Инструкция по применению «инно-лиа сифилис усовершенствованный», тест-системы для подтверждения наличия антител к антигенам Treponema
|
|
Скачать 178.63 Kb.
|
 УТВЕРЖДАЮ Главный государственный санитарный врач Российской Федерации Г.Г. Онищенко 16.12.2005 г. № 01-11/240-05 ИНСТРУКЦИЯ по применению «ИННО-ЛИА Сифилис усовершенствованный», тест-системы для подтверждения наличия антител к антигенам Treponema pallidum в сыворотке или плазме крови человека методом линейного иммуноферментного анализа Тест-система «ИННО-ЛИА Сифилис усовершенствованный» представляет собой набор реагентов, который включает: иммуносорбент, тест-полоски ИННО-ЛИА Сифилис с нанесенными рекомбинантными антигенами: TpN47, TpN17, TpN15 и синтетический пептид ТmрА; положительный контрольный образец (К+), инактивированный – сыворотка крови человека, содержащая антитела к Treponema pallidum, прозрачная бесцветная жидкость; отрицательный контрольный образец (К-), инактивированный – сыворотка крови человека, не содержащая антитела к Treponema pallidum, прозрачная бесцветная жидкость; конъюгат – антитела козьи к IgG человека, меченные щелочной фосфатазой, прозрачная жидкость ярко-красного цвета; хромоген – прозрачная жидкость ярко-оранжевого цвета; раствор для разведения образцов – фосфатный буферный раствор, прозрачная жидкость ярко-зеленого цвета; отмывающий раствор, 5-кратный –фосфатный буферный раствор, прозрачная жидкостьярко-голубого цвета; стоп-реагент – 0,1 М серная кислота, прозрачнаябесцветная жидкость. Набор рассчитан на 20 определений. НАЗНАЧЕНИЕ Подтверждение наличия антител против Treponema pallidum в образцах сыворотки или плазмы крови человека методом линейного иммуноферментного анализа (линейным иммуноблоттом). Тест используется как дополнительный при исследовании образцов сыворотки или плазмы крови человека, показавших при скрининге (в РПР, РПГА или ИФА) положительный результат. ^ Три рекомбинантных белка TpN47, TpN17, TpN15 и синтетический пептид ТmрА, представляющие собой антигенные детерминанты Treponema pallidum, нанесены в виде отдельных линий на мембрану из нейлона, которая прикреплена к пластиковой подложке, что вместе образует тест-полоску. Антитела к Treponema pallidum обнаруживаются по их связыванию с антигенами TpN47, TpN17 и TpN15 и TmpA, нанесенными на тест-полоску в виде отдельных линий. На каждую тест-полоску также нанесены четыре контрольных линии: анти-стрептавидиновая линия (иммобилизованный стрептавидин); линия, по интенсивности окрашивания соответствующая 3+ положительному контролю (иммобилизованные антитела к Ig человека), которая также является контролем внесения образца; линия, по интенсивности окрашивания соответствующая 1+ положительному контролю (иммобилизованные IgG человека); линия, по интенсивности окрашивания соответствующая критическому уровню ± (иммобилизованные IgG человека). Тест-система «ИННО-ЛИА Сифилис усовершенствованный» основана на принципе иммунного анализа. Тестируемый образец инкубируется в ванночке вместе с тест-полоской. Специфические антитела, если они присутствуют в образце, связываются с антигенами, нанесенными на тест-полоску. Затем в ванночку вносятся козьи антитела к IgG человека, меченные щелочной фосфатазой. Эти антитела связываются с любым образовавшимся комплексом «антиген Treponema pallidum – антитело», который сформировался на полоске на предыдущем этапе ИФА-реакции. Инкубация тест-полоски с хромогеном дает темно-коричневый цвет на тех линиях, где присутствуют специфические антитела (с интенсивностью пропорционально количеству антител). Развитие окраски останавливают добавлением серной кислоты. В случае, если тестируемый образец не содержит специфических антител, изменения окраски полос с нанесенными антигенами TpN47, TpN17 и TpN15 и TmpA не происходит: комплекс «антиген Treponema pallidum –– антитело» на полосках не образуется, и антитела к IgG человека, меченные щелочной фосфатазой, не могут с ним связаться. ^ - При условии хранения при температуре от 2 до 8 °С все реагенты тест-системы, включая тест-полоски, стабильны в течение всего срока хранения, указанного на упаковке. Реагенты не замораживать. - Все реагенты и пластмассовую пробирку, содержащую тест-полоски, необходимо выдерживать при температуре от 18 до 25 °С в течение приблизительно 30 мин до использования и помещать в холодильник (температура от 2 до 8 °С) сразу после использования. - Изменение внешнего вида компонентов набора свидетельствует об их негодности. - После открытия пластиковой пробирки, содержащей стрипы, неиспользованные стрипы будут стабильны в течение 16 недель, если их хранить притемпературе от 2 до 8 °С в плотно закрытой пробирке с капсулой осушителя. ^
^ - Дистиллированная или деионизированная вода. - Прецизионные пипетки на 10 µl, 20-200 µl и 200-1000 µl с одноразовыми наконечниками. - Орбитальный шейкер или ротатор (см. Указания по процедуре инкубации). - Вортекс или другой аналогичный встряхиватель. - Мерные цилиндры: 25, 50, 100 и 200 мл. - Пинцет для работы со стрипами. - Перчатки. - Таймер (1ч, разрешение - 1 мин). - Дополнительные материалы:
^ Все компоненты крови и биологические материалы должны рассматриваться как потенциально инфекционные и должны обрабатываться также. Анализ должен проводить только обученный персонал. Со всеми остатками компонентов крови и биологическими материалами необходимо обращаться в соответствии с установленными нормами безопасности: - автоклавирование в течение 15 мин при температуре 121 °С - сжигание. Жидкие отходы могут быть обработаны раствором гипохлорита натрия (конечная концентрация гипохлорита должна быть равна ± 1 %). Оставить на ночь до утилизации. ВНИМАНИЕ! Нейтрализуйте жидкие отходы, которые содержат кислоту, перед добавлением гипохлорита натрия. Используйте индивидуальные защитные средства (перчатки и защитные очки) при работе с опасными и инфекционными материалами. Утилизируйте отходы согласно национальным или федеральным руководствам, соблюдайте законодательство по охране окружающей среды. Не аспирируйте стоп-реагент в сосуд с жидкими отходами, который содержит гипохлорит натрия. ^ Тест-систему «ИННО-ЛИА Сифилис усовершенствованный» можно использовать для тестирования сыворотки или плазмы крови человека, находящихся в пробирках, содержащих цитрат, гепарин или ЭДТА в качестве антикоагулянта. Неоднократно замороженные и оттаявшие образцы могут давать при тестировании ошибочные результаты. Перед хранением сыворотка или плазма должны быть отделены от кровяного сгустка или клеток крови центрифугированием. Храните образцы, взятые для анализа, при температуре от 2 до 8 °С. Если необходимо хранить образцы более 1 недели, заморозьте образцы в аликвотах и храните при температуре минус 20 °С или ниже. Любое предварительное разведение исследуемых образцов можно делать с использованием нормальной сыворотки человека. Не используйте образцы, подвергшиеся тепловой обработке. Замечания по процедуре тестирования
Окрашенные тест-полоски необходимо высушивать полностью во избежание ошибочной интерпретации результатов из-за появления слабо различимых полос после добавления стоп-реагента.
Проведение анализа Прежде чем приступить к работе, пожалуйста, ознакомьтесь с разделом «Замечания по процедуре тестирования».
^ После ночной инкубации тщательно удалите липкую пластину. Тщательно удалите жидкость из ванночки. Держите рамку под углом, чтобы вся жидкость стекла в ту сторону ванночки, где находятся не покрытые мембраной пластиковые «основы»стрипов. Удалите жидкость пипеткой (предпочтительнее пользоваться вакуумным аспиратором). Добавьте 1 мл рабочего отмывающего раствора в каждую ванночку и перемешивайте содержимое ванночки в течение 5 мин, используя орбитальный шейкер. Удалите жидкость пипеткой, держа ванночку под углом, как описано выше. Повторите эту процедуру 3 раза. Замечания:
^ Всегда добавляются объемы, которые указаны в разделе «Проведение анализа». Добавление избытка реактивов может привести к расплескиванию жидкости через края ванночек и вызвать перекрестную контаминацию. Скорость, развиваемая орбитальным шейкером или ротатором, является критичной для достижения эффективного окрашивания линий и достижения максимальной чувствительности анализа. Все этапы инкубации тест-полосок (с образцом, конъюгатом, хромогеном и стоп-реагентом), а также этапы отмывки должны производиться на орбитальном шейкере или ротаторе. Во время инкубации или отмывки тест-полоска должна быть полностью погружена в жидкость мембраной вверх. Орбитальный шейкер или ротатор должен перемешивать содержимое ванночки таким образом, чтобы тест-полоска двигалась в ванночке «туда-сюда», а жидкость омывала тест-полоску, но не переливалась через край ванночки. ^ Для орбитального шейкера:
Для ротатора:
^ Уровень интенсивности окраски антигенных линий может меняться от «-» до «4+». Для качественной оценки интенсивности окраски антигенных линий проводят сравнение с интенсивностью окраски контрольных линий. Расположение и идентификация антигенов и контрольных линий на тест-полоске даны в таблице (расположение указанных линий на тест-полоске сверху вниз).
Интенсивность реакции на контрольных линиях каждой тест-полоски используется для оценки реактивности для каждого антигена на данной тест-полоске. Для облегчения оценки результата прилагается специальная форма для учета результатов.
Проявленные тест-полоски прикрепляются к форме для учета результатов так, чтобы контрольные линии интенсивности 3+ у всех тест-полосок и соответствующая линия на рисунке формы были на одном уровне. Перед считыванием результатов образцов оценивают правильность постановки, используя результаты контрольных тест-полосок (К+ и К-) и контрольных линий на каждой тест-полоске. Валидация Результаты на отдельной тест-полоске можно учитывать, если:
Примечание: Слабое окрашивание контрольной линии может наблюдаться в образцах с высоким содержанием IgG (выше нормального диапазона IgG). Разведите такой образец в 2 раза нормальной сывороткой человека (однако разведение может привести к снижению чувствительности). ^ Образец является ОТРИЦАТЕЛЬНЫМ:
Образец является ПОЛОЖИТЕЛЬНЫМ:
Образец считается НЕОПРЕДЕЛЕННЫМ:
ПРИМЕЧАНИЕ:
^ Для достижения оптимального качества проводимого анализа необходимо четко следовать инструкции. Отрицательный результат не исключает, тем не менее, возможность инфицированности пациента ^ Использование разбавленных образцов может давать ложные результаты. Форма выпуска Тест-система выпускается в виде упакованного в коробку набора.
-1 пробирка.
В коробку вкладывают также: Рамки с ванночками для инкубации тест-полосок, пластмассовые - 2 шт. Пластины липкие 5 шт. Трафарет-схему 1 шт. Форму для учета результатов 1 шт. Инструкцию по применению. ^ Срок годности - 12 месяцев. Хранение при температуре от 2 до 8°С. Транспортирование при температуре от 2 до 8°С. Допускается транспортирование при температуре от 9 до 25 °С в течение трех дней. Условия отпуска. Для лечебно-профилактических и санитарно-профилактических учреждений. Рекламации на качество тест-системы направлять в ФГУ «ГНЦД Росмедтехнологий» по адресу: 107076, Москва, ул. Короленко, д.3, строение 6; тел. (499)785-20-15 факс (499)785-20-16 и в фирму-производитель «ИННОДЖЕНЕТИКС Н.В.» по адресу: Технолоджипарк 6, В-9052 Гент, Бельгия; тел.32-9/329-13-29, факс 32-9/329-19-11. Регистрационное удостоверение Росздравнадзора № ЛС-001298 от 17.02.2006. ================================================================== В. 050809.  |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям