Парентеральные вирусные гепатиты в сибирских регионах России 03. 01. 03 молекулярная биология 03. 02. 02 вирусология
|
|
Скачать 0.86 Mb.
|
|
На правах рукописи Кочнева Галина Вадимовна Парентеральные вирусные гепатиты в сибирских регионах России 03.01.03 – молекулярная биология 03.02.02 – вирусология Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Кольцово-2010 Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении науки Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Минздравсоцразвития России
Защита состоится «^ � 2010 г. в _______ часов на заседании диссертационного совета Д.208.020.01 при ФГУН Государственном научном центре вирусологии и биотехнологии «Вектор» по адресу: ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора, Кольцово Новосибирской области, 630559, тел. (383)336-74-28 С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» Автореферат разослан «_____»________________2010 г. Ученый секретарь диссертационного совета д.б.н. Г.П. Трошкова ^ Актуальность проблемы. Изучению вопросов молекулярной эпидемиологии парентеральных вирусных гепатитов в России долгое время уделялось мало внимания. Не было единого подхода в проведении эпидемиологических исследований, большинство результатов основывалось на данных официальной статистики, полученных без использования принятых в развитых странах и рекомендованных ВОЗ методов, таких как: подтверждающие серологические тесты и ПЦР анализ - в диагностике; филогенетический анализ нуклеотидных последовательностей - в генотипировании образцов; использование программ EpiInfo и SPSS – для статистически значимой оценки факторов риска инфицирования вирусами гепатитов. Проведённые к 2001 году работы по молекулярной эпидемиологии гепатитов В, С и G были единичными в России и охватывали в основном население европейской части страны, тогда как популяции регионов, расположенных за Уралом, были изучены совершенно недостаточно. Крупномасштабных исследований по генотипированию HBV и HGV до публикации результатов наших работ в 2003 году в Российской Федерации не проводилось. В связи с вышесказанным в 2001г нами был начат цикл комплексных молекулярно-эпидемиологических исследований парентеральных вирусных гепатитов В, С и G на территории трех сибирских регионов России – Новосибирской, Иркутской областей и Алтайского края. Знание особенностей молекулярной эпидемиологии парентеральных вирусных гепатитов на определенной территории имеет важное социальное значение и способствует разработке продуманной стратегии борьбы с этими инфекциями. Особое место в этой борьбе занимает вакцинопрофилактика. Среди исследованных нами трех парентеральных вирусных гепатитов B, C и G вакцина разработана только в случае HBV инфекции. Для вакцинации против гепатита В в настоящее время повсеместно используется рекомбинантный поверхностный белок HBV (HBsAg), выделенный из культуры клеток дрожжей. Эффективность вакцинации определяется путем измерения концентрации анти-HBs IgG в сыворотке крови (протективный уровень >10 МЕ/л). Однако в течение 5-7 лет после полного курса прививок от 30 до 50 % лиц утрачивают антитела, что ставит вопрос о необходимости ревакцинации [Акимкин, 2004; Yuen et al., 2004]. Вместе с тем установлено, что вакцинация ведет к индукции эффективной и продолжительной иммунологической памяти, которая обеспечивает защиту от инфекции и после утраты антител [Селиашвили и др., 2006; Yuen et al., 2004], но этот критерий защищенности практически не исследован у вакцинированных против гепатита В. Методом его оценки может стать определение индекса HBsAg-специфической стимуляции лимфоцитов периферической крови в ELISPOT анализе. Создание вакцины против гепатита С - одна из самых насущных задач мирового здравоохранения. Ее решение сдерживается рядом факторов, в числе которых высокий уровень изменчивости вируса. Наибольшая вариабельность наблюдается в поверхностных белках Е1 и Е2 HCV [Simmonds et al., 2005], однако антитела именно к этим белкам обладают вируснейтрализующей активностью [Yu et al., 2004]. В настоящее время идет накопление данных о том, какие районы поверхностных белков вируса гепатита С индуцируют синтез антител с широким спектром действия, способных нейтрализовать различные генотипы и субтипы вируса. Пептиды, имитирующие структуру таких районов, рассматриваются в качестве перспективных компонентов анти - HCV вакцин. ^ Целью данной работы явилось проведение комплексного молекулярно-эпидемиологического исследования парентеральных вирусных гепатитов на территории сибирских регионов России, а также оценка протективных свойств поверхностных белков вирусов гепатитов В и С. Для достижения этой цели решались следующие задачи: 1) Организация и проведение молекулярно-эпидемиологических исследований гепатитов В, С и G в Новосибирской, Иркутской областях и Алтайском крае:
2) Оценка напряженности гуморального иммунитета и состояния клеточного иммунитета методом ELISPOT через 5 лет после полного курса вакцинации против гепатита В:
3) Сравнительный функциональный анализ антител, индуцированных нативными (у инфицированных людей) и рекомбинантными (у иммунизированных мышей) гликопротеинами Е1 и Е2 вируса гепатита С:
^ В данной работе в соответствии с международными стандартами впервые проведено крупномасштабное молекулярно-эпидемиологическое исследование парентеральных вирусных гепатитов В, С и G на территории Новосибирской, Иркутской областей и Алтайского края. Созданы три уникальные электронные базы данных в формате EpiInfo, содержащие эпиданамнез и результаты иммуно- и генодиагностики гепатитов В, С и G среди 5605 представителей разных групп населения Сибирского региона России. В исследование были вовлечены пациенты инфекционных больниц и наркологической клиники; медицинские работники ряда крупных городских и сельских больниц; группы, сформированные по принципу места проживания или места работы. Впервые получены данные по встречаемости маркеров HBV, HCV и HGV среди представителей разных групп населения трех регионов Сибири. Оценена роль HBV и HCV в этиологии острых и хронических гепатитов на обследованной территории. С использованием созданных электронных баз данных и статистических мощностей программы EpiInfo-2007 впервые проведена количественная оценка факторов риска инфицирования гепатитами В, С и G в период с 2001 по 2003 гг. Силу статистической связи между каждым фактором риска и статусом по инфекции выражали с помощью отношения шансов (OR, odds ratio). Впервые проведен анализ генотипического разнообразия сибирских изолятов HBV и HGV, а в случае HCV показано, что встречаемость генотипов существенно различается в разных возрастных и популяционных группах. Получены новые данные по оценке состояния клеточного и гуморального иммунитета в отдаленные сроки после вакцинации против вирусного гепатита В. Показано, что клеточное звено вносит существенный вклад в развитие поствакцинального иммунного ответа. С использованием панели из 76-ти перекрывающихся синтетических пептидов впервые проведен сравнительный полноразмерный анализ антигенного профиля поверхностных белков сибирских изолятов вируса гепатита C трех генотипов 1b, 2a/2c и 3а. Показано, что общие для всех генотипов HCV высокоиммуногенные пептидные эпитопы белков Е1 и Е2 расположены в позициях аминокислот 250-260, 315-325 (Е1 белок), 390-400, 430-440 и 680-690 (Е2 белок). Наибольшие межгенотиповые различия регистрируются в позициях 280-290, 410-430 и 520-540. В районе 280-290 а.о. белка Е1 выявлена новая антигенная детерминанта, характерная только для 2а/2с генотипа HCV. С использованием высоковирулентного клона HCV J6/JFH1 и культуры клеток гепатомы человека Huh-7.5 выявлены два новых вируснейтрализующих эпитопа в позициях а.о. 264-318 (Е1 белок) и 496-515 (Е2 белок), первый из которых является генотип-специфическим, а второй – консервативным. В рамках работы по созданию белковых вакцин против гепатита C был проведен сравнительный анализ двух эукариотических систем экспрессии генов поверхностных гликопротеинов HCV с целью получения белков, наиболее адекватных природным аналогам. Впервые показано, что в одних и тех же клетках млекопитающих (BHK-F) рекомбинантные белки Е1 и Е2 HCV, полученные в системе экспрессии вируса осповакцины (VV), существенно отличаются от аналогичных белков, полученных в системе вируса Синдбис (SIN). Хотя оба препарата белков индуцируют синтез антител к поверхностным гликопротеинам