Тропонин I миоглобин двойной тест (Duo Troponin I mgl test (Duo Troponin I – mgl-check-1))
|
|
Скачать 157.01 Kb.
|
|
Содержание
Предназначение и принцип методаОбезвреживание отходов Подготовка реагентов Взятие и подготовка проб Характеристики теста Ограничения метода |
|
Тропонин I - Миоглобин двойной тест (Duo Troponin I - MGL Test (Duo Troponin I – MGL-Check-1)). VEDALAB, Франция Каталожный номер: 15041B Фасовка: 20 тестов/упаковка Справка Тропонин I (TnI) – один из регуляторных белков сократительной мускулатуры (1). Он кодируется тремя различными генами, которые отвечают за разные формы сократительных мышечных тканей – быстрые и медленные скелетные и сердечные TnI изоформы (2). Уникальная аминокислотная последовательность делает сердечный тропонин I (cTnI) идеальным кандидатом для лабораторного тестирования острого инфаркта миокарда (ОИМ), что приводит к развитию техники тестирования с помощью моноклональных антител, не дающих перекрестных реакций со скелетно-мышечным тропонином (3). Опубликованные исследования показали полезность измерения cTnI для диагностики ОИМ (3, 4, 12, 13). Уровень cTnI поднимается выше нормального уровня в течение 4-6 часов после инфаркта, типичный диапазон составляет 18,5-188 нг/мл для cTnI через 11-15 часов (5). Уровень cTnI очень низок у нормальных здоровых людей и не обнаруживается у пациентов с поврежденными скелетными мышцами. Следовательно, cTnI является наиболее специфическим маркером для диагностики ОИМ. Миоглобин – внутриклеточный гемовый белок, участвующий в запасании кислорода и его передаче мышечной ткани (6). У человека миоглобин является одним из главных белков сердечной мышцы, поэтому повреждение миокарда приводит к выходу миоглобина в кровяное русло (7, 8). В норме уровень миоглобина в сыворотке человека составляет около 60 нг/мл, но при остром инфаркте миокарда он может повыситься до 1500 нг/мл. Тем самым, измерение миоглобина является ценным индикатором при ранней диагностике острого инфаркта миокарда, поскольку было обнаружено, что его уровень возрастает уже в течение 2-4 часов после появления симптомов (9, 10, 11). ^ Двойной иммунохроматографический экспресс-тест для качественного определения тропонина I и миоглобина в сыворотке, плазме или цельной крови. В методе используется уникальная комбинация окрашенного коньюгата мышиных антител с коллоидным золотом к человеческому тропонину I и миоглобину и иммобилизованных в тестовой области мембраны мышиных поликлональных антител к этим же белкам для их определения в тестируемых пробах с высокой специфичностью. Тестовое устройство состоит из пластмассового корпуса, содержащего две разные полоски для определения данных белков. После сбора цельной крови, плазмы или сыворотки несколько капель образца добавляют в каждую лунку для образца тестового устройства. По мере того как образец продвигается по мембранам, окрашенный коньюгат мышиных антител к белкам связывается с миоглобином или тропонином I, если последние присутствуют в пробе, образуя комплекс антиген-антитело. Этот комплекс связывается со специфическими иммобилизованными в тестовой зоне антителами, образуя полосы розового цвета. При отсутствии в пробе указанных белков цветные полосы не образуются. Вне зависимости от результата теста несвязанный конъюгат, продолжая продвигаться по слою адсорбента, достигает контрольных зон, где осаждается с образованием пурпурно-розовых контрольных полос, подтверждающих качественность применяемых в тесте реагентов. Качественный результат теста считывается визуально. Состав Тестовые кассеты 20 Одноразовые пластмассовые пипетки 40 Разбавитель для тропонина I во флаконе-капельнице, 5 мл 1 Разбавитель для миоглобина во флаконе-капельнице, 5 мл 1 Инструкция 1 Стабильность и хранение 1. Хранить при температуре от 4 до 30°C в герметично закупоренной фабричной упаковке. 2. Не замораживать! 3. Тест стабилен до истечения срока хранения, указанного на этикетке. Меры предосторожности Данный тест предназначен только для диагностики in vitro и профессионального применения. При работе с пробами пользоваться защитной одеждой и одноразовыми перчатками. Не принимать пищу, не пить и не курить в помещении, где выполняется работа с пробами. При взятии и тестировании проб не прикасаться руками к слизистой оболочке глаз и носа. Внимательно прочитать инструкцию перед проведением теста. Не использовать тестовую кассету, если её защитная упаковка повреждена. Не использовать тестовую кассету с истекшим сроком хранения. Пробы цельной крови следует тестировать сразу после взятия (в течение 4 часов). ^ Все пробы следует считать потенциально инфекционными. После завершения процедуры тестирования утилизировать пробы следует с осторожностью и только после стерилизации в автоклаве или обработки 0,5 – 1% раствором гипохлорита натрия не менее 1 часа. ^ Все реагенты готовы к использованию. Исследуемые образцы Сыворотка, плазма (с цитратом натрия, ЭДТА или гепаринизированная) или цельная кровь. ^ 1. Взятие крови для отделения сыворотки осуществляется с помощью стандартной лабораторной процедуры (асептическим способом, исключающим гемолиз). Все пробы следует считать потенциально инфекционными. 2. Пробы цельной крови следует тестировать сразу после взятия (в течение 4 часов). 3. Для тестирования пробы в течение 48 часов после взятия крови образец следует хранить в холодильнике при 2–8°C. Если же тест будет выполняться позже, пробу сыворотки или плазмы необходимо заморозить. Замороженные пробы перед тестированием следует оттаять, тщательно перемешать и довести до комнатной температуры. Повторное замораживание проб не допускается. Процедура тестирования 1. Довести все пробы, тестовые кассеты и разбавители до комнатной температуры. 2. Извлечь тестовую кассету из защитной упаковки, оторвав край упаковки по надрезу. 3. Пометить тестовую кассету фамилией или кодовым номером пациента. 1. Тропонин I -Образцы сыворотки/плазмы 4. Набрать пробу сыворотки или плазмы в пипетку-капельницу и, держа её вертикально, внести по капле 9-10 капель (250 мкл) пробы в тропониновую лунку для проб тестовой кассеты. Не добавлять разбавитель для образца, если тестируется сыворотка или плазма! -Образцы цельной крови 4. Набрать пробу цельной крови в пипетку-капельницу и, держа её вертикально, внести по капле 2 капли (50 мкл) пробы в тропониновую лунку для проб тестовой кассеты. Затем внести по капле 5 капель (200 мкл) разбавителя для тропонина I в ту же лунку. 5. Считать качественный результат теста на миоглобин визуально через 15-20 минут после внесения пробы. 2. Миоглобин 4. Набрать пробу (сыворотки или плазмы) в пипетку-капельницу и, держа её вертикально, внести 1 каплю (25 мкл) пробы в миоглобиновую лунку для проб тестовой кассеты. Если тестируется цельная кровь, внести в лунку для проб по капле 2 капли (50 мкл) пробы. 5. Внести по капле 5 полных капель разбавителя (200 мкл) в миоглобиновую лунку для проб тестовой кассеты. 6. Считать качественный результат теста визуально через 10 минут после внесения пробы. И  нтерпретация результатовОтрицательный: Появляется только одна цветная полоса в контрольной зоне (C). Положительный: Кроме цветной полосы в контрольной зоне, появляется также вторая чётко различимая полоса в тестовой зоне. Неопределённый: Если в контрольных зонах не появилось чётких полос, тест считается не прошедшим контроль качества. В этом случае рекомендуется повторить его (немедленно или в течение 4 часов после первого), взяв новую тестовую кассету. ^ 1. ТРОПОНИН I а) Чувствительность -Образцы сыворотки/плазмы Отрицательные сыворотки человека, предварительно проанализированные с использованием анализатора STRATUS-DADE, обогащались cTnI (либо комплексным (I.T.C.), либо свободным) в различных концентрациях. Результаты показывают, что данный тест способен специфически обнаруживать cTnI в минимальной концентрации 0,4 нг/мл. Белок в равной степени может распознаваться как в комплексной форме (которая является обычной формой белка в сыворотке ОИМ), так и в свободной форме. -Образцы цельной крови Отрицательные сыворотки человека обогащались cTnI (либо комплексным (I.T.C.), либо свободным) в различных концентрациях. Результаты показывают, что данный тест способен специфически обнаруживать cTnI в минимальной концентрации 1 нг/мл. Белок в равной степени может распознаваться как в комплексной форме (которая является обычной формой белка в сыворотке ОИМ), так и в свободной форме. б) Специфичность: Отрицательная сыворотки, проанализированные с помощью анализатора STRATUS-DADE, показывали постоянные отрицательные результаты при использовании данного теста. Не наблюдалось никаких перекрестных реакций с тропонином скелетных мышц. в) Влияния: Следующие вещества не влияют на результаты теста: Билирубин 10 мг/дл Гемоглобин 250 мг/дл Триглицериды 1000 мг/дл Не наблюдалось влияния на результат анализа в негативных сыворотках с концентрацией СРБ до 96 мг/мл и ревматоидного фактора до 3 072 МЕ/мл. Исследование образцов цельной крови или плазмы с различными антикоагулянтами не показало влияния цитрата и ЭДТА на результаты анализа, в то время как гепарин может быть причиной ложных отрицательных результатов. г) Хук-эффект: Хук-эффект не наблюдался до концентрации 5 мкг/мл как для связанной, так и для свободной формы тропонина I. д) Воспроизводимость: Внутрисерийная Воспроизводимость в рамках одного анализа определялась с использованием 5 повторов образцов крови или сыворотки, как положительных, так и отрицательных по тропонину I. Совпадение положительных и отрицательных результатов составляло 100%. Межсерийная Воспроизводимость в рамках нескольких разных анализов определялась с использованием тех же образцов по тропонину I с использованием трех различных партий тестовых кассет. Совпадение положительных и отрицательных результатов составляло также 100%. 2. МИОГЛОБИН а) Чувствительность: Аналитическая чувствительность теста составляет 100 нг/мл. Тест может также иногда давать положительные результаты при концентрациях, не достигающих 100 нг/мл. б) Специфичность: Было обследовано 54 пациента (средний возраст 54 ± 9,5 лет) с подозрением (по клиническим признакам или ЭКГ) на острый инфаркт миокарда. Все пациенты поступили в кардиологическое отделение через 2–8 часов после появления симптомов. При поступлении у пациентов немедленно брались пробы крови, которые тестировались данным тестом и, параллельно, количественным ИФА-тестом для определения уровня миоглобина в крови. При сравнении результатов тестов с уточнённым диагнозом как чувствительность, так и специфичность теста составила 100%. При сравнении результатов теста с количественным методом специфичность составила 100%.
1* - Диафрагмальный ОИМ, 2 - антеросептальный ОИМ, 3 - антеролатеральный ОИМ, 4 – без зубца Q ^ 1. Как и для всех диагностических процедур, врачу следует принимать во внимание результат теста только в свете всей прочей диагностической информации. 2. Тест разработан таким образом, чтобы давать положительный результат при концентрациях тропонина I в пробе выше 1 нг/мл в цельной крови и 0,4 нг/мл в сыворотке/плазме, а миоглобина выше 100 нг/мл. Время, за которое уровень миоглобина в крови достигает этого порогового значения, составляет 2–4 часа с момента появления симптомов инфаркта, а тропонина I – 4-6 часов после ОИМ. Тем самым, отрицательный результат теста в первые часы после появления симптомов не может с уверенностью исключить острый инфаркт миокарда. При сохранении подозрения на инфаркт миокарда следует через некоторое время повторить тест. 3. Тест даёт лишь качественные результаты. 4. Пробы цельной крови следует тестировать сразу после взятия (в течение 4 часов). 5. Некоторые пробы сыворотки с высокими концентрациями ревматоидного фактора или СРБ могут дать неспецифический ложный положительный результат при тестировании. Эта возможность должна быть учтена заранее. 6. При несоблюдении времени реакции могут наблюдаться ошибочные результаты. 7. При разработке теста преследовалась цель исключить возможное влияние человеческих антител к мышиным IgG (HAMA). Тем не менее, при высоких уровнях HAMA возможны ложно положительные результаты. Литература
12. F.S. Apple. A. WU. Myocardial infarction redefined : role of cardiac troponin testing. Clinical Chemistry. Vol. 47 no.3. 13. Bates K.J., Hall E.M. et al. Circulating Immunoreactive Cardiac Troponin Forms Determined by Gel Filtration Chromatography after Acute Myocardial Infarction. Clinical Chemistry. Vol. 56 no.6. 952-958. 2010. Соблюдать температуру хранения Читать инструкцию Не использовать повторно Только для in vitro диагностики _________________________________________________________________________________________________________________ Рег. Уд. ФС3 2009/05727 стр. из ЗАО ДИАКОН, 142290 г.Пущино Моск. обл., ул.Грузовая 1а Тел (495) 9806339, факс (495) 9806679, e-mail: [email protected] |
||||||||||||||
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям