Сифилис рпга (трна syphilis). Vedalab, Франция
|
|
Скачать 110.1 Kb.
|
|
Сифилис РПГА (ТРНА Syphilis). VEDALAB, Франция Каталожный номер: L-99200 Фасовка: 200 тестов/упаковка Справка Сифилис является хронической инфекцией, которая развивается по определенным стадиям: первичной, вторичной, третичной и четвертичной. Эти стадии характеризуются разными клиническими симптомами; первоначально обычно образуется твердый шанкр, затем сифилитическая сыпь, с последующими долгими скрытыми периодами, и, в конце концов, заболевание может привести к сердечно-сосудистым проблемам и нейросифилису. Инфекция, вызываемая спирохетой ^ , обычно передаётся половым путем, заболеть можно также после переливания инфицированной крови. Тесты на сифилис подразделяются на четыре категории: прямое микроскопическое исследование; тесты на трепонемные антитела; тесты на нетрепонемные антитела и тесты непосредственно на антиген. Из-за длительных латентных периодов и неспецифической природы нетрепонемных тестов, методы, которые определяют специфические антитрепонемные антитела в образцах больных, стали чрезвычайно популярны для скрининга. ^ В тесте РПГА используются стабилизированные птичьи эритроциты, покрытые антигенами Treponema pallidum (штамм Nichol), предназначенные для связывания со специфическими антителами, присутствующими в сыворотке или плазме больного. Клетки суспендируют в разбавителе, содержащем компоненты для удаления неспецифических реакций. Положительные реакции характеризуются гемагглютинацией. Хотя тест предназначен в основном для качественных определений, но его можно также использовать как количественный тест. Результаты теста можно интерпретировать визуально или с помощью микропланшетного ридера. Неспецифические реакции определяются с помощью использования контроля несенсибилизированных птичьих клеток. Состав
^ Автоматические пипетки на 10, 25, 75 и 190 мкл. Стабильность и хранение Хранить флаконы в вертикальном положении. Реагенты стабильны до окончания срока хранения, указанного на этикетке, при условии хранения при температуре от +2ºС до +8ºС. Не замораживать! Не смешивать компоненты из разных лотов. Не использовать помутневшие реагенты или растворы с бактериальным загрязнением. ^ Тест предназначен только для диагностического применения in vitro и только для профессионального использования. Растворы содержат менее 0,1% азида натрия в качестве консерванта. Избегайте попадания раствора на кожу, не глотайте реагенты. Азид натрия может образовать взрывчатые соли при контакте с сантехникой. Работайте с компонентами набора в защитных перчатках. Контроли приготовлены из человеческой сыворотки или дефибринизированной плазмы, показавших отрицательный результат в тестах на антиген HBS (ABBOTT AXSYM HbsAg MEIA), на антитела к HIV-1 и HIV-2 (ABBOTT AXSYM HIV 1/2 MEIA), на антиген ВИЧ p24 (MUREX HIV antigen MAB t) и на антитела к HCV (ABBOTT AXSYM HCV MEIA). Однако, поскольку известные методы тестирования не дают полной гарантии отсутствия инфекции, эти материалы следует рассматривать как потенциально инфекционные и строго следовать инструкциям по технике безопасности. ^ Все пробы следует считать потенциально инфекционными. После завершения процедуры тестирования утилизировать пробы следует с осторожностью и только после стерилизации в автоклаве или обработки 0,5 – 1% раствором гипохлорита натрия не менее 1 часа. ^ Качественное определение (скрининг) 1) Разведение образца Все сывороточные образцы следует развести 1/20:
^ Каждый образец анализируется в трех дублях в трех разных лунках. а) Разбавление образца в лунке № 1. Действуйте, как указано в пункте «1) Разбавление образца» б) Смешать буфер для разбавления образцов и образец сыворотки, используя пипетку, и внести по 25 мкл смеси в лунки № 2 и № 3. в) Убедитесь, что птичьи эритроциты для контроля и теста полностью ресуспендированы. Добавить 75 мкл контрольных клеток в лунку № 2. Добавить 75 мкл сенсибилизированных клеток для тестирования в лунку № 3. г) Осторожно встряхнуть пластину для перешивания содержимого в лунках. д) Инкубировать 45-60 минут при комнатной температуре. Замечание: Не подвергайте микропланшету воздействию тепла, солнечного света или вибрации. Считайте результаты теста. Считывание результатов может быть отложено до 24 часов при условии, если микропланшета будет накрыта и будет храниться при описанных выше условиях. Количественное определение 1) Разведение образца Все сывороточные образцы следует развести 1/20:
Замечания:
^ Каждый образец анализируется в 8 разных лунках (от А до Н). а) Внести по 25 мкл буфера для разбавления в лунки, начиная от В до Н. Оставить лунку А пустой. б) Внести по 25 мкл разбавленной сыворотки в лунки А и В. б) Смешать образец и буфер в лунке В и серийно разбавить образец до лунки Н. Из последней лунки Н отбросить избыточные 25 мкл. в) Убедиться, что клетки для теста полностью ресуспендированы. Внести по 75 мкл тестовых клеток в лунки от А до Н. г) Осторожно встряхнуть пластину для перешивания реагентов в лунках. д) Инкубировать 45-60 минут при комнатной температуре. Замечание: Не подвергайте микропланшету воздействию тепла, солнечного света или вибрации. Считайте результаты теста. Считывание результатов может быть отложено до 24 часов при условии, если микропланшета будет накрыта и будет храниться при описанных выше условиях. ^ а) Качественные результаты
Если клетки образуют структуру, покрывающую дно лунки, это указывает на четкий положительный результат. В случае отрицательного результата клетки (образца или отрицательного контроля) оседают в виде компактной «кнопочки» на дне лунки. Если эти два условия не выполняются, тест следует считать недействительным и его следует выполнить вновь ^ должен показывать как клеточную структуру с отчетливо открытым центром лунки, так и компактную массу клеток для идентификации пограничных образцов (неопределенные результаты). Эти результаты указывают на низкий уровень антител как в случае раннего первичного сифилиса, так и недавно проведенного лечения или фрамбезии. Образец такого типа следует повторно тестировать с помощью качественного метода. Необходимо определить титр образца, чтобы определить повышение титра во времени. Рекомендуется тест для определения реагинов (РПР-сифилис) и/или тест FTA-ABS. Положительный контроль должен давать четкую агглютинацию эритроцитов с появлением структуры клеток, покрывающих дно лунки. Примечание: В случае положительного результата контрольную лунку следует внимательно рассмотреть. Контрольные клетки должны сформировать компактную «кнопочку» на дне лунки. Этот результат не должен использоваться для сравнения с результатами, полученными для отрицательных образцов (контрольная «кнопочка» клеток получается более компактной, чем образование из тестовых клеток). Агглютинация эритроцитов в контрольной лунке указывает на наличие неспецифических агглютининов в образце; тест следует считать недействительным. Образец такого рода можно абсорбировать, используя контрольные клетки (см. пункт «Неспецифическая абсорбция»). б) Количественные результаты Внешний вид результатов на примере положительного контроля из набора:
Интерпретация: титр образца соответствует разведению, показывая неопределенный результат (клеточная структура + «кнопочка»). Положительный контроль, разбавленный 1/1280, должен дать неопределенный результат (клеточная структура + «кнопочка»). Эта величина может изменяться от 1/640 до 1/2560, в зависимости от лота реагентов, как показано на рисунке выше. в) Неспецифическая абсорбция 1. Внести 100 мкл исследуемой сыворотки в пробирку, затем добавить 400 мкл контрольных клеток. Хорошо перемешать и оставить на час при комнатной температуре. 2. Центрифугировать при 1000 об/мин в течение 5 минут и анализировать супернатант согласно методике качественного теста. Примечание. Разведение сыворотки будет равно 1/5. Этот факт следует учитывать в процессе приготовления разведений. Если результат после этапа абсорбции всё ещё неопределенный, то образец следует проанализировать другим методом, например, определением реагинов или тестом FTA-ABS. ^ а) Внешняя оценка Тест РПГА на сифилис оценивали в центрах переливания крови и независимых лабораториях. Образцы анализировали с помощью данного и другого коммерческого теста. Сыворотки с противоречивыми и положительными результатами теста РПГА на сифилис были подтверждены с помощью теста FTA-ABS и/или клиническим диагнозом. ^ Скрининг прошли 2160 образцов. Все результаты были отрицательными. Неспецифический результат получен на двух сыворотках. После этапа абсорбции данные сыворотки дали отрицательные результаты. Специфичность составила 100% (2160/2160). ^ Были протестированы 602 сыворотки. Результаты суммированы в нижеследующей таблице:
Сыворотки с противоречивыми и положительными результатами теста РПГА на сифилис были подтверждены с помощью теста FTA-ABS и/или клиническим диагнозом. Специфичность составила 99,3% (301/303). Чувствительность составила 99,7% (298/299). ^ 1. Антитела к сифилису, которые определяются тестом РПГА, долговременно сохраняются в крови, даже после успешного лечения. В этом заключается причина, почему положительный тест РПГА указывает на недавнюю или предыдущую инфекцию. 2. Невозможно отличить сифилис от других трепонемных инфекций (например, фрамбезии), используя тест РПГА. Всегда следует учитывать клинические симптомы при постановке диагноза. Ложные положительные результаты можно наблюдать у пациентов, страдающих от проказы, инфекционного мононуклеоза или нарушений соединительной ткани. 3. Тест FTA-ABS следует применять для подтверждения результатов, поскольку им можно различить антитела классов IgG и IgM. Данный тест полезен в случае очень раннего заболевания сифилисом, когда можно получить отрицательный тест РПГА. 4. Рекомендуется применение количественного теста (например, РПР или VDRL) при мониторинге процесса лечения. Литература
Соблюдать температуру хранения Читать инструкцию Не использовать повторно Только для in vitro диагностики ____________________________________________________________________________________________________________________ Рег. Уд. ФС3 2009/05844 стр. из ЗАО ДИАКОН, 142290 г.Пущино Моск. обл., ул.Грузовая 1а Тел (495) 9806339, факс (495) 9806679, e-mail: [email protected] |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям