Отчет V изучение аллергизирующего действия субстанции и лекарственных форм препарата киллевир договор
|
|
Скачать 279.64 Kb.
|
|
ФЕДЕРАЛЬНОЕ МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКОЕ АГЕНТСТВО ФЕДЕРАЛЬЙОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ НАУКИ «НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ЦЕНТР ТОКСИКОЛОГИИ И ГИГИЕНИЧЕСКОЙ РЕГЛАМЕНТАЦИИ БИОПРЕПАРАТОВ» (ФГУН НИЦ ТБП ФМБА России)  ЗамаУтверждаю: директора НИЦ ТБП работе, доктор профессор . Р. Дядищев 2005 г. ОТЧЕТ V Изучение аллергизирующего действия субстанции и лекарственных форм препарата КИЛЛЕВИР (Договор ЦТ 14/2005)  Руководитель исследований доктор медицинских наук А.А. Денисов Серпухов - 2005 ^   Начальник отдела молекулярной генетики и иммунологии, доктор медицинских наук Ведущий научный сотрудник, кандидат биологических наук Младший научный сотрудник Научный сотрудник Младший научный сотрудник Младший научный сотрудник Лаборант-исследователь Лаборант-исследователь Лаборант-исследователь А.А. Денисов Л.В. Михина С.А. Попова Ю.С. Дороватовская О.М. Рыбакова СВ. Мельникова Е.Н. Соколова И.А. Николайчук И.В. Козлова РЕФЕРАТ ^ - 22 страницы, таблиц - 4, список литературы - 3 наименования. Ключевые слова: доклинические исследования, аллергизирующее действие, фуллеренполиаминокапроновая кислота, лекарственный препарат киллевир Изучали аллергизирующее действие субстанции и двух лекарственных форм препарата киллевир: инъекционной (для внутривенных инъекций) и в виде суппозиториев (ректальных). Субстанцией препарата киллевир является фуллеренполиаминокапроновая кислота. Исследовали воздействие на экспериментальных животных (мышей линии Balb/c и морских свинок-альбиносов) лекарственных средств в рекомендуемой для клинических испытаний терапевтической дозе (по содержанию субстанции 0,7 мг/кг для инъекционной формы и 0,14 мг/кг - для суппозиториев) и в дозе, на порядок ее превышающей. Схему сенсибилизации выбирали в соответствии с предполагаемым в клинике способом введения и в соответствии с «Методическими указаниями по оценке аллергизирующих свойств фармакологических веществ» ФК МЗ РФ. Состояние гиперчувствительности немедленного и замедленного типов к лекарственным средствам выявляли: в тесте отека лапки (ГЗТ, мыши), в реакции активной кожной анафилаксии (ГНТ, мыши), методом конъюнктивальной пробы (морские свинки) и в реакции общей анафилаксии (ГНТ, морские свинки). Группами контроля служили интактные животные и животные, получавшие плацебо по схеме введения лекарственного средства. Установили, что исследуемые лекарственные средства в дозе, десятикратно превышающей терапевтическую, приводили к формированию ГНТ, которая проявилась в гибели 20% морских свинок от анафилактического шока, при следующих схемах сенсибилизации: субстанция и препарат киллевир (инъекционная форма) - трехкратное введение (через сутки: подкожно и дважды - внутримышечно), препарат киллевир (суппозитории ректальные) - многократное ректальное введение (раз в сутки, по 5 суток в неделю, всего 4 недели). В рекомендуемых для клинических испытаний терапевтических дозах субстанция и обе лекарственные формы препарата киллевир не формировали у мышей и морских свинок гиперчувствительность немедленного или замедленного типов. Таким образом, возможна индивидуальная чувствительность к аллергизирующему действию высоких доз субстанции и инъекционной формы препарата киллевир (7,0 мг/кг), а также препарата киллевир суппозитории ректальные (при длительном введении в дозе 1,4 мг/кг). СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ 5
2.1. Изучение аллергизирующего действия субстанции и лекарственного препарата киллевир (инъекционной формы) 11
2ЛЗ. Выявление сенсибилизации методом конъюнктивальной пробы на морских свинках 13 2.1.4. Выявление ГНТ в реакции общей анафилаксии на морских свинках 14 2.2. Изучение аллергизирующего действия лекарственного препарата киллевир (суппозитории ректальные) 16
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 20 ^ ВВЕДЕНИЕ К возможнйм побочным эффектам, возникающим при применении лекарственных средств, относится формирование состояния гиперчувствительности к какому-либо веществу, входящему в состав препарата. Выявление таких эффектов у разрабатываемых фармакологических препаратов является обязательным этапом их доклинической оценки. Цель настоящего исследования - выявление аллергизирующих свойств субстанции и двух лекарственных форм препарата киллевир. Препарат предполагается использовать как противовирусное, в частности, противогерпетическое лекарственное средство. Субстанцией препарата киллевир является фуллеренполиаминокапроновая кислота. Состав препарата киллевир (инъекционная форма, концентрат; перед введением растворить в 30 мл воды для инъекций):
Состав препарата киллевир (суппозитории ректальные^:
Работа выполнена в соответствии с «Методическими указаниями по оценке аллергизирующих свойств фармакологических веществ» Фармакологического комитета МЗ РФ [2]. ^ Работа проведена в соответствии с Методическими указаниями [2]. Лабораторные животные Эксперименты выполнены на мышах линии Balb/c (масса тела 26±2 г) и на морских свинках-альбиносах (масса тела 380±40 г). Животные приобретены в питомниках «Столбовая» (мыши) и «Крюково» (морские свинки). Содержание животных в виварии НИЦ ТБП соответствовало санитарным правилам, утвержденным МЗ СССР 06.07.73 г., по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев) [1]. Для кормления использовали полнорационные комбикорма для грызунов, поение осуществляли водопроводной водой. Животные прошли карантин и акклиматизацию в условиях вивария в течение не менее 14 дней. Экспериментальные группы животных формировали методом случайной выборки с учетом массы тела в качестве ведущего показателя. ^ На исследования представлены:
3) лекарственный препарат киллевир (суппозитории ректальные) следующего состава:
Растворы лекарственных форм для введения готовили при соблюдении правил антисептики и асептики, в ламинарном боксе при вертикальном потоке стерильного воздуха. 7 Субстанция Концентрат раствора субстанции готовили в ДМСО таким образом, чтобы при последующем разведении в физиологическом растворе расчетную дозу вводить в 3% ДМСО. ^ Предполагаемая для испытаний в клинике терапевтическая доза препарата киллевир (инъекционной формы, по содержанию субстанции)- 0,7 мг/кг (1 ТД); доза, в 10 раз ее превышающая - 7 мг/кг (10 ТД). Перед введением концентрат (3 мл) растворяли в 30 мл воды для инъекций, полученный раствор - раствор А. 10 ТД:
1ТД:
^ Предполагаемая для испытаний в клинике терапевтическая доза препарата киллевир (суппозиториев ректальных, по содержанию субстанции) - 0,14 мг/кг (1 ТД); доза, в 10 раз ее превышающая (10 ТД) - 1,4 мг/кг. 10 ТД: - При массе тела мыши 20 г это составляет 0,028 мг/особь (по содержанию субстанции), указанная доза содержится в 5,6 мкл лекарственной формы. Вводили по 6,0 мкл препарата киллевир каждой особи при массе тела 20 г. .. - При массе тела морской свинки 330 г это составляет 0,467 мг/особь (по содержанию субстанции), указанная доза содержится в 93 мкл лекарственной формы. Вводили по 95 мкл препарата киллевир каждой особи при массе тела 330 г. 1ТД:
^ 1) Получение рабочего разведения ПАФ (рПАФ): ПАФ смешивали с физиологическим раствором в соотношении 1:1; 2) к 1 части полученного рПАФ добавляли (тщательно перемешивая) 2 части соответствующего разведения исследуемого фармакологического средства - 0,04 мл и 0,08 мл соответственно (при массе тела мыши 20 г); 3) полученные эмульсии фармакологического средства (по 0,12 мл при массе тела мыши 20 г) вводили подкожно (в паховую область). Плацебо
Вводили по 6,0 мкл на одну особь при массе тела 20 г (мыши) или по 95 мкл на одну особь при массе тела 330 г (морские свинки). 9 ^ пяпк-и мыти ГЗТ выявляли через 5 суток после последнего введения субстанции или лекарственного йрепарата. Разрешающую дозу, растворенную в 3% ДМСО, вводили в подушечку задней лапки в объеме 0,05 мл, в противоположную лапку - контрольную - 0,05 мл 3% ДМСО. Через 24 часа определяли индекс реакции (ИР) ГЗТ по разнице в весе опытной (Ро) и контрольной (Рк) лапок по формуле: ИР = Разрешающую дозу сенсибилизирующего агента - дозу, не вызывающую сильного неспецифического воспаления при введении интактным мышам (ИР до 10%), - подбирали предварительно. Сравнивали значения показателей ИР в опытных и контрольных группах животных. ^ ГНТ выявляли через 14 суток после последней сенсибилизации. При проведении реакции АКА животным внутрикожно вводили разрешающие дозы субстанции или лекарственной формы в 3% ДМСО в объеме 0,05 мл; в контрольные точки вводили 0,05 мл 3% ДМСО. Через 20 минут мышам в хвостовую вену инъецировали 0,2 мл 1%-ного раствора красителя синего Эванса. Спустя 30 минут животных умерщвляли и оценивали реакцию по диаметру пятна экссудата, окрашенного синим Эванса, на внутренней поверхности кожи в местах введения разрешающих доз. Максимальные разрешающие дозы субстанции или лекарственной формы, не вызывающие неспецифического повышения проницаемости кровеносных капилляров, подбирали на интактных мышах предварительно, до выявления ГНТ. Оценивали разницу в размерах пятен экссудата, образовавшихся в ответ на введение разрешающих доз, у животных из опытных и контрольных групп. ^ Разрешающую дозу субстанции или лекарственной формы в 3% ДМСО вводили глазной пипеткой с вытянутым тонким концом под верхнее веко подопытным и контрольным морским свинкам. Во второй глаз (контрольный) вводили 1 каплю 3% ДМСО. 10 Реакцию учитывали в течение первых 15-30 минут (быстрая реакция) и через б -24 - 48 часов (гиперчувствительность замедленного типа) и оценивали по следующей шкале (в баллах):
Подбор разрешающих доз субстанции или лекарственной формы осуществляли путем закапывания различных концентраций в глаз несенсибилизированных морских свинок. ^ Подопытным и контрольным морским свинкам внутрисердечно вводили препарат киллевир (инъекционную форму) в объеме 0,75 мл, что составляло 1,25 мг по содержанию субстанции. Состояние животных регистрировали в течение 1 часа. Учет интенсивности анафилактического шока проводили в индексах по Weigle. ^ Статистическую обработку полученных экспериментальных данных проводили с использованием критерия Стьюдента [3]. 11 ^ щ Аллергизирующая активность фармакологических средств проявляется в формировании состояния гиперчувствительности к ним. Различают гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ), обусловленную наличием сенсибилизированных лимфоцитов, и гиперчувствительность немедленного типа (ГНТ), обусловленную наличием гуморальных факторов. Аллергизирующее действие субстанции и двух лекарственных форм препарата киллевир изучали на двух видах лабораторных животных: мышах и морских свинках. Выбор исследованных доз обусловлен рекомендациями разработчика: предполагаемая при использовании в клинике терапевтическая доза (1 ТД) препарата киллевир (инъекционная форма) - 0,7 мг/кг (по содержанию субстанции), препарата киллевир (суппозитории ректальные) - 0,14 мг/кг (по содержанию субстанции). ^ Изучали воздействие двух уровней доз: предполагаемой к применению в клинике терапевтической дозы и дозы, в 10 раз ее превышающей. ^ Способность субстанции и лекарственного препарата киллевир (инъекционной формы) формировать ГЗТ изучали на мышах линии Balb/c при сенсибилизации в соответствии с методическими рекомендациями [2], с последующим выявлением ГЗТ в тесте отека лапки. Мышей сенсибилизировали однократно подкожно в полном адъюванте Фрейнда (ПАФ) в дозах 0,7 мг/кг и 7,0 мг/кг (по содержанию субстанции). Группы контроля №1 представлены животными, сенсибилизированными плацебо в ПАФ (3% ДМСО), группы контроля №2 представлены интактными животными, получавшими только ПАФ. В каждую экспериментальную и контрольные группы брали по 10 животных при равном соотношении по полу. Предварительно подобранные разрешающие дозы исследуемых лекарственных средств, не вызывающие неспецифического воспаления у интактных мышей, составили 100 мкг (по содержанию субстанции, растворенной в 3% ДМСО). ГЗТ выявляли через 24 часа после введения разрешающей дозы. 12 Результаты проведенного исследования представлены в таблице 1. Значения ИР ГЗТ в группах мышей, получавших испытуемые лекарственные средства, и в контрольных группах не различались. Субстанция и препарат киллевир (инъекционная форма) в терапевтической дозе и в дозе, десятикратно ее превышающей, не вызывали у мышей формирования гиперчувствительности замедленного типа. Таблица 1. Показатели реакции гиперчувствительности замедленного типа у мышей после однократной подкожной сенсибилизации
^ Способность субстанции и лекарственного препарата киллевир (инъекционной формы) формировать ГНТ изучали на мышах линии Balb/c при сенсибилизации в соответствии с методическими рекомендациями [2], с последующим выявлением ГНТ в реакции активной кожной анафилаксии (АКА). Мышей сенсибилизировали каждым из испытуемых лекарственных средств по следующей схеме: 1-я сенсибилизация - подкожно, 2-я и 3-я - через сутки -внутримышечно. Суточные дозы составляли 0,7 мг/кг и 7,0 мг/кг (по содержанию субстанции). Группы контроля №1 представлены животными, сенсибилизированными плацебо, группы контроля №2 представлены интактными животными. В каждую экспериментальную и контрольные группы брали по 10 животных при равном соотношении по полу. 13 Предварительно подобранные максимальные разрешающие дозы исследуемых лекарственных средств, не вызывающие неспецифического повышения проницаемости кровеносных капилляров у интактных мышей, составили 100 мкг (по содержанию субстанции) в 0,05 мл 3% ДМСО. ГНТ выявляли через 14 суток после последней сенсибилизации. При проведении реакции АКА 100 мкг (по содержанию субстанции) лекарственного средства вводили внутрикожно, в две точки, в третью точку вводили 50 мкг (по содержанию субстанции) лекарственного средства и в четвертую точку - 0,05 мл 3%ДМСО. Оказалось, что у сенсибилизированных мышей размеры пятен экссудата, образовавшегося в точках введения разрешающих доз, не достигали в диаметре 2 мм и не превышали размеров пятен экссудата в контрольных точках. Таким образом, в реакции АКА на мышах гиперчувствительность немедленного типа не выявлена. Субстанция и препарат киллевир (инъекционная форма) в терапевтической дозе и в дозе, десятикратно ее превышающей, не вызывали у мышей формирования гиперчувствительности немедленного типа. ^ Аллергизирующее действие субстанции и лекарственного препарата киллевир (инъекционной формы) изучали на морских свинках-альбиносах при тестировании животных методом конъюнктивальной пробы. Морских свинок сенсибилизировали каждым из испытуемых лекарственных средств по следующей схеме: 1-я сенсибилизация - подкожно, 2-я и 3-я - через сутки -внутримышечно. Суточные дозы составляли 0,7 мг/кг и 7,0 мг/кг (по содержанию субстанции). Группы контроля №1 представлены животными, сенсибилизированными плацебо, группы контроля №2 представлены интактными животными. В каждую экспериментальную и контрольные группы брали по 10 животных. В результате предварительного подбора разведений исследуемых лекарственных средств, не вызывающих неспецифического воспаления у интактных морских свинок, принято решение использовать в качестве разрешающих доз препарат киллевир (инъекционную форму) и раствор субстанции в 3% ДМСО в такой же, как в препарате, концентрации. Конъюнктивальную пробу проводили через 14 суток после последней сенсибилизации. В результате не выявлено ни одного подопытного животного с быстрой (в течение первых 15-30 минут) или отсроченной (через 6-24-48 часов) реакцией на 14 .. исследуемые лекарственные средства. Состояние слезного протока, склеры и конъюнктивы в целом после введения разрешающих доз оставалось без изменений. Таким образом, методом конъюнктивальной пробы на морских свинках не установлено аллергенное действие субстанции и препарата киллевир (инъекционной формы), взятых в терапевтической дозе и в дозе, десятикратно ее превышающей. ^ Аллергизирующее действие субстанции и лекарственного препарата киллевир (инъекционной формы) изучали на морских свинках-альбиносах при тестировании животных в реакции общей анафилаксии. Морских свинок сенсибилизировали каждым из испытуемых лекарственных средств по следующей схеме: 1-я сенсибилизация - подкожно, 2-я и 3-я - через сутки -внутримышечно. Суточные дозы составляли 0,7 мг/кг и 7,0 мг/кг (по содержанию субстанции). Группы контроля №1 представлены животными, сенсибилизированными плацебо, группы контроля №2 представлены интактными животными. В каждую экспериментальную и контрольные группы брали по 10 животных. ГНТ выявляли через 21 сутки после последней сенсибилизации. Подопытным и контрольным морским свинкам внутрисердечно вводили разрешающую дозу препарата киллевир (инъекционную форму) в объеме 0,75 мл, что составляло 1,25 мг по содержанию субстанции, наблюдение за животными проводили в течение 1 часа. Разрешающая доза должна превышать суммарную сенсибилизирующую дозу. При введении указанного объема препарата это условие вьшолнено для групп морских свинок, сенсибилизированных терапевтической дозой (1 ТД) лекарственного средства. Для групп морских свинок, сенсибилизированных дозой 10 ТД, не удалось повысить разрешающую дозу: интактные свинки не переносили увеличения объема вводимого препарата. При увеличении концентрации субстанции путем разведения концентрата для инъекций не в 10, как положено в соответствии с инструкцией, а в 5 раз содержание ДМСО увеличивалось до 6%, при этом интактные животные погибали при внутрисердечном введении 0,3-0,5 мл субстанции в 6% ДМСО. В результате проведенного исследования не было выявлено ни одного животного с проявлениями анафилактического шока в группах морских свинок, сенсибилизированных лекарственными средствами в терапевтической дозе. В группах животных, сенсибилизированных лекарственными средствами в десятикратной терапевтической дозе, по 2 из 10 морских свинок пали в течение 10 минут после внутрисердечного введения 15 разрешающей дозы (Табл. 2). Наблюдавшиеся при этом проявления: боковое положение (через 5-9 минут), учащенное дыхание и гибель в течение 30 секунд после появления первых признаков анафилактического шока. При последующем вскрытии павших животных было видно место укола на сердце, грудная полость без крови. У остальных животных из этих экспериментальных групп (по 8 из 10) признаки, сопровождающие анафилактический шок, не присутствовали. В контрольных группах ответная реакция на введение разрешающей дозы не отмечена. Таблица 2. Результаты проведения реакции общей анафилаксии на морских свинках, сенсибилизированных субстанцией или препаратом киллевир (инъекционной формой)
Таким образом, на морских свинках установлено аллергизирующее действие субстанции и препарата киллевир (инъекционной формы), взятых в дозе, десятикратно превышающей терапевтическую, проявившееся у 20% животных в гибели от анафилактического шока. Субстанция и препарат киллевир (инъекционная форма) в терапевтической дозе (0,7 мг/кг) не приводили к развитию гиперчувствительности немедленного типа, реакция общей анафилаксии при внутрисердечном введении разрешающих доз у морских свинок не развивалась. 16 ^ Изучали воздействие двух уровней доз: предполагаемой к применению в клинике терапевтической дозы и дозы, в 10 раз ее превышающей. ^ Способность лекарственного препарата киллевир (суппозитории ректальные) формировать ГЗТ изучали на мышах линии Balb/c при многократном ректальном введении, с последующим выявлением ГЗТ в тесте отека лапки. Препарат вводили в дозах 0,14 мг/кг и 1,40 мг/кг (по содержанию субстанции) по следующей схеме: 1 раз в сутки, по пять дней в неделю, всего 4 недели. Группы контроля №1 представлены животными, сенсибилизированными плацебо для ректальной формы по такой же схеме, группы контроля №2 представлены интактными животными. В каждую экспериментальную и контрольные гр"уппы брали по 10 животных при равном соотношении по полу. Предварительно подобранная разрешающая доза* не вызывающая неспецифического воспаления при введении интактным мышам, составила 100 ми-субстанции (растворенной в 3% ДМСО). ГЗТ оценивали через 24 часа после введения разрешающей дозы. Результаты проведенного исследования представлены в таблице 3. Значения ИР ГЗТ в группах мышей, получавших препарат киллевир (суппозитории ректальные), и в контрольных группах не различались. Препарат киллевир (суппозитории ректальные) в терапевтической дозе и в дозе, десятикратно ее превышающей, не вызывали у мышей формирования гиперчувствительности замедленного типа. Таблица 3. Показатели реакции гиперчувствительности замедленного типа у мышей после многократного - в течение 4 недель - ректального введения препарата киллевир
17 ^ Способность лекарственного препарата киллевир (суппозитории ректальные) формировать ГНу изучали на мышах линии Balb/c при многократном ректальном введении, с последующим выявлением ГНТ в реакции активной кожной анафилаксии. Препарат вводили в дозах 0,14 мг/кг и 1,40 мг/кг (по содержанию субстанции) по следующей схеме: 1 раз в сутки, по пять дней в неделю, всего 4 недели. Группы контроля №1 представлены животными, сенсибилизированными плацебо для ректальной формы по такой же схеме, группы контроля №2 представлены интактными животными. В каждую экспериментальную и контрольные группы брали по 10 животных при равном соотношении по полу. Предварительно подобранная максимальная разрешающая доза, не вызывающая неспецифического повышения проницаемости кровеносных капилляров у интактных мышей, составила 100 мкг субстанции (в 3% ДМСО). ГНТ выявляли через 14 суток после последней сенсибилизации. При проведении реакции АКА разрешающие дозы вводили в три точки: 100 мкг, 100 мкг и 50 мкг (в объеме 0,05 мл); в четвертую - контрольную точку - вводили 0,05 мл 3% ДМСО. Оказалось, что у сенсибилизированных мышей размеры пятен экссудата, образовавшегося в точках введения разрешающих доз, не достигали в диаметре 2 мм и не превышали размеров пятен экссудата в контрольных точках. Таким образом, в реакции АКА на мышах гиперчувствительность немедленного типа не выявлена. Препарат киллевир (суппозитории ректальные) в терапевтической дозе и в дозе, десятикратно ее превышающей, не вызывал у мышей формирования гиперчувствительности немедленного типа при многократном (в течение 4 недель) ректальном введении. ^ Аллергизирующее действие лекарственного препарата киллевир (суппозитории ректальные) изучали на морских свинках-альбиносах при тестировании животных методом конъюнктивальной пробы. Морских свинок сенсибилизировали путем многократного ректального введения препарата в дозах 0,14 мг/кг и 1,40 мг/кг (по содержанию субстанции). Схема введения: 1 раз в сутки, по пять дней в неделю, всего 4 недели. Группы контроля №1 представлены животными, сенсибилизированными плацебо для ректальной формы по такой же схеме, 18 группы контроля №2 представлены интактными животными. В каждую экспериментальную и контрольные группы брали по 10 животных. В результате предварительного подбора разрешающих доз, не вызывающих неспецифического воспаления при введении интактным морским свинкам, выбран раствор субстанции в 3% ДМСО в концентрации 1,67 мг/мл. Конъюнктивальную пробу проводили через 14 суток после последней сенсибилизации. В результате не выявлено ни одного подопытного животного с быстрой (в течение первых 15-30 минут) или отсроченной (через 6-24-48 часов) реакцией на разрешающую дозу: состояние слезного протока, склеры и конъюнктивы в целом оставались без изменений. Таким образом, методом конъюнктивальной пробы на морских свинках не установлено аллергизирующее действие препарата киллевир (суппозитории ректальные) при многократном применении (в течение 4 недель) в терапевтической дозе и в дозе, десятикратно ее превышающей. ^ Аллергизирующее действие лекарственного препарата киллевир (суппозитории ректальные) изучали на морских свинках-альбиносах при тестировании животных в реакции общей анафилаксии. Морских свинок сенсибилизировали путем многократного ректального введения препарата в дозах 0,14 мг/кг и 1,40 мг/кг (по содержанию субстанции). Схема введения: 1 раз в сутки, по пять дней в неделю, всего 4 недели. Группы контроля №1 представлены животными, сенсибилизированными плацебо для ректальной формы по такой же схеме, группы контроля №2 представлены интактными животными. В каждую экспериментальную и контрольные группы брали по 10 животных. ГНТ выявляли через 21 сутки после последней сенсибилизации. Подопытным и контрольным морским свинкам внутрисердечно вводили 1,25 мг субстанции (в 3% ДМСО) в объеме 0,75 мл, наблюдение за животными проводили в течение 1 часа. Разрешающая доза должна превышать суммарную сенсибилизирующую дозу. Для групп морских свинок, сенсибилизированных препаратом в терапевтической дозе, это условие выполнено, для сенсибилизированных препаратом в дозе 10 ТД повысить разрешающую дозу не удалось. В результате проведенного исследования не было выявлено ни одного животного с проявлениями анафилактического шока в группах морских свинок, сенсибилизированных 19 препаратом в терапевтической дозе. В группе животных, сенсибилизированных препаратом в десятикратной терапевтической дозе, 2 из 10 морских свинок пали в течение 10 минут после вйутрисердечного введения разрешающей дозы (Табл. 2). Наблюдавшиеся при этом проявления: боковое положение (через 5-9 минут), учащенное дыхание и гибель в течение 30 секунд после появления первых признаков анафилактического шока, на вскрытии видно место укола на сердце, грудная полость без крови. У остальных 8 морских свинок из этой экспериментальной группы ответная реакция на разрешающую дозу отсутствовала, в контрольных группах ответная реакция на введение разрешающей дозы не отмечена. Таблица 4 Результаты проведения реакции общей анафилаксии на морских свинках, сенсибилизированных препаратом киллевир (суппозитории ректальные)
Таким образом, на морских свинках установлено аллергизирующее действие препарата киллевир (суппозиториев) при многократном - в течение 4 недель - ректальном введении в дозе, десятикратно превышающей терапевтическую, проявившееся в гибели от анафилактического шока 20 % животных. Препарат киллевир (суппозитории ректальные) в терапевтической дозе (0,14 мг/кг) при многократном - в течение 4 недель - введении не приводил к развитию гиперчувствительности немедленного типа: реакция общей анафилаксии при внутрисердечном введении разрешающей дозы у морских свинок не развивалась. 20 ЗАКЛЮЧЕНИЕ Проведено изучение аллергизирующего действия субстанции и двух лекарственных форм препарата киллевир: инъекционной (для внутривенных инъекций) и в виде суппозиториев (ректальных). Субстанцией препарата киллевир является фуллеренполиаминокапроновая кислота. Состав препарата киллевир (инъекционная форма, концентрат; перед введением растворить в 30 мл воды для инъекций):
Состав препарата киллевир (суппозитории ректальные):
Выбор исследованных доз обусловлен рекомендациями разработчика: предполагаемая терапевтическая доза препарата киллевир (инъекционная форма) - 0,7 мг/кг (по содержанию субстанции), препарата киллевир (суппозитории ректальные) - 0,14 мг/кг (по содержанию субстанции). Экспериментальных животных - мышей линии Balb/c и морских свинок-альбиносов - сенсибилизировали в соответствии с предполагаемым в клинике путем введения лекарственных средств. Испытывали воздействие двух уровней доз: рекомендуемого для клинических испытаний (терапевтическая доза) и десятикратно его превышающего. Состояние гиперчувствительности немедленного и замедленного типов к лекарственным средствам выявляли: в тесте отека лапки (ГЗТ, мыши), в реакции активной кожной анафилаксии (ГНТ, мыши), методом конъюнктивальной пробы (морские свинки) и в реакции общей анафилаксии (ГНТ, морские свинки). Группы контроля представлены интактными животными и животными, получавшими плацебо по схеме введения лекарственного средства. Установили, что субстанция и обе лекарственные формы препарата киллевир в дозах, десятикратно превышающих терапевтическую, приводили к формированию гиперчувствительности немедленного типа, проявившейся в гибели 20% морских свинок от анафилактического шока, при следующих схемах сенсибилизации: 21
Гиперчувствительность замедленного типа при введении десятикратных терапевтических доз исследуемых лекарственных средств у подопытных животных не выявлена. В соответствии с «Методическими указаниями по оценке аллергизирующих свойств фармакологических веществ» [2], если число сенсибилизированных животных в группе по одному из испытанных тестов составляет менее 50%, то наблюдаемые эффекты рассматриваются как проявление индивидуальной чувствительности. Таким образом, аллергизирующее действие высоких доз субстанции и лекарственных форм препарата киллевир можно рассматривать как проявление индивидуальной чувствительности животных. В рекомендуемых для клинических испытаний терапевтических дозах субстанция и обе лекарственные формы препарата киллевир не формировали у мышей и морских свинок гиперчувствительность немедленного или замедленного типов. 22 ^
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям