|
Скачать 0.66 Mb.
|
Ядассона проба с калия йодидом имеет большую диагностическую ценность для отличия герпетиформного дерматоза Дюринга и истинной пузырчатки. Для герпетиформного дерматоза характерна повышенная чувствительность больных к галогенам, в том числе к йоду. Пробу проводят в двух вариантах. Больной принимает внутрь 1 столовую ложку 5 % раствора ка лия йодида. Пробу считают положительной при обострении кожного процесса. На свободный от высыпаний участок кожи предплечья накладывают 50 % мазь с калия йодидом, приготовленную на ланолине. Через 24, реже 48 ч на месте контакта с мазью возникает эритема, иногда пузырьки, папулы, аналогичные высыпаниям при герпетиформном дерматозе Дюринга, либо наблюдается обострение основного процесса вне места наложения мази. Более «закономерной» является проба с приемом калия йодида внутрь, накожная проба у части больных с типичными проявлениями герпетиформного дерматоза бывает, и отрицательной. Однако пробу с приемом калия йодида внутрь необходимо проводить осторожно, особенно у детей. Бужирование мочеиспускательного канала Используется при диагностике и лечении чаще хронической гонореи у мужчин, реже — гонореи у женщин. С этой целью применяют бужи различных диаметров (от № 19 до № 30) в зависимости от ширины наружного отверстия мочеиспускательного канала. Бужи находятся постоянно в дезинфицирующем растворе (чаще всего «тройном») или перед употреблением их кипятят в течение 40—50 мин. Применяют бужи: прямые, изогнутые, полутвердые, эластичные, нитевидные, головчатые. Последний обычно проходит мочеиспускательный канал до луковицы полового члена без особых затруднений. В луковице зондом определяется препятствие, которое при выпрямлении полового члена легко преодолевается. Больного помещают в урологическое кресло, буж смазывают стерильным глицерином или растительным маслом и вводят в передний отдел мочеиспускательного канала. Производят пальпацию мочеиспускательного канала на буже. При этом обращают внимание на возможно имеющиеся инфильтраты, зернистость. При наличии уплотнения определяют его характер и локализацию: передняя, средняя, задняя часть переднего отдела мочеиспускательного канала. При необходимости делают легкий массаж. В качестве бужа при проведении исследования с диагностической целью лучше использовать тубус с обтуратором уретроскопа Валентина, что дает возможность при подозрении на инфильтрат, зернистость, атрофию сразу же произвести уретроскопию. Наибольшую ценность имеет бужирование головчатым бужом при сужении мочеиспускательного канала, когда нужно определить место стриктуры, а иногда и ее протяженность При появлении сильной боли во время бужирования делают анестезию мочеиспускательного канала, вводя в него 10— 15 мл новокаина (2 % раствор) или дикаина (3: 1000). Следует отметить, что бужирование при сужении мочеиспускательного канала нужно производить с осторожностью во избежание образования ложных ходов. Исследование мочеиспускательного канала на буже является также одной из разновидностей провокации. После бужирования необходимо брать мазки на протяжении последующих 3 сут Взятие мазка из мочеиспускательного канала . Предварительно ватным тампоном, смоченным стерильным изотоническим раствором натрия хлорида, обрабатывают наружные половые органы: у мужчин — головку полового члена, у женщин — половые губы, преддверие влагалища, клитор и наружное отверстие мочеиспускательного канала. При отсутствии свободно вытекающего гноя у мужчин нажатием пальца на заднюю поверхность мочеиспускательного канала и легким движением в направлении к наружному отверстию выдавливают каплю отделяемого, которую захватывают краем предметного стекла, а лучше петлей, помещают на предметное стекло и равномерно размазывают по его поверхности При отсутствии видимого отделяемого материал для исследования (соскоб) берут тупой ложечкой или петлей. Препарат высушивают на воздухе и отправляют в лабораторию Двухстаканная проба (проба Томпсона) Применяется в венерологии и урологии для суждения о месте поражения мочеиспускательного канала: передней или задней его части. Перед пробой больной в течение 4—6 ч не должен мочиться, после чего ему предлагают собрать мочу в два стакана: в первый — 50—60 мл, во второй — остальную. Если первая порция будет мутной, а вторая — прозрачной, то процесс локализуется в передней части мочеиспускательного канала. Наличие мути в обоих стаканах свидетельствует о тотальном поражении мочеиспускательного канала, так как при поражении задней его части гной может попадать в мочевой пузырь, в котором будет также мутная моча. Эта широко применяемая проба позволяет диагностировать выраженные гнойно-воспалительные процессы.. Следует иметь в виду, что мутность мочи при двухстаканной пробе может быть обусловлена наличием в ней различных .солей. Для дифференциальной диагностики мути органического и неорганического генеза (при подозрении на наличие кристаллов фосфорной кислоты) к моче добавляют несколько капель уксусной кислоты, после чего муть исчезает. Муть, вызванная наличием уратов, исчезает при подогревании мочи, наличием оксалатов — при добавлении небольшого количества хлористоводородной кислоты. Для постановки двухстаканной пробы нужно пользоваться стаканами из тонкого стекла без узоров и рисунков. Трехстаканная проба Ядассона Ставят в случае вялого течения воспалительного процесса в мочеиспускательном канале при наличии симптомов заднего уретрита и отрицательной двухстаканной пробе. Предварительно больного просят задержать мочу в мочевом пузыре в течение 4 ч и более. Изотоническим раствором натрия хлорида или 2 % раствором кислоты борной промывают передний отдел мочеиспускательного канала, смыв помещают в стакан (первая порция). Затем больного просят выделить 50—100 мл мочи во второй стакан (вторая порция) — смыв с заднего отдела мочеиспускательного канала, а оставшуюся мочу — в третий стакан (третья порция). Наличие изменений (мутность, хлопья, плавающие нити) в первой порции Мочи свидетельствует о поражении переднего отдела мочеиспускательного канала, во второй порции — заднего отдела; в третьей порции — мочевого пузыря. Исследование плавающих нитей в моче при гонорейном и других уретритах Мочу наливают в чашку Петри и ставят на какой-либо черный фон. На черном фоне хорошо видны плавающие в моче нити и комочки, которые вылавливают гистологической иглой и переносят на предметное стекло, слегка сдавливают покровным стеклом и окрашивают по Граму или анилиновыми красителями. Иногда препараты из осадка мочи для выявления гонококков готовят после центрифугирования. Метод исследования нитей эффективен не только при гонорейном, но и других уретритах, особенно бактериальных Массаж и получение секрета предстательной железы Производят с целью диагностики и лечения. Перед процедурой больного просят освободить мочевой пузырь. В прямую кишку больного, находящегося в коленно-локтевом положении, врач вводит указательный палец правой руки, на которую надета перчатка. Палец предварительно смазывают жиром. Нежными движениями массируют вначале правую долю предстательной железы, которая менее чувствительна, затем левую. Массаж начинают поглаживанием, слегка нажимая на предстательную железу сверху вниз. В конце процедуры необходимо несколько раз слабо надавить рукой на область междолевой бороздки сверху вниз с целью выдавить содержимое предстательной железы в мочеиспускательный канал. При появлении секрета из наружного отверстия последнего массаж предстательной железы прекращают. Секрет помещают на предметное стекло, подсушивают и направляют в лабораторию для исследования. В случав отсутствия вьщеления секрета из мочеиспускательного канала процедуру повторяют на следующий день. Если его взять не удается, тогда в освобожденный от мочи мочевой пузырь катетером вводят 50 мл дистиллированной воды или 2 % раствора кислоты борной. После массажа предстательной железы больного просят освободить от введенного раствора мочевой пузырь и исследуют центрифугат Исследование секрета предстательной железы Полученный мазок секрета предстательной железы или центрифугата первой порции мочи фиксируют над пламенем горелки, окрашивают 1 % водным раствором метиленового синего и под микроскопом рассматривают при увеличении в 300—400 раз. В секрете железы обнаруживают лецитиновые зерна, лейкоциты, эпителиальные клетки. В норме секрет содержит большое количество лецитиновых зерен, единичные (не более 10 в поле зрения) лейкоциты и эпителиальные клетки, иногда амилоидные тельца и сперматозооны. В патологически измененном секрете предстательной железы лецитиновых зерен незначительное количество или они вовсе отсутствуют, много лейкоцитов, микробов. Иногда удается обнаружить гонококки, трихомонады, атипичные клетки, характерные для новообразования предстательной железы. Микроскопическое исследование бледной трепонемы в темном поле зрения Материал для исследования берут с элемента, подозрительного на первичную или вторичную сифилому (эрозия, язва, эрозированная папула), либо путем пункции лимфатического узла Элемент очищают стерильным ватным или марлевым тампоном, после чего прокаленной в пламени горелки и охлажденной петлей слегка поскабливают его поверхность до получения тканевой жидкости. Последнюю помещают на чистое, обезжиренное предметное стекло с каплей изотонического раствора натрия хлорида и накрывают нетолстым покровным стеклом. Если получить тканевую жидкость указанным способом нельзя, то рукой в резиновой перчатке сдавливают сифилому с краев до появления тканевой жидкости на ее поверхности. Количество тканевой жидкости и изотонического раствора натрия хлорида должно быть небольшим, так как при большой капле трепонемы будут плавать в жидкости, что затрудняет их обнаружение. Для исследования в темном поле зрения применяют специальные приспособления к обычному микроскопу. Пройдя через эти приспособления (конденсоры), лучи света принимают косое направление и концентрируются под острым углом в месте исследуемой капли серрума, не попадая в объектив, чем достигается исследование в темном поле. Для данной методики можно пользоваться кружком из плотной черной бумаги (конверт от фотобумаги) диаметром 1,5 см, который накладывают на нижнюю линзу развинченного конденсора так, чтобы между краями линз и бумаги оставался свободный ободок (просвет) шириной 1,5—2 мм. Освещение при исследовании в темном поле зрения должно быть достаточно интенсивным (электрическая лампа 100—150 Вт). Рассматривают препарат при объективе № 40 и окуляре № 10—15. При этом на темном фоне можно увидеть большое количество светящихся движущихся точек (белковые и коллоидные частицы), а также клеточные элементы, трудно дифференцируемые, что, впрочем, не входит в задачу исследования. Бледная трепонема имеет вид светлых штопорообразных нитей, движущихся плавно либо маятникообразно. Ее можно спутать с часто встречающейся на половых органах трепонемой crassus, однако последняя толще бледной трепонемы, имеет более широкие завитки и движется быстрее. Данный способ простой и, пожалуй, является наиболее надежным. Бледную трепонему рассматривают в живом состоянии, что позволяет дифференцировать ее и другие виды спирохет Микрореакция в диагностике сифилиса Качественная реакция, используемая для экспресс-диагностики сифилиса. Реакцию ставят на стекле с каплей сыворотки крови или плазмы со специально приготовленным кардиолипиновым антигеном: 1 мл кардиолипинового антигена смешивают с 1 мл изотонического раствора натрия хлорида и оставляют на 30 мин при комнатной температуре, затем центрифугируют 15—20 мин при 1000—1500 об/мин. Надосадочную жидкость отсасывают, а к осадку добавляют 3 мл 10 % раствора холина хлорида в изотоническом растворе натрия хлорида. Осадок суспендируют и его можно хранить в колбе, закрытой плотной корковой пробкой, в холодильнике при температуре 4—6 °С на протяжении 1 нед. На плексигласовую пластинку с лунками вносят по 2—3 капли сыворотки крови или плазмы обследуемого и добавляют по 1 капле антигенной смеси. Легкими движениями рук пластинку покачивают в течение 5 мин. Затем добавляют по 1 капле изотонического раствора натрия хлорида и оставляют при комнатной температуре еще на 5 мин. По истечении этого времени оценивают результаты реакции. Пластинку ставят над источником света (лампой) и невооруженным глазом при положительном результате наблюдают крупные хлопья в лунке. Мелкие хлопья без защитного просветления свидетельствуют о слабоположительном или сомнительном результате Реакция Вассермана В сыворотке крови больных сифилисом находятся реагины и антитела. Реагины обладают свойством вступать в соединения с кардиолипиновым антигеном. Специфические антитела против бледной трепонемы вступают в соединение со специфическими антигенами. Образовавшиеся комплексы антиген — антитело сорбируют добавляемым в реакцию комплементом. Индикацию производят путем введения гемолитической системы (эритроциты барана + гемолитическая сыворотка). Для проведения реакции требуются: а) изотонический раствор натрия хлорида; б) ультраозвученный трепонемный (хранят в холодильнике при температуре +4 °С) и кардиолипиновый (хранят при комнатной температуре) антигены; в) комплемент, представляющий собой сыворотку крови, полученной при пункции сердца 5—10 здоровых гвинейских свинок. Может сохраняться в холодильнике в течение 2 мес при условии консервирования 4 % раствором борной кислоты и 5 % раствором натрия Сульфата; г) гемолизин — гемолитическая сыворотка крови кролика, иммунизированная эритроцитами барана с разными титрами (хранят в холодильнике при температуре 4 °С); д) эритроциты барана, получаемые пункцией яремной вены. Кровь собирают в стерильную банку со стеклянными шариками (для перемешивания), встряхивают 15 мин. Сгустки фибрина отделяют фильтрованием через стерильную марлю. Дефибринированную кровь можно хранить в холодильнике до 5 сут. Иногда возникает необходимость более длительного хранения крови барана, в связи с чем ее консервируют специальным консервантом (6 г глюкозы, 4,5 г кислоты борной, 100 мл изотонического раствора натрия хлорида), который кипятят на водяной бане по 20 мин в день в течение 3 сут. На 100 мл дефибринированной крови барана требуется 15 мл консерванта. Консервированную таким образом дефибринированную кровь хранят в холодильнике. Проведению основного опыта предшествует несколько этапов. 1. У больного из локтевой вены берут 5—10 мл крови и обрабатывают сыворотку. У детей кровь можно взять из височной вены или разреза на пятке. Пункцию делают стерильными инструментами, шприц и иглу предварительно промывают изотоническим раствором натрия хлорида. Кровь для исследования берут натощак; за 3—4 дня до исследования больному запрещают употреблять наркотические средства, препараты наперстянки, принимать алкоголь. Не следует проводить исследование у больных с повышенной температурой тела, после травмы, операции, наркоза, перенесенных недавно инфекционных заболеваний, у женщин во время менструации, у беременных (в последние 10 дней беременности), рожениц (в первые 10 дней после родов), а также новорожденных (в первые 10 дней жизни). Полученную кровь в стерильной пробирке помещают на 15—30 мин в термостат при температуре 37 °С. Образовавшийся сгусток отделяют от стенок пробирки стерильной стеклянной палочкой и ставят в холодильник на сутки. Отделившуюся прозрачную сыворотку (над сгустком) отсасывают пастеровской пипеткой с помощью резиновой груши либо осторожно сливают в другую стерильную пробирку и инактивируют на водяной бане в течение 30 мин при температуре 56 °С. Приготовленную таким образом для опыта сыворотку можно хранить в холодильнике до 5—6 дней. 2. Антигены разводят соответственно способу и титру, указанным на этикетке. 3. Приготавливают гемолитическую систему. Для этого дефибринированную кровь или эритроциты барана в количестве, необходимом для проведения реакции, центрифугируют, плазму осторожно отделяют, а осадок промывают 5—6 объемами изотонического раствора натрия хлорида до тех пор, пока надосадочная жидкость не станет совершенно бесцветной. Из осадка готовят 3 % взвесь эритроцитов в изотоническом растворе натрия хлорида по утроенному титру. Раствор гемолитической сыворотки и взвесь эритроцитов барана быстро смешивают и помещают в термостат на 30 мин. 4. Сухой комплемент разводят изотоническим раствором натрия хлорида в пропорции 1:10, нормальную инактивированную сыворотку человека— 1:5. Комплемент титруют в 30 пробирках, помещенных в штатив по 10 пробирок в 3 ряда. В двух рядах его титруют в присутствии двух антигенов, в третьем — с изотоническим раствором натрия хлорида. Пять пробирок являются контрольными: две для соответствующих двух антигенов и по одной — для контроля комплемента, гемолитической сыворотки и изотонического раствора натрия хлорида на гемотоксичность; заполняют их следующим образом: Реактивы, мл Ряд пробирок 1-й 2-й 3-й 4-й 5 и 3 % взвесь эритроцитов барана 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 Гемолитическая сыворотка, разведенная по утроенному титру — 0,25 — — — Комплемент 1:10 0,25 - - - - Трипонемный антиген, разведённый по титру - - - - - Кардиолипиновый антиген, разведённый по титру - - - - 0,5 Изотонический раствор натрия хлоприда 0,75 0,75 1,0 0,5 0,5 Пробирки помещают на 45 мин в термостат, после чего их проверяют. Гемолиза не должно быть ни в одной пробирке. Комплемент в разведении 1:10 разливают в 10 пробирок 1-го ряда штатива в дозах: 0,1, 0,16, 0,2,0,24, 0,3, 0,36,0,4,0,44, 0,5 и 0,55 мл. К содержимому каждой пробирки добавляют изотонический раствор натрия хлорида до 1 мл и тщательно перемешивают. По 0,25 мл смеси из каждой пробирки переносят в соответствующие пробирки 2-го и 3-го рядов. Штатив с пробирками встряхивают, в 3-й ряд пробирок добавляют по 0,5 мл гемолитической системы, вновь встряхивают и помещают на 45 мин в термостат при температуре 37 °С. Нормальную сыворотку крови человека, разведенную изотоническим раствором натрия хлорида в пропорции 1:5, по 0,25 мл разливают во все 30 пробирок. Антиген I (трепонемный ультраозвученный), разведенный по титру изотоническим раствором натрия хлорида, по 0,25 мл добавляют в 10 пробирок 1-го ряда; антиген II (кардиолипиновый в том же разведении и в том же количестве) — в 10 пробирок 2-го ряда. В 10 пробирок 3-го ряда приливают по 0,25 мл изотонического раствора натрия хлорида, оставшиеся 0,25 мл выливают. После инкубации в термостате в 20 пробирок (1-го и 2-го ряда) добавляют по 0,5 мл гемолитической системы, встряхивают и повторно помещают в термостат на 45 мин. Через 45 мин определяют рабочую дозу комплемента, то есть титр его с надбавкой в пределах 15—20 %. Титром комплемента считают его минимальное количество, вызывающее полный гемолиз эритроцитов барана в присутствии антигена и нормальной сыворотки крови человека. Основной опыт заключается в том, что каждую испытуемую инактивированную сыворотку, разведенную в пропорции 1 : 5 изотоническим раствором натрия хлорида, разливают по 0,25 мл в три пробирки. В первую пробирку добавляют 0,25 мл антигена I, во вторую — 0,25 мл антигена II, в третью (контроль) —0,25 мл изотонического раствора натрия хлорида. Во все пробирки добавляют также по 0,25 мл разведенного до рабочей дозы комплемента. Все пробирки помещают на 45 мин в термостат, затем в них добавляют по 0,5 мл гемолитической системы, встряхивают и ставят в термостат на 45—50 мин. Результат опыта регистрируют после наступления полного гемолиза в контрольных пробирках. Результаты реакции оценивают плюсами: полная задержка гемолиза (резкоположительная реакция) ++++, значительная (положительная реакция) +++, частичная (слабоположительная реакция) ++, незначительная (сомнительная реакция) - ±, отсутствие задержки гемолиза (отрицательная реакция) —. При количественном методе проведения реакции Вассермана опыт ставят с уменьшающимися объемами сыворотки, разведенной изотоническим раствором натрия хлорида. Схема проведения основного опыта реакции Вассермана Ингредиенты (в мл). Общий объем 1,25 мл № пробирок I Ц III Испытуемая сыворотка инактивированная, разведенная в пропорции 1 : 5 Антиген I (трепонемный), разведенный по титру Антиген II (кардиолипиновый), разведенный по титру Изотонический раствор натрия хлорида Комплемент, разведенный по рабочей дозе 0,25 0,25 0,25 0,25 — 0,25 — 0,25 0,25 0,25 0,25 Клиническое значение реакции Вассермана трудно переоценить. Ее проводят всем больным до начала лечения, но особое значение она имеет при скрытом сифилисе, поражении внутренних органов и нервной системы. Результаты реакции Вассермана характеризуют качество проведенного лечения, что дает основание в определенные сроки снимать с учета лечившихся больных. При первичном сифилисе реакция Вассермана положительная обычно в конце 6-й недели с момента заражения; при вторичном свежем сифилисе она положительная почти в 100 % случаев, при вторичном рецидивном —в 98—100%; третичном активном — в 85%; третичном скрытом — в 60 % случаев. Реакцию Вассермана проводят двукратно всем беременным, больным с соматическими, нервными, психическими и кожными болезнями, а также декретируемым контингентам населения. В то же время к.положительным и слабоположительным результатам реакции следует относиться критически, так как они могут быть в конце беременности и после родов, при гипертиреозе, малярии, проказе, распаде злокачественной опухоли, инфекционных заболеваниях, коллагенозах и др. Поэтому при наличии клинических проявлений болезни их следует учитывать, наряду с данными бактериоскопии, в первую очередь. Вместе с тем имеются факторы, которые могут исказить истинный характер полученных результатов реакции Вассермана: плохо вымытая лабораторная посуда (следы кислоты и щелочи в пробирках), длительное хранение крови, взятой для исследования, употребление больными жиров и алкоголя перед обследованием, период менструации и др. Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ) С помощью реакции в сыворотке крови больных сифилисом выявляют антитела и комплемент, обездвиживающие бледную трепонему. При первичном сифилисе РИБТ преимущественно отрицательная, при вторичном — положительная в 92—96 % случаев, при третичном — в 92—100 %,при сифилисе нервной системы и врожденном — в 86—89 % случаев. Положительные результаты РИБТ отмечены при саркоиде, эритематозе, диабете, злокачественных опухолях, вирусном гепатите, циррозе печени, малярии, лепре, инфекционном мононуклеозе, некоторых болезнях жарких стран (пинта, фрамбезия и др.). Антитела содержатся в крови больного, которую берут из локтевой вены (5—8 мл) в стерильную сухую пробирку. Полученную кровь обрабатывают так же, как и для реакции Вассермана, но с соблюдением условий стерильности. В реакции используют сыворотку крови, инактивированную в течение 30 мин при температуре 56 °С на водяной бане. Антигеном служит взвесь бледных трепонем, взятых из яичек кролика, зараженного сифилисом путем введения в яичко 0,75—1 мл взвеси бледных трепонем в изотоническом растворе натрия хлорида (50 особей в поле зрения). Материал из яичка следует брать через 6—8 дней после заражения животного. Перед взятием антигена кролика забивают методом обескровливания (пункция сердца или сонной артерии). Ткань яичка измельчают и заливают сывороткой крови здорового кролика, разведенной изотоническим раствором натрия хлорида, встряхивают в течение -30 мин, а затем 10 мин центрифугируют (1000 оборотов в 1 мин). Надосадочную жидкость микроскопируют. В каждом поле зрения должно быть не менее 10—15 бледных трепонем. Комплемент готовят обычным способом из крови гвинейских свинок. Для проведения РИБТ необходимы: 1,2 мл 0,2 % раствора желатина, 2,8 мл 5 % раствора альбумина, 1,6 мл взвеси бледных трепонем; рН среды — 7,2. К указанной смеси прибавляют 0,15 мл комплемента (коктейль). Параллельно ставят две пробы: с активным (опыт) и реактивным (контроль) комплементами. В меланжеры до отметки «1» набирают исследуемую сыворотку, а затем до отметки «2» — коктейль и закрывают их стерильным резиновым кольцом. Одновременно аналогичную реакцию проводят с заведомо положительной и заведомо отрицательной сыворотками. Меланжеры нумеруют и ставят в термостат при температуре 35 °С на 18—20 ч, после чего попарно (опыт — контроль) извлекают их из термостата и содержимое выливают в соответствующие пробирки. На предметное стекло наносят 2 капли: слева — опыт, справа — контроль, накрывают покровным стеклом и микроскопируют в темном поле зрения. Вначале изучают результаты контроля: определяют процент подвижных и неподвижных бледных трепонем. Формула подсчета: X = (А — В)/А * 100, где А — количество подвижных бледных трепонем в контроле; В — количество подвижных бледных трепонем в опыте. Пример: (24 — 19) / 24 * 100 = 21 %. Оценки результатов РИБТ: ниже 20 % — отрицательный. 21—30 % — сомнительный, 31—50 % — слабоположительный, свыше 50 % —положительный. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) Принцип реакции заключается в том, что меченная флюорохромом иммунная противовидовая сыворотка соединяется со специфическим комплексом антиген — антитело, обусловливая его свечение при исследовании препарата в сине-фиолетовых лучах. При проведении реакции пользуются люминесцентным микроскопом ДРШ-250 с иммерсионной системой. В первой фазе реакции после добавления взвеси бледных трепонем к исследуемой сыворотке крови больного образуется комплекс антиген — антитело. Во второй фазе происходит соединение меченной флюорохромом иммунной сыворотки! с образовавшимся комплексом антиген — антитело. Методика. В сухую пробирку берут 5 мл крови из вены больного и инактивируют в термостате при температуре 56 °С в течение 30 мин. Из антигена (трепонемы кролика, аналогичные получаемым при РИБТ, см. № 123) готовят препараты на обезжиренных предметных стеклах. Для этого на одной стороне стекла карандашом рисуют окружность диаметром 1 см, а на другую наносят равномерно распределенную взвесь бледных трепонем, занимающую всю окружность. После высушивания на воздухе препарат в течение 10 мин фиксируют химически чистым ацетоном, нумеруют и затем готовят испытуемые сыворотки. С целью получения различных разведений сыворотки больного берут три ряда пробирок: 1-й — цельная сыворотка, 2-й — 0,45 мл изотонического раствора натрия хлорида (9 капель), 3-й ряд — 6,95 мл изотонического раствора натрия хлорида (19 капель). Из каждой пробирки 1-го ряда берут 0,05 мл сыворотки (1 капля) и переносят, хорошо перемешивая, в пробирки 2-го ряда, получая разведение 1 : 10, из каждой пробирки 2-го ряда переносят одну каплю (0,05 мл) в 3-й ряд, что соответствует разведению 1 : 200. На предметные стекла с высушенным антигеном наносят по 1 капле сыворотки в разведениях 1 : 10 и 1 :200, препараты помещают во влажную камеру, которую закрывают крышкой и ставят в термостат на 30 мин при температуре 37 °С (1-я фаза реакции). Затем стекла извлекают из термостата, 2 раза осторожно промывают изотоническим раствором натрия хлорида, помещают на 10 мин в изотонический раствор натрия хлорида и высушивают. На стекла наносят по 1 капле флюоресцирующей сыворотки, помещают их на 30 мин во влажную камеру, снова 2 раза промывают изотоническим раствором натрия хлорида (2-я фаза реакции). К готовому препарату добавляют 1 каплю забуферного глицерина, накрывают покровным стеклом, на которое наносят 1 каплю иммерсионного нелюминесцентного масла (диметилфталат). Результаты реакции учитывают по степени свечения бледных трепонем. При отсутствии в испытуемой сыворотке антител свечения не наблюдается. Яркость свечения обозначают плюсами. При интенсивно свечении на темном поле видны ярко светящиеся бледные трепонемы желто-зеленого цвета (++++). если бледные трепонемы светятся не ярко, результат обозначают +++; при слабом свечении ++; при незначительном свечении (+) реакцию считают отрицательной; ++, +++, ++++ обозначаются реакции положительные, различной степени интенсивности. РИФ 10 применяют при серодиагностике первичного серонегатив-ного сифилиса, когда все другие реакции (Вассермана, осадочные, РИБТ) отрицательные; РИФ 200 — для серодиагностики всех других форм сифилиса, включая и латентную. Пальпация твердого шанкра У основания твердого шанкра, особенно при язвенной форме, имеется выраженное легко определяемое уплотнение. Для выявления этой особенности твердый шанкр слегка сжимают пальцами в перчатке у основания и подтягивают его вверх. Инфильтрат (уплотнение) обычно выходит на 1—1 мм за пределы эрозии или язвы, в отличие от наблюдающейся иногда инфильтрации при простом герпесе. Следует отметить, что плотность основания — весьма частый, но не постоянный признак твердого шанкра, особенно при локализации его на головке полового члена Симптом козырька при сифилисе Учитывая, что первичная сифилома часто локализуется на внутреннем листке крайней плоти, при обнажении головки полового члена (оттягивании крайней плоти назад) ясно определяется хрящевидное уплотнение в виде плотного козырька. Уплотнение несколько напоминает вывернутое веко. Симптом особенно отчетлив при язвенной форме первичной сифиломы, менее отчетлив — при эрозивной. Симптом дорсального хряща при сифилисе Является дополнением к симптому козырька при диагностике первичной сифиломы. При пальпации спинки полового члена, закрытого крайней плотью, выявляют пластинчатый участок уплотнения. Симптом бывает положительным при локализации шанкра как на внутреннем листке крайней плоти, так и на головке, венечной бороздке и теле полового члена. Симптом особенно ценен при фимозе, когда нельзя обследовать половой член и внутренний листок крайней плоти. Более выражен симптом при язвенной форме первичной сифиломы, менее — при эрозивной. Пальпация при индуративном (уплотненном) отеке Индуративный отек —одно из атипичных проявлений первичного сифилиса. Он возникает в местах, богатых жировыми отложениями, чаще на больших половых губах, мошонке, крайней плоти; реже — на веках, губах. В этих случаях, особенно в серонегативный период, возможны диагностические ошибки. Диагностике помогает пальпация пораженных участков — при надавливании пальцем в напальчнике в области отека не остается ямки. Аналогичное явление наблюдается и при генерализованной микседеме. Проба с кислотой никотиновой («воспламенение») Основана на свойстве кислоты никотиновой при внутривенном введении (почти сейчас же) и приеме внутрь (через 3—4 мин) вызывать расширение капилляров кожи. Проба имеет большую диагностическую ценность в случаях слабо выраженной сифилитической розеолы. Внутривенно вводят 1—2 мл 1 % раствора кислоты никотиновой либо больной принимает 0,05—0,1 г препарата внутрь. Пятна, вызванные расширением сосудов, окрашиваются более интенсивно и четче контурируются по сравнению с окружающей кожей. Реакция Яриша — Герксгеймера — Лукашевича Реакция Яриша — Герксгеймера — Лукашевича, или реакция «обострения», развивается при свежем вторичном сифилисе. После введения бензилпенициллина натриевой соли (чаще после третьей, четвертой инъекций) у многих больных повышается температура тела, иногда до 38— 39 °С, розеолы становятся более яркими, приподнятыми, появляются новые пятнистые высыпания. Реакция имеет диагностическое значение в сомнительных случаях при постановке диагноза свежего или рецидивного сифилиса. Реакция развивается вследствие гибели в организме большого количества трепонем, поступления их эндотоксина в кровь, что вызывает специфическую иммунологическую клеточную реакцию, сопровождающуюся общими явлениями. В крови больного, взятой в этот период, отмечаются лейкоцитоз и увеличение СОЭ. |