Тема: Лабораторная диагностика возбудителей иппп
|
Скачать 150.72 Kb.
|
|
Специальность «Лечебное дело». Практика. Тема: Лабораторная диагностика возбудителей ИППП. Лабораторная диагностика возбудителей ИППП – Инфекций Передаваемых преимущественно Половым Путем - в настоящее время в различных странах мира включает достаточно много современных методов и диагностических тест-систем различных диагностических возможностей. В Российской Федерации государственная система здравоохранения уделяет значительное внимание общественной профилактике ИППП, в том числе – обязательному серологическому обследованию всех стационарных больных во всех ЛПУ широкого профиля. ^ существуют инструктивные указания по обследованию больных и контактных лиц. Согласно приказу МЗ РФ от 26.03.2001 г. за №87 "О совершенствовании серологической диагностики сифилиса" последовательность обследования пациентов на сифилис представляется следующим образом:
^ нашей страны обследование больных для исключения сифилиса до 2006года проводилось с помощью постановки в серологической лаборатории реакции Вассермана. (в некоторых регионах страны и сейчас используется реакция Вассермана) ^ (РВ =RW) известна с 1907 года). Август Пауль фон Вассерман (нем. August Paul von Wassermann; 21 февраля 1866, Бамберг — 16 марта 1925, Берлин) —немецкий микробиолог и иммунолог. Родился в семье баварского придворного банкира. Учился в Страсбургском, Венском и Берлинском университетах, где его учителями были Роберт Кох и Пауль Эрлих. С 1902 года — профессор института Р.Коха, с 1913 года — директор института экспериментальной терапии в Берлине. Основные исследования — изучение изменений в сыворотке крови больных в процессе возникающего иммунитета при холере, тифах и дифтерии. В 1906 году разработал (совместно с А. Нейссером и К. Бруном) методику диагностики сифилиса (т. н. «реакция Вассермана»). Установил (1901) наличие иммунологической специфичности белков различных животных, работал над усовершенствованием серодиагностики туберкулёза, новообразований и др. В 1913 году за научные заслуги получил дворянство (и право на приставку «фон» между именем и фамилией). В СССР первая инструкция по постановке реакции Вассермана была утверждена в 1928 году на XI съезде эпидемиологов и микробиологов. Позже два вида RW - с кардиолипиновым и трепонемным антигенами, вместе с РМП были объединены в комплекс серологических (стандартных) реакций (КСР), который на протяжении многих лет являлся основой серологической диагностики сифилиса. Реакция Вассермана основана на том, что в сыворотке крови заразившегося сифилисом появляются антитела, которые вырабатывает его иммунная система. Их выявляют в лаборатории с помощью антигена кардиолипина — вещества, содержащегося в бледной трепонеме. Наличие антител в крови дает положительную реакцию Вассермана, что свидетельствует о заражении сифилисом. Материалом для анализа является кровь пациента, которая берется из вены. В процессе исследования крови происходит реакция связывания комплемента (РСК), позволяющая выявить наличие в крови антител к Treponema pallidum. При этом используется антиген выращенных в яичке кролика трепонем, бычий кардиолипин и (ранее использовался) экстракт из мертворожденных младенцев. Однако, антигены, используемые в RW, не являются высокоспецифическими и дают значительный процент ложноположительных результатов. Так, положительные реакции могут встречаться у здоровых лиц (например, после приема обильной жирной пищи), при некоторых физиологических состояниях (беременность, менструация), а также при целом ряде заболеваний (системная красная волчанка, лепра, гепатиты, туберкулез, ревматизм, онкозаболевания, заболевания крови и т.д.). Обычно иммунная система человека не борется против клеток собственного организма. Однако в некоторых случаях появление антител возможно в результате именно такой парадоксальной реакции иммунитета. Врачи давно заметили, что эта реакция может быть и ложноположительной. Причина этого в. том, что кардиолипин содержится не только в бледной трепонеме, но и в клетках человека. И тогда в крови обнаруживаются точно такие же противолипидные антитела, как и при заболевании сифилисом. Это может наблюдаться после перенесенных малярии, вирусной пневмонии, заболеваний крови, печени, а также в период беременности. В таких случаях обычно через год, а иногда и позже реакция Вассермана становится отрицательной без всякого лечения. С 2006г. – Реакция Вассермана в Москве не должна применяться: Приказ ДЗ (№184) обязал осуществить замену Реакции Вассермана – как реакции связывания комплемента (РСК) - и комплекса серологических реакций (КСР) на РМП, или на быстрый плазмореагиновый тест (РПР), или на реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА), или на иммуноферментный анализ (ИФА). СОВРЕМЕННЫЕ МЕТОДЫ лабораторной диагностики: условно все методы лабораторной диагностики можно разделить на прямые тесты (выявление возбудителя из очагов поражения) и непрямые тесты (выявление антител к возбудителю в сыворотке крови больного, то есть, серологическая диагностика). Обращая внимание на отсутствие в настоящее время научно выработанного единого алгоритма лабораторной диагностики инфекций передаваемых половым путем, тем не менее, особо подчеркнем строгую необходимость проводить назначенные венерологом серологические и культуральные исследования перед назначением лекарственных препаратов! В настоящее время рекомендованы следующие методы лабораторной диагностики ИППП:
Основными достоинствами ПЦР - полимеразной цепной реакции - является ее высокая чувствительность и специфичность при определении хламидиоза, герпетической инфекции, гонореи, ВИЧ-инфекции, микоплазмоза, уреаплазмоза и др.); высокая специфичность ПЦР обусловлена тем, что в исследуемом материале выявляется уникальный, характерный только для данного возбудителя фрагмент ДНК. Наиболее рационально и эффективно применение ПЦР для обнаружения микроорганизмов трудно выявляемых в лабораторных условиях, атипичных форм бактерий. К ним также относятся внутриклеточные паразиты и микроорганизмы, способные длительно существовать в организме хозяина. Применение ПЦР-диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов. Методом ПЦР возможно выявление возбудителей не только в клиническом материале, полученном от больного, но и в материале, получаемом из объектов внешней среды (вода, почва и т.д.). Однако следует отметить, что метод ПЦР лишь дополняет спектр традиционных методов, используемых в микробиологической диагностике. Кроме перечисленных применяются также и такие тесты, как:
Тема: Серологические тесты для диагностики сифилиса.
РПГА – реакция пассивной гемагглютинации (или по английски TPHA - ^ ): — метод обнаружения и идентификации антигенов или антител, основанный на возникающем в их присутствии феномене агглютинации эритроцитов, на поверхности которых были предварительно адсорбированы соответствующие специфические антитела или антигены. - используются эритроциты животных, покрытые антигеном из патогенных трепонем: суспензия эритроцитов разводится сывороткой больного и если в сыворотке содержатся антитрепонемные антигела, то в планшете для микротитрования наблюдается агглютинация. РПГА ставят в пластиковых планшетках или в пробирках с разведениями сыворотки крови больного, к которым добавляют эритроцитарный диагностикум. Антигеном для этой реакции являются эритроциты барана или индюка, покрытые частицами бледных трепонем от зараженных кроликов, а затем фрагментированные ультразвуком. Адсорбирующий разбавитель (состоит из фрагментов эритроцитарных мембран барана либо индюка и быка, трепонем Рейтера, ткани семенников кролика, кроличьей сыворотки) заливают в лунки пластин, куда затем вносят инактивированную сыворотку. Разбавитель связывает неспецифические групповые антитела. Специфические иммунноглобулины к бледным трепонемам вызывают агглютинацию. Предварительный результат может быть зарегистрирован после инкубации в течение 3—4 ч. Появление равномерной розовой окраски указывает на положительный результат, а агглютинат (преципитат) темно-красного цвета в виде пятна или кольца является показателем осаждения эритроцитов. Эритроциты (или частицы латекса) с адсорбированными на них антигенами взаимодействуют с соответствующими антителами сыворотки крови, что вызывает склеивание и выпадение эритроцитов на дно пробирки или ячейки в виде фестончатого осадка. При отрицательной реакции эритроциты оседают в виде пуговки. Следует учитывать возможное получение ложноположительных результатов РПГА у больных с аутоиммунными заболеваниями (системная красная волчанка), и рядом вирусных заболеваний из-за появления большого количества неспецифических антител. Простота постановки, низкая стоимость и высокая чувствительность РПГА дает возможность использовать ее в качестве отборочной реакции на сифилис. РПГА ставят в качественном и количественном вариантах, существуют макро - и микромодификации. ^ : -положительными считаются образцы, реагирующие на «4+» и «3+» -слабоположительными считаются образцы, реагирующие на «2+» -сомнительными считаются образцы, реагирующие на «1+» -отрицательными считаются образцы, реагирующие на +/- и - ^ ряд заболеваний (ревматизм, коллагенозы, аутоиммунные заболевания, например, волчанка и др.) Как оценивается РПГА. Интерпретация результатов при количественном методе: при количественном методе постановки серологических реакций титром положительной сыворотки считается максимальное разведение, дающее результат, соответствующий «1+2». Например, при количественном методе постановки серореакций методом РПГА должны определяться антитела к бледной спирохете T. pallidum в титре не ниже 1:1280. После лечения сифилиса РПГА остается положительной всю жизнь практически у всех пациентов. ^
^ - позволяет выявить АТ к кардиолипиновому АГ бледной спирохеты. МР при изолированном применении служит не диагностическим, а отборочным тестом, в связи с чем на основании её позитивности диагноз сифилиса не устанавливают, а пациенту проводят диагностические тесты (РСК, ИФА). С помощью МР обследуют лиц, подлежащих периодическим медицинским осмотрам на венерические заболевания, больных соматическими заболеваниями и др. Существует несколько вариантов микрореакций — VDRL (Venereal Disease Research Laboratory), TRUST (Toluidine Red Unheated Serum Test), RST (Reagin Screen Test), RPR (repid plasma reagin) и др. RPR-тест (МР плазмы с кардиолипиновым Аг) бывает положительной в 78% случаев при первичном, в 97% — при вторичном сифилисе. VDRL-тест (МР инактиви-рованной сыворотки с кардиолипиновым Аг) положителен при первичном сифилисе в 59-87% случаев, при вторичном — в 100%, при позднем латентном — в 79-91%, при третичном — в 37-94% [Henry J.B., 1996]. МР обычно отрицательны в первые 7-10 дней после появления твёрдого шанкра. 1Положительный результат
Ложноположительный результат
Ложноположительная реакция микропреципитации возможна при ревматических заболеваниях (например, СКВ, ревматоидный артрит, склеродермия), инфекциях (мононуклеоз, малярия, микоплазменная пневмония, активный туберкулёз, скарлатина, бруцеллёз, лептоспироз, корь, эпидемический паротит, венерическая лимфогранулёма, ветряная оспа, трипаносомоз, проказа, хламидиоз), беременности (редко), в старческом возрасте (около 10% людей в возрасте старше 70 лет могут иметь ложноположитель-ную МР), при хроническом лимфоцитарном тиреоидите, гемобластозах, приёме некоторых гипотензивных средств, наследственной или индивидуальной особенности. ^ или по- английски RPR - Rapid Plasma Reagin)– скрининговый метод диагностики сифилиса, (является нетрепонемным тестом, так называемые реагиновые или кардиолипиновые тесты, которые проводят при первичном обследовании на сифилис) посредством определения реагинов - неспецифических антител класса IgM и IgG (их еще называют реагины), образующихся против антигенов липидного происхождения, образовавшихся при повреждении клеток больного сифилисом. Основные показания к применению: первичное обследование на сифилис, медицинские осмотры, контроль эффективности лечения. РПР (Экспресс-тест, вариант РМП)- ^ T фирмы "HUMAN" (Германия) предназначены для исследования образцов сыворотки или плазмы крови. Наборы содержат все необходимые для постановки реакции компоненты: антиген со специальным флаконом-капельницей, положительный и отрицательный контроли, слайды, одноразовые пипетки. Используемый в них антиген представляет собой модификацию кардиолипинового антигена и содержит угольные микрочастицы для усиления видимых различий между положительным и отрицательным результатом. С помощью теста можно провести не только качественный учет реакции, но и полуколичественное определение антител (титрование). Время постановки реакции - 10 минут. RPR- первичный скрининговый тест на сифилис, выявляющий антифосфолипидные антитела. Метод RPR, в какой то мере, можно рассматривать как замену реакции Вассермана. Метод RPR относится к нетрепонемным тестам. Антитела выявляемые в RPR реакции появляются, как правило, появляются в крови больного через 3-5 недель после заражения. Образовавшиеся антитела могут быть неспецифическими - их называют реагины. Они образуются на липидные антигены бледной трепонамы и против аутоантигенов , которые образуются при разрушении клеток больных. Поскольку тест не специфический, то можно ожидать получение как ложноположительных, так и ложноотрицательных результатов. В случае положительной реакции RPR проводят подтверждающий тест: ИФА или РПГА. ^ Принцип реакции заключается в соединении сифилитического антигена, сорбированного на поверхности твердофазного носителя, с антителом испытуемой сыворотки крови и выявления специфического комплекса «антиген—антитело» с помощью антивидовой иммунной сыворотки, меченной ферментом. Взаимодействие фермента с субстратом дает цветную реакцию, интенсивность которой зависит от количества связанных сывороточных антител. Чувствительность и специфичность ИФА аналогичны РИФ РИТ. Результаты реакции могут быть оценены по четырёхбальной системе, и помимо визуальной возможна инструментальная оценка в величине цифровых показателей оптической плотности, получаемых на специальных ридерах при определенной длине волны. На практике ИФА широко применяют также и для выявления АНТИГЕНОВ Chlamydia trachomatis в мазках из мочеиспускательного канала и влагалища, стрептококков группы А в мазках из зева и токсина Clostridium difficile в фекалиях. |
средне
1
Похожие:
 |
Микобактерии. Общая характеристика. Возбудители туберкулеза, туберкулез, лабораторная диагностика, |
|
Отдел учебно-методической работы каталог элективных дисциплин для 5 курса специальности «общая медицина» Этот курс позволит студентам получить знания о возбудителях иппп: классификацию возбудителей, их... |
|
Иппп – это группа заболеваний, передающихся от человека к человеку, преимущественно половым путем. |
|
17 февраля – Всемирный день профилактики иппп иппп Иппп — это заболевания, передающиеся преимущественно во время полового акта от одного инфицированного... |
|
Лабораторная диагностика |
|
Клиническая лабораторная диагностика |
|
Клиническая лабораторная диагностика |
|
Клиническая лабораторная диагностика |
|
Клиническая лабораторная диагностика |
|
Клиническая лабораторная диагностика |
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям