Правила взятия, хранения и транспортировки биологического материала для диагностики методом пцр общие правила взятия клинического материала для исследования методом пцр
|
|
Скачать 307.63 Kb.
|
|
ПРАВИЛА ВЗЯТИЯ, ХРАНЕНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВКИ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ МЕТОДОМ ПЦР Общие правила взятия клинического материала для исследования методом ПЦР:
Что делать, если Вы что-то нарушили из перечисленного?
^
3.1. КРОВЬ Взятие крови следует производить натощак или через 3 часа после приема пищи из локтевой вены одноразовой иглой в специальную вакуумную систему (сиреневые крышки – ЭДТА). После взятия крови, пробирку следует плавно несколько раз перевернуть вверх дном, чтобы кровь в пробирке постепенно перемешалась с антикоагулянтом (! в противном случае кровь свернется и выделение ДНК/РНК станет невозможным!). После плавного перемешивания пробирку поместить в штатив. ^
Условия хранения плазмы:
^ Перед взятием материала из уретры пациенты не должны мочиться: женщины в течение 1-1,5 часов, мужчины в течение 3-5 часов, желательно ночное мочевое воздержание. При взятии материала следует помнить, что оптимальными являются определенные участки цилиндрического эпителия мочеполовых путей (передняя уретра на глубине 2,5-4 см у мужчин и слизистая оболочка цервикального канала шейки матки 1-1,5 см у женщин). При взятии материала из шейки матки ключевым моментом является удаление слизистой пробки. От тщательности проведения этой подготовительной процедуры во многом зависит возможность правильного соскоба клеток цервикального канала. Вводят гинекологическое зеркало во влагалище, открывают шейку в зеркалах, осматривают слизистую влагалища и шейки матки. Удаляют слизистую пробку тампоном с использованием пинцета, затем берут материал с помощью универсального гинекологического зонда.
Получать материал для скринингового исследования методом ПЦР следует из нескольких различных точек: эпителий цервикального канала (эндоцервикс), вагинальное отделяемое. При необходимости материал для исследования (соскоб) следует брать из уретры и эрозивно-язвенных поражений. Материал из разных локализаций можно помещать в одну пробирку с транспортной средой. Для диагностики воспалительных заболеваний (цервицит, вагинит, уретрит), скринингового ВПЧ – тестирования, диагностики бактериального вагиноза, материал с каждой локализации следует забирать в отдельную пробирку. Получение материала производят отдельными для каждой локализации одноразовыми стерильными цитощетками или универсальными зондами
Получение материала производить с помощью цервикальной цитощетки или универсального зонда в пробирку со специальной транспортной средой. Эпителий следует забирать в достаточном количестве. Допустимо присутствие небольших примесей в виде слизи и крови. Удалить слизь с поверхности шейки матки стерильным тампоном. Ввести рабочую часть цитощетки/универсального зонда в цервикальный канал и сделать два полных поворота по часовой и против часовой стрелки. Извлечь зонд, избегая касания стенок влагалища и поместить его в пробирку с транспортной средой. Рабочую часть цитощетки/универсального зонда, содержащую исследуемый материал, отрезать или обломить в области насечки и оставить в пробирке с транспортной средой. При невозможности обломить зонд допускается производить смывы в среду. Пробирку плотно закрыть крышкой не допуская зазора и смятия внутренней части крышки, и промаркировать. 3.2.1.2. Отделяемое влагалища
Получение материала следует производить с помощью универсального зонда в пробирку со специальной транспортной средой. Отделяемое урогенитального тракта следует забирать в достаточном количестве. Погрузить рабочую часть зонда в вагинальное отделяемое задненижнего свода влагалища и вращая зонд, провести по поверхности эпителия максимально полно набрать материал на зонд. Извлечь зонд и поместить его в пробирку с транспортной средой. Рабочую часть зонда, содержащую исследуемый материал, необходимо отрезать или обломить в области насечки и оставить в пробирке с транспортной средой. При невозможности обломить зонд допускается производить смывы в среду. Пробирку плотно закрыть крышкой не допуская зазора и смятия внутренней части крышки, и промаркировать. 3.2.1.3. Отделяемое уретры женщин
Получение отделяемого уретры следует производить с помощью универсального зонда в пробирку со специальной транспортной средой. Отделяемое следует забирать в достаточном количестве Допустимо присутствие небольших примесей в виде слизи и крови. Перед взятием соскоба из уретры необходимо обработать наружное отверстие уретры, смоченным стерильным физиологическим раствором тампоном, чтобы удалить отделяемое из влагалища. Ввести рабочую часть зонда в уретру несколькими вращательными движениями собрать отделяемое уретры на рабочую части зонда. Извлечь зонд и поместить его в пробирку с транспортной средой. Рабочую часть зонда, содержащую исследуемый материал, необходимо отрезать или обломить в области насечки и оставить в пробирке с транспортной средой. При невозможности обломить зонд допускается производить смывы в среду. Пробирку плотно закрыть крышкой не допуская зазора и смятия внутренней части крышки, и промаркировать.
Получение отделяемого уретры следует производить с помощью универсального зонда в пробирку со специальной транспортной средой для материала из урогенитального тракта. Отделяемое следует забирать в достаточном количестве. Допустимо присутствие небольших примесей в виде слизи и крови. Перед взятием соскоба из уретры необходимо обработать головку полового члена в области наружного отверстия уретры, смоченным стерильным физиологическим раствором тампоном. Произвести массаж уретры. При наличии свободно стекающих из уретры выделений, их удаляют сухим тампоном. Вводят рабочую часть зонда в уретру, несколькими вращательными движениями собирают отделяемое уретры на рабочую часть зонда и переносят зонд в пробирку с транспортной средой. Рабочую часть зонда, содержащую исследуемый материал, необходимо отрезать или обломить в области насечки и оставить в пробирке с транспортной средой. Пробирку плотно закрыть крышкой не допуская зазора и смятия внутренней части крышки, и промаркировать. 3.2.2.2. Соскоб эпителиальных клеток из уретры мужчин
Перед взятием соскоба из уретры необходимо обработать головку полового члена в области наружного отверстия уретры, смоченным стерильным физиологическим раствором тампоном. Произвести массаж уретры. При наличии свободно стекающих из уретры выделений их удаляют сухим тампоном. Вводят зонд в уретру на глубину 3-4 см, несколькими вращательными движениями производят соскоб эпителиальных клеток и переносят зонд в пробирку с транспортной средой для материала из урогенитального тракта. Рабочую часть зонда, содержащую исследуемый материал, необходимо отрезать или обломить в области насечки и оставить в пробирке с транспортной средой. Пробирку плотно закрыть крышкой не допуская зазора и смятия внутренней части крышки, и промаркировать. Отделяемое должно забираться в достаточном количестве. Допустимо также небольшое присутствие примесей в виде слизи, крови и гноя. ^
Перед получением секрета простаты головку полового члена обработать стерильным ватным тампоном. Секрет простаты следует собирать после предварительного массажа простаты через прямую кишку. Врач проводит массаж с надавливанием несколькими энергичными движениями от основания к верхушке. После окончания массажа предстательной железы ее секрет в количества 0,5-1 мл следует собрать в одноразовую стерильную сухую пробирку типа «Эппендорф») объемом 1,5-2,0 мл. Пробирку плотно закрыть крышкой, не допуская зазора и смятия внутренней части крышки, и промаркировать. При невозможности получить секрет - сразу после массажа простаты - следует собрать первую порцию мочи (в которой содержится секрет предстательной железы) а количестве 20-30 мл (см.правила забора мочи) 3.4. СПЕРМА
Перед сбором материала тщательно вымойте руки с мылом, а затем проведите туалет наружных половых органов также с мылом и водой. Головку полового члена и крайнюю плоть высушите стерильной салфеткой. Подготовьте контейнер, крышку контейнера приоткройте так, чтобы ее можно было снять одной рукой. Не дотрагивайтесь руками до внутренних стенок контейнера и крышки. Материал получают путем мастурбации и собирают в стерильный контейнер. Обратите внимание на то, чтобы крышка на контейнере была хорошо закрыта (во избежание вытекания материала). 3.5. МОЧА
После гигиены наружных половых органов для анализа отбирают первую порцию утренней мочи в количестве 20-30 мл в специальный контейнер для мочи. ^ Материалом служит фекалии (кал) после естественной дефекации, который собирают в чистый одноразовый контейнер с завинчивающейся крышкой и ложечкой. Собирают кал на чистую поверхность, в качестве которой может быть использован чистый новый лист (пакет) из полиэтилена или бумаги (этот способ является предпочтительным). При использовании судна, его предварительно хорошо промывают с мылом и губкой, ополаскивают многократно водопроводной водой, а потом обдают кипятком и остужают. Небольшое количество (4-6 раз) забирать из нескольких мест специальной ложечкой, вмонтированной в крышку стерильного контейнера, в количестве не более 1/3 от объема контейнера. Не наполняйте контейнер доверху. Тщательно закройте крышку. На контейнере необходимо указать Вашу фамилию, инициалы, дату рождения, дату и время сбора материала, запись должна быть сделана разборчивым почерком. В направительном бланке обязательно должен быть указан диагноз и дата начала заболевания. При взятии материала необходимо соблюдать стерильность. По возможности сбор материала на исследование должен осуществляться до назначения антибиотиков (если невозможно, то только через 12 часов после отмены препарата).
^ Ликвор получают путем прокола поясничной, субоктиципитальной области или мозговых желудочков одноразовыми пункционными иглами. Переносят 1,0 мл ликвора в одноразовые пластиковые стерильные пробирки типа «Эппендорф» объемом 1,5 мл.
3.7. МОКРОТА Взятие материала осуществляют утром натощак до выполнения гигиенических процедур при глубоком откашливании в количестве не менее 1 мл в стерильный одноразовый флакон с широким горлом, завинчивающейся крышкой, объемом не менее 50 мл.
Провести тщательную гигиену полости рта (почистить зубы, прополоскать рот водой до полного удаления зубной пасты) ч\з 30 минут можно начинать сбор слюны в стерильную емкость (желательно в пробирку с красной крышкой). Забор слюны можно производить в течении дня. Переносят не менее 1,0 мл слюны в одноразовые пластиковые стерильные пробирки типа «Эппендорф» объемом 1,5 мл ^
Взятие материала осуществляют из зоны предполагаемого местонахождения возбудителя инфекции, из поврежденной ткани или из пограничного с повреждением участка. Материал помещают в одноразовые стерильные пробирки типа «Эппендорф» объемом 1,5 мл, содержащие 0,5 мл транспортной среды.
Материал следует забирать с помощью одноразовых пластиковых пипеток в объеме не менее 0,5 мл в одноразовые сухие стерильные пробирки типа «Эппендорф» на 2 мл. Для усиления слезоотделения провести провокацию слезоточивым веществом (обычно используется нашатырный спирт) Пробирку плотно закрыть крышкой, не допуская зазора и смятия внутренней части крышки, и промаркировать.
Материал следует получать сухим стерильным ватным тампоном на пластиковой основе под местной анестезией (2 капли раствора декаина) Оттянув нижнее веко, вращающими движениями провести зонд 4-5 раз по конъюнктиве, захватывая внешний и внутренний углы глаза. После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) поместить в стерильную одноразовую пробирку на 2 мл с транспортной средой. Погрузив рабочую часть зонда в транспортную среду, аккуратно обломать пластиковый стержень на расстоянии не более 0,5 см от рабочей части и оставить рабочую часть зонда с материалом в транспортной среде Пробирку плотно закрыть крышкой, не допуская зазора и смятия внутренней части крышки, и промаркировать
Отделяемое полости носа следует забирать сухими стерильными ватными тампонами на пластиковой основе. Тампон ввести легким движением по наружной стенке носа на глубину 2-3 см до нижней раковины. Затем тампон слегка опустить книзу, ввести в нижний носовой ход под нижнюю носовую раковину, сделать вращательное движение и удалить вдоль наружной стенки носа. После получения материала рабочую часть зонда поместить в стерильную одноразовую пробирку на 1,5-2,0 мл с защелкивающийся крышкой с транспортной средой объемом 0,5 мл. Погрузив рабочею часть зонда в транспортную среду, аккуратно обломить пластиковый стержень на расстоянии нe более 0,5 см от рабочей части и оставить рабочую часть зонда с материалом в транспортной среде Пробирку плотно закрыть крышкой, не допуская зазора и смятия внутренней части крышки, и промаркировать.
Взятие материала производить в положении больного сидя с отклоненной назад головой. Для получения смыва из полости носа в оба носовых хода поочередно с помощью зонда или одноразового шприца ввести по 3-5 мл теплого стерильного изотонического раствора натрии хлорида. Промывную жидкость из обоих носовых ходов собирать через воронку в одну стерильную пробирку. Не допускается повторное использование воронки без предварительного автоклавирования. - при температуре 2-8°С – в течение 6 часов; Допускается только однократное замораживание - оттаивание материала. Транспортировка: в термоконтейнерах с охлаждающими элементами
Отделяемое следует забирать сухими стерильными ватными тампонами на пластиковой основе вращательными движениями с поверхности миндалин небных дужек и задней стенки ротоглотки. После получения материала рабочую часть зонда поместить в стерильную одноразовую пробирку на 2-1,5 мл с транспортной средой объемом 0,5 мл. Погрузить рабочую часть зонда в транспортную среду, аккуратно обломить пластиковый стержень на paccтоянии не более 0,5 см от рабочей части и оставить рабочую часть зонда с материалом в транспортной среде Пробирку плотно закрыть крышкой, не допуская зазора и смятия внутренней части крышки, и промаркировать.
Перед получением материала провести предварительное полоскание полости рта водой. После этого провести тщательное полоскание ротоглотки (в течение 10-15 сек) с помощью 10 мл изотонического раствора натрия хлорида. Жидкость следует собрать в стерильный флакон на 50 мл.
^ Защечный (буккальный) эпителий - это верхний слой живых клеток, которые очень удобны для исследования. Забор буккального эпителия исключает прием пищи в течение 4-х часов. Перед забором производится тщательное полоскание полости рта водой или физиологическим раствором. Забор эпителия производится соскобом клеток с внутренней стороны щеки тупым стерильным шпателем, пластиковой кисточкой, разовым зондом с синтетическим ворсом. Соскоб со шпателя аккуратно смывается физиологическим раствором в стерильную одноразовую пробирку типа «Эппендорф» (0,5-3 мл) с транспортной средой. При использовании зонда с синтетическим ворсом в пробирку помещается отрезанная рабочая часть зонда. Забор буккального эпителия может производиться самостоятельно обследуемым, процедура совершенно безболезненна, бескровна и не травматична.
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2019
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям