Энзимология как учение о ферментах. Простые и сложные ферменты

Скачать 1.54 Mb.

Название	Энзимология как учение о ферментах. Простые и сложные ферменты
страница	3/7
Дата	05.04.2013
Размер	1.54 Mb.
Тип	Документы

1 2 3 4 5 6 7

Раздел 3.2

Особенности структурной организации активного центра фермента.

Каким же образом ферменты повышают скорость химических реакций? Представим себе смесь двух веществ. Реакция между этими веществами возможна, но она не пойдёт без затраты некоторого количества энергии. Энергия, необходимая для того, чтобы заставить вещества вступить в реакцию, называется энергией активации [Ea] (рисунок 3.1). Чем больше необходимая энергия активации, тем ниже скорость реакции при данной температуре.

Рисунок 3.1. Энергетические барьеры катализируемой и некатализируемой реакций.

В любой совокупности молекул того или иного вещества индивидуальные молекулы при постоянной температуре сильно различаются по количеству содержащейся в них энергии. Лишь небольшая часть их может преодолеть активационный барьер и вступить в реакцию в отсутствие катализатора. Поэтому скорость реакции в таких условиях будет очень низкой.

Фермент, соединяясь с субстратом, образует короткоживущий фермент-субстратный комплекс (рисунок 3.2), которому соответствует более низкая энергия активация по сравнению с субстратом в некатализируемой реакции; такой энергией обладает уже значительно больше молекул субстрата. По завершении реакции фермент-субстратный комплекс распадается на продукт (или продукты) и фермент. Фермент по окончании реакции остаётся таким же, как был до неё, и может взаимодействовать с новой молекулой субстрата.

Рисунок 3.2. Образование фермент-субстратного комплекса в ходе катализируемой реакции.

Именно таким образом ферменты снижают энергетический барьер реакции: в их присутствии гораздо большее число молекул вступает в реакцию за единицу времени.

Активный центр фермента

В процессе формирования фермент-субстратного комплекса субстрат присоединяется к специфическому участку на молекуле фермента, который называется активным центром.

Активный центр – участок молекулы фермента, который связывает субстраты и от которого зависит специфичность каталитического действия ферментов; активный центр содержит функциональные группы остатков аминокислот и коферментов, пространственно сближенных и определённым образом ориентированных.

Несмотря на огромное разнообразие структуры ферментов, их специфичности и механизма действия, существует ряд общих закономерностей формирования активных центров.

Во-первых, на активный центр приходится относительно малая часть объёма фермента. Роль остальных аминокислотных остатков, составляющих основную массу фермента, состоит в том, чтобы обеспечить молекуле фермента правильную глобулярную форму.

Во-вторых, активный центр – это сложная трёхмерная структура, и в её образовании принимают участие группы, принадлежащие разным частям линейной последовательности аминокислот. Радикалы аминокислот, образующих активный центр, оказываются вблизи друг от друга в результате формирования третичной структуры белка (рисунок 3.3). Поэтому при воздействии факторов, вызывающих денатурацию (нагревание, концентрированные кислоты и щёлочи) утрачивается конформация активного центра и фермент теряет свою активность.

Рисунок 3.3. А. Участие аминокислотных остатков, образующих активный центр фермента, во взаимодействии с субстратом. Б. Положение этих аминокислотных остатков в первичной структуре фермента.

В-третьих, активный центр имеет форму узкого углубления или щели, в которую ограничен доступ воде, за исключением тех случаев, когда вода является одним из реагирующих веществ. В этом углублении присутствует несколько полярных аминокислотных остатков, необходимых для связывания субстрата и катализа.

В-четвёртых, в составе активного центра можно условно выделить две части: а) контактный или якорный участок, где происходит связывание субстрата в нужной ориентации; б) каталитический участок, обеспечивающий протекание реакции.

Рисунок 3.4. Состав активного центра фермента (на примере химотрипсина).

В-пятых, субстраты относительно слабо связываются с ферментами. В связывании и превращении субстрата принимают участие следующие группировки аминокислотных радикалов:

полярные заряженные: карбоксильные группы глутамата и аспартата, аминогруппы лизина; гуанидиновые группы аргинина; имидазольные группы гистидина;

полярные незаряженные: гидроксильные группы серина и треонина; сульфгидрильные группы цистеина; фенольные группы тирозина;

неполярные группы: углеводородные цепи алифатических аминокислот; ароматические кольца фенилаланина и триптофана.

У сложных ферментов в формировании активных центров принимают участие также функциональные группы коферментов.

В образовании фермент-субстратных комплексов принимают участие те же молекулярные взаимодействия, что и обеспечивают формирование пространственной структуры макромолекул, межклеточные контакты и другие процессы в биологических системах:

водородные связи между полярными незаряженными группировками субстрата и фермента;

ионные связи между противоположно заряженными группировками субстрата и фермента;

гидрофобные взаимодействия между неполярными группировками субстрата и фермента.

Эти три основных типа нековалентных связей различаются по своей геометрии, энергии, специфичности.

Раздел 3.3

Взаимодействие активного центра с субстратом: модели жёсткого и индуцированного соответствия.

Cпецифичность связывания субстрата с ферментом зависит от строго определённого расположения атомов в активном центре. Субстрат входит в активный центр, если он соответствует ему по форме. Существует две модели, описывающие взаимодействие субстрата с активным центром:

1. Модель жёсткого соответствия («ключ – замок»), предложена Э. Фишером в 1890 году. Активный центр считается заранее подогнанным под форму молекулы субстрата (рисунок 3.5). Эта модель не утратила своего значения для понимания некоторых свойств ферментов, например, их способности к строго определённому связыванию двух или большего числа субстратов или для объяснения кинетики насыщения субстратом.

Рисунок 3.5. Взаимодействие субстрата с ферментом согласно модели жёсткого соответствия (Л.Страйер, 1984).

2. Модель индуцированнного соответствия («рука – перчатка»), предложена Кошлендом в 1950-е годы. Согласно этой модели, субстрат вызывает (индуцирует) конформационные изменения фермента, и лишь в результате этих изменений аминокислотные остатки фермента принимают пространственную ориентацию, необходимую для связывания субстрата и катализа (рисунок 3.6). При этом другие аминокислотные остатки могут погрузиться вглубь молекулы фермента.

Рисунок 3.6. Взаимодействие субстрата с ферментом согласно модели индуцированного соответствия (Л.Страйер, 1984).

Значение конформационных изменений, возникающих в молекуле фермента в процессе присоединения к ней субстрата можно рассмотреть на примере гексокиназы. Этот фермент катализирует фосфорилирование глюкозы в реакции с АТФ. Присоединение относительно небольшой молекулы глюкозы к активному центру гексокиназы приводит к сближению полипептидных цепей двух субъединиц, которые, как клещи, захватывают молекулу глюкозы (рисунок 3.7). По-видимому, при такой индуцированной подгонке конформации фермента к структуре субстрата молекула глюкозы также деформируется и облегчается её взаимодействие с молекулой АТФ.

Рисунок 3.7. Индуцированное соответствие при взаимодействии гекокиназы с глюкозой по данным рентгеноструктурного исследования (А.Ленинджер, 1985)

Раздел 3.4

Аллостерические ферменты: изменение конформации под действием эффекторов. Виды аллостерической регуляции.

Ферменты, осуществляющие в клетке различные метаболические процессы, организованы в виде последовательных цепей или систем, в которых они действуют согласованно. В каждой такой ферментной системе есть хотя бы один фермент, выполняющий роль «дирижера», который задает скорость всей последовательности реакций, так как он катализирует лимитирующую стадию, т. е. самую медленную реакцию, определяющую скорость всего процесса в целом. Такие ферменты-«дирижеры» обладают способностью повышать или понижать свою каталитическую активность в ответ на определенные сигналы.

Благодаря действию подобных ферментов скорость каждой последовательности метаболических реакций постоянно изменяется, почти мгновенно приспосабливаясь к изменяющимся потребностям клетки в энергии и играющих роль строительных блоков молекулах, необходимых для роста и обновления клеток. В большинстве случаев фермент-«дирижер» катализирует первую реакцию такой последовательности. Остальные же ферменты просто подчиняются указаниям «дирижера»; катализируемые ими реакции ускоряются лишь при поступлении достаточного количества субстратов, образующихся в качестве продуктов предшествующих реакций.

Такие ферменты-«дирижёры», активность которых изменяется под действием молекулярных сигналов различных типов, называются регуляторными. Существуют два основных класса регуляторных ферментов: аллостерические, т.е. ферменты, регулируемые нековалентно связанными с ними модуляторами, и ферменты, регулируемые путём их ковалентной модификации.

Многие ферменты, обладающие олигомерной структурой (хотя и не все), являются аллостерическими белками, способными изменять своё сродство к субстрату. Аллостерические ферменты, как правило, катализируют начальные реакции в многостадийных путях химических превращений в клетке. Аллостерические ферменты отличаются от остальных ферментов тем, что не подчиняются классической кинетике Михаэлиса – Ментен. Зависимость скорости реакции от концентрации субстрата у таких ферментов имеет вид S-образной кривой. Наряду с активным центром такие ферменты содержат по меньшей мере один аллостерический центр (регуляторный центр).

Аллостерический центр - участок молекулы фермента, способный присоединять определённые молекулы (эффекторы или модуляторы). Аллостерический центр специфичен по отношению к своему эффектору подобно тому, как активный центр специфичен по отношению к своему субстрату. Между аллостерическим центром одной из субъединиц фермента и аллостерическим эффектором могут возникать нековалентные взаимодействия (водородные, ионные и гидрофобные). Это приводит к обратимому изменению конформации остальных субъединиц молекулы фермента, в том числе изменению конформации активного центра. В результате активность фермента снижается или повышается.

Рисунок 3.8. Схема взаимодействия аллостерического фермента и его эффектора. Аллостерический фермент состоит из двух субъединиц: А - каталитической, включающей активный центр, и Б - регуляторной, в состав которой входит аллостерический центр. Присоединение эффектора к аллостерическому центру приводит к изменению конформации активного центра.

Аллостерические эффекторы бывают двух типов – активаторы и ингибиторы. Аллостерические активаторы способствуют переходу фермента из Т-конформации с низким сродством к субстрату в R-конформацию с высоким сродством к субстрату, аллостерические ингибиторы – наоборот. Если после присоединения эффектора сродство активного центра фермента к субстрату повышается, то эффектор называется аллостерическим активатором, если сродство понижается, то эффектор называется аллостерическим ингибитором.

Различают гомотропную и гетеротропную аллостерическую регуляцию. В случае гомотропной регуляции эффектором является субстрат. У таких ферментов аллостерический центр по своей конформации совпадает с активным, а роль аллостерического эффектора фермента выполняет молекула субстрата. Взаимодействие субстрата с активным центром одной из субъединиц аллостерического фермента повышает сродство остальных субъединиц к субстрату. Это напоминает связывание молекулы гемоглобина с кислородом.

В случае гетеротропной регуляции эффектор отличается от субстрата и аллостерический центр не совпадает с активным центром. Примером может служить регуляция биосинтеза пиримидиновых нуклеотидов.

Рисунок 3.9. Схема биосинтеза пиримидиновых нуклеотидов.

Начальную реакцию этого метаболического пути катализирует фермент аспартат-карбамоилтрансфераза (АКТ-аза). Конечный продукт цепи реакций – цитидинтрифосфат (ЦТФ) является аллостерическим ингибитором АКТ-азы. При увеличении концентрации ЦТФ сродство фермента к субстратам снижается, хотя максимальная скорость реакции (Vmax) остаётся неизменной. График зависимости активности от концентрации при этом смещается вправо. В этом случае Vmax может быть достигнута при более высокой концентрации субстрата (аспартата). Ингибирующее действие ЦТФ может быть снято добавлением АТФ (субстратом промежуточных реакций биосинтеза).

Рисунок 3.10. Регуляция аспартат-карбамоилтрансферазы ЦТФ и АТФ.

Таким образом, при накоплении ЦТФ в клетке скорость синтеза пиримидиновых нуклеотидов снижается и повышается при снижении концентрации ЦТФ. Так фермент обеспечивает постоянное присутствие в клетке нужных количеств цитидинтрифосфата..

Раздел 3.5

Ковалентная модификация ферментов.

В ряде случаев каталитическая активность ферментов может изменяться в результате разрыва или образования ковалентных связей в молекуле. Существует несколько вариантов ковалентной модификации, из которых наибольший интерес представляют частичный протеолиз и регуляция путём фосфорилирования — дефосфорилирования.

Частичный протеолиз. Многие белки синтезируются в форме неактивных предшественников, которые затем активируются в результате специфического расщепления одной или нескольких пептидных связей. Если каталитически активный белок называется ферментом (или энзимом), то неактивный предшественник фермента называется проферментом (или зимогеном).

Активация белков путем частичного протеолиза - процесс, широко распространенный в биологических системах. Вот несколько примеров.

пищеварительные ферменты, гидролизующие белки, синтезируются в желудке и поджелудочной железе в виде проферментов: пепсин – в виде пепсиногена, трипсин – в виде трипсиногена и т.д.

свертывание крови представляет собой каскад реакций протеолитической активации проферментов. Это обеспечивает быструю ответную реакцию на повреждение кровеносного сосуда.

некоторые белковые гормоны синтезируются в виде неактивных предшественников. Например, инсулин образуется из проинсулина.

фибриллярный белок соединительной ткани коллаген также образуется из предшественника — проколлагена.

Активацию неактивных предшественников ферментов путем частичного протеолиза можно рассмотреть на примере превращения трипсиногена в трипсин. Этот процесс происходит под действием фермента энтеропептидазы в просвете двенадцатиперстной кишки и сводится к отщеплению с N-конца полипептидной цепи 6 аминокислотных остатков и соответственно укорочению полипептидной цепи (рисунок 3.11). Такое же действие на трипсиноген оказывает и активный трипсин.

В результате изменения первичной структуры в молекуле профермента возникают новые нековалентные связи, изменяется конформация полипептидной цепи и формируется активный центр. В молекуле профермента активный центр отсутствует.

Рисунок 3.11. Схема механизма активации трипсиногена быка.

Физиологический смысл выработки пищеварительных ферментов в форме проферментов заключается в том, что в противном случае ферменты могли бы оказывать свой эффект на клеточные белки слизистой желудка и поджелудочной железы, вызывая разрушение этих клеток. Такое разрушение клеток может наблюдаться, например, при панкреатите, когда активация трипсина происходит непосредственно в поджелудочной железе.

Фосфорилирование – дефосфорилирование ферментов – присоединение или отщепление фосфатной группы. В отличие от частичного протеолиза, это обратимое изменение каталитической активности ферментов.

Такие ферменты могут существовать в двух формах – фосфорилированной и дефосфорилированной. В зависимости от конкретного случая, одна из этих форм будет обладать более высокой, а другая – более низкой каталитической активностью.

Фосфорилированию обычно подвергаются остатки серина, реже тирозина или треонина. Донором фосфатной группы является молекула АТФ. Фосфорилирование происходит избирательно и затрагивает лишь небольшое число аминокислотных остатков, не обязательно в активном центре фермента. Присоединение фосфата приводит к изменению конформации фермента и его активности. Фосфатные группы, связанные с остатками аминокислот, удаляются путём гидролиза с образованием неорганической фосфорной кислоты.

Фосфорилирование и дефосфорилирование катализируется протеинкиназами и протеинфосфатазами соответственно (рисунок 3.12). Активность протеинкиназ и протеинфосфатаз находится под гормональным контролем и регулируется также нервной системой.

Рисунок 3.12. Ковалентная модификация, осуществляемая путем фосфорилирования — дефосфорилирования.

Примером фермента, активность которого регулируется путём обратимого фосфорилирования, является гликогенфосфорилаза, участвующая в распаде гликогена в клетках печени и мышц

Неактивная форма фермента (дефосфорилированная) превращается в активную форму (фосфорилированную) при помощи другого фермента – киназы фосфорилазы. Реакцию дефосфорилирования катализирует фосфатаза фосфорилазы которая инактивирует фосфорилазу.

Раздел 3.6

Регуляция по принципу обратной связи.

В результате аллостерических механизмов и ковалентной модификации происходит изменение активности уже имеющихся в клетке молекул фермента. Существуют также механизмы, влияющие на скорость реакций обмена веществ путём изменения количества молекул ферментативного белка в клетке.

В настоящее время установлено, что синтез и распад ферментов, как и других белков, происходит в организме непрерывно. У взрослого здорового человека в условиях динамического равновесия процессы синтеза и распада имеют одинаковую скорость, благодаря чему общее содержание фермента не изменяется во времени. Для каждого фермента характерна своя скорость распада. В большинстве случаев полное прекращение синтеза фермента привело бы к исчезновению 50% молекул фермента за несколько дней, но некоторые ферменты обновляются значительно быстрее. Скорость синтеза фермента может варьировать от нуля до максимума, тогда как скорость распада представляется постоянной. Таким образом, любое вещество, влияющее на скорость синтеза фермента, способно оказать существенное воздействие на регуляцию обмена веществ путем изменения соотношения ферментов в организме. В основе многих гормональных воздействий на обмен веществ у человека лежат, как было установлено, именно такие контролирующие влияния на выработку каталитически активных белков.

Рисунок 3.14. Регуляция синтеза фермента.

Конечный продукт (Г) цепи метаболических реакций снижает концентрацию фермента, катализирующего этап Б → В путем репрессии его синтеза. Субстрат (Б) индуцирует синтез того фермента, который превращает его в В, препятствуя действию репрессора.

Вещество, которое избирательно препятствует синтезу определенного фермента, называется репрессором. При помощи механизма репрессии конечные продукты реакций обмена веществ могут регулировать процесс их собственного образования по принципу обратной связи. Было доказано, что в некоторых системах накопление метаболитов, образующихся в итоге цепи последовательных реакций, предотвращает синтез одного из ферментов, функционирующего в начале этой цепи (рисунок 3.14). Продукт реакции в таком случае действует как специфический репрессор синтеза этого фермента предотвращая как ненужное потребление субстратов, вовлекаемых в реакции данной метаболической цепи, так и бесполезный расход энергии и аминокислот, необходимых для образования каталитически активного белка.

Примером того, как конечные продукты цепи химических реакций способны замедлять синтез ферментных белков, катализирующих начальные стадии процесса (то есть снижать количество молекул этих ферментов), может служить регуляция синтеза гемоглобина в клетках кроветворных органов. По мере накопления гема в этих клетках подавляется синтез фермента, катализирующего первую реакцию синтеза гема (рисунок 3.15). Тем самым предупреждается избыточное накопление гемоглобина в клетке.

Рисунок 3.15. Регуляция синтеза гема по механизму репрессии на уровне фермента, катализирующего начальную реакцию этого метаболического пути.

Явление, противоположное репрессии, известно под названиями индукция фермента или дерепрессия. В типичном случае субстрат определенного фермента способен индуцировать синтез этого фермента, что в свою очередь стимулирует потребление данного субстрата. Воздействуя на механизм синтеза фермента, индуктор, вероятно, прямо или косвенно противодействует репрессору. Соотношение между репрессором (конечным продуктом) и индуктором (субстратом) определяет, таким образом, количество ключевых ферментов и обеспечивает приспособление последовательности метаболических реакций к количеству метаболитов, поступающих в клетки организма с пищей.

Как и в случае регуляторных ферментов, лишь немногие ключевые ферменты способны реагировать подобным образом на изменение физиологических потребностей. Такие ферменты называют индуцибельными (или адаптивными); ферменты, содержание которых в таких условиях не изменяется, называют конститутивными; они составляют постоянное содержимое клетки.

У человека на адаптивные ферменты, вероятно, в большей мере влияют эндокринные факторы, нежели промежуточные продукты реакций обмена веществ. Так, гормоны коры надпочечников глюкокортикоиды стимулируют синтез ферментов, участвующих в образовании сахара крови (глюкозы), тогда как гормон поджелудочной железы инсулин противодействует этому. Глюкокортикоиды прямо или косвенно играют роль индукторов ферментов, когда как инсулин усиливает процесс репрессии. От определяемой противоположными воздействиями индукции и репрессии уровня синтеза ферментов зависит физиологическая регуляция содержания глюкозы в крови этими противоборствующими эндокринными системами.

Ингибирование - частичное или полное торможение ферментативной реакции под действием веществ различной химической природы. Вещества, вызывающие ингибирование ферментов, называют ингибиторами.

Различают обратимое и необратимое ингибирование. Если ингибитор вызывает стойкое снижение скорости реакции, то это необратимое ингибирование. При этом образуются ковалентные связи между молекулами фермента и ингибитора. Некоторые ферменты полностью ингибируются очень малыми концентрациями ионов тяжёлых металлов, например, ионов ртути (Hg2+), серебра (Ag+) и мышьяка (As+), или иодуксусной кислотой. Эти ингибиторы необратимо соединяются с SH-группами ферментов и вызывают денатурацию ферментного белка.

Диизопропилфторфосфат (ДФФ) – соединение из группы нервнопаралитических отравляющих веществ. Он является ингибитором ацетилхолинэстеразы, которая инактивирует нейромедиатор ацетилхолин. ДФФ связывается с остатком аминокислоты серина в активном центре и блокирует действие фермента. В результате ацетилхолин накапливается в синаптической щели, нервные импульсы следуют один за другим, мышца не расслабляется, и наступает паралич или смерть.

Рисунок 3.16. Необратимое ингибирование фермента ацетилхолинэстеразы диизопрропилфторфосфатом.

Другим примером необратимого ингибирования может служить действие цианидов на фермент цитохромоксидазу, участвующую в окислительно-восстановительных процессах в митохондриях клеток. Отравление цианидами может привести к смерти.

Если ингибитор соединяется с ферментом при помощи нековалентных связей, то возможно восстановление исходной активности фермента после удаления ингибитора, например, путём диализа. Такое ингибирование называется обратимым.

Обратимое ингибирование можно разделить на конкурентное и неконкурентное.

Запомните особенности, характерные для конкурентного ингибирования:

конкурентный ингибитор сходен по строению с субстратом.

конкурентный ингибитор взаимодействует с активным центром фермента, образуя фермент-ингибиторный комплекс, и препятствует взаимодействию активного центра с субстратом.

действие конкурентного ингибитора зависит от его концентрации: чем выше концентрация ингибитора, тем ниже скорость ферментативной реакции.

действие конкурентного ингибитора можно снять, увеличив концентрацию субстрата.

График зависимости скорости ферментативной реакции от концентрации субстрата в присутствии конкурентного ингибитора даёт такую же величину Vmax, как и в отсутствии ингибитора. Величина KM в данном случае будет увеличена, поскольку для обеспечения скорости, равной половине максимальной, в присутствии ингибитора потребуется больше субстрата. Отсюда следует, что конкурентный ингибитор препятствует образованию фермент-субстратного комплекса, но не влияет на процесс распада фермент-субстратного комплекса с образованием продуктов реакции.

Рисунок 3.17. Влияние конкурентного ингибитора на кинетические свойства фермента.

Примером конкурентного ингибирования является ингибирование фермента сукцинатдегидрогеназы малоновой кислотой. Сукцинатдегидрогеназа катализирует реакцию дегидрирования янтарной кислоты с образованием фумаровой кислоты. Малоновая кислота, как и янтарная кислота, содержит две карбоксильные группы, но обладает более короткой углеродной цепью. Поэтому дегидрирование малоновой кислоты невозможно. Если концентрация малоновой кислоты в среде будет превышать концентрацию янтарной, то активность сукцинатдегидрогеназы снижается. Ингибирующее действие малоновой кислоты исчезает при увеличении концентрации янтарной кислоты.

Рисунок 3.18. Конкурентное ингибирование сукцинатдегидрогеназы малоновой кислотой.

Запомните особенности, характерные для неконкурентного ингибирования:

неконкурентный ингибитор не сходен по строению с субстратом.

неконкурентный ингибитор может взаимодействовать, как правило, не с активным центром фермента, а с другими участками в молекуле фермента. Поэтому фермент-ингибиторный комплекс может присоединять субстрат. На ввиду изменения конформации активного центра сродство к субстрату будет понижено.

действие неконкурентного ингибитора не зависит от его концентрации.

действие неконкурентного ингибитора нельзя снять, увеличив концентрацию субстрата.

График зависимости скорости реакции от концентрации субстрата в присутствии неконкурентного ингибитора показывает сниженную величину Vmax. Субстрат не может вытеснить ингибитор из его соединения с ферментом. Величина KM в присутствии неконкурентного ингибитора не меняется. Это значит, что неконкурентный ингибитор воздействует на фермент на стадии распада фермент-субстратного комплекса, но не влияет на связывание субстрата.

Рисунок 3.19. Влияние неконкурентного ингибитора на кинетические свойства фермента.

Неконкурентные ингибиторы снижают количество молекул субстрата, которые взаимодействуют с одной молекулой фермента в единицу времени (число оборотов фермента).

Ингибиторы ряда ферментов используются в медицине как химиотерапевтические препараты. Целью химиотерапии является уничтожение возбудителя болезни при помощи химических веществ, не повреждая при этом организма-хозяина.

Раздел 4.1

Распределение ферментов в тканях и в клетке. Изоферменты и мультиферменты: особенности структурной организации, биологическая роль.

Локализация ферментов в клетке

В клеточном содержимом ферменты распределены не хаотически, а строго упорядоченно. При помощи внутриклеточных мембран клетка разделена на отсеки или компартменты (рисунок 4.1). В каждом из них осуществляются строго определенные биохимические процессы и сосредоточены соответствующие ферменты или полиферментные комплексы. Вот несколько характерных примеров.

Рисунок 4.1. Внутриклеточное распределение ферментов различных метаболических путей.

В лизосомах сосредоточены преимущественно разнообразные гидролитические ферменты. Здесь протекают процессы расщепления сложных органических соединений на их структурные компоненты.

В митохондриях находятся сложные системы окислительно-восстановительных ферментов.

Ферменты активирования аминокислот распределены в гиалоплазме, но они же есть и в ядре. В гиалоплазме присутствуют многочисленные метаболоны гликолиза, структурно объединенные с таковыми пентозофосфатного цикла, что обеспечивает взаимосвязь дихотомического и апотомического путей распада углеводов.

В то же время ферменты, ускоряющие перенос аминокислотных остатков на растущий конец полипептидной цепи и катализирующие некоторые другие реакции в процессе биосинтеза белка, сосредоточены в рибосомальном аппарате клетки.

В клеточном ядре локализованы в основном нуклеотидилтрансферазы, ускоряющие реакцию переноса нуклеотидных остатков при новообразовании нуклеиновых кислот.

Распределение ферментов по субклеточным органеллам изучают после предварительного фракционирования клеточных гомогенатов путем высокоскоростного центрифугирования, определяя содержание ферментов в каждой фракции.

Локализацию данного фермента в ткани или клетке часто удается установить in situ гистохимическими методами («гистоэнзимология»). Для этого тонкие (от 2 до 10 мкм) срезы замороженной ткани обрабатывают раствором субстрата, к которому специфичен данный фермент. В тех местах, где находится фермент, образуется продукт катализируемой этим ферментом реакции. Если продукт окрашен и нерастворим, он остается на месте образования и позволяет локализовать фермент. Гистоэнзимология дает наглядную и в известной мере физиологичную картину распределения ферментов.

Ферментные системы ферментов, сосредоточенные во внутриклеточных структурах, тонко координированы друг с другом. Взаимосвязь катализируемых ими реакций обеспечивает жизнедеятельность клеток, органов, тканей и организма в целом.

При исследовании активности различных ферментов в тканях здорового организма можно получить картину их распространения. Оказывается, что некоторые ферменты широко распространены во многих тканях, но в разных концентрациях, а другие очень активны в экстрактах, полученных из одной или нескольких тканей, и практически отсутствуют в остальных тканях организма.

Рисунок 4.2. Относительная активность некоторых ферментов в тканях человека, выраженная в процентах от активности в ткани с максимальной концентрацией данного фермента (Мосс, Баттерворт, 1978).

Изоферменты (изозимы)

Изоферментами или изозимами называют множественные формы ферментов, которые существуют у одного и того же вида, в одной и той же ткани, и даже в одной и той же клетке. Все эти формы фермента катализируют одну и ту же реакцию, но различаются по своим кинетическим свойствам, а также по первичной структуре. Изоферменты играют регуляторную роль в обмене веществ и позволяют метаболизму в разных тканях лучше приспосабливаться к действию внутренних и внешних факторов.

Примером фермента, у которого были обнаружены такие формы, может служить лактатдегидрогеназа (L-лактат:НАД+-оксидоредуктаза, КФ 1.1.1.27), катализирующая обратимую окислительно-восстановительную реакцию:

Лактатдегидрогеназа (ЛДГ) присутствует в тканях животных в виде пяти разных изоферментов, которые различаются на уровне четвертичной структуры. Молекула ЛДГ состоит из четырех протомеров двух типов, Н (от англ. heart - сердце) и М (от англ. muscle - мышца), которые различаются по аминокислотному составу и последовательности аминокислот. Каталитической активностью обладает только тетрамерная молекула.

Протомеры могут быть скомпонованы следующими способами:

Изофермент

HHHH

HHHM

HHMM

HMMM

MMMM

Обозначение

ЛДГ1

ЛДГ2

ЛДГ3

ЛДГ4

ЛДГ5

Изоферменты сывороточной лактатдегидрогеназы могут быть обнаружены с помощью электрофореза при рН 8,6. При данном значении рН изозимы несут разный заряд и распределяются на электрофореграмме в пяти разных местах. Наибольшим отрицательным зарядом обладает изозим ЛДГ1.

Распределение изоферментов ЛДГ (изоферментный спектр) в тканях также отличается. Так, изоформа ЛДГ, содержащая четыре М-субъединицы, преобладает в печени и скелетной мышце, а изоформа, состоящая из четырех Н-субъединиц, преобладает в миокарде (рисунок 4.3).

Рисунок 4.3. Относительное содержание изоферментов ЛДГ (в процентах от суммарной активности) в некоторых тканях человека (Мосс, Баттерворт, 1978).

Мультиферменты

Мультиферменты (мультэнзимы) - надмолекулярные комплексы, в состав которых входят ферменты, катализирующие последовательные стадии превращения субстрата.

Например, для в реакциях превращения метаболита A в метаболит D :

комплекс ферментов Е1, Е2, Е3 является мультиферментом. Объединение нескольких ферментов в один комплекс имеет важное преимущество: резко сокращаются расстояния, на которые молекулы промежуточных продуктов должны перемещаться от фермента к ферменту. Поэтому суммарная скорость таких метаболических путей довольно высока.

Примером мультэнзима может служить пируватдегидрогеназный комплекс, находящийся в митохондриях и катализирует последовательные реакции окислительного декарбоксилирования пирувата:

Пируватдегидрогеназный комплекс состоит из трёх ферментов: пируватдекарбоксилазы, трансацилазы и дигидролипоилдегидрогеназы.

В промежуточных реакциях участвует пять коферментов:

тиаминдифосфат;

липоевая кислота;

коэнзим А;

ФАД;

НАД.

Регуляторным ферментом комплекса является пируватдекарбоксилаза, активность которой (и всего комплекса в целом) снижается при высокой концентрации АТФ в клетке.

1 2 3 4 5 6 7

плохо

не очень плохо

средне

хорошо

отлично

Ваша оценка этого документа будет первой.

Ваша оценка:

	Обмен нуклеиновых кислот В живом организме нуклеиновые кислоты находятся в диссоциированном состоянии. В составе белковых...		Сущность холотропного подхода Этот метод, сочетающий в себе такие простые элементы, как ускоренное дыхание, этническая, ритуальная...
	Лето время поездок. Многие, кому приходится перемещаться на том или ином транспорте, хотя бы однократно Бороться с укачиванием или предотвращать его возникновение каждый пытается по своему. А когда простые...		2. Ферменты
	Ферменты (Энзимы)		Тема: Ферменты
	Тема: Ферменты. Общие свойства		Отчаялся выздороветь. Тяжело отвечает даже на простые вопросы
	Учение об инфекции		Простые и аллергические дерматиты. Токсидермии. Экзема. Крапивница. Отек Квинке

Энзимология как учение о ферментах. Простые и сложные ферменты

Похожие: