Инструкция по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови (железо и ожсс фс)
|
|
Скачать 94.75 Kb.
|
ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови ^ РУ № ФСР 2007/01440 НАЗНАЧЕНИЕ Набор предназначен для количественного определения железа в сыворотке крови колориметрическим методом (без депротеинизации) и железосвязывающей способности сыворотки крови (ОЖСС) в клинико-диагностических и биохимических лабораториях и научно-исследовательской практике. Набор рассчитан на проведение 70 определений концентрации железа или ОЖСС при расходе 1,0 мл рабочего реагента на один анализ. ^ Связанное с трансферрином железо отщепляется в кислой среде в виде трёхвалентного железа и затем восстанавливается до двухвалентного в присутствии аскорбиновой кислоты. Двухвалентное железо образует с феррозином окрашенный комплекс фиолетового цвета, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна концентрации железа в пробе и измеряется фотометрически при длине волны 560 (540 – 600) нм. Для определения общей железосвязывающей способности сыворотки крови, сыворотку насыщают ионами трехвалентного железа, избыток которого адсорбируется на карбонате магния и удаляется центрифугированием. Общую концентрацию железа, связанного сывороткой, определяют в надосадочной жидкости вышеописанным методом. ^ Реагент 1: буферный раствор, рН 4,5, содержащий ацетат натрия, 148 ммоль/л; тиомочевину, 100 ммоль/л, гуанидин гидрохлорид, 4,5 ммоль/л, азид натрия, 0,095% – 3 флакона (по 20 мл). Реагент 2: аскорбиновая кислота, 120 ммоль/л, феррозин, 2,5 ммоль/л, тиомочевина, 100 ммоль/л –1 флакон (15 мл). Реагент 3: насыщающий раствор, содержащий хлорид трехвалентного железа, 90 мкмоль/л – 1 флакон (100 мл). Реагент 4: карбонат магния – 1 флакон (15 г). Калибратор: калибровочный раствор двухвалентного железа, 17,9 мкмоль/л, в растворе азида натрия, 0,095% – 1 флакон (3,0 мл). ^ Набор обеспечивает: линейную область определения концентрации железа в диапазоне от 3,0 до 179 мкмоль/л, отклонение от линейности не превышает 5%. Чувствительность – не более 2,0 мкмоль/л, коэффициент вариации результатов определений – не более 5%. Линейная область определения общей железосвязывающей способности сыворотки крови – от 10,0 до 150 мкмоль/л, отклонение от линейности не превышает 5%. Чувствительность – не более 8,0 мкмоль/л, коэффициент вариации результатов определений – не более 5%. Качество набора можно оценивать по отечественным или зарубежным контрольным сывороткам, аттестованным данными методами. Нормальные величины концентрации железа в сыворотке крови человека составляют 8,9 – 31,2 мкмоль/л. Нормальные величины общей железосвязывающей способности сыворотки крови человека составляют 45 – 72 мкмоль/л. Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон значений нормальных величин для обследуемого контингента людей. ^ Негемолизированная сыворотка крови. Сыворотку крови следует отделить от форменных элементов крови не позднее, чем через 1 час после забора крови. ^ Калибратор содержит токсичный компонент азид натрия. При работе с ним следует соблюдать осторожность и не допускать попадания на кожу и слизистые; при попадании немедленно промыть пораженное место большим количеством проточной воды. При проглатывании следует выпить 0,5 л теплой воды и вызвать рвоту. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции. ^
^ Реагенты готовы к использованию для определения железа в сыворотке крови или в супернатанте сыворотки крови при запуске реакции субстратом. Приготовление рабочего реагента для определения железа в сыворотке крови или в супернатанте сыворотки крови при запуске реакции образцом: смешать в колбе конической вместимостью 200 мл реагента 1 (80 мл) и реагента 2 (20 мл). При необходимости приготовления рабочего реагента в меньшем объеме следует смешать нужные объемы реагентов 1 и 2 в соотношении 4:1. Тщательно закрыть флаконы с реагентами 1 и 2 непосредственно после каждого использования. Рабочий реагент должен храниться в защищенном от света месте при температуре + 2 – 8°С не более одного месяца или при комнатной температуре (+ 18 – 25°С) – не более одной недели. Реагенты 3, 4 и Калибратор готовы к использованию. ^ Получение супернатанта для определения общей железосвязывающей способности сыворотки крови В центрифужную пробирку внести 500 мкл сыворотки крови, добавить 1000 мкл реагента 3. Пробу перемешать и выдержать 10 минут при комнатной температуре (+18–25оС), затем добавить 0,15 г реагента 4, несколько раз тщательно встряхнуть, выдержать не менее 30 минут при комнатной температуре, тщательно встряхивая каждые 5 минут, затем центрифугировать при 3000 об./мин в течение 10 минут. Прозрачный супернатант использовать для определения общей железосвязывающей способности сыворотки крови. Компоненты реакционной смеси отбирать в количествах, указанных в таблице. Определение железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови: Запуск реакции субстратом Таблица 1.
Еоп. или Екал. = (E2 - 0,83E1) опытной или калибровочной пробы, где: 0,83 – коэффициент для компенсации уменьшения величины оптической плотности E2 по сравнению с E1 вследствие разбавления реакционной смеси после добавления реагента 2. Коэффициент рассчитывают: (Объем образца + Объем Реагента 1)/Общий объем. Запуск реакции образцом Таблица 2.
Пробы перемешать и инкубировать при температуре + 37оС или при комнатной температуре (+18–25оС) в течение 10 минут. Измерить оптическую плотность опытной и калибровочной проб против контрольной (холостой) пробы при длине волны 560 (540 – 600) нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм. Окраска растворов стабильна в течение 30 минут. РАСЧЕТЫ
^ Хранение наборов должно производиться при температуре + 2–8оС в упаковке предприятия-изготовителя в течение всего срока годности. Допускается хранение реагентов 1, 2 и калибратора при температуре до + 25оС не более 5 суток. Реагенты 3, 4 могут храниться при температуре + 2-25 оС в течение всего срока годности. Замораживание компонентов набора не допускается. Срок годности набора – 12 месяцев. Реагенты 1 и 2 после вскрытия флаконов могут храниться при температуре + 2–8оС, а реагенты 3 и 4 после вскрытия флаконов могут храниться при температуре + 2-25 оС, в течение всего срока годности набора при условии достаточной герметичности флаконов. Рабочий реагент должен храниться в защищенном от света месте при температуре + 2 – 8°С не более одного месяца или при комнатной температуре (+ 18 – 25°С) – не более одной недели. Калибратор после вскрытия флакона можно хранить при температуре + 2–8оС не более 3 месяцев при условии достаточной герметичности флакона. При содержании железа в сыворотке крови выше 179 мкмоль/л или общей железосвязывающей способности сыворотки крови выше 160 мкмоль/л анализируемую пробу следует развести физиологическим раствором, приготовленном на деионизованной воде, и полученный результат умножить на разведение. Причиной грубых ошибок может быть недостаточно чистая посуда. Посуду следует мыть хромовой смесью или раствором 4 М соляной кислоты в деионизованной воде, затем тщательно ополоснуть деионизованной водой. Для получения надежных результатов необходимо строго соблюдать инструкцию по применению набора. По вопросам, касающимся качества набора (ЖЕЛЕЗО и ОЖСС ФС), следует обращаться в ЗАО «ДИАКОН-ДС» по адресу: 142290, г. Пущино, Московской обл., ул. Грузовая 1а; тел. (495) 980-63-38, 980-63-39; т/факс (495) 980-66-79. Директор по производству ЗАО «ДИАКОН-ДС» Сысоева В.И. “СОГЛАСОВАНО” Зав. кафедрой клинической лабораторной диагностики ГОУ ДПО “РМАПО Росздрава, д.м.н., профессор Долгов В.В. 06 марта 2012 г. |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
де: 
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям