Антибактериальная фотодинамическая терапия в лечении нозокомиального синусита у пациентов отделений реанимации и интенсивной терапии 14. 01. 03 болезни уха, горла и носа

^ ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Первый, крайне успешный, опыт применения пенициллина в 1941 году дал надежду человечеству на скорую победу над инфекционными болезнями. Однако этим надеждам не было суждено осуществиться. Уже в 50-е годы XX века появились первые сообщения о появлении штаммов микроорганизмов со сниженной чувствительностью к пенициллину [Акимкин В.Г., 1997; Goldman et all, 1996]. Продолжающееся снижение чувствительности к антибиотикам привело к возникновению штаммов микроорганизмов, характеризующихся панрезистентностью ко всем существующим на сегодняшний день антибактериальным препаратам. Эти возбудители на сегодняшний день являются типичной флорой для лечебно-профилактических учреждений и поэтому условно объединены в группу внутрибольничных (нозокомиальных) микроорганизмов [Козлов В.С., 2002].

Нозокомиальная инфекция (НИ) может иметь любую локализацию, но наиболее частыми ее формами является раневая НИ, нозокомиальная пневмония (НП), НИ мочевого тракта и нозокомиальный синусит (НС) [Акимкин В.Г., 1998]. Первый случай НС был описан в 1974 году [Arens, 1975]. С этого момента отмечался неуклонный рост заболеваемости НС, которая, по мнению ряда авторов, достигла к 90-м годам ХХ века 100% в отделениях реанимации и интенсивной терапии (ОРИТ) [Meyer P., 1988, Pedersen J., 1991].

Клиническая значимость НС в первую очередь определяется его тесной патогенетической связью с развитием НП. Доказано, что патологическое отделяемое в околоносовых пазухах (ОНП) является одним из основных источников эндогенной контаминации трахеобронхиального дерева нозокомиальной флорой. При бактериологическом исследовании отделяемого из верхних и нижних дыхательных путей у больных НС и НП в подавляющем случае выделяется идентичная микрофлора [Козлов Р.С., 2001; Salord F., 2000; Sottile F., 1986]. Именно поэтому НС является неблагоприятным прогностическим фактором у пациентов, проходящих лечение в ОРИТ [Крюков А.И., 2005; Саmрbell G., 1996].

При лечении НИ антибактериальная терапия проводиться препаратами максимально широкого спектра действия, эффективными в отношении основных возбудителей. Однако применение самых современных антибактериальных препаратов не гарантирует достижения клинического результата. Это обусловлено ростом резистентности основных штаммов возбудителей НИ ко всем группам антибиотикам [Козлов Р.С., 2002; Крюков А.И., 2005]. В ближайшие годы прогнозируется снижение эффективности цефалоспоринов IV поколения, амикацина, карбапенемов в отношении грамотрицательных возбудителей НИ [Fagon J.J., 1999]. Также прогрессивно снижается клиническая эффективность ванкомицина, что значительно ухудшает результаты антибактериальной терапии у больных с НИ, обусловленной S. aureus.

Низкая эффективность антибактериальной терапии в отношении нозокомиальных возбудителей требует разработки и внедрения новых способов антимикробной терапии, направленных на преодоление антибиотикорезистентности и повышение эффективности лечения различных форм НИ и, в частности, НС. Все это послужило основой для проведения настоящего исследования. Основанием для выбора антибактериальной фотодинамической терапии (АФДТ) для лечения НС стал имеющийся экспериментальный и клинический опыт по лечению банального синусита [Лапченко А.A., 2005; Исаев В.М., Наседкин А.Н. 2004] и гнойно-воспалительных процессов другой локализации с применением АФДТ.

^ Цель исследования

Повышение эффективности лечения нозокомиального синусита у больных, проходящих лечение в отделении реанимации и интенсивной терапии, на основе клинико-экспериментальной разработки и применения метода местной антибактериальной фотодинамической терапии.


^ Задачи исследования

1. 
   Изучить спектр возбудителей нозокомиального синусита у больных в отделениях реанимации и интенсивной терапии.
   
2. 
   Экспериментальным путем in vitro определить параметры антибактериальной фотодинамической терапии и эффективность использования различных фотосенсибилизаторов для воздействия на наиболее распространенные штаммы возбудителей нозокомиального синусита.
   
3. 
   Разработать методику проведения антибактериальной фотодинамической терапии для лечения нозокомиального синусита у пациентов отделений реанимации и интенсивной терапии.
   
4. 
   Оценить эффективность лечения нозокомиального синусита с применением антибактериальной фотодинамической терапии у пациентов отделений реанимации и интенсивной терапии.
   
5. 
   Провести сравнительный анализ эффективности лечения больных нозокомиальным синуситом с использованием антибактериальной фотодинамической терапии и больных, получающих антибактериальную терапию по стандартным схемам.
   

^ Научная новизна

Впервые экспериментально изучена эффективность антибактериальной фотодинамической терапии по отношению к основным возбудителям нозокомиального синусита.

Впервые экспериментально на возбудителях нозокомиального синусита, выделенных от больных отделений реанимации и интенсивной терапии, определены и обоснованы параметры проведения фотодинамического воздействия, необходимые для инактивации возбудителей нозокомиального синусита. Обоснована необходимость включения в схему антибактериальной фотодинамической терапии полимиксина Е.

Разработаны показания для проведения антибактериальной фотодинамической терапии у больных нозокомиальным синуситом, проходящих лечение в отделениях реанимации и интенсивной терапии, и доказана ее микробиологическая и клиническая эффективность.

^ Научно-практическая значимость работы

Разработан метод антибактериальной фотодинамической терапии, который позволяет повысить эффективность лечения больных нозокомиальным синуситом, проходящих лечение в отделениях реанимации и интенсивной терапии, без увеличения лекарственной нагрузки. Применение метода сокращает сроки лечения нозокомиального синусита у пациентов отделений реанимации и интенсивной терапии.

^ Положения, выносимые на защиту

1. 
   Грамотрицательная флора обуславливает более 75% случаев нозокомиального синусита в отделениях реанимации и интенсивной терапии. Основными грамотрицательными возбудителями являются K. pneumoniae и P. aeruginosa. Наиболее значимым грамположительным возбудителем является S. aureus.
   
2. 
   Метиленовый синий является более эффективным фотосенсибилизатором при использовании антибактериальной фотодинамической терапии по отношению к грамотрицательным возбудителям, чем хлорин Е6. Оба фотосенсибилизатора демонстрируют одинаково высокую активность в отношении грамположительных возбудителей нозокомиального синусита.
   
3. 
   Эффект от применения антибактериальной фотодинамической терапии с применением метиленового синего усиливается при включении в схему терапии полимиксина Е.
   
4. 
   Метод лечения нозокомиального синусита с применением антибактериальной фотодинамической терапии является эффективным и безопасным.
   

^ Внедрение результатов в практику

Результаты проведенной работы внедрены и используются в практике отделений реанимации и интенсивной терапии ГКБ им. С.П. Боткина, ГКБ №1, ГКБ №12.

^ Публикация материалов исследования

По материалам научных исследований опубликованы 13 печатных работ, из них 3 – в центральной печати; методические рекомендации – 2, подана заявка на патент.

^ Апробация работы

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на VIII Конгрессе Российского общества ринологов (Оренбург, 2009); VIII, IX, Х Всероссийском конгрессе оториноларингологов «Наука и практика в оториноларингологии», (Москва, 2009, 2010, 2011); Ежегодной конференции российского общества ринологов, (Ярославль, 2010, Красноярск, 2012); IХ и X Научно-практической конференции «Внутрибольничные инфекции в стационарах различного профиля», (Москва, 2011, 2012); XVIII Съезде Российского общества оториноларингологов, (Санкт-Петербург, 2011); IХ и Х Научно-практической конференции «Фармакологические и физические методы лечения в оториноларингологии», (Москва, 2011, 2012); IV Научно-практической конференции оториноларингологов центрального федерального округа РФ «Актуальное в оториноларингологии», (Москва, 2012); I Петербургском форуме оториноларингологов России, (Санкт-Петербург, 2012); XXVII Международной конференции молодых оториноларингологов (Санкт-Петербург, 2012).

Апробация диссертации состоялась на научно-практической конференции ГБУЗ МНПЦО ДЗМ 07 сентября 2012 года. Протокол № 17.

^ Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 146 страницах машинописного текста, состоит из оглавления, введения, обзора литературы, трех глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 22 рисунками и 15 таблицами. Список использованной литературы состоит из 228 источников, из которых 111 – отечественных и 117 – зарубежных авторов.

^ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Нами было обследовано 100 пациентов с НС, которые проходили лечение в ОРИТ ГКБ №12 и ГКБ им. С.П. Боткина Департамента Здравоохранения города Москвы в период с 2010 по 2012 годы. В исследование были включены пациенты обоего пола в возрасте от 17 лет до 81 года, мужчин было 62, женщин - 38. Средний возраст пациентов составил 48,6±16,9 лет.

Критерием включения больных в исследование было развитие у пациентов НС на фоне нахождения в ОРИТ и проведения искусственной вентиляции легких. Из исследования исключались пациенты, у которых при проведении бактериологического исследования отделяемого из ОНП выявляли внебольничную флору, пациенты с изолированным поражением основных пазух, а также больные, находившиеся в ОРИТ недостаточное для оценки результатов время.

Пациенты, включенные в исследование, находились в ОРИТ с различной хирургической (26 пациентов), неврологической (45 пациентов) нейрохирургической патологией (26 пациентов) и другой патологией (3 пациента).

Самой частой формой НС у пациентов, включенных в исследование, был односторонний гаймороэтмоидит – у 46 пациентов, двусторонний гаймороэтмоидит был выявлен у 27 пациента, гемисинусит – у 15, пансинусит – у 12 пациентов. У пациентов с гемисинуситом и пансинуситом изменения слизистой оболочки лобной пазухи заключались в отеке слизистой оболочки и не требовали хирургического лечения. Средний срок развития НС у пациентов в ОРИТ по данным компьютерной томографии (КТ) составил 4,1±1,5 суток.

Общая летальность среди пациентов, включенных в исследование, составила 41%. Основной причиной летальности стала нарастающая полиорганная недостаточность.

Все пациенты, включенные в исследование, находились под динамическим наблюдением специалистов в зависимости от профиля основного заболевания – нейрохирургов, хирургов, неврологов, терапевтов и других.

По причине тяжелого и крайне тяжелого состояния пациентов, вошедших в исследование, жалобы и анамнез изучали по данным истории болезни. Всем пациентам проводили клинико-лабораторный мониторинг состояния: общий анализ крови (ежедневно), биохимический анализ крови (ежедневно), исследование электролитов крови (2 раза в сутки), бактериологическое исследование отделяемого из ОНП (полученного при пункции верхнечелюстных пазух), из трахеи (при проведении санационной бронхоскопии), исследование крови на антитела к ВИЧ, RW, вирусу гепатита С, Hbs –антиген (при поступлении).

Всем пациентам проводили переднюю риноскопию с помощью носового зеркала. Для исследования области соустий ОНП, сфеноэтмоидального кармана и носоглотки проводили эндоскопическое исследование полости носа эндоскопом 30⁰ с наружным диаметром 2,7 мм Karl Storz. При проведении осмотра оценивали отечность и гиперемию слизистой оболочки, наличие и характер патологического отделяемого в полости носа. Каждый симптом оценивали по бальной шкале от 0 (отсутствие симптома) до 3 баллов (симптом максимально выражен). Таким образом, максимальная оценка местных симптомов составляла 12 баллов.

Лучевая диагностика включала проведение КТ ОНП и рентгенографию органов грудной клетки. КТ всем пациентам выполняли в аксиальной проекции с шагом томографа от 1 до 5 мм. Кратность выполнения КТ определяли течением основного заболевания, течением синусита, тяжестью общего состояния пациента и возможностью его транспортировки в отделение КТ. Рентгенографию органов грудной клетки выполняли в положении лежа на спине на реанимационной койке. Кратность выполнения рентгенографии определяли наличием НП и динамикой ее течения.

Всем пациентам выполняли бактериологическое исследование отделяемого из полости носа, ОНП, трахеобронхиального дерева. Материал из ОНП получали при пункции верхнечелюстной пазухи. Лечебно-диагностическую пункцию выполняли по стандартной методике через нижний носовой ход одноразовой иглой Куликовского. После пункции патологическое отделяемое из полости верхнечелюстной пазухи аспирировали в стерильный шприц с физиологическим раствором. Полученное патологическое отделяемое направляли в бактериологическую лабораторию. При заборе материала в пробирки без транспортной среды доставку в лабораторию осуществляли незамедлительно, в пробирках с транспортной средой – в течение суток после получения материала. Бактериологический анализ проводили по традиционным методикам. Посевы инкубировали в термостате при 37⁰С до 3 суток. Выросшие колонии микроорганизмов изучали макро- и микроскопически. При этом подсчитывали количество колоний каждого типа. Далее производили выделение чистых культур. Чистые культуры микроорганизмов изучали на антибиотикочувствительность диско-диффузионным методом со стандартными концентрациями.

Для определения параметров АФДТ в эксперименте in vitro мы использовали лазерные аппараты «Мустанг 2000» и «Креолка». Оба аппарата излучают лазерное излучение с длиной волны 660 нм, но отличаются мощностью излучения («Мустанг 2000» – 30 мВт, «Креолка» - от 100 до 1000 мВт).

Бактериологическую оценку эффективности воздействия АФДТ на штаммы возбудителей НС проводили методом стандартных разведений и высева на питательные среды и с помощью бактериологического анализатора Bak Trak.

Для проведения статистического анализа данных использовали: определение средней арифметической (Х), ошибки средней арифметической (Sx), стандартного отклонения (S), максимального (Max) и минимального (Min) показателей величин. Обработку полученных данных проводили, используя программы Microsoft Excel, Statistica.

Оценку статистической значимости различий между средними величинами проводили с помощью критерия Стьюдента (t). Различия считали достоверными при 95% пороге вероятности (Р<0,05)

^ Результаты исследования

Для изучения спектра возбудителей НС было выполнено и проанализировано 685 бактериологических анализов отделяемого из полости носа, ОНП и трахеобронхиального дерева у больных НС в ОРИТ.

По нашим данным среди возбудителей НИ большая часть представлена грамотрицательными бактериями родов Enterobacteriaceae и Pseudomonas. Штаммы бактерий данных родов выделяли в 53% случаев. В целом грамотрицательные бактерии были выделены в 84,1% проб патологического отделяемого из носа, ОНП и трахеобронхиального дерева. Основными грамотрицательными возбудителями являлись K. pneumoniae - 29,9%, P. aeruginosa - 21,4%, E. coli - 7,5%, Acinetobacter spp. - 10,1%. Суммарная доля грамположительных бактерий составляла 15,9%. Грамположительная флора была представлена S. aureus - 6,4% и S. epidermidis – 5,9%, Enterococcus spp. – 1%. Все выделенные бактериальные возбудители имели высокий уровень антибиотикорезистентности. Грибковая флора была представлена грибами рода Candida и была выявлена в 8% проведенных исследований, во всех случаях в ассоциации с бактериями. Необходимо отметить, что у этих пациентов клинические проявления микоза, требовавшие назначения специфической противогрибковой терапии, отсутствовали.

Анализ результатов микробиологических исследований показал, что в 61% (481 исследование) случаев были выделены несколько культур, и лишь в 29% - монокультура (144 исследования). При этом данный факт следует рассматривать как совместное выделение, а не образование ассоциаций. Мы не выявили каких-либо отличий в течение НС при выделении монокультуры и нескольких штаммов бактерий.

При сравнении спектров возбудителей нижних и верхних дыхательных путей мы не выявили достоверных различий. Данный факт объясняется анатомической близостью верхних и нижних дыхательных путей и общим патогенезом НС и НП.

^ Исследование чувствительности возбудителей НС к АФДТ in vitro

С учетом сведений о спектре возбудителей НС для исследования эффективности АФДТ in vitro были выбраны штаммы P. aeruginosa, K. pneumoniae, S. aureus. Все штаммы были выделены от пациентов, у которых за время лечения в ОРИТ развился НС. Для изучения были выбраны полирезистентные штаммы.

^ Определение чувствительности к АФДТ штаммов K.pneumoniaе и P. aeruginosa. После приготовления стандартной бактериальной взвеси и ее разведения до концентрации 1:10 McF 1,0 мл взвеси переносили в стерильную чашку Петри диаметром 30 мм и равномерно распределяли по дну чашки. Таким образом, толщина слоя бактериальной взвеси составляла 1 мм, что имитировало облучение слизистой оболочки. В отобранную пробу вносили 0,1 мл фотосенсибилизатора: метиленовый синий (в концентрациях 3, 7 и 15 мкг/мл) или хлорина Е6 (в концентрации 3,5, 0,35 и 0,035 мкг/мл). После внесения фотосенсибилизатора и экспозиции 10 минут бактериальную взвесь равномерно облучали с помощью лазерных аппаратов Мустанг 2000 (излучающая насадка КЛ 02) и аппарата Креолка. Облучение лазером проводили с различными параметрами длительности (от 60 до 420 с) и мощности (от 30 до 1000 мВт) для достижения различного уровня энергии – от 2 до 278 мДж/мм². Для изучения эффективности фотодинамического воздействия на каждый штамм проводили 84 сеанса облучения.

В результате исследования эффективности АФДТ в отношении грамотрицательных бактерий нами установлено, что P. aeruginosa и K. pneumoniaе обладают равной чувствительностью к АФДТ с использованием метиленового синего. Выраженный бактериостатический эффект (снижение множественности исходной взвеси с 10⁷ до 10⁴) возникал при применении в качестве фотосенсибилизатора метиленового синего в концентрации 15 мкг/мл и облучении, обеспечивающего плотность энергии 198 мДж/мм², которая в эксперименте достигалась при облучении длительностью 300 с и с исходящей мощностью 500 мВт.

Во всех сериях эксперимента мы не получили достоверного эффекта при применении хлорина Е6.

Поскольку при использовании аппарата Мустанг 2000 плотность энергии 198 мДж/мм² могла быть достигнута при длительности экспонирования 4950 с (13 часов 45 минут), мы отказались от его дальнейшего использования.

^ Изучения влияния полимиксина Е на эффект АФДТ. Известно, что основным механизмом, снижающим эффективность АФДТ в отношении грамотрицательных бактерий, является строение клеточной стенки бактерии, препятствующее адгезии фотосенсибилизатора. Для исследования возможности повышения эффективности АФДТ в отношении грамотрицательных бактерий мы изучили влияние субингибирующих доз мембранотропного антибиотика – полимиксина Е. Чувствительность K. pneumoniae и P. aeruginosa к полимиксину Е была определена на бактериологическом анализаторе. Минимальная подавляющая концентрация полимиксина Е для K. pneumoniae и P. aeruginosa составила 200 мкг/мл.

Для исследования эксперимент модифицировали следующим образом: в бактериальную взвесь одновременно с фотосенсибилизатора вносили 100 мкл раствора полимиксина Е с концентрацией 100 и 50 мкг/мл. Облучения проводили с параметрами, обеспечивающими плотность мощности 198 мДж/мм², которые мы установили как оптимальные на первом этапе эксперимента.

В серии из 24 экспериментов при применении указанных параметров и метиленового синего был достигнут выраженный эффект – снижение множественности исходной взвеси на 6 порядков при применении 50 мкг полимиксина Е и на 7 порядков – при применении 100 мкг полимиксина Е. Данный результат мы расценивали как бактерицидное действие АФДТ. (Табл. 1,2)

Следует отметить появление бактериостатического действия АФДТ с полимиксином Е при использовании в качестве фотосенсибилизатора хлорина Е6 в концентрации 0,035мкг/мл. Снижение множественности исходной взвеси на 2 порядка в условиях in vitro недостаточно для клинического применения данного фотосенсибилизатора, однако, подтверждает механизм действия полимиксина Е как катализатора адгезии фотосенсибилизатора на поверхности грамотрицательной клетки.

^ Таб. 1. Эффект фотодинамического воздействия на K. pneumonia с применением полимиксина Е

Экспозиция мДж/мм2	Фотосенсибилизатор						Контроль среды
	метиленовый синий 15 мкг/мл			хлорин Е6 0,35 мг/мл
	полимиксин 100 мкг/мл	полимиксин 50 мкг/мл	0	полимиксин 100 мкг/мл	полимиксин 50 мкг/мл	0
0 (темновой контроль)	7,3*107	7,3*107	7,3*107	7,3*107	7,3*107	7,3*107	7,3*107
198 мДж/мм2	23	270	9,2*104	4,2* 105	5,4*105	7,3*107

Экспозиция мДж/мм2	Фотосенсибилизатор						Контроль среды
	метиленовый синий 15 мкг/мл			хлорин Е6 0,35 мг/мл
	полимиксин 100 мкг/мл	полимиксин 50 мкг/мл	0	полимиксин 100 мкг/мл	полимиксин 50 мкг/мл	0
0 (темновой контроль)	5,9*106	5,9*106	5,9*106	5,9*106	5,9*106	5,9*106	5,9*106
198 мДж/мм2	74	525	8,1*103	6,1*103	3,8*104	5,9*106

^ Таб. 2. Эффект фотодинамического воздействия на P. aeruginosa с применением полимиксина Е.

Полученные нами данные продемонстрировали потенциальную возможность усиления фотодинамического воздействия на грамотрицательные бактерии при использовании полимиксина Е в качестве катализатора фотодинамической реакции. Использование полимиксина Е расширяет спектр фотосенсибилизаторов для антибактериального воздействия.

^ Исследование чувствительности S. aureus к АФДТ. Для изучения эффективности фотодинамического воздействия в отношении S. aureus мы использовали определенные ранее как оптимальные параметры для фотодинамической инактивации грамотрицательных бактерий.

Исследование проводили по той же схеме, как и изучение фотодинамического воздействия на K. pneumoniae, и P. aeruginosa. Использовали метиленовый синий в концентрации 15 мкг/мл и хлорин Е6 в концентрации 0,035 мкг/мл.

В результате эксперимента было установлено, что фотодинамическое воздействие с параметрами, эффективными для инактивации грамотрицательных бактерий, и указанными фотосенсибилизаторами приводит к бактерицидному эффекту в отношении стафилококка (отсутствие бактериального роста в течение 24 часов после облучения). Метиленовый синий и хлорин Е6 проявили одинаково высокую эффективность.

^ Адаптация полученных результатов к клиническому применению АФДТ. Результаты, полученные в результате лабораторной части исследования, были положены в основу клинической части нашей работы. Ключевым значением для расчета параметров фотодинамического воздействия в условиях in vivo является плотность энергии (мДж/мм²), оптимальный уровень которой был установлен равным 198 мДж/мм². Приняв среднюю площадь слизистой оболочки верхнечелюстной пазухи равной 3500 мм², мы определили, что данная плотность энергии будет достигнута при следующих параметрах: мощность излучения 500 мВт и длительность экспонирования Т= 1409 с (23,5 мин).

Нами было обследовано 100 пациентов в ОРИТ с НС. Средний срок развития НС в ОРИТ составил 4,1±1,5 суток. На момент выявления НС риноскопическая картина у большинства пациентов соответствовала легкой (31%) и средней степени тяжести синусита (49%). У 15% синусит согласно риноскопической картине расценивали как тяжелый. У 5% был выявлен синусит без риноскопических изменений.

КТ имела ключевое значение в диагностике НС. У 61 пациента НС был выявлен при выполнении КТ головного мозга, которую проводили в связи с основным заболеванием. Только у 39 пациентов КТ было выполнено с целью исключения патологии ОНП после осмотра ЛОР-врача и выявления клинических симптомов НС.

У 87 из 100 пациентов, включенных в исследование, при динамическом рентгенологическом контроле была выявлена НП (у 78 – двусторонняя, у 9 – односторонняя), у 7­ – ателектазы доли легкого. Средний срок выявления НП составил 6,3±2,1 суток.

Все пациенты, включенные в исследование, получали системную антибактериальную терапию по поводу основного заболевания и нозокомиальных осложнений. Стартовую эмпирическую терапию проводили цефалоспоринами III-IV поколения с антисинегнойной активностью. Данная схема антибактериальной терапии была применена у 74% пациентов. У 10 % пациентов в качестве стартового антибиотика использовали ципрофлоксацин. У 16% для проведения стартовой терапии применяли комбинацию цефалоспорина III поколения в сочетании с амикацином или фторхинолонами. После получения результатов бактериологического исследования проводили коррекцию антибактериальной терапии с учетом антибиотикограммы. После получения результатов микробиологического исследования с учетом коррекции проводимой терапии цефалоспорины IV поколения получали 65% пациентов. Комбинацию цефалоспоринов III поколения с амикацином применяли у 7% пациентов, карбапенемы в виде монотерапии у 18% пациентов, 10% пациентов получали комбинацию карбапенемов с антистафилококковыми препаратами (ванкомицином или линезолидом). Ванкомицин и карбапенемы назначали только по рекомендации клинического фармаколога пациентам с тяжелым течением НИ.

Препаратом последнего резерва являлся полимиксин (ингаляционная форма), который назначали пациентам в критическом состоянии с тяжелой НП, ассоциированной с P. aeruginosa. Полимиксин Е получали 10% пациентов, включенных в исследование. У всех пациентов, получавших полимиксин Е, его топическое применение сочетали с использованием карбапенемов системно.

Всем пациентам, включенным в исследование, после выявления НС проводили местное лечение, направленное на санацию полости носа и ОНП. Всем больным проводили пункции верхнечелюстной пазухи с промыванием пазухи антисептиком. После анемизации слизистой оболочки носа деконгестантами патологическое отделяемое из полости носа удаляли санационным катетером. После аспирации патологического отделяемого из полости носа проводили ее орошение растворами антисептиков. Рекомендовали изменять положение пациентов в постели таким образом, чтобы голова была приподнята. Назогастральный зонд устанавливали через контралатеральную синуситу сторону. При двустороннем НС назогастральный зонд устанавливали через половину носа с менее выраженным поражением ОНП.

Для изучения эффективности АФДТ все пациенты, включенные в исследование, были случайным образом рандомизированы на 3 группы, одинаковые по возрастному и половому составу.

1 группа (контрольная) (50 пациентов) – лечение проводили по традиционной методике.

2 группа (основная) (40 пациентов) – при лечении использовали АФДТ по разработанной нами методике.

3 группа (основная) (10 пациентов) – лечение с применением АФДТ по модифицированной методике с использованием полимиксина Е (из соображений рациональности антибактериальной терапии и для профилактики развития резистентности к полимиксину Е, в данную группу были включены пациенты, получавшие ингаляционную терапию полимиксином Е по поводу НП).

^ Местное лечение пациентов с НС с применением АФДТ. (2 группа)

После выполнения пункции верхнечелюстной пазухи и аспирации патологического отделяемого мы вводили в пазуху 20 мл раствора фотосенсибилизатора метиленового синего в концентрации 15 мкг/мл. После 10 минутной экспозиции фотосенсибилизатор из пазухи аспирировали, а через иглу Куликовского в пазуху вводили цилиндрический световод оснащенный рассеивающим диффузором, обеспечивающим равномерное облучение всех стенок пазухи лазерным излучением. Для облучения использовали аппарат «Креолка». Облучение проводили с параметрами излучения: мощность излучения 500 мВт, длина волны 660 нм, длительность экспонирования – 23,5 минуты. После завершения облучения световод и иглу удаляли из пазухи.

При контрольной пункции через 24 часа оценивали характер патологического отделяемого в пазухе, после чего повторяли сеанс АФДТ.

^ Местное лечение пациентов с НС с применением АФДТ по модифицированной методике с применением полимиксина Е (группа 3.)

Методика АФДТ была аналогичной со 2 группой, но после аспирации патологического отделяемого из верхнечелюстной пазухи в ее полость вводили 20 мл раствора полимиксина Е с концентрацией 100 мкг/мл. После 10 минутной экспозиции раствор антибиотика аспирировали из пазухи в шприц и в ее просвет вводили 20 мл раствора метиленового синего в концентрации 15 мкг/мл. В остальном схема проведения АФДТ не отличалась от схемы у пациентов 2 группы.

^ Оценка результатов лечения

Оценку результатов лечения проводили по динамике риноскопической картины, количества и характера отделяемого, полученного при пункции верхнечелюстных пазух, а также результатов бактериологического исследования.

Динамику риноскопических симптомов у пациентов с НС оценивали при каждом осмотре согласно описанной ранее бальной системе. Мы отметили большую скорость наступления положительной динамики у пациентов 2-й и 3-й групп. Уже после первого сеанса АФДТ отмечали уменьшение выраженности местных симптомов на 2-3 балла, а после второго – на 3-4 балла. У пациентов 1-й группы уменьшение выраженности симптомов было менее заметно и составляло в среднем 1-2 балла после первой и 2-3 балла – после второй пункции (см. рис.1).

^ Рис. 1. Динамика риноскопических симптомов на фоне лечения пациентов



Таким образом, при проведении стандартной местной терапии у пациентов с НС сроки купирования местных симптомов составили 7,2±0,4 суток, при применении АФДТ (группа 2) 4,1±0,3 суток, а при применении АФДТ по модифицированной методике с использованием полимиксина Е (группа 3) – 3,5±0,3 суток. Таким образом, применение АФДТ без использования полимиксина ускоряет купирование местных симптомов синусита на 3 суток, а при использовании полимиксина Е – на 3,5 суток. Однако, в связи с малым количеством пациентов, включенных в 3-ю группу, разница между результатами в группах 2 и 3 оказалась недостоверной.

Уже после первого сеанса АФДТ у всех пациентов 2-й и 3-й групп отмечалось изменение характера патологического отделяемого в верхнечелюстной пазухе с гнойного на слизистое или слизисто-гнойное. После второго сеанса у подавляющего большинства пациентов отмечалось значительное уменьшение количество отделяемого в пазухе. У всех пациентов характер отделяемого был слизистым.

У пациентов 1-й группы на второй день лечения сохранялось гнойное отделяемое в верхнечелюстной пазухе. После второй или третьей пункции верхнечелюстной пазухи отмечалось изменение характера отделяемого на слизисто-гнойное. В целом для купирования гнойного НС при применении АФДТ было необходимо проведение 3,3±0,8 пункций верхнечелюстной пазухи, а при стандартной терапии НС – 5,2± 0,75 пункций. Эффективность АФДТ по модифицированной схеме с применением полимиксина Е оказалась сравнимой со стандартной схемой проведения АФДТ (статистически недостоверно), однако, при проведении второго сеанса АФДТ отмечалось меньшее количество слизистого отделяемого.

Материал для бактериологического исследования забирали при каждой пункции. При наличии отделяемого в пазухе его направляли для бактериологического исследования, а при отсутствии отделяемого – для исследования направляли промывную жидкость из верхнечелюстной пазухи. Проводили только качественную оценку микрофлоры. Установлено, что даже на фоне проведения АФДТ в условиях ОРИТ не удается достичь стерильности слизистой оболочки верхнечелюстных пазух и носа. Мы не наблюдали качественного изменения характера микрофлоры при проведении терапии у пациентов в основной и контрольной группах. Большое влияние на результаты бактериологического исследования играла путевая флора. Поскольку мы не проводили количественного исследования обсемененности слизистой оболочки патогенами, бактериологическое исследование не рассматривалось как критерий оценки эффективности проводимой терапии.

Таким образом, АФДТ при НС является высокоэффективным и безопасным методом консервативного лечения этого контингента пациентов ОРИТ.

Выводы

1. 
   Грамотрицательная флора обуславливает развитие нозокомиального синусита в 75% случаев, основными грамотрицательными возбудителями являются K. pneumoniаe (29,9%), P. aeruginosa (21,4%). Наибольшее значение среди грамположительных бактерий имеет S. aureus (6,9%). Грибковая флора выделяется лишь в сочетании с бактериальной и представлена Candida (8%).
   
2. 
   С помощью экспериментального микробиологического исследования in vitro установлено, что метиленовый синий (в концентрации 15 мкг/мл) является более эффективным фотосенсибилизатором по отношению к возбудителям нозокомиального синусита, чем хлорин Е6: бактериостатический эффект возникает при воздействии на грамотрицательные бактерии и бактерицидный – на грамположительные, при лазерном излучении с длиной волны – 660 нм, мощностью излучения – 500 мВт, облученностью – 198 мДж/мм², длительностью облучения – 23,5 минуты.
   
3. 
   Эффект антибактериальной фотодинамической терапии в отношении грамотрицательных бактерий может усиливаться (в 1000 раз) с помощью включения в схему антибактериальной фотодинамической терапии полимиксина Е за счет улучшения адгезии фотосенсибилизатора к мембране бактериальной клетки.
   
4. 
   Применение антибактериальной фотодинамической терапии для лечения пациентов с нозокомиальным синуситом позволяет сократить сроки лечения заболевания на 3 суток и уменьшить количество пункций, необходимое для санации околоносовых пазух на 2.
   
5. 
   На основании анализа динамики клинической картины, данных эндоскопического исследования полости носа и околоносовых пазух, оценки результатов пункций верхнечелюстных пазух установлено, что антибактериальная фотодинамическая терапия при нозокомиальном синусите является высокоэффективным и безопасным методом консервативного лечения пациентов с нозокомиальным синуситом. Клинического улучшение удалось добиться у 100% пациентов.
   

^ Практические рекомендации

1. 
   Местное лечение пациентам в отделениях реанимации и интенсивной терапии с нозокомиальным синуситом должно проводиться по следующей схеме: а) анемизация слизистой оболочки носа топическими адреномиметиками проводится каждые 4 часа; б) после анемизации слизистой оболочки выполняется аспирация патологического отделяемого из полости носа; в) пациенту с нозокомиальным синуситом должно придаваться положение в постели с приподнятой головой.
   
2. 
   Сеансы антибактериальной фотодинамической терапии пациентам с нозокомиальным синуситом в отделениях реанимации и интенсивной терапии надо проводить по следующей схеме: после проведения пункции верхнечелюстной пазухи отделяемое из пазухи аспирируется, она промывается физиологическим раствором, через ту же иглу в пазуху вводится фотосенсибилизатор – метиленовый синий в концентрации 15 мкг/мл; после экспозиции 10 минут фотосенсибилизатор из пазухи аспирируется, а через иглу Куликовского или троакар в пазуху вводится цилиндрический световод с рассеивающим наконечником, обеспечивающий равномерное облучение стенок пазухи лазерным излучением. Облучение проводится лазерным аппаратом «Креолка» с параметрами излучения: мощность излучения – 500 мВт, длина волны – 660 нм, длительность экспонирования – 23,5 минуты. После завершения облучения световод и игла удаляются из пазухи.
   
3. 
   Пациентам, получающим ингаляционную форму полимиксина Е для лечения нозокомиальной пневмонии возможно его включение в схему антибактериальной фотодинамической терапии: 20 мл раствора полимиксина Е в концентрации 100 мкг/мл вводится в верхнечелюстную пазуху с экспозицией 10 минут, затем раствор антибиотика аспирируется, и в пазуху вводится раствор метиленового синего. Далее методика аналогична описанной в пункте 2.
   

^ Список опубликованных работ

1. 
   Кунельская Н.Л., Туровский А.Б., Изотова Г.Н., Талалайко Ю.В. «Антибиотикотерапия в оториноларингологии», Научно-практический медицинский рецензируемый журнал «Доктор.ру», 2008, №5, С. 6-9.
   
2. 
   Туровский А.Б., Жуховицкий В.Г., Талалайко Ю.В. «Особенности фотодинамической терапии нозокомиальных инфекций верхних дыхательных путей», Российская оториноларингология, Приложение № 1, 2010, С. 59-61.
   
3. 
   Талалайко Ю.В., Туровский А.Б., Жуховицкий В.Г. «Нозокомиальный синусит и фотодинамическая терапия», материалы к конференции «Наука и практика в оториноларингологии», 2010, Москва.
   
4. 
   Кунельская Н.Л., Туровский А.Б., Талалайко Ю.В. «Основные принципы лечения хронического синусита», Научно-практический медицинский рецензируемый журнал «Доктор.ру», 2010, №6 (57), С. 5-11.
   
5. 
   Туровский А.Б., Колбанова И.Г., Талалайко Ю.В., Матвеева Е.В., Москалева В.А. «Острый синусит: состояние проблемы на начало XXI века», Научно-практический медицинский рецензируемый журнал «Доктор.ру», 2011, №6 (65), С. 7-12.
   
6. 
   Крюков А.И., Туровский А.Б., Жуховицкий В.Г., Талалайко Ю.В. «Опыт лечения больных с нозокомиальным синуситом с применением метода антибактериальной фотодинамической терапии», материалы к конференции «Наука и практика в оториноларингологии», 2011, Москва.
   
7. 
   Крюков А.И., Туровский А.Б., Жуховицкий В.Г., Талалайко Ю.В. «Новый подход к лечению нозокомиальной инфекции верхних дыхательных путей», материалы к конференции «Девятый конгресс Российского общества ринологов», 2011, Казань.
   
8. 
   Туровский А.Б., Жуховицкий В.Г., Талалайко Ю.В. «Перспективы использования фотодинамической антибактериальной терапии в лечении нозокомиальных инфекций верхних дыхательных путей», материалы к конференции «Фармакологические и физические методы лечения в оториноларингологии», 2011, Москва, С. 38-39.
   
9. 
   Крюков А.И., Туровский А.Б., Жуховицкий В.Г., Талалайко Ю.В. «Опыт клинического применения антибактериальной фотодинамической терапии у больных с нозокомильным синуситом», материалы к конференции «Актуальное в оториноларингологии», 2011, Москва, С. 47-48.
   
10. 
    Крюков А.И., Туровский А.Б., Жуховицкий В.Г., Талалайко Ю.В. «Место антибактериальной фотодинамической терапии в лечении больных с нозокомиальным синуситом в отделениях реанимации и интенсивной терапии», материалы к конференции «Внутрибольничные инфекции в стационарах различного профиля, профилактика, лечение осложнений», 2012, Москва, С. 35-36.
    
11. 
    Крюков А.И., Туровский А.Б., Жуховицкий В.Г., Талалайко Ю.В. «Результаты применения антибактериальной фотодинамической терапии в лечении нозокомиального синусита у пациентов в отделениях реанимации и интенсивной терапии», материалы к конференции «Фармакологические и физические методы лечения в оториноларингологии», 2012, Москва, С. 30-31.
    
12. 
    Kryukov A.I., Turovsky A.B., Zhukhovitsky V.G., Talalayko Y.V. «Application of antibacterial photodynamic therapy by treatment of patients with nosocomial sinusitis», Folia Otorhinolaryngologiae et Pathologiae Respiratoriae, vol. 18, № 2, 2012, P. 1.
    
13. 
    Крюков А.И., Туровский А.Б., Жуховицкий В.Г., Талалайко Ю.В. «Клиническое применение антибактериальной фотодинамической терапии у пациентов с нозокомиальным синуситом», «Российская ринология», 2012, №2 С. 17-18.
    

Методические рекомендации

1. 
   «Антимикробная фотодинамическая терапия воспалительных заболеваний околоносовых пазух и их гнойно-септических осложнений» В.Т. Пальчун, А.И. Крюков, Н.Л. Кунельская, А.С. Лапченко, А.А. Лапченко, А.В. Гуров, А.Г. Кучеров, Д.Л. Муратов, Д.С. Огородников, А.Б. Туровский, В.Г. Жуховицкий, Ю.В. Талалайко – 16 с., Москва, 2009.
   
2. 
   «Лечебно-диагностическая тактика у больных с нозокомиальным синуситом находящихся в отделениях реанимации и интенсивной терапии» А.И. Крюков, Н.Л. Кунельская, А.Б. Туровский, В.Г. Жуховицкий, Ю.В. Талалайко - 18 с, Москва, 2012.