Елистратова людмила Леонтьевна клинико-микробиологические особенности акнеподобных дерматозов, осложненных демодекозом
|
|
Скачать 369.01 Kb.
|
|
На правах рукописи ЕЛИСТРАТОВА Людмила Леонтьевна КЛИНИКО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ АКНЕПОДОБНЫХ ДЕРМАТОЗОВ, ОСЛОЖНЕННЫХ ДЕМОДЕКОЗОМ 03.02.03 – Микробиология 14.01.10 – Кожные и венерические болезни АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Санкт-Петербург 2013 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Ульяновский государственный университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации ^ доктор медицинских наук профессор Нестеров Алексей Сергеевич доктор медицинских наук профессор ^ доктор медицинских наук, профессор ФГКВОУ ВПО «Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова» МО РФ, профессор ^ доктор медицинских наук, профессор ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный педиатрический медицинский университет» МЗ РФ, профессор ^ ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова» Министерства здравоохранения Российской Федерации Защита диссертации состоится 28 марта 2013 г. в 13.00 часов на заседании совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 215.002.08 при ФГКВОУ ВПО «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова» МО РФ (194044, Санкт-Петербург, ул. Акад. Лебедева, д. 6) С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова. Автореферат разослан «___» февраля 2013 г. Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук профессор Митин Юрий Алексеевич ^ Актуальность исследования. Акнеподобные дерматозы, такие как розацеа, периоральный дерматит, розацеаподобный дерматит, себорейный дерматит и др., остаются одной из самых актуальных проблем дерматологии. Среди данных дерматозов наибольший удельный вес имеют розацеа – 36% и периоральный дерматит – 25% (Юцковская Я.А. и соавт, 2010). Изучению этиологии и патогенеза хронических кожных заболеваний уделяется большое внимание во всем мире. Несмотря на наличие многочисленных работ отечественных и зарубежных исследователей, этиология данных заболеваний не известна, а механизмы формирования во многом не ясны. До настоящего времени нет единой точки зрения на причины хронизации акнеподобных дерматозов (Адаскевич В.П., 2003; Громова С.А., Олисова О.Ю., 2003; Ахтямов С.Н. и соавт, 2007). В последние десятилетия активно обсуждается вопрос о важной роли клещей рода Demodex в развитии розацеа и периорального дерматита. При этом ряд исследователей считают присутствие данных паразитов в сально-волосяных фолликулах кожи лица основной причиной развития розацеа (Коган Б.Г., Головченко Д.Я. 2011). В то же время, имеются мнения, что демодекоз является самостоятельным заболеванием, однако в Международной классификации болезней Х пересмотра демодекоз не представлен как отдельная нозологическая форма, что отражает представление лишь о провоцирующем действии клеща в развитии акнеподобных дерматозов (Давыдова И.Б., Чхатвал Н.А., Королева М.А., 2008; Заслаский Д.В., 2009). Можно предположить, что формирование акнеподобных дерматозов создает благоприятные условия для существования и размножения клеща, что утяжеляет клиническое течение заболеваний и субъективные ощущения пациента (Самцов А.В. и соавт, 2002). Именно Demodex является переносчиком микробов и вирусов в более глубокие слои дермы и усиливает в очагах поражения пустулизацию (Батыршина С.В. и соавт, 2005). Так, например, M. Norn с помощью электронного микроскопа обнаружил бактерии на поверхности тела Demodex folliculorum (Norn M.S., 1972). Наличие пустул и положительный эффект от антибактериальной терапии позволяет предположить инфекционную природу акнеподобных дерматозов (Козловская В.В., 2010; Потекаев Н.Н. и соавт., 2000; Lehmann Р., 2005). Кроме того, имеются данные, что при розацеа за счет повышения температуры кожи создаются благоприятные условия для размножения патогенной микрофлоры (Dahl M.V. et al., 2004). Однако роль микроорганизмов в развитии акнеподобных дерматозов до сих пор мало изучена (Насыбуллина Н.М., 2006). ^ Основанием для диссертации служат исследования в области акнеподобных дерматозов отечественных и зарубежных ученых (В.П. Адаскевич, Д.В. Заславский, Н.Н. Потекаев, А.В. Самцов, Е.В. Соколовский, K. Aroni, J.B. Bikowski, F. Forton и др. авторов). В работах изложены основные принципы этиопатогенеза розацеа и периорального дерматита, а также методы лечения. Исследователями не в полной мере раскрыта роль клещей рода Demodex в этиопатогенезе розацеа и периорального дерматита, их частота встречаемости и влияние на клинические проявления дерматозов. Недостаточно раскрыты особенности микрофлоры пораженных участков кожи лица у больных акнеподобными дерматозами. Мало изучен видовой спектр и факторы вирулентности бактерий, выделенных из очагов поражения при розацеа и периоральном дерматите, осложненных демодекозом. ^ охарактеризовать клинико-микробиологические особенности розацеа и периорального дерматита в зависимости от наличия микроскопических клещей рода Demodex. ^
^ Установлена зависимость между тяжестью клинических проявлений акнеподобных дерматозов и выявляемостью у больных розацеа и периорального дерматита микроклещей рода Demodex. Выявлены основные направления изменений микробных консорциумов, проявляющиеся в широком видовом спектре и достоверном увеличении показателей частоты встречаемости патогенных и условно-патогенных видов микроорганизмов при розацеа и периоральном дерматите. Получены новые знания о микробиоценозе пораженных участков кожи при розацеа и периоральном дерматите, установлено преобладание представителей рода Staphylococcus, среди которых доминировали S. aureus и S. haemolyticus, обладающие достоверно большей вирулентностью. Впервые у штаммов S. aureus и S. haemolyticus, обнаруженных у больных розацеа и периоральным дерматитом, осложненных демодекозом, выявлено достоверное увеличение генетических детерминант вирулентности, контролирующих продуцирование таких факторов вирулентности, как липаза, ДНК-аза, гемолизина-III и α-гемолизина. ^ Материалы работы используются в диагностической и лечебной работе Ульяновского областного клинического кожно-венерологического диспансера и внедрены в учебно-педагогический процесс преподавания дерматовенерологии и микробиологии студентов медицинского и педиатрического факультетов ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный университет», а также слушателей клинической ординатуры и интернатуры факультета последипломного образования и научно-исследовательской лаборатории ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный университет». Изданы практические рекомендации для врачей, интернов и ординаторов, студентов медицинских вузов: «Особенности клинических проявлений акнеподобных дерматозов, осложненных демодекозом» (г. Ульяновск: УлГУ, 2012), «Микрофлора кожи при акнеподобных дерматозах» (г. Ульяновск: УлГУ, 2012). Сочетании розацеа и периорального дерматита с демодекозом определяет необходимость в лабораторном исследовании, включающее паразитологическое, бактериологическое исследования, выявление факторов вирулентности для последующего назначения этиотропного лечения, а также профилактики осложнений. ^ Методологической основой диссертационной работы явилось последовательное применение методов научного познания. Работа выполнена в дизайне сравнительного открытого исследования с использованием клинических, инструментальных, лабораторных, аналитических и статистических методов. ^
^ Разработано и внедрено в практику комплексное микробиологическое обследование больных акнеподобными дерматозами, включающее изучение патогенного потенциала микрофлоры пораженных участков кожи для оценки их этиологической значимости и прогнозирования течения заболевания (Акт внедрения № 3 от 14.09.2012, выдан ГУЗ «Городская поликлиника №3» г. Ульяновска). ^ Тема и план диссертации, ее основные идеи и содержание разработаны совместно с научным руководителем на основании целенаправленных исследований. Автор принимал непосредственное участие в клиническом обследовании больных и в лабораторных исследованиях. Лично проводил оценку клинического течения розацеа и периорального дерматита, а также результатов бактериологических и молекулярно-генетических исследований. Автором подробно исследованы особенности микробиоценоза кожи у больных акнеподобными дерматозами на фоне демодекоза, изучена вирулентность выделенных штаммов стафилококков и ее генетические детерминанты, а также характер изменений показателей колонизационной резистентности клинических изолятов в зависимости от нозологической формы дерматоза и тяжести его течения. Автором планировалось настоящее исследование, формировалась база данных и обобщение полученных результатов. Материал был проанализирован с помощью современных методов статистического Диссертант самостоятельно провела экспериментальные микробиологические исследования, весь объем клинических и инструментальных исследований, обработку полученных результатов, сформировала базу данных, выполнил их статистический анализ и обобщение. ^ . Диссертация выполнена в соответствии с планом научной работы ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный университет». Основные положения диссертационной работы доложены на симпозиуме Национального Альянса дерматологов и косметологов. (г. Ростов-на-Дону, 2008), на международном форуме медицины и красоты (Москва, 2008), Всероссийской конференции с международным участием «Медико-физиологические проблемы экологии человека» (г.Ульяновск, 2007); 43-й научно-практической межрегиональной конференции врачей «Год семьи. Механизмы реализации приоритетного национального проекта и демографической политики в системе здравоохранения» (г.Ульяновск, 2008), 44-й межрегиональной научно-практической медицинской конференции врачей (г.Ульяновск, 2009); 45-ой научно-практической межрегиональной конференции врачей (г.Ульяновск, 2010); Всероссийская научно-практическая конференция (школа-семинар) в рамках федеральной целевой программы (г.Тольятти, 2012). Публикации. По материалам диссертации опубликовано 13 печатных работ, в том числе 5 статей в рецензируемых журналах из списка изданий, рекомендованных ВАК Минобразования России. ^ Диссертационная работа изложена на 139 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, результатов исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и списка использованной литературы, содержащего 129 отечественных и 61 иностранных источников. Текст иллюстрирован 28 таблицами и 45 рисунками. ^ Характеристика материалов и методов исследования Клинические исследования выполнены в период с 2009 по 2011 гг. на базе ГУЗ ОККВД г. Ульяновска. У всех больных акнеподобными дерматозами (n=427), средний возраст которых составил 34,2±0,82 лет, при скрининговом обследовании было проведено паразитологическое исследование с целью выявления демодекоза. Обнаружено, что частота осложнений клещами рода Demodex follicolorum у обследованных составила 73,1% (n=312), из них среди больных розацеа – 88,7%, периоральным дерматитом – 58,8%. Обследовано 122 пациента с клиническими проявлениями розацеа (71 пациент) и периорального дерматита (51 пациент). Продолжительность заболеваний составляла 3,9 ± 0,93 лет. В первую группу сравнения входили пациенты с клиническими проявлениями розацеа (68 больных) и периорального дерматита (47 больных) без демодекоза. Вторую группу сравнения составили 52 практически здоровых человека, репрезентативных по полу и возрасту. Критерии включения в исследование: больные с достоверно установленным диагнозом розацеа и периорального дерматита; возраст больных старше 18 лет и не более 60 лет; информированное согласие пациента. Из всех обследованных больных розацеа 73,3% (52 пациентов) составили женщины и 26,7% (19 человек) мужчины, средний возраст которых составил 36,7±0,89 лет. Продолжительность заболевания была 3,6±0,74лет. Среди больных розацеа эритематозная форма выявлена у 12 пациентов (16,9%), папулезная – у 27 (38,0%), пустулезная – у 31 (43,7%) и инфильтративно-продуктивной формой (гиперторофическая) – 1 (1,4%) пациент. Больных периоральным дерматитом обследовано 51 человек, из них 43 (84,3%) женщины и 8 (15,7%) мужчин, средний возраст которых составил 31,2±0,78 лет. Продолжительность заболевания была равна 4,2 ± 0,82 лет. Легкая форма заболевания наблюдалась у 9 (17,7%), средняя – 25 (49,0%), тяжелая – 17 (33,3%) пациентов. Диагнозы устанавливали на основании клинической картины заболеваний, которую оценивали по основным и второстепенным диагностическим критериям (Wilkin J., Dahl M. et all., 2002; Dahl M., 2004, Lehmann P., 2005). В процессе исследования пациентов с розацеа применялась шкала диагностической оценки розацеа (ШДОР) (Адаскевич В.П., 2004), которая включала выраженность эритемы, количество папул и пустул, телеангиэктазии, сухость кожи, жжение и покалывание, отек лица, а также выраженность симптомов офтальморозацеа. Для оценки тяжести течения периорального дерматита использовали клинический балльный индекс количественного учета объективных симптомов (эритема, папулы, шелушение) периорального дерматита – ИТПОД (индекс тяжести периорального дерматита) (Wollenberg A., Oppel T., 2006). Количественную и качественную оценку состава микрофлоры кожи производили бактериологическим методом в соответствии с Приказом МЗ СССР №535 от 22.04.85. «Об унификации микробиологических методов исследования, применяющихся в клинико-диагностических лабораториях». Определение антибиотикорезистентности культур проводили диско-диффузным методом на агаре Мюллера-Хинтона (Hispanlab/Laboratorios Conda, Испания) (Методические указания 4.2.1890-04.2004). Для выявления чувствительности микроорганизмов к антибиотикам определяли минимальную ингибирующую концентрацию препарата – МИК в ЕД/мл или мкг/мл (Навашин С.М., Чучалин А.Г., Белоусов Ю.Б., 1998). Вирулентность клинических изолятов выявляли внутрибрюшинной пробой на белых мышах и выражали через LD50 (Костюкова И.С. и соавт., 1996). Молекулярно-генетические методы с применением полимеразной цепной реакции (ПЦР) использовали для определения генетических детерминант вирулентности Staphylococcus aureus и Staphylococcus haemolyticus (Маккреди Б.Д, Чимера Д.А., 1999) на базе клинико-диагностической лаборатории ГУЗ УОКБ «Областная клиническая больница №1». Для этого применяли реакционную смесь ПЦР-РВ в присутствии EVA-Green и набора праймеров (ООО «Синтол», г. Москва) (табл.1). Таблица 1 Использованные в работе праймеры
Бактериальную ДНК выделяли из культур, выросших на питательных средах, методом аффинной сорбции. Тотальную ДНК для идентификации генов выделяли с использованием набора реагентов «Выделение ДНК из биопроб» (НПФ «Литех», Москва). Подбор праймеров и температуры отжига осуществляли при использовании пакета программ в Gene Runner Version 3.05 и Primer Blast (ресурсы GeneBank) (США). Праймеры стафилококков были синтезированы в «ООО Синтол» (Москва). Амплификацию ДНК осуществляли на программируемом амплификаторе «Терцик» (ООО «НПФ ДНК-Технологии», г. Москва). Для проведения амплификации была использована коммерческая стандартная лиофилизированная реакционная смесь с оптимизированной для классической схемы ПЦР буферной системой (ООО «ИзоГен», г. Москва), «Набор реагентов для проведения ПЦР-РВ с Taq-ДНК-полимеразой и ингибирующими активность фермента антителами в присутствии красителя EVA-Green» (Компания «Синтол», г. Москва). Регистрацию результатов ПЦР осуществляли путем электрофоретического разделения продуктов амплификации на окрашенном бромистом этидием агарозном геле. Компьютерный анализ нуклетидных последовательностей проводили с помощью компьютерной программы Vector NTI Suite (США). Регистрацию флуоресцентного сигнала осуществляли с помощью оптической камеры прибора термоциклера, обрабатка производилась с помощью встроенного программного обеспечения (ДТ 322, ООО «НПФ ДНК-Технологии», г. Москва).оизводилась с помощьюмеры Статистическую обработку данных производили на компьютере с использованием пакетов программ для статистического анализа «Excel» и «Statistica 8.0». Критический уровень достоверности (р) нулевой статистической гипотезы (об отсутствии значимых различий) принимали равным 0,05. ^ Определены показатели заболеваемости акнеподобными дерматозами у населения Ульяновской области в ходе статистической обработки отчетов за период 2009-2011гг. Они составили при розацеа – 4,33±1,61‰; ПД – 3,61±3,04‰; контактном акне – 2,04±2,02‰; климатическом акне – 1,49±2,54‰ и механическом акне – 0,26±0,46‰. В связи с преобладанием в структуре акнеподобных дерматозов розацеа и периорального дерматита далее было проведено сравнительное изучение этих нозологических форм в зависимости от наличия у больных сопутствующего демодекоза. На основании комплексного обследования пациентов выявлено, что у больных розацеа, осложненной демодекозом, чаще встречалась тяжелая форма заболевания (пустулезная), тогда как в группе сравнения преобладали более легкие (папулезная и эритематозная) (табл.2). Клинически эритематозная форма розацеа характеризовалась приливной эритемой лица. У 41,6% пациентов эритема локализовалась на центральной части лица, у 16,7% – в области щек, у 16,7% – в носощечной области. У 25,0% пациентов эритема занимала обширные зоны с умеренной инфильтрацией. В группе сравнения у большинства больных (47,6%) элементы располагались в центральной части лица и только у 1 пациента (4,8%) эритема занимала обширные зоны. У всех пациентов на фоне эритемы наблюдалось наличие переплетающихся капиллярных телеагиэктазии ярко- или темно-красного цвета. Таблица 2 Распределение больных по клиническим формам розацеа
У 27 пациентов (38,0%) отмечалась папулезная форма розацеа. У этих больных на фоне эритемы и пастозности кожи с обилием тонких и широких телеангиэктазий, наблюдались розово-красные папулы диаметром 3-5 мм, плотно-эластической консистенции, округлых очертаний, полусферической или несколько уплощенной формы, со слабо контурированными границами. У большинства пациентов (18 больных) папулы локализовались в нижней трети лица (щеки, край нижней челюсти, подбородок). У 33,3% пациентов высыпания располагались повсеместно (на лбу, щеках, подбородке), в отличии от группы сравнения, где такая локализация элементов была лишь у 9,4% больных. В основании наиболее крупных элементов отмечалась инфильтрация. Пустулезная форма наблюдалась у 31 больного. Клинически она характеризовалась интенсивной эритемой в сочетании с отечностью и инфильтрацией. Отмечались папулезные и пустулезные высыпания величиной 1-5 мм в диаметре, полушаровидной формы с содержимым желтого или зеленовато-желтого цвета. У 25,8% пациентов элементы были сгруппированы, имели большие размеры (5-6 мм в диаметре) и инфильтрированное основание. Как правило, такие элементы располагались в нижней трети лица (край нижней челюсти, скуловая область и подбородок). Инфильтративно-продуктивная (гиперторофическая) форма розацеа у обследованной группы наблюдалась у 1 пациента (в группе сравнения больные с данной формой не встречались). Инфильтративно-продуктивная (гиперторофическая) форма проявлялась в виде ринофимы. На фоне стойкой эритемы с багрово-синюшным оттенком отмечались стойко делатированные сосуды и устья расширенных сальных желез, локализующиеся, преимущественно, в области носа и щек. Из всех пациентов обследуемой группы у 9,8% наблюдалась офтальморозацеа, которая сопровождалась блефаритом и конъюнктивитом. В группе сравнения данных осложнений не наблюдались. Под наблюдением находилось 12 пациентов (16,9%) с легкой степенью тяжести, со средней степенью тяжести 35 (49,3%) и с тяжелой степенью тяжести было 24 пациента (33,8%). В группе сравнения основную долю пациентов составляли больные с легкими проявлениями дерматоза (табл.3). Таблица 3 Характеристика тяжести течения розацеа, осложненной демодекозом
Особенности клинического течения розацеа на фоне демодекоза характеризовались увеличением частоты рецидивов два и более раза в год по сравнению с пациентами розацеа без демодекоза. Из всех обследованных больных с розацеа, осложненной демодекозом, у 49 пациентов (69,1%) были жалобы на зуд различной интенсивности, ощущение сухости кожи (16,9%), жжения и покалывания (12,7%), а также отечность лица (9,9%). В группе сравнения субъективные проявления заболевания наблюдались реже - у 45,6% пациентов. На основании комплексного обследования пациентов периоральным дерматитом выявлено, что у пациентов основной группы чаще встречалась средняя форма заболевания, тогда как в группе сравнения преобладала легкая (табл.4). Таблица 4 Распределение больных по клиническим формам периорального дерматита
У 9 пациентов (17,3%) отмечалось легкая форма периорального дерматита. Клинически она характеризовалась едва заметной эритемой с единичными папулами диаметром 1-2 мм и наличием участка видимо непораженной кожи шириной 3-5 мм вокруг красной каймы губ. У 3-х больных (33,3%) наблюдалось незначительное шелушение. Течение заболевания средней тяжести наблюдалось у 26 пациентов (50%). У этих больных наблюдались эритематозные пятна с полушаровидными папулами и мелкопластинчатым шелушением. У 17 (65,4%) пациентов высыпания локализовались в области носогубных складок, у 6 (23,0%) – в области медиальной части бровей и переносицы и у 3 (11,6%) больных – процесс носил генерализованный характер (затрагивал носощечные складки, зону верхней губы, подбородка и область бровей). Тяжелая форма болезни наблюдалась у 17 пациентов (32,7%). На фоне эритематосквамозных бляшек, покрытых жирными чешуйками наблюдались множественные полушаровидные и остроконечные папулы с пустулами в центре. У двух больных наблюдалась отечность лица. При периоральном дерматите по данным, полученным при помощи ИТПОД (индекс тяжести периорального дерматита) пациентов с легкой формой периорального дерматита было 11,8%, со средней –60,8%, с тяжелой – 27,4% (рис.1). Особенности клинического течения периорального дерматита на фоне демодекоза характеризовались увеличением количества больных с частотой рецидивов 2 и более раза в год.  Рис. 1. Распределение больных периоральным дерматитом в зависимости от тяжести течения (%) Из всех обследованных периоральным дерматитом, осложненном демодекозом субъективные ощущения отмечали 62,8% пациента. 19 пациентов отмечали зуд (37,3%) и 13 больных отмечалось чувство жжения (25,5%). В группе сравнения данные проявления были выявлены лишь у 44,7%. Микрофлора кожи, с одной стороны, является одним из защитных механизмов организма человека, а с другой – резервуаром возбудителей инфекций, поддерживающих воспалительный процесс. Изучение микрофлоры пораженных участков кожи лица больных розацеа и периоральным дерматитом выявило ее значительные изменения, наиболее выраженные при сочетании дерматозов с демодекозом. Микробиоценоз кожи при акнеподобных дерматозах, осложненных демодекозом, характеризовался более широким спектром видового состава, чем у здоровых. Наибольшее видовое разнообразие отмечалось у бактерий рода Staphylococcus. Так, у стафилококков идентифицировали 7 видов, у стрептококков – 4 вида и у коринебактерий – 2 вида, в отличии от микрофлоры кожи больных розацеа и периоральным дерматитом, не осложненных демодекозом, когда было обнаружено 5 видов стафилококков, 1 вид стрептококков и 1 вид коринебактерий. Следует отметить высокую степень колонизации кожи в зонах высыпаний при всех нозологических формах дерматозов S. aureus, S. capitis, S. haemolyticus и E. faecalis по сравнению со здоровыми лицами (p<0,05). Таблица 5 Колонизационная плотность микробиоты кожи лица у больных акнеподобными дерматозами (n=289)
Примечание: * - достоверность различий показателей с больными Р и ПД (р<0,05); ^ - достоверность различий показателей со здоровыми (р<0,05) Микробиоценоз кожи у больных акнеподобными дерматозами, осложненными демодекозом расширился также за счет появления таких видов как S. warneri, S. anhaemoliticus, S. mitis, S. mutans, M. luteus, C. haemolyticus и A. calcoaceticus, которые не высевались у здоровых. Из всех групп микроорганизмов наибольшая плотность колонизации отмечена у S. aureus и S. haemolyticus (табл. 5). При розацеа и периоральном дерматите набольшая частота встречаемости отмечена у бактерий рода Staphylococcus. Так, при легкой форме заболевания в основном выделялся S. epidermidis, при средней - S. haemolyticus и S. capitis, при тяжелой – S. aureus. Другие виды определялись значительно реже. При розацеа и периоральном дерматите наиболее значимые изменения микробиоты кожи лица выявлены при длительности заболеваний более одного года и наличии у пациентов демодекоза. Были изучены биологические свойства Staphylococcus aureus и Staphylococcus haemolyticus, выделенных с поверхности кожи лица больных розацеа и периоральным дерматитом, осложненными демодекозом и пациентов с данными дерматозами без инвазии. Клинические изоляты стафилококков обладали типичными морфологическими, тинкториальными, культуральными и биохимическими свойствами. Проведенные исследования показали, что стафилококки, выделенные у больных акнеподобными дерматозами, протекающими на фоне демодекоза и без него, имели различную частоту встречаемости факторов вирулентности (табл. 6). Таблица 6 Частота встречаемости факторов вирулентности клинических изолятов ^ и S. haemolyticus (%)
Примечание: * – достоверность различий показателей между пациентами основной группы и группы сравнения 1 (р<0,05); ^ – достоверность различий показателей со здоровыми (р<0,05) Как видно из таблицы, большей частотой встречаемости факторов вирулентности обладали S. aureus и S. haemolyticus, выделенные у пациентов акнеподобными дерматозами, сочетанные с демодекозом. Наибольшими показателями частоты встречаемости обладали клинические изоляты стафилококков основной группы, особенно в отношении липазной активности, ДНК-азы, гемолизина. Производили изучение чувствительности к химиопрепаратам стафилококков, выделенных у больных акнеподобными дерматозами с поверхности кожи. Результаты определения антибиотикорезистентности S. aureus и S.haemolyticus показали, что при розацеа и периоральном дерматите, сочетанных демодекозом, чувствительность к доксициклину наблюдалась у 61,8±3,9% штаммов, к эритромицину – 47,6±2,1%, к кларитромицину – 32,4±2,7% штаммов. У неинвазированных больных наблюдалось увеличение количества штаммов, чувствительных к антибактериальным препаратам. Частота встречаемости чувствительных изолятов составила 78,2±3,7%, 54,9±3,1% и 41,2±2,3% соответственно. С целью более полной характеристики чувствительности клинических изолятов к антимикробным препаратам использовали определение минимальной ингибирующей концентрации (табл.7). Среди S. aureus и S. haemolyticus преобладали штаммы чувствительные к доксициклину, наименьшая чувствительность наблюдалась к антибактериальному препарату кларитромицину. Таблица 7 Антибиотикорезистентность штаммов S. aureus и S. haemolyticus (%)
Наблюдается изменение чувствительности выделенных стафилококков к антибактериальным препаратам при акнеподобных дерматозах в зависимости от наличия микроскопических клещей рода Demodex. Так, S. aureus и S. haemolyticus, выделенные у больных розацеа и периоральным дерматитом без демодекоза, в основном обладают высокой и средней чувствительностью к антибиотикам, в отличие от штаммов, изолированных у инвазированных пациентов, где наблюдалось увеличение количества умеренно устойчивых изолятов. Для характеристики этиологической значимости клинических изолятов стафилококков проводили выявление их вирулентности in vivo. Установлено, что 77,8±2,4% штаммов S. aureus и S. haemolyticus, выделенных у больных дерматозами, сочетанных демодекозом, обладали вирулентностью, в то время как у неинвазированных больных доля вирулентных штаммов уменьшалась до 46,7±1,2% (p<0,001).  Рис.2. Соотношение клинических изолятов S. aureus и S. haemolyticusс различной вирулентностью (LD50/lg) Наблюдалось увеличение количества бактерий со слабовирулентными (32,1%) и значительное уменьшение высоковирулентных штаммов (20,5%). Для высоко вирулентных штаммов уровень показателей LD50 (lg) составил 5,4±0,6, для умеренно вирулентных штаммов - 2,4±0,1, для слабовирулентных - 1,6±0,3 (рис. 2). Таблица 8 Чувствительность ПЦР с системами праймеров при индикации и идентификации ^ и S. haemolyticus
На следующем этапе работы проводили молекулярно-генетические исследования с целью выявления нуклеотидных последовательностей генов вирулентности, детерминирующих липазу, ДНК-азу (S. aureus) и гемолизина-III, α-гемолизина (S. haemolyticus). Для этого была разработана ПЦР-тест-система на основе флуоресцентной детекции продуктов амплификации с регистрацией в режиме «реального времени» и определена чувствительность ПЦР с системами праймеров при индикации и идентификации S. aureus и S. haemolyticus (табл.8). При проведении экспериментов были получены результаты, представленные на рис. 3 (а;б).  а) к участку гена фактора ДНК-азы^ s  б) к участку гена α-гемолизина S. haemolyticus; Рис. 3. Кривая роста флуоресценции по каналу FAM в эксперименте с праймерами В ходе наших экспериментов были получены количественные показатели содержания ДНК ^ и S. aureus. В пробах, содержащих факторы вирулентномти ДНК-азы S. aureus (рис.3а) и α-гемолизин S. haemolyticus (рис.3б), наблюдалось превышение порога флуоресцентного сигнала по каналу Fam, что свидетельствует о наличии искомых нуклеотидных последовательностей в исследуемом материале. ВЫВОДЫ
^
ЗАКЛЮЧЕНИЕ Итоги. Таким образом, при сочетании розацеа и периорального дерматита с демодекозом наблюдается более тяжелое течение дерматозов с увеличением количества обострений. У больных акнеподобными дерматозами, осложненных демодкозом, отмечается широкий видовой спектр микроорганизмов кожи лица с превалированием высоковирулентных штаммов и увеличением показателей частоты выявления факторов вирулентности. ^ Перспективы дальнейшей разработки темы лежат в дальнейшем микробиологическом исследовании акнеподобных дерматозов в зависимости от наличия микроскопических клещей рода Demodex, а также в разработке комплексного лечения дерматозов в сочетании с демодекозом. ^
^
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям