Тест системы на основе иммуноферментного анализа Высокая чувствительность
|
|
Скачать 375.19 Kb.
|
 Тест – системы на основе иммуноферментного анализа
Т-4 ИФа Тироксин (3,5,3\',5\'-тетрайодотиронин, Т4) - основной гормон щитовидной железы с молекулярной массой 776,9 Да. Биосинтез Т4 полностью протекает в клетках щитовидной железы. Йод, который попадает в организм, всасывается через стенки кишечника и поступает в фолликулярные клетки щитовидной железы, где немедленно окисляется пероксидазой щитовидной железы и связывается с тирозиновыми остатками тиреоглобулина, после чего в ходе многочисленных преобразований принимает участие в образовании гормонов щитовидной железы. После секреции Т4 в сыворотке связывается тиреоид-связывающим глобулином (75%), тиреоид-связывающим преальбумином (15%) и альбумином (10%). В норме не связывается с сывороточными белками только 0,02-0,04% тироксина. Считают, что биологические эффекты Т4 в первую очередь связаны с его свободной фракцией. Показания для определения Т4: диагностика нарушений функций щитовидной железы, особенно у населения экологически неблагоприятных районов; гипертиреоз; нарушение общего содержания белков сыворотки крови (уровень Т4 повышен); гипотиреоз (уровень Т4 снижен); контроль проведенной терапии. Принцип определения Используется принцип двусайтового (сендвич) иммуноферментного анализа. В лунки микропланшета, на поверхности которого адсорибованы специфические анти – Т4 -антитела, вносят исследуемый образец. Антиген из образца связывается с антителами на поверхности лунки. Несвязанный матереал удаляется промыванием. В лунки вносят вторые антитела против другого эпитопа Т4, меченные пероксидазой. Активность фермента, связанного на поверхности лунки микропланшета, проявляется и измеряется добавлением хромоген-субстратной cмеси, стоп-раствора и фотометрией при 450 нм. Интенсивность цветной реакции прямо пропорциональна количеству антигена в образце. Время проведения анализа: 45 мин ^ Трийодтиронин(Т3) - тиреоидный гормон, биосинтез которого происходит в щитовидной железе в несколько стадий. Основная фракция органического йода в крови находится в форме Т4. Около 70% Т4 связано с тироксинсвязующим глобулином (ТСГ), 20 % - с тироксинсвязующим преальбумином (ТСПА) и 10 % - с альбумином. Большая часть Т4 связана только с ТСГ, меньшая- сразу с двумя белками. Не связанными с белками остаются 0,02-0,04 % данного гормона. Считают, что именно эта свободная фракция Т4 ответственна за стимуляцию обмена веществ. Концентрация Т4 в сыворотке крови общепринятый показатель функции щитовидной железы, которая позволяет довольно четко разграничивать гипер-, гипо-, и эутиреоз. Определение концентрации Т4 показано при гипертиреозе (она может достигать 230 нмоль/л) - для дифференциации тиреоидита, автономной аденомы и аденокарциномы, при состояниях с повыщеным уровнем ТСГ (беременность, генетически обусловленное повышение), при остром гепатите (на протяжении 4 недель), ожирение . Низкий уровень Т4 наблюдается при гипотиреозе, состояниях со сниженным уровнем ТСГ, пангипопитуитаризме, при физической нагрузке. Снижение уровня Т4 происходит при гемолизе. Концентрация Т4 в крови снижается при приеме аминосалициловой кислоты, андрогенов, ацетилсалициловой кислоты, холестирамина, клофибрата, кобальта, кортикостероидов, кортикотропинов, даназола, этинамида, лития, метамазола, митотана, оксифенбутазона, пеницилинафенотиазинов, фенилбутазона, фенитоина, йодита калия, пропилтиоурацила, резерпина, сульфаниламидов, трийодтиронина (Т3), вальпроевої кислоты. Повышенный уровень Т4 наблюдается при приеме естрогенов, героина, левартеренола, метадона, оральных контрацептивов, тиреоидних препаратов, ТТГ, тиреолиберина. Уровень свободного Т4 является более надежным параметром, чем уровень общего Т3, так как свободная форма гормона - биологически активна. Принцип определения Используется принцип конкурентного иммуноферментного анализа. В лунки микропланшета, на поверхности которого адсорибованы анти-Т3-антитела, вносят исследуемый образец и коъьюгат Т 3-пероксидаза. Т 3-свободный из образца конкурирует с конъюгированным антигеном за связь с антителами на поверхности лунки. После промывания активность фермента, связанного на поверхности лунки микропланшета, проявляется и измеряется добавлением хромоген-субстратной смеси, стоп-раствора и фотометрией при 450 нм. Интенсивность цветной реакции обратно пропорциональна количеству антигена в образце. Время проведения анализа: 1 ч 15 мин Анти-ТГ-ИФА Антитела к тиреоглобулину (ТГ) в сыворотке – это антитела к предшественнику гормонов щитовидной железы. Они связывают ТГ, нарушая синтез гормонов и вызывают тем самым гипотиреоз. Антитела к микросомальной фракции щитовидной железы (АО/МФ) образуют иммунные комплексы на поверхности клеток, активируют комплемент и цитотоксические лимфоциты, что приводит к разрушению клеток и формированию воспалительного процесса в щитовидной железе. Аутоантитела при тиреоидите являются органоспецифичными. Определение антител к ТГ, МА проводится для оценки выраженности аутоиммунных реакций при заболеваниях щитовидной железы. Повышение уровня антител к ТГ определяют в большинстве случаев тиреоидита Хашимото, болезни Грейвса и идиопатической микседеме. Антитела к ТГ определяются у больных раком щитовидной железы при наличии регионарных метастазов. МА появляются при таких заболеваниях: тиреоидит Хашимото, гипотиреоз, базедова болезнь, рак щитовидной железы, тиреотоксикоз, после хирургического лечения щитовидной железы, после приема препаратов радиоактивного йода, пернициозной анемии, синдроме Шмидта, коллагенозах. В сыворотке крови здоровых людей могут быть обнаружены антитела к ТГ, МА в низких титрах. Антитела к тиреоглобулину определяются у 90-95% больных, которые страдают аутоиммунным тиреоидитом, у 40-50 % - больных, которые страдают гипотиреозом, 20-30 % больных с диффузным токсическим зобом и у 3-5 % - больных раком щитовидной железы. В сыворотке практически здоровых людей АТ к ТГ не определяются, однако, в 5% случаев они могут присутствовать в крови, что связано, возможно, с идентификацией лиц, с субклиническими формами аутоимунного тиреоидита. Принцип определения Используется принцип двусайтового (сендвич) иммуноферментного анализа. В лунки микропланшета, на поверхности которого адсорибован специфический антиген, вносят исследуемый образец. Антитела из образца связываются с антигенами на поверхности лунки. Несвязанный материал удаляется промыванием. В лунки вносят вторые антитела против Ig человека, меченные пероксидазой. После повторного промывания активность фермента, связанного на поверхности лунки миропланшета, проявляется и измеряется добавлением хромоген-субстратной cмеси, стоп-раствора и фотометрией при 450 нм. Интенсивность цветной реакции прямо пропорциональна количеству антител в образце. Время проведения анализа: 1 ч 15 мин Эстрадиол-Ифа Эстрадиол- половой стероидний гормон с молекулярной массой 272,4 Да. По биологической активности эстрадиол лидирует среди эстрогенов. Основное физиологическое значение эстрадиола состоит в «формировании» специфических функций женского организма: развитие вторичных половых признаков, становление и регуляция менструального цикла, обеспечение репродуктивной функции и т.д. На протяжении беременности определения уровня эстрадиола позволяет контролировать состояние фетоплацентарной системы. Содержание эстрадиола в периферической крови определяют для выявления причин нарушений менструального цикла, бесплодия, недостаточной функции половых желез, подозрения на гормонозависимые опухоли. Понижение содержания эстрадиола в крови регистрируют при синдроме Тернера, первичном и вторичном гипогонадизме, гермафродитизме, климактерическому и посткастрационном синдромах и при употреблении оральних контрацептивов. Концентрация эстрадиола повышена при феминизации у детей, при гормоносекретирующих опухолях яичников, гиперплазии надпочечников, эстрогенсекретующей тестикулярной опухоли. Снижение количества эстрадиола при динамическом исследовании является достоверным показателем нарушения состояния плода и требует проведения срочного родоразрешения. Содержание эстрадиола необходимо определять в комплексе с исследованием секреции гонадотропинов и прогестерона. Принцип определения Используется принцип конкурентного иммуноферментного анализа. В лунки микропланшета, на поверхности которого адсрбированы специфические анти-эстрадиол-антитела, вносят исследуемый образец и конъюгат Эстрадиол-пероксидаза. Эстрадиол из образца конкурирует с конъюгированным антителом за связь с антителами на поверхности лунки. Активность фермента, связанного на поверхности лунки микропланшета, проявляется и измеряется добавлением хромоген-субстратной смеси, стоп-раствора и фотометрией при 450 нм. Интенсивность цветной реакции обратно пропорциональна количеству специфических антител в образце. Время проведения анализа: 2 ч 15 мин ФСГ-ИФА Фолликулостимулирующий гормон (фолитропин, ФСГ) - гликопротеид с молекулярной массой около 30000 Да. Его молекула состоит из альфа- и бета-цепей: альфа-цепь аналогична альфа-цепи ЛГ и не имеет гормональной активности. Специфическое гормональное действие связано с бета-цепью, однако, для проявления гормональной активности необходимы обе субъединицы. У женщин ФСГ контролирует циклические изменения яичников во время нормального менструального цикла. У мужнин ФСГ, ЛГ и тестостерон стимулируют сперматогенез в семенных канальцах яичек. Определение уровня ФСГ необходимо для диагностики нарушений в системе гипоталамус-гипофиз-гонады и обследования при бесплодии. У мужчин повышенные концентрации ФСГ могут быть индикатором первичной недостаточности функции яичек, недостаточности клеток Сертоли, дисгенезии семенных канальцев (синдром Клайнфельтера), анорхии или задержки полового созревания. У женщин повышение уровня ФСГ можно наблюдать в менопаузе, при преждевременном снижении функции или агенезии яичников. Как у мужчин, так и у женщин пониженные концентрации ФСГ могут определяться при дисфункции гипофиза. Определение ФСГ и ЛГ после назначения люлиберина является полезным тестом для оценки функции гипофиза. Этот тест также позволяет провести дифференционную диагностику между гипотоламическими и гипофизарными нарушениями в случае аменореи или гипогонадизма с низкой или нормальной концентрацией ФСГ. Снижение уровня ФСГ отмечено также при влиянии оральних контрацептивов, фенотиазинов, эстрагенов: влияние зависит от дозы и продолжительности применения препарата (большие дозы снижают, а малые могут повышать уровень гормона). Принцип определения Используется принцип двусайтового (сендвич) иммуноферментного анализа. В лунки микропланшета, на поверхности которого адсорбированы антитела против альфа-цепи ФСГ,вносят исследуемый образец. Антиген из образца связывается с антителами на поверхности лунки. Несвязанный материал удаляется промыванием. В лунки вносят другие антитела против бета-цепи ФСГ,меченные пероксидазой. После повторного промывания активность фермента, связанного на поверхности лунки микропланшета, проявляется и измеряется добавлением хромоген-субстратной cмеси, стоп-раствора и фотометрией при 450 нм. Интенсивность цветной реакции прямо пропорциональна количеству антигена в образце. Время проведения анализа: 2 ч 15 мин ЛГ-ИфА Лютеинизирующий гормон (лютропин, ЛГ) - сложный гликопротеид, который вырабатывается специализированными клетками аденогипофиза, состоящего из двух субъединиц: альфа и бета. Молекулярная масса каждой из субъединиц около 15000 Да. Альфа цепь не имеет гормональной активности, эта функция свойственна только бета-субъединице ЛГ. У женщин ЛГ стимулирует разрыв фолликула и образование желтого тела, которое начинает секретировать в кровь прогестерон и вызывает, таким образом, увеличение его концентрации в крови в лютеиновую фазу цикла. Гормон является основным стимулятором в пусковых механизмах овуляции. У мужчин ЛГ стимулирует образование тестостерона в интерстициальних клетках Лейдига. Максимальный уровень ЛГ у женщин наблюдается в середине менструального цикла, когда его концентрация может возрастать в 5-10 раз. Содержание ЛГ в крови как у женщин, так и у мужчин зависит от суточного ритма, в связи с чем определение уровня этого гормона должно проводиться в одно и то же самое время. Периодические увеличения содержания ЛГ наблюдаются у женщин чаще: их частота и степень выражения зависит от стадии менструального цикла. Так, колебания уровня ЛГ становятся менее частыми в конце лютеиновой фазы цикла, а их выраженность уменьшается в конце фоликулиновой фазы. Высокий уровень гормона определяют при первичной дисфункции половых желез, при аменорее, вызванной недостаточностью яичников, при синдроме Штейна-Левенталя. Небольшое повышение уровня ЛГ может наблюдаться при приеме спиронолактона и кломифена. Снижение концентрации ЛГ происходит при нарушении функции гипофиза или гипоталамуса, синдроме галактореи-аменореи, при изолированном дефиците гонадотропных гормонов, при изолированном дефиците ЛГ («фертильный евнух»). Снижение уровня гормона происходит также при приеме оральных контрацептивов, прогестерона, синтетических эстрагенов. Принцип определения Используется принцип двусайтового (сендвич) иммуноферментного анализа. В лунки микропланшета, на поверхности которого адсорибованы антитела против альфа-цепи ЛГ, вносят исследуемый образец. Антиген из образца связывается с антителами на поверхности лунки. Несвязанный материал удаляется промыванием. В лунки вносят другие антитела против бета-цепи ЛГ, меченные пероксидазой. После повторного промывания активность фермента, связанного на поверхности лунки микропланшета, проявляется и измеряется добавлением хромоген-субстратной cмеси, стоп-раствора и фотометрией при 450 нм. Интенсивность цветной реакции прямо пропорциональна количеству антигена в образце. Время проведения анализа: 2 ч 15 мин Иммуноглобулин Е IgЕ состоит из двух тяжелых и двух легких полипептидных цепей. IgЕ - гликопротеин с молекулярной массой приблизительно 190000 Да, которая состоит на 12% из углеводов.У IgЕ самая низкая продолжительность существования (время полувывода из сыворотки крови 2-3 суток), самая высокая скорость катаболизма и наименьшая скорость синтеза из всех иммуноглобулинов (2,3 мкг/кг в сут). IgЕ синтезируется главным образом плазматическими клетками, которые локализируются в слизистых оболочках. Основная биологическая роль IgЕ - уникальная способность связываться с поверхностью тучных клеток и базофилов человека. IgЕ - класс иммуноглобулинов, который определяется в норме в незначительных количествах в сыворотке крови и секретах. Кроме участия в аллергических реакциях I (немедленного) типа, IgE участвует в защитному противогельминтном иммунитете, что обусловлено существованием перекрестного связывания между IgE и антигеном гельминтов. Последний проникает через мембрану слизистой и садится на тучные клетки, вызывая их дегрануляцию. Медиаторы воспаления повышают проницаемость капилляров и слизистой, в результате чего IgE и лейкоциты выходят из кровотока. К гельминтам, покрытым IgE, присоединяются эозинофили, которые выбрасывают содержание своих гранул и таким способом убивают гельминтов. Показание к определению общего IgE: атопические болезни, аллергический ринит, атопическая бронхиальная астма, атопический дерматит, аллергическая гастроентеропатия, анафилактические болезни, системная анафилаксия, крапивница - ангионевротический отек, аллергический бронхопульмональный аспергиллёз, гельминтозы, гипер-IgE синдром (синдром Джоба), селективный IgE дефицит, тимусная аплазия (синдром Ди-Джорджи), IgЕ-Миелома, реакция "трансплантат против хозяина" и др. Принцип определения Используется принцип двусайтового (сендвич) иммуноферментного анализа. В лунки микропланшета, на поверхности которого адсорбированы специфические анти-IgЕ-эпсилон-антитела, вносят исследуемый образец. Антиген из образца связывается с антителами на поверхности лунки. Несвязанный материал удаляется промыванием. В лунки вносят вторые антитела против другого эпитопа IgЕ, меченные пероксидазой. После повторного промывания активность фермента, связанного на поверхности лунки микропланшета, проявляется и измеряеися добавлением хромоген-субстратной cмеси, стоп-раствора и фотометрией при 450 нм. Интенсивность цветной реакции прямо пропорциональна количеству антигена в образце. Время проведения анализа: 1 ч 15 мин СА125-ИФА СА125 - высокомолекулярный гликопротеин (МВ от 200000 до >1000000). Антиген СА125, образующийся линией клеток эпителиальной карциномы яичника, но не здоровыми клетками, присутствует в нормальной ткани эндометрия и в серозной и муцинозной жидкости матки. Он не проникает в кровоток за исключением случаев разрушения естественных барьеров. Уровни в сыворотке могут удваиваться во время менструации, особенно с эндометриозом. Самые высокие уровни величин в сыворотке могут быть определены в первом триместре беременности. Повышение величин может также наблюдаться у 1 % здоровых людей, 6% пациентов с некоторыми незлокачественными состояниями и у некоторых больных с негинекологическими злокачественными неоплазиями (карцинома поджелудочной железы, легких и др.) Повышенные уровни обнаружены у 82% пациентов с карциномой яичников без связи с весом опухоли и без прогностического значения для успеха лечения При раке яичников и эндометрия постоянное повышение величины СА125 может сопровождаться с прогрессированием неоплазии и плохой реакцией на лечение, тогда как снижение величин СА125 указывает на благоприятный прогноз и хороший ответ на лечение. Повышенный СА125 также предсказывает присутствие интра-перитонеальной опухоли или рецидив. Нормальные уровни не исключают рецидив или присутствие экстенсивной опухоли. Показания к определению: серозные, эндометриальные, светоклеточные и недифференцированные раки яичников, аденокарцинома эндометрия или фаллопиевих труб, некоторые незлокачественные состояния (беременность, менструальный цикл, перитонит или плеврит, кисты яичников, ендометриоз), другие раки, включая матку, поджелудочную железу, печень и легкие. Принцип определения Используется принцип двусайтового (сендвич) иммуноферментного анализа. В лунки микропланшета, на поверхности которого адсорбированы специфические анти-СА125 -антитела, вносят исследуемый образец. Антиген из образца связывается с антителами на поверхности лунки. Несвязанный материал удаляется промыванием. В лунки вносят вторые антитела против другого эпитопы СА125 , меченные пероксидазой. Активность фермента, связанного на поверхности лунки микропланшета, проявляется и измеряется добавлением хромоген-субстратной cмеси, стоп-раствора и фотометрией при 450 нм. Интенсивность цветной реакции прямо пропорциональна количеству антигена в образце. Время проведения анализа: 1 ч 15 мин Анти-ТПО Антитела к микросомальной фракци тиреоидних антигенов (АТ/МФ) в основном представлены антителами к тиреопероксидазе (ТПО). Антиген ТПО является гемсодержащим ферментом гликопротеиновой природы с молекулярной массой около 105000 D. Он играет важную роль в процессе синтеза тиреоидних гормонов. Аутоантитела к микросомальной фракции определяются при всех видах аутоиммунных заболеваний щитовидной железы, однако, они могут определяться и у здоровых людей. Считается, что АТ/МФ является патогенным фактором, который непосредственно вызывает повреждение тиреоидных клеток. Наиболее высокие уровни АТ/МФ определяются у пациентов с аутоиммунным тиреоидитом Хашимото (у 95% больных) и идиопатической микседемой, а также на последней стадии хронического атрофического тиреоидита, особенно у женщин преклонного возраста. Аутоиммунний тиреоидит – заболевание, которое характеризуется образованием антител к различным компонентам щитовидной железы, с развитием ее лимфоидной инфильтрации и разрастанием фиброзной ткани. Аутоантитела к микросомальной фракции способны разрушать щитовидную железу и снижать ее функциональную активность. Антитела к микросомальной фракции определяются у 85% больных с диффузным токсическим зобом. Их наличие у больных зобом указывает на его аутоиммунный генез. Эти антитела иногда можно идентифицировать и при раке щитовидной железы. Антитела к микросомальной фракции тиреоидных антигенов довольно часто встречаются у пациентов с выявленной неизлечимой формой болезни Грейвса. Важным показателем для измерения уровня АТ/МФ является беременность. Повышенные уровни АТ/МФ на протяжении 1-го триместра указывают на определенную степень риска возникновения послеродового тиреоидита. Определение АТ/МФ также используется у пациентов с высокой степенью риска возникновения тиреоидита, например, при наследственной склонности к данному заболеванию, а также при всех других формах аутоиммунных процессов, включая сахарный диабет 1-го типа, болезнь Аддисона, а также пернициозную анемию. Принцип определения Используется принцип двусайтового (сендвич) иммуноферментного анализа. В лунки микропланшета, на поверхности которого адсорибован специфический антиген, вносят исследуемый образец. Антитела из образца связываются с антигенами на поверхности лунки. Несвязанный матереал удаляется промыванием. В лунки вносят вторые антитела против Ig человека, меченные пероксидазой. После повторного промывания активность фермента, связанного на поверхности лунки миропланшета, проявляется и измеряется добавлением хромоген-субстратной cмеси, стоп-раствора и фотометрией при 450 нм. Интенсивность цветной реакции прямо пропорциональна количеству антител в образце. Время проведения анализа: 1 ч 15 мин ^ Тестостерон - наиболее важный андрогенный и естественный анаболический гормоном мужчин и женщин. Нормальная секреция тестостерона необходимая для поддержания репродуктивной функции мужчин. Тестостерон контролирует сперматогенез, функцию простаты и потенцию, стимулирует либидо, влияет на рост волос. У женщин тестостерон секрецируют яичники и кора надпочечников. Секреция тестостерона резко снижается после 50-60 лет. У мужчнин недостаток андрогенов может вызвать замедленное половое созревание, бесплодие и импотенцию. Гиперсекреция андрогенов у женщин может быть причиной гирсутизма с вирилизацией разной степени, часто в скомплексе с олигоменореей, аменореей и бесплодием. Определение тестостерона используется для оценки функционального состояния репродуктивной системы человека, а также при некоторых заболеваниях, связанных с гормональными нарушениями. Принцип определения Используется принцип конкурентного иммуноферментного анализа. В лунки микропланшета, на поверхности которого адсорбированы специфические анти-тестостерон-антитела, вносят исследуемый образец и конъюгат Тестостерон-пероксидаза. Тестостерон из образца конкурирует с конъюгированным антигеном за связь с антителами на поверхности лунки. Активность фермента, связанного на поверхности лунки микропланшета, проявляется и измеряется добавлением хромоген-субстратной сумеси, стоп-раствора и фотометрией при 450 нм. Интенсивность цветной реакции обратно пропорциональна количеству специфических антител в образце. Время проведения анализа: 1 ч 15 мин Прогестерон-ИФА Прогестерон - стероидный гормон (гестаген) с моллекулярной массой 314 Да. Прогестерон секретируется в небольшом количестве клетками желтого тела яичников, а также корой надпочечников и яичками, где используется для биосинтеза кортикостероидов и андрогенов. Прогестерон действует на эндометрий вместе с эстрадиолом, вследствие чего менструальный цикл переходит из пролиферативной фазы в секреторную. Уровень прогестерона достигает максимума на 5-7 день после овуляции. Если не происходит оплодотворение, уровень прогестерона уменьшается. Если оплодотворенная яйцеклетка имплантировалась, желтое тело продолжает секретировать большое количество прогестерона (до 12 недель беременности). Показания к определению прогестерона: oценка функционального состояния половой системы; наблюдение за течением беременности; определение причин бесплодия; нарушение менструального цикла. Принцип определения Используется принцип конкурентного иммуноферментного анализа. В лунки микропланшета, на поверхности которого адсорбированы анти-Прогестерон-антитела, вносят исследуемый образец и конъюгат Прогестерон-пероксидаза. Прогестерон из образца конкурирует с конъюгированным антителом за связь с антителами на поверхности лунки. После промывания активность фермента, связанного на поверхности лунки микропланшета, проявляется и измеряется добавлением хромоген-субстратной смеси, стоп-раствора и фотометрией при 450 нм. Интенсивность цветной реакции обратно пропорциональна количеству антигена в образце. Время проведения анализа: 2 ч 15 мин ^ Антитела к тиреоглобулину (ТГ) в сыворотке – это антитела к предшественнику гормонов щитовидной железы. Они связывают ТГ, нарушая синтез гормонов, вызывая тем самым гипотиреоз. Антитела к микросомальной фракции щитовидной железы (МА) образуют иммунные комплексы на поверхности клеток, активируют комплемент и цитотоксические лимфоциты, что приводит к разрушению клеток и формированию воспалительного процесса в щитовидной железе. Аутоантитела при тиреоидите являются органоспецифическими. Определение антител к ТГ, МА проводится для оценки выраженности аутоиммунных реакций при заболеваниях щитовидной железы. Повышение уровня антител к ТГ обнаруживают в большинстве случаев тиреоидита Хашимото, болезни Грейвса и идиопатической микседеме. Антитела к ТГ определяются у больных раком щитовидной железы, при наличии регионарных метастазов. МА появляются при таких заболеваниях, как: тиреоидит Хашимото, гипотиреоз, базедова болезнь, рак щитовидной железы, тиреотоксикоз, после хирургического лечения щитовидной железы, после приема препаратов радиоактивного йода, пернициозной анемии, синдроме Шмидта, коллагенозах. В сыворотке крови здоровых людей могут быть обнаружены антитела к ТГ, МА в низких титрах. Принцип метода Основан на определении в сыворотке крови антител, специфичных к антигенам житовидной железы (тиреоглобулину и микросомальному), адсорбированных на твердой фазе. Антитела, которые присоединились к твердой фазе, обнаруживают с помощью специфического антиглобулинового конъюгата анти-IgG (третий слой иммунного комплекса). Активность фермента в составе иммунных комплексов определяют с помощью субстрат-хромогенной смеси. Интенсивность окрашивания хромогена прямо пропорциональна количеству антител в образце. Время проведения анализа :1 ч 40 мин ^ Тироксин (Т4) - тиреоидный гормон, биосинтез которого происходит в щитовидной железе в несколько стадий. Основная фракция органического йода в крови находится в форме Т4. Около 70 % Т4 связано с тироксинсвязывающим глобулином (ТСГ), 20 % - с тироксинсвязывающим преальбумином (ТСПА) и 10 % - с альбумином. Большая часть Т4 связана только с Т С Г, меньшая- сразу с двумя белками. Не связанными с белками остаются 0,02-0,04 % данного гормона. Считают, что именно эта свободная фракция Т4 ответственная за стимуляцию обмена веществ. Концентрация Т4 в сыворотке крови общепринятый показатель функции щитовидной железы, которая позволяет довольно четко разграничивать гипер-, гипо-, и эутиреоз. Определение концентрации Т4 показано при гипертиреозе (она может достигать 230 нмоль/л) - для дифференциации тиреоидита, автономной аденомы и аденокарциномы, при состояниях с повыщеным уровнем ТСГ (беременность, генетически обусловленное повышение), при остром гепатите (на протяжении 4 недель), ожирение . Низкий уровень Т4 наблюдается при гипотиреозе, состояниях со сниженным уровнем ТСГ, пангипопитуитаризме, при физической нагрузке. Снижение уровня Т4 происходит при гемолизе. Концентрация Т4 в крови снижается при приеме аминосалициловой кислоты, андрогенов, ацетилсалициловой кислоты, холестирамина, клофибрата, кобальта, кортикостероидов, кортикотропинов, даназола, этинамида, лития, метамазола, митотана, оксифенбутазона, пеницилинафенотиазинов, фенилбутазона, фенитоина, йодита калия, пропилтиоурацила, резерпина, сульфаниламидов, трийодтиронина (Т3), вальпроевої кислоты. Повышенный уровень Т4 наблюдается при приеме естрогенов, героина, левартеренола, метадона, оральных контрацептивов, тиреоидних препаратов, ТТГ, тиреолиберина. Уровень свободного Т4 является более надежным параметром, чем уровень общего Т3, так как свободная форма гормона - биологически активна. Принцип определения Используется принцип конкурентного иммуноферментного анализа. В лунки микропланшета, на поверхности которого адсорбированы анти-Т4-антитела, вносят исследуемый образец и конъюгат Т 4-пероксидаза. Т 4-свободный из образца конкурирует с конъюгированным антигеном за связь с антителами на поверхности лунки. После промывания активность фермента, связанного на поверхности лунки микропланшета, проявляется и измеряется добавлением хромоген-субстратной смеси, стоп-раствора и фотометрией при 450 нм. Интенсивность цветной реакции обратно пропорциональна количеству антигена в образце. Время проведения анализа: 1 ч 15 мин ^ Наиболее ранним критерием развития диабетической нефропатии (до появления протеинурии ) является МИКРОАЛЬБУМИНУРИЯ . Под этим термином понимают экскрецию альбумина с мочой, которая превышает допустимые нормальные значения, но не достигающие степени протеинурии. В норме экскретируется не более 30 мг альбумина в сутки , что эквивалентно концентрации альбумина менее 20 мкг/мл в разовом анализе мочи. С появлением протеинурии экскреция альбумина с мочой превышает 300 мг/сут. Поэтому диапазон микроальбуминурии составляет от 30 до 300 мг/сут или 20 до 200 мкг/мл. Появление у больного сахарным диабетом постоянной микроальбуминурии свидетельствует о быстром развитии (на протяжении ближайших 5-7 лет) выраженной стадии диабетической нефропатии. Если при разовом анализе мочи неоднократно определяется концентрация альбумина более 20 мкг/мл, то необходим анализ суточной мочи. При выявлении в моче, собранной через сутки, концентрации альбумина более 30 мг, и подтверждении этого значения в следующих анализах мочи, повторенных через 6 и 12 недель, следует поставить диагноз ДИАБЕТИЧЕКСКАЯ НЕФРОПАТИЯ и начинать превентивное лечение. Однако следует иметь в виду, что экскреция альбумина с мочой может повышаться после интенсивных физических нагрузок, при инфекции мочевыводящих путей и застойной сердечной недостаточности. Принцип метода Основан на выявленные в моче человека сывороточного альбумина с помощью специфического антиальбуминного конъюгата. Компоненты, которые не связались, отмываются, а активность фермента в составе иммунных комплексов определяют с помощью субстрат-хромогенной смеси. Интенсивность окрашивания хромогена обратно пропорциональна концентрации альбумина в образце. Время проведения анализа : 1ч 15 мин ^ Антикард иолипиновые антитела - это антитела к фосфолипидам (кардиолипину) клеточных мембран, являются основным показателем наличия антифосфолипидного синдрома у больных. В сыворотке здоровых людей аутоантитела к кардиолипинуу могут присутствовать в незначительном количестве, но при повышении этого уровня появляется качественно новая реакция в системе гемостаза. Эти антитела направлены против тромбоцитов и эндотелия сосудов и, вызывая их нарушения, приводят к тромбозам и тромбоемболиям. Повышение уровня антител является чувствительным и специфическим лабораторным тестом, который характеризует риск возникновения тромботических осложнений. При беременности из-за тромбоэмболических повреждений трофобласта и плаценты возможна гибель плода, отслоение плаценты, гипотрофия и гипоксия плода. Антикард иолипиновые антитела появляются при следующих заболеваниях : тромбоцитопении, гемолитические анемии, аутоиммунные заболевания, красная волчанка, ревматоидный артрит, узелковый периартериит, инфаркт миокарда, инсульт, нестабильная стенокардия, инфекциии (туберкулез, лепра, стафилококковая, стрептококковая инфекции, корь, мононуклеоз, краснуха, СПИД), артериальная гипертензия, эндартериит, системный атеросклероз, акушерская патологиия Принцип метода Основан на выявленные в сыворотке крови антител, специфических к антигену, адсорбированному на твердой фазе. Антитела, которые присоединились к твердой фазе, обнаруживают с помощью специфического антиглобулинового конъюгата анти- IgG (третий слой иммунного комплекса). Активность фермента в составе иммунных комплексов определяют с помощью субстрат-хромогенной смеси. Интенсивность окрашивания хромогена прямо пропорциональна количеству антител в образце. Время проведения анализа : 1 ч 40 мин АФП-ИФА Альфа-фетопротеин (АФП) - гликопротеин с молекулярной массой около 70000 Да. В период внутриутробного развития АФП образ уется в желчном мешке и печени плода и в незначительном количестве в желудочно-кишечном тракте. У здоровых беременных женщин с нормальным плодом концентрация АФП повышается к 31-й неделе, а к моменту родов постепенно снижается. В сыворотке крови ребенка уровень АФП достигает максимума к 15-й неделе внутриутробного развития, после чего снижается к нормальным величинам до конца второго года жизни. Содержание АФП в крови здоровых людей возрастает также при некоторых злокачественных новообразованиях - первичной опухоле печени и опухолях фетального происхождения. Показания к определению АФП: получение информации о состоянии плода, течении беременности и ее прогнозе; диагностика внематочной беременности; диагностика и мониторинг опухолей. Принцип определения Используется принцип двусайтового (сендвич) иммуноферментного анализа. В лунки микропланшета, на поверхности которого адсорбированы специфические анти-АФП-антитела, вносят исследуемый образец. Антиген из образца связывается с антителами на поверхности лунки. Несвзяанный матереал удаляется промыванием. В лунку вносят вторые антитела против другого эпитопа АФП, меченные пероксидазой. Активность фермента, связанного на поверхности лунки миропланшета, проявляется и измеряется добавлением хромоген-субстратной cмеси, стоп-раствора и фотометрией при 450 нм. Интенсивность цветной реакции прямо пропорциональна количеству антигена в образце. Время проведения анализа: 1 ч 15 мин ДНК-ИФа Определение антител к ДНК может служить характеристикой процессов аутоиммунитета . Так, антитела к нативной (двуспиральной) ДНК високоспецифичні для красной волчанки. При активном ревматическом процессе также отмечается значительное повышение антител к нативной ДНК. В ряде случаев эти антитела можно определить при выраженной активности хронического активного гепатита или болезни Шегрена, аутоиммунном увеите. Антитела к денатурированной ДНК отражают активность ревматических заболеваний, а также встречаются при других соматических и инфекционных заболеваниях. Большая частота определения этих антител наблюдается при красной волчанке и склеродермии, особенно при ее активных и злокачественных формах, болезни Рейно и др. Антитела к односпиральной формалинизированной ДНК широко встречаются как в норме, так и при разнообразных инфекционных процессах (напр. туберкулезе), вирусных заболеваниях. Принцип метода Основан на определени и в сыворотке крови антител, специфичных к антигену, адсорбированному на твердой фазе. Антитела, которые присоединились к твердой фазе, обнаруживают с помощью специфического антиглобулинового конъюгата анти-IgG (третий слой иммунного комплекса). Активность фермента в составе иммунных комплексов определяют с помощью субстрат-хромогенной смеси. Интенсивность окрашивания хромогена прямо пропорциональна количеству антител в образце. Время проведения анализа : 1 ч 40 мин ^ Иммуноглобулины являются продуктами секреции В-клеток на конечной стадии их дифференцирования, т.е. плазматических клеток. Дефекты, связанные с нарушением метаболизма иммуноглобулинов, наблюдаются при многих заболеваниях. Снижение уровня иммуноглобулинов свидетельствует о недостаточности гуморального звена иммунитета, нарушение их синтеза или увеличении катаболизма, адсорбции на иммунных комплексах. Повышение уровня характерно для острых и хронических воспалительных процессов, аутоиммунных заболеваний и др. Принцип метода Основан на выявленные в сыворотке крови иммуноглобулинов A, M, G с помощью специфических антиглобулинових конъюгатов (анти-A, анти-M, анти-G). Компоненты, которые не связались, отмывают, активность фермента в составе иммунных комплексов определяют с помощью субстрат-хромогенной смеси. Интенсивность окрашивания хромогена обратно пропорциональна количеству антител в образце. Время проведения анализа : 1 ч 15 мин Кортизол-ИФА Кортизол - глюкокортикоидный гормон, синтезируемый корой надпочечников, с молекулярной массой 362 Да. Менее 10% кортизола в циркулирующей крови находится в физиологически свободной форме и выделяется с мочой в неметаболизированном виде. Секреция кортизола неодинаковая в течении суток и подчиняется определенному суточному ритму. Суточная секреция кортизола составляет 10-20 мг, достигая максимума между 7-9 часами утра и 16-18 часами. Кортизол является стрессовым гормоном, который защищает организм от любых резких изменений физиологического равновесия, влияя на метаболизм углеводов, белков и липидов, а также на электролитный баланс. Показания к определению кортизола: oценка функционирования системы гипоталамус-гипофиз-кора надпочечников, особенно во время приема стероидних препаратов; диагностика эндокринных заболеваний (болезнь Аддисона и болезнь Иценко-Кушинга); диагностика некоторых злокачественных заболеваний. Принцип определения Используется принцип конкурентного иммуноферментного анализа. В лунки микропланшета, на поверхности которого адсорбированы анти-Кортизол-антитела, вносят исследуемый образец и конъюгат Кортизол-пероксидаза. Кортизол из образца конкурирует с конъюгированным антителом за связь с антителами на поверхности лунки. После промывания активность фермента, связанного на поверхности лунки микропланшета, проявляется и измеряется добавлением хромоген-субстратной смеси, стоп-раствора и фотометрией при 450 нм. Интенсивность цветной реакции обратно пропорциональна количеству антигена в образце. Время проведения анализа: 1 ч 15 мин ^ Пролактин - полипептид с молекулярной массой 22000 Да, секретируемый лактотропными клетками передней части гипофиза. Этот гормон инициирует и поддерживает процесс лактации, а также развитие молочной железы. Пролактин не влияет непосредственно на функциональную активность половых желез, но уровень пролактина коррелирует с состоянием гипоталамуса и аденогипофиза. Повышение уровня пролактина в плазме характерно для овуляции, беременности, кормления грудью и стресса. Понижение концентрации пролактина характерно для гипофункции гипофиза. Показания к определению пролактина: диагностика гиперпролактинемии, что нарушает функционирование половых желез как у мужчин, так и у женщин; мониторинг пролактиномы и других опухолей гипофиза. Принцип определения: Используется принцип двусайтового (сендвич) иммуноферментного анализа. В лунки микропланшета, на поверхности которого адсорбированы специфические анти-пролактин-антитела, вносят исследуемый образец . Антиген из образца связывается с антителами на поверхности лунки. Несвязанный материал удаляется промыванием. В лунки вносят другие антитела против другого эпитопа пролактина, меченные пероксидазой. После повторного промывания активность фермента, связанного на поверхности лунки микропланшета, проявляется и измеряется добавлением хромоген-субстратной cмеси, стоп-раствора и фотометрией при 450 нм. Интенсивность цветной реакции прямо пропорциональна количеству антигена в образце. Время проведения анализа: 2 ч 15 мин ПСА-общий Общий простатспециф ический антиген (ПСА об ) представляет собой гликопротеид с молекулярной массой 34 кДа, который состоит из одной полипептидной цепи. ПСА вырабатывается эпителиальными клетками здоровой простаты и функционирует как сериновая протеаза для уменьшения вязкости спермы. При гиперплазии и злокачественной трансформации простаты увеличивается виработка и секреция ПСА об в крови. Содержание ПСА об в сыворотке крови увеличивается с возрастом, особенно у мужчин после 40 лет. Показаниями к определению ПСА об : проведение массового скрининга у мужчин старшего возраста, диагностика и мониторинг лечения рака предстательной железы. Принцип определения Используется принцип двусайтового (сендвич) иммуноферментного анализа. В лунки микропланшета, на поверхности которого адсорбированы специфические анти-ПСА об-антитела, вносят исследуемый образец. Антиген из образца связывается с антителами на поверхности лунки. Несвязанный материал удаляется промыванием. В лунки вносят другие антитела против другого эпитопа ПСА об, меченные пероксидазой. После повторного промывания, активность фермента, связанного на поверхности лунки микропланшета, проявляется и измеряется добавлением хромоген-субстратной cмеси, стоп-раствора и фотометрией при 450 нм. Интенсивность цветной реакции прямо пропорциональна количеству антигена в образце. Время проведения анализа: 1 ч 15 мин Ревмофактор-ИФА Ревматоидний фактор (РФ) - аутоантитела IgG, IgM или IgA, котор ые реагируют с Fc-фрагментом IgG. Он образуется в результате стимуляции агрегированным модифицированным (видоизмененным) IgG или за счет влияния экзогенного перекрестно реагирующего антигена при нарушении иммунорегуляции. Комплекс IgG+РФ не фагоцитируется, откладывается в периваскулярном пространстве, стимулируя клеточно-опосредованные цитотоксические реакции, что приводит к появлению воспаления. Наибольшее клиническое значение имеет определение РФ IgМ. Повышение уровня РФ характерно для ревматоидного артрита (до 90% больных), но возможны серонегативные формы. Повышение титра РФ отмечается не раньше чем через 6-8 недель после клинических проявлений. РФ в более низких титрах может наблюдаться при инфекционном мононуклеозе, острых воспалительных процессах (бактериальный эндокардит, сифилис, туберкулез, корь, краснуха, грипп и др.), волчанке с поражением суставов, синдроме Шегрена, саркоидозе, гепатите, системной склеродермии, полимиозите. Принцип метода Основан на выявленные в сыворотке крови антител, специфических к антигену, адсорбированном на твердой фазе (Ig G). Антитела, которые присоединились к твердой фазе, обнаруживают с помощью специфического антиглобулинового конъюгата анти-Ig М (третий слой иммунного комплекса). Активность фермента в составе иммунных комплексов определяют с помощью субстрат-хромогенной смеси. Интенсивность окрашивания хромогена прямо пропорциональна количеству антител в образце. Время проведения анализа :1 ч 40 мин Т3-ИФА.. Трийодтиронин (3,5, 3-трийодотиронин или Т3) - гормон щитовидной железы с молекулярной массой 651 Да. 20% Т3 вырыбатывается в щитовидной железе, а остальные 80% образуются в результате конверсии тироксина (Т4) в периферических тканях. Период полураспада Т3 равняется приблизительно 24ч. В свободной форме находится приблизительно 0,5% Т3, а остаток гормона связан с теми же сывороточными белками, что и Т4, но существенным образом слабее. Т3 имеет более высокую биологическую активность чем Т4, так что большинство биологических эффектов гормонов щитовидной железы реализуются по средствам действия Т3. Т3 ингибирует секрецию ТТГ по принципу отрицательной обратной связи. Показания к определению Т3 : диагностика нарушений функций щитовидной железы; гипертиреоз, нарушение общего содержания белков (уровень Т3 повышен); гипотиреоз (уровень Т3 снижен);контроль проведенной терапии. Принцип определения Используется принцип конкурентного иммуноферментного анализа. В лунки микропланшета, на поверхности которого адсорбированы анти-Т3-антитела, вносят исследуемый образец и конъюгат Т 3-пероксидаза. Т 3-свободный из образца конкурирует с конъюгированным антигеном за связь с антителами на поверхности лунки. После промывания активность фермента, связанного на поверхности лунки микропланшета, проявляется и измеряется добавлением хромоген-субстратной смеси, стоп-раствора и фотометрией при 450 нм. Интенсивность цветной реакции обратно пропорциональна количеству антигена в образце. Время проведения анализа: 45 мин ХГЧ-ИФА Хорионический гонадотропин (ХГ) гликопротеидный гормон с молекулярной массой 36700 Да, состоящий из двух субъединиц (альфа- и бета-) и углеводного компонента. Альфа-субъединица ХГ общая с другими тропными гормонами гипофиза (ЛГ, ФСГ); специфические для ХГ биологические функции выполняет бета-субъединица. ХГ образуется в плаценте сразу после имплантации эмбриона, после чего этот гормон на протяжении 5-10 суток уже может определяться в сыворотке крови и мочи беременной. Целую молекулу ХГ или ее фрагменты могут также вырабатывать и секретировать в кровь некоторые злокачественные опухоли (трофобластомы и тератомы различной локализации ). Показания к определению ХГ : диагностика беременности и ее мониторинг; выявление и контроль за лечением опухолей, секретирующих ХГ. Принцип определения Используется принцип двусайтового (сендвич) иммуноферментного анализа. В лунки микропланшета, на поверхности которого адсорибованы специфические анти-ХГ-антитела, вносят исследуемый образец. Антиген из образца связывается с антителами на поверхности лунки. Несвязанный материал удаляется промыванием. В лунки вносят вторые антитела против эпитопа β-ХГ , меченные пероксидазой. Активность фермента, связанного на поверхности лунки микропланшета, проявляется и измеряется добавлением хромоген-субстратной cмеси, стоп-раствора и фотометрией при 450 нм. Интенсивность цветной реакции прямо пропорциональна количеству антигена в образце. Время проведения анализа: 1 ч 15 мин |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям