Инструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного определения антител класса g I g

СОДЕРЖАНИЕ

CONTENT



_______________________________________________________________________________________________________

Инструкция составлена Руководителем службы клиентского сервиса ООО «ХЕМА», к. б. н. Д. С. Кострикиным


 

ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ КЛАССА G (IgG) К АНТИГЕНАМ РОДА MYCOPLASMA В СЫВОРОТКЕ (ПЛАЗМЕ) КРОВИ СОБАЧЬИХ «Микоплазма IgG-C-ИФА»


НАЗНАЧЕНИЕ

1.1. Набор реагентов «Микоплазма IgG-C-ИФА» предназначен для качественного определения концентрации антител класса G (IgG) к антигенам рода Mycoplasma в сыворотке (плазме) крови собачьих методом твердофазного иммуноферментного анализа.

1.2. Микоплазмы являются отдельным классом микроорганизмов. Из-за особенностей метаболизма микоплазмы не растут или крайне медленно растут на стандартных средах, используемых в бактериологических лабораториях; это требует применения серологических методов для диагностики. Микоплазмы вызывают пневмонию, трахеобронхит и буллезный менингит, острые и хронические воспалительные заболевания мочеполового тракта и быть причиной бесплодия. Специфические IgG-антитела к антигенам микоплазмы не являются протективными (не защищают от рецидива или повторного инфицирования), но их титр в сыворотке крови обычно отражает степень активности размножения микоплазмы; поэтому определение IgG-антител может быть использовано для мониторинга данных инфекций. Повышенные титры IgG-антител в сыворотке крови могут определяться через 3-4 недели после начала заболевания несмотря на успешную антимикробную терапию.


^ ПРИНЦИП РАБОТЫ НАБОРА

Определение антител класса G (IgG) к антигенам рода Mycoplasma основано на использовании «сэндвич»-варианта твердофазного иммуноферментного анализа. На внутренней поверхности лунок планшета иммобилизован антиген - Mycoplasma. Антитела из образца связываются с антигеном на поверхности лунки. Образовавшийся комплекс выявляют с помощью конъюгата мышиных моноклональных антител к IgG собаки с пероксидазой хрена. В результате образуется связанный с пластиком «сэндвич», содержащий пероксидазу. Во время инкубации с раствором субстрата тетраметилбензидина (ТМБ) происходит окрашивание растворов в лунках. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации антител класса G (IgG) к антигенам рода Mycoplasma в исследуемом образце. Концентрация антител класса G (IgG) к антигенам рода Mycoplasma в исследуемых образцах рассчитывается по формуле, приведенной в инструкции.


^ АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

3.1. Специфичность.

Использование высокоочищенного препарата позволяет достичь высокой специфичности анализа.

3.2. Воспроизводимость.

Коэффициент вариации результатов определения содержания антител класса G (IgG) к антигенам рода Mycoplasma в одном и том же образце сыворотки (плазмы) крови собачьих с использованием Набора «Микоплазма IgG-C-ИФА» не превышает 8,0%.

^ СОСТАВ НАБОРА

	Код компонента	Символ	Наименование	Количество	Ед.	Описание
1	P106CZ	SORB MTP	Планшет 96-луночный полистироловый, стрипированный, готов к использованию	1	шт	-
2	CQ106CZ	CAL	^ Калибровочная проба на основе трис-буфера (рН 7.2-7.4), содержащая известное количество антител класса G (IgG) к антигенам рода Mycoplasma, готова к использованию, 1 мл	1	шт	прозрачная жидкость синего цвета
3	CN106CZ CP106CZ	^ CONTROL - CONTROL +	Контрольные сыворотки (отрицательный и положительный контроли) на основе сыворотки крови собачьих с известным содержанием антител класса G (IgG) к антигенам рода Mycoplasma, готовы к использованию (1 мл и 1 мл соответственно)	2	шт	прозрачная бесцветная жидкость и прозрачная жидкость красного цвета
4	T106CZ	CONJ HRP	Конъюгат, готов к использованию (11 мл)	1	шт	прозрачная жидкость красного цвета
5	S014Z2	DIL SPE	ИФА-Буфер, готов к использованию (22 мл)	1	шт	прозрачная жидкость синего цвета
6	R055Z	SUBS TMB	^ Раствор субстрата тетраметилбензидина (ТМБ), готов к использованию (11 мл)	1	шт	прозрачная бесцветная жидкость
7	S008Z	BUF WASH 21X	^ Концентрат отмывочного раствора, 21х-кратный (22 мл)	1	шт	прозрачная бесцветная жидкость
8	R050Z	STOP	Стоп-реагент, готов к использованию (11 мл)	1	шт	прозрачная бесцветная жидкость
9	N003	-	Бумага для заклеивания планшета	2	шт	-
10	K106CI	-	Инструкция по применению Набора реагентов «Микоплазма IgG-C-ИФА»	1	шт	-
11	K106CQ	-	Паспорт контроля качества Набора реагентов «Микоплазма IgG-C-ИФА»	1	шт	-

^ МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ


5.1. При работе с Набором следует соблюдать «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).


^ ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ

- фотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность содержимого лунок планшета при длине волны 450 нм;

- термостат, поддерживающий температуру +37+-0,1 °С

- дозаторы со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы в диапазоне 25-250 мкл;

- цилиндр мерный вместимостью 500 мл;

- вода дистиллированная;

- перчатки резиновые или пластиковые;

- бумага фильтровальная.


^ ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ АНАЛИЗА

7.1. Перед проведением анализа компоненты Набора и исследуемые образцы сыворотки (плазмы) крови следует выдержать при комнатной температуре (+18-25°С) не менее 30 мин.

^ 7.2. Приготовление планшета.

Вскрыть пакет с планшетом и установить на рамку необходимое количество стрипов. Оставшиеся неиспользованными стрипы, чтобы предотвратить воздействие на них влаги, тщательно заклеить бумагой для заклеивания планшета и хранить при температуре +2-8°С в течение всего срока годности Набора.

^ 7.3. Приготовление отмывочного раствора.

Содержимое флакона с концентратом отмывочного раствора (22 мл), перенести в мерный цилиндр вместимостью 500 мл, добавить 440 мл дистиллированной воды и тщательно перемешать. В случае дробного использования Набора следует отобрать необходимое количество концентрата отмывочного раствора и развести дистиллированной водой в 21 раз (1 мл концентрата отмывочного раствора + 20 мл дистиллированной воды).


^ УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА

8.1. Набор реагентов «Микоплазма IgG-C-ИФА» должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +2-8°С в течение всего срока годности, указанного на упаковке Набора.

Допускается хранение (транспортировка) Набора при температуре до +25 °С не более 5 суток. Не допускается замораживание целого набора.

8.2. Набор рассчитан на проведение анализа в дубликатах 45 исследуемых образцов, 1 калибровочных проб и 2 пробы контрольной сыворотки (всего 96 определений).

8.3. В случае дробного использования Набора компоненты следует хранить следующим образом:

- оставшиеся неиспользованными стрипы необходимо тщательно заклеить бумагой для заклеивания планшета и хранить при температуре +2-8°С в течение всего срока годности Набора;

- ИФА-Буфер, конъюгат, субстрат, стоп-реагент после вскрытия флаконов следует хранить при температуре +2-8°С в течение всего срока годности Набора;

- калибровочные пробы и контрольную сыворотку после вскрытия флаконов следует хранить при температуре +2-8°С не более 2 месяцев

- оставшийся неиспользованным концентрат отмывочного раствора следует хранить при температуре +2-8°С в течение всего срока годности Набора.

- приготовленный отмывочный раствор следует хранить при комнатной температуре (+18-25°С) не более 5 суток или при температуре +2-8°С не более 30 суток;

Примечание. После использования реагента немедленно закрывайте крышку флакона. Закрывайте каждый флакон своей крышкой.

8.4. Для проведения анализа не следует использовать гемолизированную, мутную сыворотку (плазму) крови, а также сыворотку (плазму) крови, содержащую азид натрия.

Если анализ производится не в день взятия крови, сыворотку (плазму) следует хранить при температуре -20°С. Повторное замораживание-оттаивание образцов сыворотки (плазмы) крови не допускается.

8.5. При использовании Набора для проведения нескольких независимых серий анализов следует иметь в виду, что для каждого независимого определения необходимо построение нового калибровочного графика; кроме этого, рекомендуется определение концентрации антител класса G (IgG) к антигенам рода Mycoplasma в контрольной сыворотке.

8.6. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение Инструкции по применению Набора.


^ ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

1	Поместите в рамку необходимое количество стрипов - исследуемые образцы в 2 повторах и 6 лунок для калибровочных проб и контрольной сыворотки.
2	^ Разбавьте образцы сыворотки (плазмы) крови собачьих в 21 раз, используя ИФА-Буфер (S014Z2). При добавлении исследуемого образца, не содержащего гепарин или ЭДТА, происходит изменение окраски буфера с синего на красный. Не разбавляйте калибровочные пробы и контрольную сыворотку.
3	Внесите в соответствующие лунки в дубликатах по 100 мкл калибровочной пробы и контрольной сыворотки. В остальные лунки внесите в дубликатах по 100 мкл разбавленных исследуемых образцов сыворотки (плазмы) крови собачьих. Внесение калибровочных проб, контрольной сыворотки и исследуемых образцов необходимо произвести в течение 5-10 минут.
4	Аккуратно перемешайте содержимое планшета круговыми движениями по горизонтальной поверхности, заклейте планшет бумагой для заклеивания планшета. Инкубируйте планшет в течение 30 минут при температуре +37 °C .
5	По окончании инкубации удалите содержимое лунок аспирацией (например, с помощью водоструйного насоса) или декантированием и отмойте лунки 3 раза. При каждой отмывке добавьте во все лунки по 250 мкл отмывочного раствора (см. п.7.3), встряхните планшет круговыми движениями по горизонтальной поверхности с последующей аспирацией или декантированием. Задержка при отмывке (замачивание лунок) не требуется. При каждом декантировании необходимо тщательно удалять остатки жидкости из лунок.
6	^ Внесите во все лунки по 100 мкл конъюгата.
7	Заклейте планшет бумагой для заклеивания планшета и инкубируйте его в течение 30 минут при температуре +37 °C .
8	По окончании инкубации удалите содержимое лунок и отмойте лунки 5 раз.
9	^ Внесите во все лунки по 100 мкл раствора субстрата тетраметилбензидина. Внесение раствора субстрата тетраметилбензидина в лунки необходимо произвести в течение 2-3 мин. Инкубируйте планшет в темноте при комнатной температуре (+18-25°С) в течение 10-20 минут в зависимости от степени развития синего окрашивания.
10	^ Внесите во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности, как и раствор субстрата тетраметилбензидина, по 100 мкл стоп-реагента, при этом содержимое лунок окрашивается в ярко-желтый цвет.
11	^ Измерьте величину оптической плотности (ОП) содержимого лунок планшета на фотометре вертикального сканирования при длине волны 450 нм. Измерение ОП содержимого лунок планшета необходимо произвести в течение 15 мин после внесения стоп-реагента. Бланк фотометра выставляйте по воздуху..
12	Рассчитайте содержание антител класса G (IgG) к антигенам рода Mycoplasma в исследуемых образцах. 1. Рассчитайте среднее ОП калибратора; 2. Умножьте это среднее на коэффициент (Q), значение которого указано в Паспорте серии - получите граничное значение оптической плотности (ОПГ); 3. Для каждого образца вычислите коэффициент К, получаемый делением ОП образца на ОПГ. При К>1.1 образец положительный, при К<0.9 - отрицательный. При значении К, лежащем в промежутке от 0.91 до 1.09 - результат в пограничной зоне (+/-).

Таблица М

Вид материала	Сбор, хранение и обработка материала	Пример разведения	Образец в лунку, мкл	Фактор пересчета
сыворотка (плазма) крови собачьих	Исследуемые образцы должны быть тщательно отцентрифугированы. Анализ мутных, хилезных и гемолитических образцов может привести к искажению результатов.	25 мкл образца + 500 мкл ИФА-Буфера	100	1

^ ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ И НОРМЫ

10.1. Основываясь на результатах исследований, проведенных ООО «ХЕМА», рекомендуем пользоваться нормами, приведенными ниже. Вместе с тем, в соответствии с правилами GLP (Хорошей лабораторной практики), каждая лаборатория должна сама определить параметры нормы, характерные для обследуемой популяции.

10.2. Некоторые лаборатории на основании результатов собственных популяционных исследований вводят "второй cut-off", расположенный между анамнестическим ("нормальным") и "высоким" уровнем IgG-антител, характерным для реактивации или позднего периода первичной инфекции.

Данные о величине «второго cut-off», полученные в лабораториях ХЕМА, приведены ниже как верхний предел для серопозитивных животных. Вместе с тем надо иметь ввиду, что данный верхний предел может значительно отличаться в популяциях, имеющих значительно более высокий или более низкий уровень заболеваемости животных.

Если значение К лежит в интервале от 1.1 до "второго cut-off", это может свидетельствовать либо о начальном периоде первичной инфекции, либо об инфекции, перенесенной ранее. Чтобы прояснить ситуацию, необходимо исследовать повторные образцы крови того же обследуемого, взятые через несколько недель. Нарастание титра в повторном образце свидетельствует о наличии инфекции. Если же титр не нарастает, это свидетельствует об отсутствии активной инфекции и об анамнестическом характере антител.

Исследуемая группа	Единицы
	K
	Нижний предел	Верхний предел
Серонегативные	<0.1	0.9
Серопозитивные	1.1	4.9

По вопросам, касающимся качества Набора «Микоплазма IgG-C-ИФА»,

следует обращаться в ООО «ХЕМА» по адресу:

105043, Москва, а/я 58, тел/факс (495) 737-39-36, 737-00-40, 510-57-07 (многоканальный)


электронная почта: [email protected]; [email protected]


интернет: www.xema.ru; www.xema-medica.com


Руководитель службы клиентского сервиса ООО «ХЕМА»,

к. б. н. Д. С. Кострикин

Instruction for use.


A solid-phase enzyme immunoassay for the qualitative determination of IgG antibodies to Mycoplasma in canine serum or plasma

^

INTENDED USE

A solid-phase enzyme immunoassay for the qualitative determination of IgG antibodies to Mycoplasma in canine serum or plasma.

This kit is designed for measurement of IgG antibodies to Mycoplasma in canine serum or plasma. For possibility of use with other sample types, please, refer to Application Notes (on request). The kit contains reagents sufficient for 96 determinations and allows to analyze 45 unknown samples in duplicates.

^

SUMMARY AND EXPLANATION

Mycoplasmae represent a separate class of microorganisms. Unique metabolic properties of Mycoplasmae determine their poor growth on standard microbiological media and require the application of serological methods in diagnostics.

All Mycoplasmae share common antigenic epitopes; the microbes cause pneumonia, bronchitis and bullous meningitis; acute or chronic pelvic inflammations and may contribute to male and female infertility.

Specific IgG-antibodies to Mycoplasmae do not possess protective properties; however their serum titer reflects the degree of microbial growth. Therefore, the detection of serum IgG antibodies may be used for disease and treatment monitoring. Elevated serum IgG antibody titers are detected after 3-4 weeks from the onset of the disease in spite of successful antibiotic treatment.

^

PRINCIPLE OF THE TEST

This test is based on two-site sandwich enzyme immunoassay principle. Tested specimen is placed into the microwells coated by the antigen. Antibodies from the specimen bind coated antigen on the microwell surface. Unbound material is removed by washing procedure. Second antibodies directed towards species specific Ig, labelled with peroxidase enzyme, are then added into the microwells. After subsequent washing procedure, the remaining enzymatic activity bound to the microwell surface is detected and quantified by addition of chromogen-substrate mixture, stop solution and photometry at 450 nm. Optical density in the microwell is directly related to the quantity of the measured analyte in the specimen.

 
^

WARNINGS AND PRECAUTIONS

4.1. For professional use only.

4.2. This kit is intended for in vitro diagnostic use only.

4.3. INFECTION HAZARD: There is no available test methods that can absolutely assure that Hepatitis B and C viruses, HIV-1/2, or other infectious agents are not present in the reagents of this kit. All human products, including patient samples, should be considered potentially infectious. Handling and disposal should be in accordance with the procedures defined by an appropriate national biohazard safety guidelines or regulations.

4.4. Avoid contact with stop solution containing 5,0% H2SO4. It may cause skin irritation and burns.

4.5. Wear disposable latex gloves when handling specimens and reagents. Microbial contamination of reagents may give false results.

4.6. Do not use the kit beyond the expiration date.

4.7. All indicated volumes have to be performed according to the protocol. Optimal test results are only obtained when using calibrated pipettes and microplate readers.

4.8. Do not smoke, eat, drink or apply cosmetics in areas where specimens or kit reagents are handled.

4.9. Chemicals and prepared or used reagents have to be treated as hazardous waste according to the national biohazard safety guidelines or regulations.

4.10. Do not mix reagents from different lots.

4.11. Replace caps on reagents immediately. Do not swap caps.

4.12. Do not pipette reagents by mouth.

4.13. Specimens must not contain any AZIDE compounds – they inhibit activity of peroxidase.

4.14. Safety Data Sheet for this product is available upon request directly from XEMA Co., Ltd.

4.15. The Safety Data Sheet fit the requirements of EU Guideline 91/155 EC.


^

KIT COMPONENTS

5.1. Contents of the Kit

	Symbol	Description		Qty	Units	Colour code	Stability of opened/diluted components
1	SORB MTP	Mycoplasma IgG-C EIA strips, 8х12 wells	polystyrene microwells coated with Mycoplasma	1	pcs		until exp.date
2	CAL	Calibrator set, 1 ml	canine IgG antibodies to Mycoplasma diluted in tris buffered preservative - 0,01% Bronidox L, 0,01% 2-Methyl-4-isothiazolin-3-one-hydrochloride;also contains blue dye	1	pcs	blue	2 months
3	^ CONTROL - CONTROL +	Control sera (1 ml and 1 ml, resp.)	dilution of preselected canine serum, without IgG antibodies to Mycoplasma with preservative - 0,01% Bronidox L, 0,01% 2-Methyl-4-isothiazolin-3-one-hydrochloride, colourless; dilution of preselected canine serum with high content of canine IgG antibodies to Mycoplasma with preservative - 0,01% Bronidox L, 0,01% 2-Methyl-4-isothiazolin-3-one-hydrochloride; also contains red dye	2	pcs	colourless and red	2 months
4	CONJ HRP	Conjugate, 11 ml	aqueous solution of murine monoclonal antibodies to canine IgG coupled with horseradish peroxidase diluted on phosphate buffered solution with casein from bovine milk and detergent (Tween-20), contains 0,1% phenol as preservative and red dye	1	pcs	red	until exp.date
5	DIL SPE	EIA buffer 22 ml	phosphate buffered saline with casein from bovine milk and detergent (Tween-20), contains 0,1% phenol as preservative and blue dye	1	pcs	blue	until exp.date
6	SUBS TMB	Substrate solution, 11 ml	ready-to-use single-component tetramethylbenzidine (TMB) solution.	1	pcs	colourless	until exp.date
7	BUF WASH 21X	Washing solution concentrate 21x, 22 ml	aqueous solution of sodium chloride and detergent (Tween 20), contains proClin300 as a preservative	1	pcs	colourless	Concentrate - until exp.date Diluted washing solution - 1 month at 2-8 °C or 5 days at RT
8	STOP	Stop solution, 11 ml	5,0% vol/vol solution of sulphuric acid	1	pcs	colourless	until exp.date
9	N003	Plate sealing tape		2	pcs		N/A
10	K106CI	Instruction Mycoplasma IgG-C EIA		1	pcs		N/A
11	K106CQ	QC data sheet Mycoplasma IgG-C EIA		1	pcs		N/A

1. 
   Equipment and material required but not provided
   

- Distilled or deionized water;

- Automatic or semiautomatic multichannel micropipettes, 100-250 µl, is useful but not essential;

- Calibrated micropipettes with variable volume, range volume 25-250 µl;

- Dry thermostat for 37 °С +- 0,1 °С

- Calibrated microplate photometer with 450 nm wavelength and OD measuring range 0-3.0.

5.3. Storage and stability of the Kit

Store the whole kit at 2 to 8 °C upon receipt until the expiration date.

After opening the pouch keep unused microtiter wells TIGHTLY SEALED BY ADHESIVE TAPE (INCLUDED) to minimize exposure to moisture.

^

SPECIMEN COLLECTION AND STORAGE.

This kit is intended for use with serum or plasma. Grossly hemolytic, lipemic, or turbid samples should be avoided.

Specimens may be stored for up to 48 hours at 2-8 °C before testing. For a longer storage, the specimens should be frozen at -20 °C or lower. Repeated freezing/thawing should be avoided.

^

TEST PROCEDURE

7.1. Reagent Preparation - All reagents (including unsealed microstrips) should be allowed to reach room temperature (+18 to +25 °C) before use. - All reagents should be mixed by gentle inversion or vortexing prior to use. Avoid foam formation. - It is recommended to spin down shortly the tubes with calibrators on low speed centrifuge. - Prepare washing solution from the concentrate BUF WASH 21X by 21 dilutions in distilled water. Procedural Note: It is recommended that pipetting of all calibrators and samples should be completed within 3 minutes. Assay flowchart See the example of calibration graphic in Quality Control data sheet. Assay procedure 1 Put the desired number of microstrips into the frame; allocate 6 wells for the calibrators CAL and control samples CONTROL - CONTROL + and two wells for each unknown sample. DO NOT REMOVE ADHESIVE SEALING TAPE FROM UNUSED STRIPS. 2 Dilute all samples using buffer DIL SPE (EIA buffer) 21 fold. (25 µl of sample + 500 µl of diluent) . After add of samples (without heparin or EDTA), buffer change colour from blue to red.Do not dilute control sample and calibrators. 3 Pipet 100 µl of calibrators , control samples CONTROL - CONTROL + and unknown samples into the wells. Cover the wells by plate adhesive tape (included into the kit). 4 Incubate 30 minutes at 37 °C . 5 Prepare washing solution by 21x dilution of washing solution concentrate BUF WASH 21X by distilled water. Minimal quantity of washing solution should be 250 µl per well. Wash strips 3 times 6 Dispense 100 µl of CONJ HRP into the wells. Cover the wells by plate adhesive tape. 7 Incubate 30 minutes at 37 °C . 8 Wash the strips 5 times. 9 Dispense 100 µl of SUBS TMB into the wells 10 Incubate 10-20 minutes at 18-25 °C 11 Dispense 100 µl of STOP into the wells. 12 Measure OD (optical density) at 450 nm. 13 Set photometer blank on air 14 Apply coefficient method for data reduction. 1. Calculate a cutoff value by multiplying mean OD of Calibrator by the Q value (see Lot QC insert). Cutoff = OD(Calibrator) * Q value 2. Divide mean OD of each sample by Cutoff. K = OD(sample) / Cutoff 3. If the K value is greater than 1.1, the result is POSITIVE. If the K value is less than 0.9, the result is NEGATIVE. If the K value is between 0.9 and 1.1, the result is EQUIVOCAL. Sample processing Material type Notes on material collection, storage and handling Sample dilution example Sample into the well, µl Calculation factor canine serum or plasma Grossly hemolytic, lipemic, or turbid samples should be avoided and should be treated by centrifugation before testing. 25 µl of sample + 500 µl of diluent 100 1 ^ QUALITY CONTROL It is recommended to use control samples according to state and federal regulations. The use of control samples is advised to assure the day to day validity of results. The test must be performed exactly as per the manufacturer’s instructions for use. Moreover the user must strictly adhere to the rules of GLP (Good Laboratory Practice) or other applicable federal, state, and local standards and/or laws. This is especially relevant for the use of control reagents. It is important to always include, within the test procedure, a sufficient number of controls for validating the accuracy and precision of the test. The test results are valid only if all controls are within the specified ranges and if all other test parameters are also within the given assay specifications. ^ EXPECTED VALUES Therapeutical consequences should not be based on results of IVD methods alone – all available clinical and laboratory findings should be used by a physician to elaborate therapeutically measures. Each laboratory should establish its own normal range for Mycoplasma IgG-C. Based on data obtained by XEMA, the following normal range is recommended (see below). K-value more than 4.9 indicates high level response that may be associated with recent infection or vaccination Sex, age Units K Lower limit Upper limit Seronegative <0.1 0.9 Seropositive 1.1 4.9