HCV, иммунный ответ к VV-экспрессированным белкам был выше и обладал большей универсальностью в отношении разных генотипов HCV, чем иммунный ответ к SIN-экспрессированным белкам. ^ В результате проведенного крупномасштабного молекулярно-эпидемиологического исследования получены статистически значимые количественные оценки дифференцированной встречаемости маркёров парентеральных вирусных гепатитов в различных популяционных группах, заболеваемости острыми и хроническими формами гепатитов, факторов риска и параметров интенсивности циркуляции генотипов HBV, HCV и HGV в период 2001-2003 гг на территории Новосибирской, Иркутской областей и Алтайского края. Результаты исследований были доведены до сведения региональных медицинских служб и главных врачей крупных инфекционных больниц и использовались ими для разработки стратегии борьбы с распространением вирусных гепатитов в регионах Сибири. В связи с тем, что общим и наиболее значимым фактором риска парентеральных гепатитов В, С и G, а также смешанных инфекций В+С и С+G в Сибири является внутривенное употребление наркотиков, оценки путей заражения и распространения разных типов психотропных препаратов оказались полезны при проведении адресных превентивных программ в сфере контроля за оборотом наркотиков. Созданные электронные базы данных представляют отдельную как научную, так и практическую ценность. Они могут использоваться для комплексной динамической оценки ситуации по вирусным гепатитам в исследованных регионах России в любом временном периоде. Показана важность проведения ПЦР-анализа для диагностики наиболее распространенных вирусных гепатитов в случаях наличия клинических проявлений гепатита и отрицательных результатах ИФА на известные вирусные маркеры. Полученные новые данные по оценке состояния клеточного и гуморального иммунитета в отдаленные сроки после вакцинации против вирусного гепатита В позволили предложить ряд рекомендаций по проведению ревакцинации в гетерогенных по возрасту, состоянию здоровья, привычкам и степени опасности группах риска инфицирования HBV. Проведенный сравнительный функциональный анализ рекомбинантных гликопротеинов Е1 и Е2 HCV показал, что иммунохимические свойства этих белков могут существенно зависеть от системы экспрессии. Причем эффективность продукции, на которую, обычно, исследователи обращают внимание в первую очередь, может быть одинаковой, а свойства белков разные. Данный факт необходимо учитывать при планировании экспериментальных работ с аналогичными мембран-связанными гликозилированными белками. Картирование позиций высокоиммуногенных линейных эпитопов поверхностных белков Е1 и Е2 сибирских изолятов HCV может быть использовано для совершенствования региональной диагностики гепатита С. Пептиды, соответствующие новым вируснейтрализующим линейным эпитопам, могут рассматриваться в качестве перспективных компонентов анти-HCV вакцин. Положения, выносимые на защиту: 1. Внутривенное употребление наркотиков является основной причиной заболеваемости парентеральным вирусным гепатитом С (OR=27.3) и смешанной инфекцией HCV и HBV (OR=10.0) на территории сибирских регионов России в период 2001-2002 гг. Вторым по значимости фактором риска являются инвазивные медицинские процедуры, наибольшую опасность из которых представляет переливание крови (OR=3.8–11.3). Половой путь передачи HBV, HGV и, что особенно важно, HCV является статистически значимым во всех исследованных сибирских регионах (OR=1.66-2.88). 2. При наличии клинических проявлений гепатита и отрицательных результатах ИФА на известные вирусные маркеры необходимо проведение ПЦР-анализа для выявления геномов наиболее распространенных вирусных гепатитов. Такой подход позволяет дополнительно диагностировать 32.7% случаев острого гепатита и 78.9% случаев хронического гепатита в группах «безмаркерных» пациентов. 3. С увеличением возраста респондентов, инфицированных HCV, растет доля генотипа 1 и снижается доля генотипа 3. Этот сдвиг обусловлен миграцией генотипа 3 HCV из районов производства наркотиков. Около 90% лиц, употребляющих наркотики, попадает в возрастную группу до 35 лет. 4. Генотипирование изолятов HCV (n=818) по двум противоположным районам генома 5’-UTR и NS5В выявило четыре рекомбинантных изолята с генотипами 2k/1b (2) и 2a-2c/1b (2), что ранее являлось крайне редким явлением вследствие генотипирования только по одному району генома – 5’-UTR. 5. Через 5 лет после полного курса вакцинации против гепатита В в группе, где концентрация защитных антител была ниже протективного уровня (<10МЕ\л), положительный индекс HBsAg стимуляции лимфоцитов определялся в 72.2% случаев, что достоверно выше (p < 0.05), чем в группе с протективным уровнем анти-HBs IgG (48.1%). Это свидетельствует о важности оценки клеточной составляющей иммунитета при разработке стратегии вакцинации и ревакцинации. 6. Полноразмерное пептидное сканирование антигенного профиля поверхностных белков Е1 и Е2 выявило существенные различия, характерные для сибирских изолятов 1b, 2a/2c и 3a генотипов HCV. Наибольшие межгенотиповые различия регистрируются в позициях 280-290, 410-430 и 520-540. Этот факт необходимо учитывать при разработке вакцин против гепатита С. 7. Иммуногенные свойства рекомбинантных гликопротеинов Е1 и Е2 HCV существенно зависят от эукариотической системы экспрессии, в которой эти белки продуцируются. Рекомбинантные белки, полученные в системе экспрессии вируса осповакцины, обладают большей иммуноадекватностью природным белкам, чем гликопротеины, полученные в системе экспрессии вируса Синдбис. 8. Пептиды, соответствующие новым вируснейтрализующим линейным эпитопам в позициях а.о. 264-318 рекомбинантного белка Е1 и a.о. 496-515 рекомбинантного белка Е2 HCV, могут рассматриваться в качестве перспективных компонентов вакцин против гепатита С. ^ Работа представлялась в докладах и постерах на 8 международных и 9 российских конференциях, конгрессах и симпозиумах: на IV конференции по вирусным гепатитам В, С и Д (Москва, 2001); 2-й научной конференции с международным участием «Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера» (Новосибирск, 2002); XIIth International Congress of Virology (Paris, France, 2002); V Российской научно-практической конференции «Гепатит B, C и D - проблемы диагностики, лечения и профилактики» (Москва, 2003); 6-м ежегодном съезде Европейского Общества Клинической Вирусологии и 8-ой Конференции по Современной ситуации в области хронических вирусных гепатитов (Лион, Франция, 2003); Международном междисциплинарном конгрессе «Прогресс в фундаментальных и прикладных науках для здоровья человека» (Судак, Крым, Украина, 2004); Международной конференции «Развитие международного сотрудничества в области изучения инфекционных заболеваний» (Сосновка, Новосибирская обл., 2004); на 5-ой Всероссийской научно-практической конференции «Генодиагностика инфекционных болезней» (Москва, 2004); на 1-й Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва, 2004); на Российской научно-практической конференции «Генодиагностика инфекционных заболеваний» (Сосновка, Новосибирская обл., 2005); на Всероссийской конференции «Фундаментальные науки – медицине» (Новосибирск, 2005); III Российской научной конференции с международным участием «Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера» (Новосибирск, 2006); Международной научно-практической конференции «Геномные технологии в медицине и медицинское образование на рубеже веков» (Алматы, Казахстан, 2006); Международной научно-практической конференции «Молекулярная диагностика инфекционных болезней» (Минск, Белоруссия, 2007); Всероссийской научной конференции «Теоретические основы эпидемиологии. Современные эпидемиологические и профилактические аспекты инфекционных и массовых неинфекционных заболеваний» (Санкт-Петербург, 2008); XIV International Congress of Virology (Istanbul, Turkey, 2008); 16th International Symposium on Hepatitis C Virus and Related Viruses (Nice, France, 2009); American Association for the Study of Liver Diseases (AASLD) annual meeting (Boston, USA, 2010). По материалам диссертации опубликовано 45 работ, включая 26 тезисов в сборниках конференций и 19 статей, из которых 15 опубликованы в журналах списка, рекомендованного ВАК, 2 статьи опубликованы в международных журналах Antiviral Therapy и Journal of Medical Virology. Работа выполнена в 1998-2010 гг. в ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора в рамках научных тем организации, по гранту Американского Фонда Гражданских Исследований и Развития (CRDF) №RB0-893 «Совместный эпидемиологический проект по изучению вирусного гепатита С», по грантам Международного научно-технического центра (МНТЦ) № 1637p «Изучение частоты встречаемости, распределения генотипов и молекулярной вариабельности изолятов вируса гепатита С в сибирских регионах России» и № 3255р «Исследование иммунологических и структурных свойств рекомбинантных белков Е1 и Е2 ВГС экспрессированных в клетках млекопитающих». Результаты, представленные в диссертации, получены лично автором, под ее руководством и в соавторстве с к.х.н. Г.Ф. Сиволобовой (раздел 3.1-3.2 и 5.2), к.б.н. А.А. Гражданцевой (раздел 3.1-3.2; 4.2 и 5.3-5.4), к.б.н. А.В. Качко (раздел 3.3.4; 3.5.3; 5.5), к.ф.-м.н. А.Н. Шваловым (раздел 3.5 и 5.1), Т.А. Лупан (раздел 5.2.1), к.б.н. А.В. Шустовым (раздел 3.3.2), к.м.н. И.В. Плясуновой (раздел 3.3.2-3.3.3), к.б.н. Р.Б. Баяндиным (раздел 3.3.1), Е.В. Чуб (раздел 3.3.2), А.В. Ивановой (раздел 5.2.2), к.б.н. В.А. Терновым (раздел 3.2.5), А.Е. Нестеровым (раздел 4.3-4.4), к.б.н. О.В. Носаревой (раздел 4.3-4.4), Л.А. Акинфеевой (раздел 3.2). Автор выражает глубокую благодарность всем коллегам за сотрудничество. Автор искренне признателен врачам, оказавшим помощь в выполнении данной работы: к.м.н. В.М. Гранитову, Н.Г. Клиновенко, к.м.н. О.И. Матрос, к.м.н. И.А. Хорошиловой (г. Барнаул); Л.И. Губановой, А.П. Четверикову, Ю.А. Данилову, В.В. Леоненко (г. Иркутск); В.Г. Орловскому, М.В. Алешиной, В.И. Кузубову, Л.И. Локтевой, Р.П. Алейникову (р.п. Кольцово); Е.Г. Сахаровой, Н.Я. Черноусовой, И.В. Красильниковой, Д.И. Козлову, Т.Г. Бурмистровой, Т.Г. Томиленко, Я.С. Ульяновой, Е.А. Фихман, О.В. Мельниковой, Т.А. Масленниковой, А.Г. Лебедеву (г. Новосибирск). За сотрудничество в работе автор признателен и благодарен своим американским коллегам Dr. Stephen M. Feinstone (зав. лабораторией вирусов гепатитов, FDA, USA) и Dr. Marian E. Major (ведущий специалист лаборатории вирусов гепатитов, FDA, USA). Автор искренне благодарит своих консультантов д.б.н., профессора, члена-корреспондента РАН С.В. Нетесова и д.б.н., профессора В.Б. Локтева за научное руководство и помощь в организации работ, представленных в диссертации. ^ Диссертация построена по монографическому типу и состоит из введения, пяти глав, выводов, списка цитируемой литературы и 3-х приложений. Работа изложена на 347 страницах, включая 43 рисунка, 31 таблицу, 449 библиографических ссылок. Нумерация рисунков и таблиц приводится отдельно для каждой главы. ^ 1. Молекулярно-эпидемиологическое исследование парентеральных вирусных гепатитов в сибирских регионах России ^ Эпидемиологическая часть работы выполнена по схеме “поперечного” (cross-sectional) исследования, от обследуемых лиц получали не только образец сыворотки крови, но также собирали эпиданамнез. Для этого, каждому участнику предлагали ответить на вопросы заранее разработанной анкеты в условиях индивидуального анонимного интервью. Было использовано три варианта анкет, набор вопросов в которых варьировал для разных групп участников и разрабатывался с учетом международного опыта по проведению аналогичных исследований. Все работы были одобрены Этическим комитетом ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор». Интервьюирование и взятие крови осуществляли только после подписания респондентом Информированного согласия. Одноразовые вакуумные системы забора крови «Вакутайнер» были впервые нами использованы для проведения крупномасштабного эпидемиологического исследования на территории Сибири. Мы использовали вакутайнеры с гелевой пробкой, которая формирует разделительный барьер между сывороткой и клетками крови во время центрифугирования. Этот барьер обеспечивал качество образцов сывороток при хранении и транспортировке из больниц в лабораторию ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» для проведения последующих анализов. В целом нами было проведено два крупных молекулярно-эпидемиологических исследования, в результате которых были созданы три электронные базы данных. Каждая база данных включает более 400 полей, по которым в дальнейшем проводили статистическую обработку. Каждое поле представляет вопрос Анкеты, пункт Истории болезни, результат ИФА отдельно по всем тестированным маркерам вирусных гепатитов, ПЦР анализа или генотип вирусного изолята. Первая электронная база данных (база данных №1 далее) содержит информацию о 2000 участниках исследования, представляющих четыре группы населения Новосибирской области: 1) пациенты Муниципального городского наркологического диспансера г. Новосибирска (МГНД), которые являются группой риска в отношении парентеральных вирусных гепатитов вследствие социального поведения и повышенных гемоконтактов; 2) пациенты Новосибирского областного Центра по профилактике и борьбе со СПИД и другими инфекционными заболеваниями (цСПИД), р.п. Кольцово, эта группа была использована для оценки частоты встречаемости гепатитов В и С среди стационарных пациентов инфекционных больниц широкого профиля; 3) посетители поликлиники Новосибирской районной больницы №1 (НРБ-1), р.п. Кольцово использовались как группа сравнения в связи с тем, что такая выборка представляет общую популяцию лучше, чем доноры крови, поскольку большая часть последних уже прошла предварительный отбор по наличию HBsAg и антител к HCV; 4) медицинские работники МГНД, НРБ-1, цСПИД, больницы скорой медицинской помощи №2 (БСМП-2) г. Новосибирска, эта группа также является группой риска в отношении парентеральных вирусных гепатитов вследствие своей профессиональной активности. Исследование проводили в 2001-2002 гг. При формировании всех четырех групп не делали никакого отбора по возрасту, полу или диагнозу, а включали в обследование всех лиц, подписавших Информированное согласие, до достижения объёма выборки n=500. Вторая электронная база данных (база данных №2 далее) была окончательно сформирована в 2004 году. Она включает информацию о 3441-м пациенте инфекционных больниц 3-х сибирских регионов России – Новосибирской обл. (n=1509), Иркутской обл. (n=888) и Алтайского края (n=1044). В обследовании участвовали пациенты, поступившие в больницы в период с 1 сентября 2001 по 31 декабря 2002 года с симптомами острого гепатита и не имеющие в анамнезе указаний на перенесенные гепатиты. Третья электронная база данных (база данных №3 далее) была существенно меньше двух предыдущих и содержала информацию о 164-х пациентах Государственной областной клинической больницы г. Новосибирска (ГОКБ) с диагнозом «хронический гепатит». Она была выполнена в рамках второго молекулярно-эпидемиологического исследования вместе с анализом острых гепатитов и полностью сформирована в 2004 году. Общий объем выборки, доступной для эпидемиологического анализа на электронном носителе, составляет 5605 жителей сибирских регионов России. Все базы данных выполнены в рекомендованном ВОЗ международном формате EpiInfo [http://www.who.int/chp/steps/resources/EpiInfo/en/index.html] на английском языке. ^    Рис. 1.1. Поло-возрастная структура обследованной выборки. Обследованная нами популяция жителей Сибири содержит примерно равное количество мужчин (n=2860) и женщин (n=2745), и это соотношение соблюдается для всех регионов (Рис. 1.1). Более 50% участников исследования входят в возрастную группу до 35 лет. Эта группа представляет наибольший интерес с точки зрения оценки инфекции парентеральными вирусными гепатитами, поскольку обладает высокой репродуктивной и социальной активностью и особенно ценна с точки зрения прогнозирования здоровья регионов. Н  аше исследование с исчерпывающей ясностью показывает, что внутривенное употребление наркотиков являлось основной причиной заболеваемости парентеральным вирусным гепатитом С и смешанной инфекцией HCV и HBV на территории сибирских регионов России в период 2001-2002 гг. (Табл. 1.1). Среди потребителей инъекционных наркотиков (ПИН) процент инфицированности HCV и микста HCV+HBV составляет 83% и 28.9% соответственно, в то время как во всей остальной популяции – 15.2% и 3.9%. Риск инфицирования HCV и микстом HCV+HBV у ПИН в 27.3 и 10 раз выше, чем у лиц, не употребляющих наркотики. Статистически достоверным фактором риска для ПИН также является инфекция HBV (OR=1.74).Таблица 1.1. Риск инфицирования гепатитами В и С среди потребителей инъекционных наркотиков.
1 Общее число обследованных респондентов по 3-м базам. 2 Процент проб, позитивных в ИФА на HBsAg и/или анти-HCV IgG. 3 Отношение шансов (OR). Количественные значения OR рассчитаны на 5% уровне значимости.  Рис. 1.2. Процент употребления различных наркотических препаратов. Около 90% лиц, употребляющих наркотики, попадает в возрастную группу до 35 лет, и доля мужчин существенно выше, чем женщин. Среди наркотических препаратов внутривенного употребления наибольшее распространение имеет так называемая «ханка» (80.57%) (Рис. 1.2), которая представляет собой кустарно приготовленный грубый экстракт опия-сырца. Вторым по значимости является героин (45.85%). Из интраназальных наркотиков респондентами были указаны крэк (20.74%) (курение) и, в существенно меньшей степени, кокаин (1.75%) (вдыхание). Амфетамины и метадон имеют незначительное распространение, 1.31% и 0.87% соответственно. ^ Исследование серологических маркёров инфекции HBV и HCV выполнено с использованием коммерческих тест-систем, активно используемых в сибирских регионах для диагностирования данных инфекций: ЗАО «Вектор-Бест» (г. Новосибирск) и НПО «Диагностические системы» (г. Нижний Новгород). В некоторых спорных случаях для диагностики дополнительно использовали наборы фирмы MONOLISA (Франция) и Ortho Clinical Diagnostics (США). В случае гепатита С анализировали IgG к белкам core, NS3, NS4 и NS5; в случае гепатита В - HBsAg, HBeAg, анти -HBc IgM и IgG, анти-HBе IgG, анти-HBs IgG; в случае гепатита А - общие анти-HAV IgM и IgG и в случае гепатита Е - общие анти-HEV IgM и IgG. Для повышения достоверности результатов ИФА нами использовались как скрининговые, так и подтверждающие тест-системы в случае определения HBsAg и анти-HCV IgG. Частота встречаемости серологических маркёров HCV и HBV в группе посетителей поликлиники оказалась достаточно велика: анти-HCV IgG -5.6%; HBsAg - 3.6%, анти-HBc IgG - 24.0%, что свидетельствует о неблагополучной ситуации по гепатитам В и С в р.п. Кольцово и отражает рост заболеваемости этими инфекциями в период 2001-2002 гг. в России в целом [ЗНиСО, №1, 2003]. У обследованного медицинского персонала больниц Новосибирской области HBsAg встречался с частотой 5.4%, а средняя частота выявления анти-HCV IgG составила 5.2% (Табл. 1.2), 27% медработников были вакцинированы против HBV. Таблица 1.2. Встречаемость серологических маркеров HBV, HCV и количество вакцинированных против HBV в группе «медицинские работники».
Среди медработников-женщин HBsAg выявлен, в основном, у медсестер и сотрудников диагностических лабораторий. Среди медработников-мужчин HBsAg был найден у хирургов, анестезиологов, медбратьев. Самая высокая частота встречаемости анти-HCV IgG (7.3%) выявлена нами у персонала больницы скорой помощи (БСМП-2), что связано со спецификой работы таких медучреждений: оказание экстренной помощи, работа в экстремальных ситуациях или в ночное время. Из числа обследованных пациентов цСПИД 35.8% оказались позитивными в ИФА на анти-HCV IgG. Частота встречаемости HBsAg составила 35.0%, анти-HBc IgM и/или IgG выявлялись с частотой 50.7%, а анти-HBs IgM и/или IgG обнаружены у 20.8% пациентов. Среди образцов крови, полученных от пациентов МГНД, анти-HCV IgG были найдены в 48.0% образцов. Частота выявления HBsAg среди всех пациентов МГНД составила 8.4%, антитела к HBcAg встречались у 49.9% пациентов (244/500), а анти-HBs IgM и/или IgG обнаружены в 32.6% случаев.  Рис. 1.3. Этиология острых вирусных гепатитов в сибирских регионах. Доля вирусных гепатитов А, В, С и Е в структуре заболеваемости острыми гепатитами в сибирских регионах России составляет 85.4% (Рис. 1.3), при этом наибольший вклад вносят HAV (40.7%) и HBV (37.8%). Высока частота встречаемости смешанных инфекций (16.6% в суммарной популяции), среди которых 48.8% составляет микст-инфекция HBV+HCV. В последнем случае среди больных преобладали лица моложе 30 лет и употребляющие наркотики внутривенно. В Иркутске процент инфицирования ПИН вирусом гепатита С был наиболее высок (45%). Это коррелирует с вспышкой ВИЧ инфекции среди ПИН г. Иркутска в этот же период, когда в город была завезена большая партия инфицированного героина. Препараты наркотиков на наличие HCV специально не проверялись, однако общий путь передачи этих вирусов определяет высокую вероятность ко-инфекции при инъекционных процедурах. Случаи гепатита Е среди пациентов с острым гепатитом в Сибири достаточно редки. Нами было выявлено только 3 случая HEV инфекции в Новосибирске, 2 из которых подтверждены ПЦР-анализом.  Рис. 1.4. Структура острых вирусных гепатитов в разных возрастных группах. На оси ординат указан объем выборки (n), на оси абсцисс – возрастные группы. Отрицательны в ИФА на маркеры гепатитов А-Е оказались 14.6% больных (выявлены болезни желчевыводящих путей, ОРЗ и др.), 30% из них были выписаны с формулировкой «гепатит невыясненной этиологии». Анализ показал, что доля пациентов данной группы растет с увеличением возраста. Так, среди пациентов моложе 25 лет только 8.8% больных с признаками острого гепатита не имели серологических маркеров А-Е гепатитов. В возрастной группе старше 60 лет доля таких гепатитов составляет 51.4% (Рис. 1.4). ПЦР анализ данных образцов выявил наличие геномов вирусов гепатитов А, В или С в 32.7% случаев. В группе больных хроническим гепатитом хотя бы один из маркеров гепатита В имели 25.6% респондентов, маркеры гепатита С - 69.5%, смешанная инфекция гепатитов В и С регистрировалась в 6.7% случаев и у 11.6% пациентов не было найдено серологических маркёров ни HCV, ни HBV инфекций. Проведение ПЦР для этой группы лиц позволило определить этиологию гепатита в 78.9% случаев. Эти данные подтверждают важность проведения ПЦР для диагностики острого и хронического гепатита в случае наличия клинических симптомов и отсутствия серологических маркеров известных вирусов гепатитов. ^ Молекулярно-биологическая часть работы предусматривала проведение ПЦР-амплификации фрагментов областей preS2-S (303 п.о.) для выявления ДНК HBV; 5’-UTR (260 п.о.) и NS5B (360 п.о.) - для выявления РНК HCV; NS5B (402 п.о.) для детекции генома HGV и определение их первичных структур посредством прямого секвенирования амплификатов. Секвенированные последовательности депонированы в электронную базу GenBank. Генотипирование образцов выполнено с помощью филогенетического анализа полученных нами данных секвенирования и последовательностей гомологичных районов прототипных изолятов соответствующих вирусов из международных баз данных. Для оценки генотипического разнообразия изолятов HBV на территории сибирских регионов России нами были использованы 246 секвенированных фрагментов вирусной ДНК. Результаты филогенетического анализа (Рис. 1.5) показали, что последовательности полученных нами изолятов относятся к трем генотипам: 4 последовательности относятся к генотипу А (1.6%), 2 последовательности к генотипу С (0.8%), 240 последовательностей к генотипу D (97.6%).  |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
 |
Что представляют собой парентеральные вирусные гепатиты? |
|
Что представляют собой парентеральные вирусные гепатиты? |
|
Что представляют собой парентеральные вирусные гепатиты? |
|
28 июля – Всемирный день борьбы с гепатитом Вирусные гепатиты Вирусные гепатиты группа инфекционных заболеваний с различными механизмами передачи, характеризующихся... |
|
Парентеральные гепатиты в вопросах и ответах |
|
Программа вступительного экзамена в магистратуру направления «Биология» по профилю «биохимия и молекулярная |
|
Источником парентерального вирусного гепатита может быть как больной острой или хронической формой, В группу вирусов вызывающих вирусные гепатиты, входят вирусы А,В,С,D и Е. В зависимости от механизма... |
|
Что такое вич/спид? Что такое вирусные гепатиты? Как не заразиться гепатитами в и С? Где можно обследоваться |
|
Вирусные гепатиты |
|
Буклета: «Вирусные гепатиты» |
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям