Морфофункциональная характеристика слизистой оболочки кишечника потомства самок крыс с хроническим поражением печени различного генеза 03. 03. 04 Клеточная биология, цитология, гистология
|
|
Скачать 303.35 Kb.
|
|
На правах рукописи Смекалина Олеся Юрьевна МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ КИШЕЧНИКА ПОТОМСТВА САМОК КРЫС С ХРОНИЧЕСКИМ ПОРАЖЕНИЕМ ПЕЧЕНИ РАЗЛИЧНОГО ГЕНЕЗА 03.03.04 Клеточная биология, цитология, гистология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Оренбург, 2011 Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Челябинская Государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» Научный руководитель доктор медицинских наук, профессор ^ Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Полякова Валентина Сергеевна доктор медицинских наук, профессор ^ Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Тюменская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации Защита диссертации состоится « » июня 2011 года в часов на заседании диссертационного совета Д 208.066.04 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Оренбургская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации по адресу: Россия, 460000, г. Оренбург, ул. Советская, 6, зал заседаний диссертационного совета. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Оренбургская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации Автореферат разослан « » мая 2011 г. Ученый секретарь диссертационного совета Н.Н. Шевлюк ^ Актуальность исследования. Воспроизводство здорового населения является ведущей проблемой современного общества. Уже известно, что согласно предварительным итогам Всероссийской переписи населения 2010 года, население наше по сравнению с прошлой (2002 года) переписью уменьшилось на 2,2 миллиона человек, или на 1,6 процента (СмольяковаТ., 2011). Даже на фоне реализации национальных проектов («Здоровье», «Мать и дитя») остаются сниженными все основные показатели, определяющие репродуктивное здоровье населения (Римашевская Н.М., 2004). В связи с этим перед учеными разных специальностей ставится задача по поиску выхода из сложившейся ситуации, так как репродуктивное здоровье россиян является, в конечном итоге, важнейшим фактором национальной безопасности (Фролова О.Г., Токова З.З., 2000). Общепризнанна важная роль материнского организма в решении проблемы воспроизводства полноценного потомства (Бурдули Г.М., Фролова О.Г., 1997; Медведь В.И., 1999). Из-за ослабления здоровья матерей растут показатели младенческой смертности (по разным регионам они наблюдаются от 18 до 40 на тысячу), причем в структуре причин ведущую роль стабильно играют патологические состояния перинатального периода (Вельтищев Ю.Е., 1999; Курцер М.А., 2000; Кулаков, В.И. с соавт., 2000). Доказано влияние на физическое развитие и здоровье новорожденного экстрагенитальной патологии (Барашнев Ю.И., 1991; Медведь В.И., 2001, 2004; Грищенко В.И. с соавт., 1992). Частота экстрагенитальной патологии среди беременных женщин очень высока и составляет 35-50% (Heppard M.C.S., 2002), а по некоторым данным даже 60-80% (Шехтман М.М., 2003). Широко распространенной является патология гепатобилиарной системы (Безнощенко Г.Б., Дроздов В.Н., Неверовский О.А., 1995). Заболевания печени крайне негативно сказываются на развитии плода и здоровье новорожденного (Фарбер Н.А., Мартынов К.А. , Гуртовой Б.Л., 1990; Игнатова Т.М. с соавт., 1993; Майер К.-П., 1999; Кузьмин В.Н., 2008). Установлено, что потомство матерей с хроническими заболеваниями печени рождается с отставаниями в физическом развитии, предрасположенностью к различным инфекционным заболеваниям, в том числе к заболеваниям желудочно-кишечного тракта (Савченков Ю.И., Лобынцев К.С., 1980; Брюхин Г.В., 1988-2008; Г.В. Брюхин, А.Ю. Грачев, 1990; Бояков А.А., 1998, 1999; Брюхин Г.В., Евченко Е.В., 2004; Николина О.В., 2004; Пивень Г.В., 2004; Федосов А.А., 2004; Вторушина Е.В., 2005; Кузнецова А.Б., 2006; Леонов Н.В., 2007; Барышева С.В., 2008; Ильиных М.А., 2009; Пашнина Е.Н., 2009; Сизоненко М.Л., 2009; Gambarin-Gelwan M., 2007). Одним из факторов, определяющих реактивность и резистентность живого организма, является морфофункциональное состояние пищеварительной системы. В связи с этим представляет большой интерес изучение влияния хронического поражения печени на состояние слизистой оболочки тонкого и толстого кишечника потомства. Целью настоящего исследования явился анализ особенностей морфофункционального становления слизистой оболочки тонкого и толстого кишечника потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени различного генеза. Для достижения поставленной цели нами были сформулированы следующие задачи:
^
^ В условиях эксперимента, отражающего различные формы поражения печени, выявлено влияние патологии гепатобилиарной системы самок крыс на морфофункциональное становление слизистой оболочки тонкого и толстого кишечника потомства в различные сроки постнатального онтогенеза. Впервые произведена комплексная морфофункциональная оценка клеточного состава эпителия слизистой оболочки различных отделов кишечника потомства самок крыс с хроническим поражением печени. Новыми являются данные, свидетельствующие, что морфологические изменения слизистой оболочки тонкого и толстого кишечника потомства самок крыс с хроническим поражением печени сопровождаются изменением числа и функциональной активности эндокриноцитов. Впервые предложена функциональная классификация эндокринных клеток диффузной эндокринной системы эпителия слизистой оболочки кишечника по степени их дегрануляции. Обнаружены нарушения морфофункционального становления индуктивного и эффекторного звеньев гастроассоциированной лимфоидной системы, а так же морфофункциональные изменения субпопуляционного состава тучных клеток слизистой оболочки тонкого и толстого кишечника подопытных животных. Установлены общие закономерности нарушений морфофункционального состояния слизистой оболочки различных отделов кишечника потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени различного генеза. ^ Диссертационное исследование относится к фундаментальным. Результаты проведенного исследования расширяют представление о роли патологии гепатобилиарной системы матери в нарушении морфофункционального состояния пищеварительной системы, в том числе ее лимфоидного и эндокринного аппарата, у потомства. Результаты настоящего исследования позволяют оценить особенности взаимодействия различных структурных компонентов слизистой оболочки тонкого и толстого кишечника потомства матерей с экспериментальным хроническим поражением печени, что расширяет представление о тканевом гомеостазе и адаптации данного органа. Полученные результаты позволяют теоретически обосновать выделение детей от матерей с хроническим заболеванием печени в группу повышенного риска по заболеваниям органов желудочно-кишечного тракта. Результаты диссертационного исследования используются в научном и учебном процессах кафедры гистологии, эмбриологии и цитологии Челябинской государственной медицинской академии: разделы «Пищеварительная система», «Эндокринная система», «Нарушения внутриутробного развития человека». ^ Результаты исследования были представлены на конференции, посвященной 65-летию кафедры гистологии, эмбриологии и цитологии Челябинской государственной медицинской академии (Челябинск, 2009); на Всероссийской конференции дипломированных специалистов «Молодые ученые – медицине» (Самара, 2010); на III Международной научно-практической конференции «Адаптации биологических систем к естественным и экстремальным факторам среды» (Челябинск, 2010); на I международной (VIII итоговой) научно-практической конференции молодых ученых (Челябинск, 2010); на VIII Всероссийской конференции по патологии клетки (Москва, 2010); на XI международной научно-практической конференции «Фундаментальные и прикладные исследования, разработка и применение высоких технологий в промышленности» (Санкт-Петербург, 2011); на совместном заседании кафедр гистологии, эмбриологии и цитологии, анатомии человека, нормальной физиологии, патологический физиологии, Челябинской государственной медицинской академии (2011). Публикации По теме диссертации опубликовано 9 работ, в том числе 3 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК для публикации материалов докторских и кандидатских диссертаций. ^ Диссертация изложена на 302 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы описания результатов собственного исследования, обсуждения результатов исследования, выводов, списка использованной литературы, включающего 315 наименований, в том числе 122 работ зарубежных авторов. Работа содержит 50 таблиц, 79 рисунков, в том числе 35 микрофотографий. ^ Экспериментальные исследования проведены на белых лабораторных крысах (самках) «Вистар» (70 взрослых самок крыс) и их потомстве (229 животных из 70 пометов) в различные сроки постнатального онтогенеза (на 1-ые, 15-ые, 30-ые, 45-ые и 60-ые сутки). Сроки исследования выбраны с учетом общепризнанного подразделения возрастных периодов у крыс (Западнюк И.П. с соавт., 1983). Исходя из поставленных задач данного исследования, экспериментальные животные были разделены на 3 группы. Первую группу составили животные от интактных матерей (контрольная группа) – «К» (90 животных из 24 пометов). Во вторую группу вошло потомство от матерей с хроническим экспериментальным поражением печени с помощью E.coli – 1-ая опытная группа (63 животных из 16 пометов). Третью группу составили животные от матерей с хроническим экспериментальным D-галактозаминовым поражением печени – 2-ая опытная группа (76 животных из 30 пометов). Исследования проводились с учетом суточных и сезонных колебаний. Животные содержались в одинаковых условиях вивария с одинаковым пищевым рационом. Работа с экспериментальными животными проводилась в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием лабораторных животных». ^ Экспериментальному животному (половозрелой самке) под эфирным наркозом в три участка печени – по одной с обеих сторон у основания мечевидного отростка и справа у края реберной дуги по срединно-ключичной линии вводили 0,2 мл супернатанта шестидневной культуры E.coli (штамм АТСС 25922) в разведении 1:4. В течение 24 часов после введения сенсибилизирующей инъекции экспериментальные животные получали только воду. Разрешающая инъекция производилась через 24 часа путем введения в хвостовую вену супернатанта шестидневной культуры E.coli в разведении 1:4 из расчета 0,3 мл/кг массы тела животного. Возникающие морфологические и функциональные изменения, согласно данным литературы, подобны таковым при гепатите А (Сааков Б.А. с соавт., 1967). ^ Данную модель хронического поражения печени создавали путем внутрибрюшинного введения D(+)-галактозамина гидрохлорида («Sigma-G0500», США) на 0,9% растворе натрия хлорида в дозе 250 мг/кг массы тела животного. Возникающий при этом комплекс морфологических, иммунологических и биохимических изменений, согласно данным литературы, в определенной мере подобен таковому при вирусном гепатите В у человека (Венгеровский А.И., Саратиков А.С., 1988; Joker А.M., 1990; Сугробова Н.П. с соавт., 1992). ^ У животных опытной и экспериментальной групп произведен анализ числа живых родившихся плодов, числа случаев фетальной смерти, численность помета, распределение животных по полу, весовые характеристики крысят в различные сроки постнатального онтогенеза. Оценивали состояние систем жизнеобеспечения потомства экспериментальных животных. С этой целью определяли показатель динамики нарастания массы тела. ^ Выделяли следующие участки желудочно-кишечного тракта: нисходящая часть двенадцатиперстной кишки, начальный отдел тощей кишки, дистальный отдел подвздошной кишки, проксимальный отдел толстой кишки. Продольными разрезами выделенные участки делились на две одинаковые половины и фиксировались одна часть в жидкости Буэна, а вторая – в абсолютном спирте. Дальнейшее уплотнение материала производилось путем заливки в парафин (Саркисов Д.С., Перова М.П., 1991). Полученные гистологические срезы из материала, зафиксированного в жидкости Буэна, окрашивали гематоксилином и эозином и импрегнировали нитратом серебра по Гримелиусу в модификации Никонова для выявления эндокринных клеток диффузной эндокринной системы в слизистой оболочке органов (Райхлин Н.Т. с соавт., 1996). Гистологические срезы из материала, зафиксированного в абсолютном спирте, окрашивали 0,1% раствором толуидинового синего для выявления тучных клеток (Саркисов Д.С., Перова М.П., 1991). Окраску 0,1% раствором толуидинового синего использовали и для выявления бокаловидных клеток кишечника (Елисеев В.Г., 1967). ^ Для морфометрического исследования был использован программно-аппаратный комплекс для анализа обработки изображений в микроскопии, состоящий из тринокулярного микроскопа Motic BA – 400 Т, цифровая цветная система ввода изображений на базе цифровой камеры ProgRes C3, 1/1.8" высокого разрешения не менее 2080×1542 и лицензионного программного обеспечения «Видео Тест – Морфология 5.0». Осуществлялся подсчет количества элементов рельефа (ворсинок и крипт) на единицу условной площади (на 100 мкм.) и их качественные характеристики (высота, максимальная ширина, средняя площадь продольного сечения ворсинки, глубина и ширина крипт) на серийных гистологических срезах. Проводили подсчет клеточных элементов в слизистой оболочке в расчете на 1 ворсинку и 1 крипту. Изучались характеристики кишечных энтероцитов, в частности, их высота и ширина. Производилось вычисление среднего диаметра ядер эпителиоцитов (мкм, диаметр эллиптического ядра равен полусумме взаимно перпендикулярных размеров), вычислялся объем ядер данных клеток по «формуле эллипсоида»: V=πLB2/6, где L и B – больший и меньший диаметры ядра (в мкм3) (Хмельницкий О.К., Третьякова М.С., 1998). Подсчитывалось количество бокаловидных клеток, межэпителиальных лимфоцитов, диффузно расположенных лимфоцитов собственного слоя слизистой оболочки различных отделов кишечника в расчете на 1 ворсинку и на 1 крипту. В слизистой оболочке кишечника проводили оценку площади лимфоидных фолликулов и их функциональных зон. Объем лимфоидных фолликулов рассчитывали в соответствии с формулами соотношения поверхности и объема биологических структур (Быков В.Л., 1975). Для анализа популяции эндокринных клеток диффузной эндокринной системы слизистой оболочки пищеварительного тракта производили подсчет клеток из расчета на одну ворсинку и на одну крипту, оценивался субпопуляционный состав клеток по степени и характеру гранулярного насыщения, а также степени дегрануляции с вычислением индекса дегрануляции. Анализ популяции тучных клеток производили по общепринятой методике Линднер Д.П. и др. (1980). При этом подсчитывалось абсолютное количество тучных клеток в слизистой оболочке и подслизистой основе в расчете на кишечную ворсинку и кишечную крипту и их субпопуляционный состав по уровню гранулярного насыщения и степени дегрануляции. ^ Статистическая обработка производилась на персональном компьютере с помощью лицензированного пакета прикладных программ «Statistica 6.0» («StatSoft, Inc.»). При обработке полученных результатов использовались методы вариационной статистики (определение среднего арифметического и его ошибки (М±м)). Достоверность результатов оценивалась с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни. При этом достоверными считались различия, где уровень значимости (р) был меньше 0,05 (Платонов А.Е., 2000). Кроме того, использовали метод ранжирования, который заключается в определении места (ранга) объектов проводимого исследования. ^ 1. Морфофункциональная характеристика слизистой оболочки различных отделов тонкого кишечника и толстой кишки экспериментальных животных В ходе исследования было выявлено, что у подопытных животных с возрастом в различных отделах тонкого и толстого кишечника изменяются размеры элементов рельефа слизистой оболочки и плотность их расположения. При этом у потомства самок крыс с хроническим поражением печени, вызванным введением супернатанта E.coli и D-галактозамина, каких-либо существенных отличий в строении и расположении ворсинок и крипт по сравнению с контролем не выявлено. Таким образом, результаты данной серии исследований позволяют сделать заключение об отсутствии изменений морфологического состояния элементов рельефа слизистой оболочки тонкого и толстого кишечника потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени различного генеза. Учитывая, что эпителий желудочно-кишечного тракта является чувствительным индикатором функционального состояния пищеварительной системы, нами проведен морфологический анализ эпителия различных отделов тонкого и толстого кишечника. Исследование показало, что после рождения отмечается увеличение числа эпителиоцитов слизистой оболочки всех отделов тонкого кишечника и толстой кишки, достигающее максимального значения к периоду половой зрелости. При этом практически на всех сроках исследования количество эпителиальных клеток слизистой оболочки кишечника подопытных животных превышало таковое в контроле. Наиболее выраженные изменения наблюдались в период полового созревания, а в тощей кишке и в толстом кишечнике (рис. 1) – до периода половой зрелости.  Высота эпителиоцитов слизистой оболочки тонкого и толстого кишечника обеих экспериментальных групп снижается с периода новорожденности до начала периода полового созревания, а затем увеличивается к периоду половой зрелости (рис. 2). Исключение составили подопытные крысята первой опытной группы, у которых в течение всех исследуемых периодов происходило постепенное увеличение исследуемого показателя.  На поздних стадиях постнатального развития у крысят обеих опытных групп исследуемый показатель значительно снижен по сравнению с контролем. Наиболее выраженные изменения высоты эпителиоцитов наблюдались у подопытных крысят в тощей кишке, где достоверное снижение исследуемого показателя наблюдалось с начала периода полового созревания до периода половой зрелости. Аналогичная закономерность была выявлена и в изменении ширины эпителиальных клеток слизистой оболочки различных отделов кишечника. При этом на поздних стадиях постнатального развития у крысят обеих опытных групп исследуемый показатель значительно снижен по сравнению с контролем во всех отделах кишечника. Наиболее выраженные изменения ширины эпителиоцитов наблюдались у подопытных крысят в тощей (рис. 3) и в толстой кишке.  У подопытных крысят первой опытной группы в ходе проведения исследования наблюдалось уменьшение объема ядра эпителиальных клеток слизистой оболочки двенадцатиперстной и тощей кишки (рис. 4) к началу периода полового созревания, а затем, наоборот, объем ядра увеличивался к периоду половой зрелости.  В слизистой оболочке подвздошной и толстой кишки данной опытной группы исследуемый показатель увеличивался с периода новорожденности до периода половой зрелости постепенно. У подопытных крысят второй опытной группы уменьшение объема ядер эпителиоцитов к началу периода полового созревания наблюдалось во всех отделах кишечника, кроме тощей кишки, где увеличение исследуемого показателя происходило постепенно. При этом на большинстве сроков постнатального развития у крысят обеих опытных групп объем ядра эпителиоцитов снижен по сравнению с контролем во всех отделах кишечника. Наиболее выраженные изменения исследуемого показателя наблюдались у подопытных крысят в тощей кишке, где достоверное снижение исследуемого показателя наблюдалось с начала периода полового созревания до периода половой зрелости. Кроме того, нами выявлена гиперхромность ядер эпителиальных клеток слизистой оболочки кишечника по сравнению с контролем что, по данным литературы, может свидетельствовать об увеличении пролиферативной активности данных клеток (Аруин Л.И., 1998). Морфофункциональное состояние эпителия слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта во многом определяется содержанием бокаловидных клеток. У крысят обеих опытных групп после рождения количество бокаловидных клеток слизистой оболочки различных отделов тонкого и толстого кишечника увеличивается и достигает максимального значения в период половой зрелости. Обращает на себя внимание, что на большинстве сроков исследования количество бокаловидных клеток слизистой оболочки различных отделов тонкого и толстого кишечника у подопытных крысят обеих групп увеличено по сравнению с контролем. Наиболее выраженные изменения наблюдались в подвздошной и толстой кишке (рис. 5). Таким образом, результаты данной серии исследований позволяют констатировать, что у потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением гепатобилиарной системы имеют место изменения количественных и качественных характеристик эпителия слизистой оболочки различных отделов кишечника, что проявляется в увеличении количества эпителиальных клеток, снижении их размеров, уменьшении объема ядер данных клеток наряду с гиперхромностью их окрашивания, увеличении количества бокаловидных клеток.  ^ Нами установлено, что у потомства самок крыс первой опытной группы наблюдается увеличение количества эндокринных клеток слизистой оболочки кишечника с периода новорожденности до начала периода полового созревания в толстой кишке, до конца периода полового созревания в двенадцатиперстной и подвздошной кишке. К периоду половой зрелости исследуемый показатель снижется. Обращает на себя внимание, что у экспериментальных крысят данной опытной группы количество эндокринных клеток эпителия слизистой оболочки двенадцатиперстной (рис. 6), тощей и подвздошной кишки на ранних стадиях постнатального развития практически не отличается от контроля, а на поздних сроках исследования существенно превышает таковое в контроле. Исключение составляет слизистая оболочка толстого кишечника подопытных животных первой опытной группы, где на ранних сроках постнатального онтогенеза исследуемый показатель ниже контрольных значений, а на поздних сроках исследования, напротив, превышает их.  У подопытных животных второй опытной группы количество диффузных эндокриноцитов слизистой оболочки различных отделов кишечника увеличивается с первого дня постнатальной жизни до начала периода полового созревания, достигая своего максимального значения. На более поздних сроках наблюдается снижение исследуемого показателя к периоду половой зрелости. При этом на большинстве сроков постнатального развития количество эндокриноцитов слизистой оболочки кишечника превышает таковое в контроле, достоверными различия становятся на поздних сроках исследования.Для оценки субпопуляционного состава эндокриноцитов мы использовали методику Линднера Д. П. и соавт. (Линднер Д.П., и др. 1980) в нашей модификации. При этом производился анализ процентного содержания эндокринных клеток различной степени гранулярного насыщения, в том числе: «очень темные», «темные», «светлые» и «очень светлые». У подопытных животных обеих опытных групп с возрастом наблюдается увеличение количества эндокринных клеток с высокой степенью гранулярного насыщения с периода новорожденности до периода половой зрелости. Изменение количества эндокринных клеток с низкой степенью гранулярного насыщения слизистой оболочки кишечника подчинено обратной закономерности. Обращает на себя внимание, что практически на всех сроках исследования у подопытных крысят обеих опытных групп количество эндокринных клеток с высокой степенью гранулярного насыщения превышало таковое в контроле. С распределением эндокриноцитов по степени гранулярного насыщения тесно связан показатель индекса гранулярного насыщения. У экспериментальных животных обеих опытных групп данный показатель увеличивается с периода полового созревания до конца полового развития, причем периоды повышения показателя чередуются с периодами его снижения (рис. 7). При этом на большинстве сроков постнатального развития индекс гранулярного насыщения диффузных эндокриноцитов слизистой оболочки кишечника обеих опытных групп превышал таковой в контроле.  Другим показателем функционального состояния эндокриноцитов является степень их дегрануляции. Анализ субпопуляционного состава эндокриноцитов по уровню их дегрануляции проводился нами с учетом разновидностей клеток со слабой, умеренной, выраженной дегрануляцией и отсутствием таковой.У крысят опытной группы №1 происходит постепенное увеличение количества эндокринных клеток слизистой оболочки кишечника с низкой степенью дегрануляции и отсутствием таковой. Так, в двенадцатиперстной кишке исследуемый показатель после снижения к подсосному периоду увеличился до максимального значения к 60-ому дню постнатального развития; в тощей и толстой кишке наблюдалось постепенное его увеличение вплоть до периода половой зрелости, а в подвздошной кишке − до конца периода полового созревания, после чего было выявлено снижение данного показателя в период половой зрелости. У экспериментальных животных второй опытной группы количество эндокринных клеток с низкой степенью дегрануляции и отсутствием дегрануляции в большинстве случаев увеличивалось до периода половой зрелости. Количество эндокринных клеток субпопуляций с умеренной и выраженной степенью дегрануляции в эпителии слизистой оболочки, как кишечных ворсинок, так и кишечных крипт носит обратную закономерность. Какой-либо закономерности в содержании эндокринных клеток с низкой степенью дегрануляции и отсутствием таковой в эпителии слизистой оболочки кишечника у крысят обеих опытных групп на ранних стадиях постнатального онтогенеза выявить не удалось. В то же время на поздних стадиях постнатальной жизни содержание данной популяции клеток превышает таковое в контроле, а количество эндокринных клеток с умеренной и высокой степенью дегрануляции, напротив, снижено, по сравнению с контролем. Анализ индекса дегрануляции эндокриноцитов слизистой оболочки кишечника выявил следующие закономерности. В двенадцатиперстной кишке подопытных животных обеих опытных групп происходит повышение исследуемого показателя к подсосному периоду, затем индекс дегрануляции снижается в период полового созревания и вновь увеличивается к 60-ому дню постнатального развития (рис. 8). В слизистой оболочке тощей, подвздошной и толстой кишки происходит снижение исследуемого показателя к периоду половой зрелости. При этом на ранних стадиях постнатального онтогенеза исследуемый показатель слабо изменен, по сравнению с контролем, а на поздних сроках исследования значительно снижен, по сравнению с контрольными значениями.  Таким образом, результаты данной серии исследований позволяют констатировать, что у потомства матерей с хроническим экспериментальным поражением печени наблюдается увеличение эндокринных клеток слизистой оболочки кишечника, сопровождающееся увеличением численности субпопуляций клеток с высокой степенью гранулярного насыщения и с низкой степенью дегрануляции, что может свидетельствовать о нарушении процессов ауторегуляции синтетической активности данных клеток (Mitschke H., 1977). ^ Нами установлено, что впервые тучные клетки в слизистой оболочке и подслизистой основе кишечника появляются у экспериментальных животных на 15-ые сутки постнатального развития. При этом у подопытных крысят обеих опытных групп наблюдается увеличение количества мастоцитов как в слизистой оболочке, так и в подслизистой основе, к периоду половой зрелости (рис. 9). Обращает на себя внимание, что у подопытных крысят обеих опытных групп количество тучных клеток на большинстве сроков исследования превышает таковое в контроле.  При анализе интестинальных мастоцитов по степени гранулярного насыщения была выявлена следующая закономерность. У подопытных крысят обеих экспериментальных групп наблюдается увеличение количества тучных клеток с высокой степенью гранулярного насыщения к концу периода полового созревания, а к периоду половой зрелости происходит небольшое снижение исследуемого показателя. Обращает на себя внимание, что в обеих опытных группах количество тучных клеток с высокой степенью гранулярного насыщения в слизистой оболочке и подслизистой основе всех отделов тонкого и в толстом кишечнике повышено к концу периода полового созревания, по сравнению с контролем. На остальных сроках исследования наблюдались различные закономерности изменения исследуемого показателя, по сравнению с аналогичным контролем. Численность субпопуляций «светлых» и «очень светлых» тучных клеток подчинена обратной закономерности.Индекс гранулярного насыщения тучных клеток слизистой оболочки и подслизистой основы в обеих группах подопытных животных увеличивается к 45-ому дню постнатального развития, а в период половой зрелости, напротив, имеет тенденцию к снижению (рис. 10). При этом исследуемый показатель на 45-ые сутки постнатального развития в слизистой оболочке и подслизистой основе всех отделов кишечника у подопытных крысят обеих опытных групп достоверно превысил таковой в контроле. На остальных сроках исследования единой закономерности в изменении индекса гранулярного насыщения мастоцитов не выявлено.  При анализе мастоцитов по степени дегрануляции было выявлено, что у крысят обеих опытных групп во всех исследуемых отделах кишечника суммарное количество недегранулирующих тучных клеток и клеток с низкой степенью дегрануляции увеличивается к концу периода полового созревания, причем максимальный рост исследуемого показателя приходится на период с 30 по 45-ый день постнатального онтогенеза, а далее, к периоду половой зрелости, происходит небольшое снижение количества мастоцитов с низкой степенью дегрануляции. При этом на большинстве сроков исследования количество тучных клеток с низкой степенью дегрануляции и её отсутствием превышает таковое в контроле. В изменениях численности субпопуляций тучных клеток с умеренной и сильной степенью дегрануляции наблюдается обратная закономерность. Индекс дегрануляции интестинальных тучных клеток слизистой оболочки и подслизистой основы различных отделов кишечника (двенадцатиперстной, тощей, подвздошной и толстой кишки) подопытных животных обеих экспериментальных групп резко снижается к концу периода полового созревания, а в период половой зрелости, напротив, незначительно повышается (рис. 11). При этом в период полового созревания индекс дегрануляции интестинальных тучных клеток был значительно снижен, по сравнению с контролем, как в слизистой оболочке, так и в подслизистой основе кишечника крысят обеих опытных групп. Таким образом, исходя из результатов данной серии исследования, можно сделать заключение, что у потомства самок крыс с экспериментальным хроническим поражением печени различного генеза наблюдаются изменения в качественном и количественном составе интестинальных мастоцитов слизистой оболочки и подслизистой основы, что проявляется увеличением общего количества клеток, а так же среди них субпопуляций мастоцитов с высокой степенью гранулярного насыщения и низкой степенью дегрануляции. Полученные данные могут свидетельствовать о нарушении ауторегуляции синтетических процессов данных клеток (Galli S.J., Wershil В.К., 1996).  ^ Важную роль в функционировании пищеварительной системы играет лимфоидный аппарат. О состоянии индуктивного звена лимфоидного аппарата мы судили на основании морфологической характеристики лимфоидных фолликулов в стенке тонкого кишечника (тощей и подвздошной кишки) и толстого кишечника. Для оценки эффекторного звена гастроассоциированной лимфоидной системы мы определяли количество межэпителиальных лимфоцитов, а так же диффузно расположенных лимфоцитов слизистой оболочки кишечника. Нами установлено, что объем лимфоидных фолликулов в стенке тонкого и толстого кишечника подопытных крысят обеих опытных групп постепенно увеличивается (рис. 12). Минимальная скорость увеличения показателя отмечалась с 45-ого по 60-ый день постнатального развития. При этом практически на всех сроках исследования объем лимфоидных фолликулов превышал таковой в контроле. Вместе с тем, у крысят обеих опытных групп наблюдалось наличие выраженного светлого центра за счет уменьшения клеточной плотности. При анализе площади функциональных зон лимфоидных фолликулов тонкого и толстого кишечника подопытных крысят нам удалось установить следующую закономерность. В первые сутки постнатального онтогенеза в лимфоидных фолликулах тощей, подвздошной и толстой кишок экспериментальных животных не определяется светлый центр. Начиная с подсосного периода, на всем протяжении кишечника в лимфоидных фолликулах размер светлого центра и мантийной зоны постепенно увеличивается во всех исследуемых отделах до периода половой зрелости. Наиболее медленное увеличение показателя отмечалось с 45-ого по 60-ый день постнатального развития. Обращает на себя внимание, что у обеих групп подопытных животных на ранних стадиях постнатального развития (подсосный период и начало периода полового созревания) площади как мантийной зоны, так и светлого центра практически не отличаются от таковых в контроле, а в период полового созревания и период половой зрелости существенно превышают контрольные величины.  Количество лимфоцитов в собственном слое слизистой оболочки, а так же межэпителиальных лимфоцитов у подопытных крысят обеих экспериментальных групп с возрастом постепенно увеличивается во всех отделах тонкого кишечника и в толстой кишке (рис. 13). При этом у подопытных животных обеих экспериментальных групп исследуемые показатели на всех сроках исследования превышают таковые в контроле. Особенно выраженные изменения были обнаружены в период полового созревания и период половой зрелости.  Таким образом, у потомства самок крыс с хроническим поражением гепатобилиарной системы наблюдаются нарушения морфофункционального становления гастроассоциированной лимфоидной системы, что проявляется в увеличении числа межэпителиальных лимфоцитов и диффузно-расположенных лимфоцитов собственного слоя слизистой оболочки кишечника, увеличении размеров лимфоидных фолликулов в стенке пищеварительного тракта, увеличении их функциональных зон, а так же уменьшение плотности расположения клеток в реактивном центре.В целом, полученные в ходе исследования результаты свидетельствуют о нарушении структурно-функционального становления слизистой оболочки кишечника потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением гепатобилиарной системы. Генез выявленных морфофункциональных изменений нам представляется следующим образом. Введение E.сoli и D(+)-галактозамина вызывает у самки в гепатоцитах печени повышенное образование пластических веществ, что ведет к накоплению липидов в мембранах клетки, что снижает проницаемость мембран и уменьшает в клетке интенсивность процессов захвата, транспорта и экскреции (Del Canho R. et all, 1997). Кроме того, общими моментами патогенеза являются нарушение белково-синтетической и дезинтоксикационной функций органа, а также нарушение липидного обмена с изменениями основных фракций липидов крови (общего холестерина, фосфолипидов, триглицеридов) (Golding P.L. et al., 1973; Подымова С.Д., 1993). Вследствие нарушения дезинтоксикационной функции печени в крови накапливаются продукты обмена веществ, в том числе высокотоксичные остаточный азот, креатинин, аммиак, фенолы, а также неинактивированные биологически активные вещества – гистамин, катехоламины и стероидные гормоны (Абдуллаев Н.Х., Каримов Х.Я., 1989). Данные изменения, в конечном итоге, обусловливают структурно-функциональные нарушения различных органов и систем организма матери, в том числе нервной, иммунной, кроветворной, сердечно-сосудистой, эндокринной, что приводит к изменениям межклеточных, межтканевых, межорганных и межсистемных взаимоотношений органов (Азизова Ф.Х. с соавт., 2006). В процессе повреждения печени различными по этиологии факторами в определенный момент наступает присоединение аутоиммунного компонента, который в ряде случаев может стать ведущим. Для развития аутоиммунного компонента поражения гепатобилиарной системы индуцирующим моментом является не только патологически измененная ткань печени, но и состояние иммунной системы. Повреждение печени сопровождается глубокими нарушениями, как гуморального звена иммунитета, так и клеточного (Буеверов, А.О., 1998; Galperin C., 1997; Manns M. P., 1997). Как известно, при хронических патологических процессах в печени матери возникают дегенеративно-воспалительные процессы в плаценте (Цинзерлинг В.А., Мельникова В.Ф., 2002). Это сопровождается увеличением проницаемости гемато-плацентарного барьера (Савченков Ю.И., Лобынцев К.С., 1980). Из крови матери в кровь плода устремляются многочисленные патогенные факторы, каковыми являются: токсичные метаболиты, специфические органные аутоантитела матери, повреждающие соответствующие органы плода (Евченко Е.В., 2001), циркулирующие иммунные комплексы, сенсибилизированные цитотоксические лимфоциты и другие клеточные и гуморальные факторы иммунной системы (Крыжановский Г.Н. с соавт., 1980; Аверкина Р.Ф., 1985; Степанова Р.Н., 1996). Кроме того, некоторые биологически активные вещества, продуцируемые гепатоцитами печени, непосредственно влияют на пролиферацию и дифференцировку эпителиоцитов желудочно-кишечного тракта (Nishimura S. et al., 1998). Все это обусловливает нарушение условий внутриутробного развития плода, приводящее к изменению процессов гисто-, органо- и системогенеза. Развивающийся дисморфогенез, в свою очередь, обусловливает нарушение функций различных систем организма развивающегося потомства, что усугубляет состояние плода. Нарушения гистогенеза тканей плода приводят, в том числе, к нарушениям межклеточных, межтканевых и межорганных взаимодействий, что обусловливает нарушения регуляции и саморегуляции различных функций (что мы и наблюдали на примере тучных и эндокринных клеток слизистой оболочки и подслизистой основы различных отделов кишечника). Особенно выраженные нарушения выявлены в период полового созревания. Значимым в данном случае является тот факт, что именно в данный период наблюдается интенсивная стимуляция различных органов и систем со стороны эндокринной системы. Структуры слизистой оболочки и подслизистой основы подопытных животных, обладающие измененной реактивностью вследствие нарушения внутриутробного развития, не способны адекватно ответить на предъявляемые к ним повышенные требования со стороны эндокринной, иммунной, нервной и других систем. Таким образом, в результате данных нарушений у самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени, вызванном введением E.coli и D(+)-галактозамина, рождается физиологически незрелое потомство, для которого характерно нарушение структурно-функционального становления систем жизнеобеспечения, в том числе и органов пищеварительной системы. ВЫВОДЫ
^
|
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям