Сравнительные аспекты полиморфных вариантов генов ил-4 и ил-10 при бронхиальной астме у коренного и пришлого населения республики хакасия 14. 03. 09- клиническая иммунология, аллергология
|
|
Скачать 318.82 Kb.
|
|
На правах рукописи АНДРЕЙЧИКОВА ЕЛЕНА АНАТОЛЬЕВНА СРАВНИТЕЛЬНЫЕ АСПЕКТЫ ПОЛИМОРФНЫХ ВАРИАНТОВ ГЕНОВ ИЛ-4 И ИЛ-10 ПРИ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЕ У КОРЕННОГО И ПРИШЛОГО НАСЕЛЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ ХАКАСИЯ 14.03.09– клиническая иммунология, аллергология Автореферат на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Новосибирск – 2011 Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Новосибирский государственный медицинский университет» Росздрава и Учреждении РАМН Научно-исследовательском институте клинической иммунологии Сибирского отделения РАМН ^ академик РАМН, профессор, доктор медицинских наук Владимир Александрович Козлов Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор ^ доктор медицинских наук, профессор Любовь Михайловна Куделя Ведущая организация: Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение «Государственный научный центр Институт иммунологии» ФМБА России Защита состоится « » 2011 г. в часов на заседании диссертационного совета Д 001.001.01 в Институте клинической иммунологии по адресу: 630099, г.Новосибирск, ул.Ядринцевская, 14 С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института клинической иммунологии СО РАМН (630099, г.Новосибирск, ул.Ядринцевская, 14) Автореферат диссертации разослан "______"____________ 2011 г. Учёный секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук Ольга Тимофеевна Кудаева ^ Актуальность проблемы. Бронхиальная астма является одной из актуальных медико-социальных проблем. Это обусловлено, в первую очередь, широкой распространенностью заболевания среди всех возрастных слоев населения. Бронхиальная астма относится к группе мультифакториальных заболеваний, этиология и патогенез которых определяется сложным взаимодействием факторов окружающей среды и генетических факторов (комбинации аллельных вариант генов, ответственных за возникновение предрасположенности к развитию патологии) (Фрейдин М.Б., 2001; Cookson W.O., 2003). За последние десятилетия изучения генетической основы бронхиальной астмы выявлено значительное число локусов, сцепленных с болезнью, где локализованы гены-кандидаты, продукты которых могут участвовать в трех основных звеньях заболевания: иммунологическом, воспалительном и нейрогенном. Особое внимание уделяется генам семейства цитокинов и цитокиновых рецепторов (Фрейдин М.Б., 2006; Barnes, P.J., 2008). Наличие определенных полиморфных вариантов может приводить к изменению уровня экспрессии данных генов и изменению структуры кодируемых ими белков (Пузырев B.П., 1999; Kips J.C., 2001). Взаимосвязь полиморфных вариантов генов цитокиной сети с бронхиальной астмой у жителей России изучена несколькими группами исследователей (Казначеев В.А. и др., 2005; Карунас А.С. и др., 2007; Огородова Л.М., 2002; Фрейдин М.Б., 2006; Рамазанова, Н.Н., 2007). Полученные результаты, однако, весьма противоречивы и не дают однозначного ответа на вопрос об их патогенетической роли в развитии астмы. Допустимо, что для такого сложного заболевания как бронхиальная астма имеет место этническая специфика в детерминации, что доказывается различием некоторых участков сцепления в этнически дифференцированных популяциях. Имеющиеся наблюдения свидетельствуют, что, по-видимому, коренные и некоренные популяции, проживающие в одинаковых климатогеографических и социально-экономических условиях, могут иметь значительные различия в распространенности бронхиальной астмы. В Республике Хакасия изучения ассоциации полиморфизма генов цитокинов с бронхиальной астмой среди взрослого населения не проводилось. Исходя из всего этого, нами была сформулирована цель исследования. ^ – охарактеризовать особенности генетического полиморфизма цитокинов и их ассоциацию с развитием бронхиальной астмы у коренного и пришлого населения Республики Хакасия. ^
^ Впервые получены данные о распределении аллельных вариантов промоторных регионов генов IL-4, IL-10 в точках полиморфизма -590С→T и -33Т→С IL-4, -592С→А и -1082А→G IL-10 в популяции монголоидов Хакасии и проведён сравнительный анализ характера их распределения с другими монголоидными популяциями по данным литературы. Установлено, что генетические факторы риска развития атопической бронхиальной астмы у хакасов ассоциированы с генотипами -33С/Т , -590С/Т гена IL-4 и -592А/А, аллелем А в локусе -592 гена IL-10. Обнаружена ассоциация аллеля А локусов -592 и -1082 гена IL-10, с такими фенотипическими проявлениями бронхиальной астмы, как тяжесть заболевания, наличие поливалентной сенсибилизации. Впервые проведено комплексное исследование концентрации противовоспалительных цитокинов (ИЛ-4, ИЛ-10) на системном уровне во взаимосвязи с другими показателями иммунного статуса при атопической бронхиальной астмой у коренных жителей Хакасии. Особенностями эндогенной регуляции межклеточных взаимодействий при БА у коренных жителей является: повышением содержания абсолютного и относительного числа СD4+ лимфоцитов, увеличение концентрации ИЛ-4 и ИЛ-10 в сыворотке крови, снижение относительного числа СD3+ и СD8+ лимфоцитов. При медикаментозно контролируемом течении болезни, сывороточный уровень ИЛ-4 и ИЛ-10 не отличались у хакасов с БА от контрольных значений. ^ Данные, полученные в результате проведенного исследования, расширяют знания в области генетики заболеваний органов дыхания и этно-экологических аспектов аллергологии. Определение концентрации цитокинов у пациентов с БА позволяет оценить интенсивность атопического воспаления на системном уровне. Полученные данные об ассоциированности аллельных вариантов генов цитокинов с атопической бронхиальной астмой у хакасов позволяют использовать их в качестве дополнительных скрининговых тестов для выявления генетических факторов риска развития болезни. Полученные результаты позволят прогнозировать течение бронхиальной астмы. Наличие аллеля А локусов -592 и -1082 гена IL-10 предполагает включение в базисную терапию бронхиальной астмы у хакасов противовоспалительных препаратов ( ингаляционных глюкокортикостероидов) в максимально рекомендуемых дозах, длительными курсами. ^
^ Диссертация изложена на 145 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, результатов исследования, обсуждения полученных результатов, заключения, выводов и списка литературы. Диссертация иллюстрирована 41 таблицей и 12 рисунками. Список литературы содержит 205 источник, в том числе 28 работ отечественных и 177 зарубежных авторов. ^ Материалы диссертационной работы были представлены на 11, 12, 13 межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы медицины» (Абакан, 2008, 2009, 2010г). Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 печатных работ, в том числе 4 журнальные статьи, из которых 3 – в журналах, рекомендованных ВАК РФ. Работа выполнена на базе лаборатории молекулярной иммунологии НИИКИИ СО РАМН (зав. лаб. – д.м.н., профессор С.В. Сенников). ^ Материалы и методы. Работа основана на результатах обследования неродственных индивидуумов, больных аллергической IgЕ-опосредованной (атопической) БА, различной этнической принадлежности, постоянно проживающих на территории Республики Хакасия. Обследованный контингент подразделяли на две популяции: хакасов (монголоидов или коренных жителей) и европеоидами (пришлое население). Группы больных составили пациенты, имеющие положительные результаты кожных аллергопроб и ранее подтвержденный диагноз бронхиальной астмы (GINA, 2006). Под наблюдением находилось 99 человек: 66 больных БА хакасов и 33 больных европеоидов. Сбор данных, включал жалобы больного, семейный и аллергологический анамнез производился в личной беседе с больным. Всем больным проводились инструментальные обследования, включающие в себя спирографию, электрокардиографию и рентгенографию. По степени тяжести больных хакасов разделили на 3 группы - легкого течения (25 пациентов), средней тяжести (23 пациентов) и тяжелого течения (18 человек). По ответу на проводимую базисную терапию больных БА разделили на две группы: 1 группа – с контролируемым течением (12 человек), 2 группа – с неконтролируемым (34 человека). В качестве контроля в работе использовалась выборка практически здоровых лиц, представленная жителями различных районов Республики Хакасия (100 человек), хакасской этнической принадлежности. Все входящие в группу контроля, являлись неродственными индивидуумами. Критериями для включения в контрольную группу являлось отсутствие аллергических заболеваний на момент включения и в анамнезе, наличие у них отрицательных аллергопроб. Иммунологическое обследование включало определение субпопуляций лимфоцитов методом проточной цитофлоуметрии с помощью моноклональных антител фирмы «Оrto Diagnostig» (США). Определяли субпопуляции Т-клеток, несущие поверхностные антигены CD3+, CD4+, CD8+, рассчитывали иммунорегуляторный индекс–соотношение CD4+/CD8+. Концентрацию иммуноглобулинов (IgА, IgМ, IgG) сыворотки крови определяли методом радиальной иммунодифузии по G. Mancini с помощью стандартных антииммуноглобулиновых сывороток. Содержание общего IgЕ сыворотки крови определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа с помощью стандартного набора реагентов «Вектор-БЕСТ», Новосибирск. Содержание цитокинов ИЛ-4 и ИЛ-10 в сыворотке крови определяли с помощью меченых моноклональных и поликлональных антител («R&D Systems», США) методом электрохемилюминесценции с использованием прибора «Origen Analyzer» фирмы IGEN (США) и реагентов, приготовленных согласно протоколам [Sennikov S.V. др. 2003]. Для генотипирование индивидов использовали образцы тотальной ДНК, выделенной из цельной венозной крови, с использованием комплекта реагентов для выделения нуклеиновых кислот «Проба НК» научно-производственной фирмы ООО «ДНК- технология» (г.Москва). Исследованы полиморфные варианты генов цитокинов: ИЛ-4 -590С→Т, -33Т→С и ИЛ-10 -592С→А, -1082А→G. Генотипирование аллельных вариантов осуществляли методом рестриктного анализа продуктов амплификации (ПДРФ - анализ), используя последовательности праймеров и параметры температурных циклов, описанные в литературе и учитывая рекомендации производителя использованного в работе амплификатора “PTC-200 DNA Engine” фирмы MJ Research (США) (табл.1). Таблица 1 ^
Обработка цифрового материала результатов исследования проводилась в соответствии с общепринятыми методами статистики, с использованием прикладного рабочего пакета статистического анализа «Statistica v.6.0» на персональном компьютере «Petntium IV 1700» в рабочей среде «Windows XP». Для представления количественных данных, не подчиняющихся нормальному закону распределения, применялись непараметрический критерий U-test Манна-Уитни [C. Гланц, 1999]. Для сравнения частот аллелей между различными группами использовали критерий χ² Пирсона. Различия считали статистически значимыми при р < 0,05. Для анализа ассоциации аллелей и генотипов с риском развития БА рассчитывали отношения шансов (ОШ) с 95%-ными доверительными интервалами (ДИ). ^ Характеристика результатов иммунологического обследования пациентов с БА. Анализ распределения субпопуляционного состава лимфоцитов выявил статистически значимое уменьшение количества CD3+ -лимфоцитов в группе коренных жителей с БА 67,54(56-75)% в отличие от индивидуумов без БА 76,73(61-79)%. Что возможно, свидетельствует о снижении суммарного содержания Т-лимфоцитов за счет миграции этих клеток в очаг повреждения, либо с подавлением дифференцировки Т-клеток, либо с селективным апоптозом наиболее зрелых Т-лимфоцитов. Концентрация иммунорегуляторных субпопуляций Т-лимфоцитов была изменена неравномерно. Анализ относительного количества CD4+-лимфоцитов показал, что у больных хакасов происходит достоверное повышение данного показателя до 53,18(49-61)%, в отличие от контроля 42,0(36-51)% (р<0,05). Снижения CD8+клеток, у хакасов с патологией составляла 15,72(3-30)%, а в контрольной группе 28,73(4-33) (р< 0,05), что соответственно приводит к увеличению ИРИ, у пациентов с БА 3,36(1,3-20,3)% и 1,46(1,24-3,4)% в контроле (р < 0,05). Высокое содержание Т-хелперов периферической крови может быть обусловлено замедлением их элиминации (Jang A.S, 2000). Бронхиальная астма сопровождается нарушением процессов клеточной гибели. Дефект апоптоза является ключевым звеном в развитии заболевания (Невзорова В.А., 2001). У больных БА происходит снижение апоптотической гибели (Majno G., 1995). У больных БА хакасов, в отличие от здоровых, отмечен дефицит NK клеток (CD56+) 8,86(4-15)% и 13,27(6-15)% соответственно (р< 0,05). Эффекторные функции NK- клеток заключаются в уничтожении клеток-мишеней, продукции ИФН-γ и других цитокинов. Таким образом, дефицит NK клеток может приводить к развитию острых респираторных инфекций (в особенности вызванных риновирусом или респираторно-синцитиальным вирусом) (Tan W.S., 2005), которые, как известно, индуцируют обострение воспалительного процесса у больных БА. Содержание В-лимфоцитов (CD 22+) выше у больных БА хакасов в отличие от здоровых 14,18(10-20) и 12,8(11-14) соответственно (р< 0,05). Отмечено изменение содержания иммуноглобулинов в сыворотке крови у больных БА хакасов: достоверно увеличено содержание IgА, IgМ и IgG, а концентрация IgЕ у больных БА значительно превышала значения в контрольной группе. Таким образом, изменения, выявленные у больных БА хакасов, соответствуют современным представлениям о том, что при БА наблюдается избыточная активация В-лимфоцитов и развитие IgЕ- опосредованных реакций (Laffer S. еt аl, 2001). Анализируемые группы больных отличаются между собой по содержанию отдельных субпопуляций лимфоцитов периферической крови. У европеоидов отмечается достоверное снижение CD3+ 64,8(54-72)% в отличие от хакасов с БА 67,54(56-75)%. Количество CD8+ -лимфоцитов у больных БА европеоидов также ниже в отличие от лиц хакасской этнической принадлежности с БА 12,4(2-24) и 15,72(3-30)% соответственно (р< 0,05). Вместе с тем, отмечаются и общие закономерности в показателей иммунного статуса у больных БА хакасов и европеоидов: содержание CD4+-, CD22+-лимфоцитов, CD56+ , ИРИ, иммуноглобулинов класса М. Концентрация общего IgЕ в сыворотке крови у больных БА хакасов регистрировались достоверно выше в отличие группы европеоидов с БА 448,32(84,2-1256,1)МЕ/мл и 311,70(102,4-985,5)МЕ/мл (р<0,05) соответственно. В обеих исследуемых популяциях у больных БА выявляются однотипные изменения показателей иммунного статуса, характерные для больных бронхиальной астмой. ИЛ-4 – один из основных пусковых медиаторов воспаления Тh2-типа. Исследование цитокинового профиля в сыворотке крови коренных жителей больных БА выявило повышение среднего уровня ИЛ-4 в отличие от группы контроля 60,78(5,8-132,2)пг/мл и 19,4(2,3-24,6)пг/мл соответственно (р<0,01). При сравнении уровня ИЛ-4 у больных БА, различающихся по этнической принадлежности, выявил повышение его у коренных жителей в отличие от пришлых 60,785(5,8-132,2) пг/мл и 30,49(6,3-45,6)пг/мл соответственно (р<0,01). К противоспалительным механизмам относится локальное и системное действие интерлейкина-10, направленное на ингибирование продукции провоспалительных цитокинов. Известно, что IL-10 продуцируется другой иммунорегуляторной субпопуляцией Т-клеток – Tr1, а также дендритными клетками, Тh2-лимфоцитами и др [Lan R.Y., 2005; Mocellin S., 2003;]. Полученные результаты отражают повышенную активность Tr1-клеток, что, возможно, связано с их участием в регуляции аллергического воспаления. Отмечается достоверное увеличение ИЛ-10 в группе хакасов с БА в отличие от контроля 1383,5(23,8-2171,2)пг/мл и 63,55(3,56-83,5)пг/мл соответственно; р<0,05). Средний уровень ИЛ-10 у больных БА европеоидов превышал значения у хакасов с БА, 1436,57(15,4-2563,3)пг/мл и 1383,5(23,8-2171,2)пг/мл соответственно. Таким образом, выявленные отклонения в цитокиновом профиле, свидетельствуют о дисбалансе иммунных реакций в сторону избыточной активации Th-2 пути, что соответствует классическим представлениям об иммунопатогенезе атопического воспаления [Leung D.Y.M., 2004]. Вместе с тем, у больных хакасской этнической принадлежности выявлены некоторые особенности в содержании цитокинов аллергического воспаления в сравнении с больными БА европеоидами. На фоне проводимой иммуносупрессорной терапии сывороточные концентрации цитокинов ИЛ-4 и ИЛ-10 в группах больных коренной национальности с контролируемым течением БА достоверно снижаются и достигают значений, не отличающихся от здоровых доноров (рис. 1).  А Б  Рис.1 Сывороточные уровни ИЛ-4 (А) и ИЛ-10 (Б) при контролируемом ГКС и неконтролируемом течении БА у хакасов и в группе контроляПримечание: * р<0,05 Проводимая базисная фармакотерапия у данной категории больных была представлена высокими дозами ИГКС или сочетанием их системными ГКС. ^ Распределение аллельных вариантов гена ИЛ-4 в позиции -590С→Т и -33Т→С среди жителей Хакасии Анализ распределения генотипов в точке -590 гена ИЛ-4 среди 100 здоровых коренных жителей Республики Хакасии, выявил преобладание гомозиготного Т/Т и гетерозиготного C/Т варианта (37% и 45% соответственно), над гомозиготным С/С (18%). Частота аллелей С и Т – 40% и 60%. В сопоставлении с данными по популяциям различных регионов Земного шара, распределение частоты генотипов полиморфизма -590С→Т гена ИЛ-4 у коренных жителей Республики Хакасия близко к северомонголоидным популяциям Евразии (Noguchi E et al., 1998; Lee, S.G., 2004; Freidin M.B., 2002). Проведенный нами анализ частоты аллелей и генотипов в локусе -590 этого гена среди коренных жителей РХ с бронхиальной астмой (61 человек), показал, что частота гетерозиготного генотипа С/Т у пациентов с БА 60,7% что выше, в отличие от группы контроля 45% (χ² = 3,72; р=0,03; OШ=1,88; 95% ДИ 1–3,6 (табл. 2). В этой связи генотип С/Т полиморфного локуса -590 гена ИЛ-4 можно рассматривать как кандидатный ген аллергической БА, в хакасской популяции. Таблица 2 Распределение генотипов и частот аллелей полиморфизма в локусе -590 гена ИЛ-4 у здоровых доноров и больных БА
Известно, коренные и некоренные популяции, проживающие в одинаковых климатогеографических и социально-экономических условиях, имеют значительные различия в полиморфизме генов цитокинов влияющих на патогенез БА. Что доказывает сравнительный анализ полиморфизма сайта -590 гена ИЛ-4 между пациентами с БА коренными и пришлыми. При анализе частот генотипов и аллелей в области -590 среди европеоидов преобладает «дикий» гомозиготный генотип Т/Т, среди хакасов гетерозиготный С/Т (р<0,001). В изученных популяциях доминирует встречаемость аллеля Т но среди европеоидов аллель Т встречается достоверно чаще 79%, в отличие от хакасов 55% ( р<0,001). При анализе полиморфизма промоторной области гена ИЛ-4 в точке -33 среди здорового коренного населения Республики Хакасия показано преобладание гомозиготного Т/Т и гетерозиготного С/Т генотипов (36% и 46% соответственно) над гомозиготным С/С (18%). Частота аллелей Т и С –59% и 41% соответственно. В опубликованных работах по изучению распределения частоты встречаемости аллелей и генотипов данных локусов гена IL-4 в сопоставлении с данными по популяциям различных регионов Земного шара, у коренных жителей Республики Хакасия распределение частоты генотипов и аллелей близко к северомонголоидным популяциям Евразии (Elliott K., 2001; Choi E.H., 2002; Lee S.G., 2004; Suzuki I., 2000). Следовательно, полученные нами данные свидетельствуют о сходстве частот аллельных вариантов гена ИЛ-4 в позиции -33 и -590 с монголоидным популяциями. Результаты сравнительного анализа показали достоверное повышение частоты гетерозиготного генотипа С/Т 65,2% (χ² = 5,86; р = 0,02; OШ =2,20; 95% ДИ 1,56–4,17) среди больных БА хакасов в отличие от здоровых 46%. Можно допустить ассоциацию данного генотипа с предрасположенностью к аллергической форме БА в хакасской популяции (табл. 3). Так же показана расовая специфика в распределении частот аллелей и генотипов полиморфного варианта -33С→Т гена ИЛ-4. У хакасов преобладал генотип С/Т 65,2% и 21,2% у европеоидов (р< 0,001), а у европеоидов Т/Т 69,8% и 22,7% у хакасов (р<0,001). У европеоидов доминировала частота аллеля Т – 80% и 55% у хакасов (р<0,001). Таблица 3 Распределение генотипов и частот аллелей в промоторной области -33 гена ИЛ-4 у доноров и больных БА
Бронхиальная астма относится к группе заболеваний трактующихся как экологически обусловленных. Одним из факторов заставляющим реализовать генетическую предрасположенность к манифесту БА является проживание в городе, что увеличивает риск заболевания в 2 раза (Черняк Б.А., 2008). Анализ распространенности частот аллелей у хакасов, зависимости от места проживания, выявил: что у городских жителей преобладает частота аллеля С в локусах -590 и -33 гена ИЛ-4 среди пациентов с БА в отличие от здоровых (χ² = 4,18 ; р = 0,04; OШ =1,92; 95% ДИ 1,02-3,62) и (χ² = 6, 33; р = 0,01; OШ =2,24; 95% ДИ 1,19-4,23) соответственно (табл.4). Можно предположить, что носительство аллеля С в полиморфных областях -590С→Т и -33Т→С гена ИЛ-4 у лиц хакасской национальности, проживающих в городах с индустриальной загрязненностью и интенсивным автомобильным движением, является фактором риска аллергической БА. Таблица 4 Распределение алелей и генотипов в полиморфном локусах -33 и -590 гена ИЛ-4 в группе хакасов городских жителей, больных БА и здоровых
^ ИЛ-10 является потенциальным противовоспалительным медиатором. Было показано, что увеличение продукции ИЛ-10 сдвигает баланс Th1/ Th2 в сторону увеличения эффектов Th2 цитокинов и приводит к развитию механизмов патогенеза астмы (Jung M. еt аl, 2004). В случае полиморфизма гена ИЛ-10 в локусе -592С→А, у здорового населения Хакасии, нами показано преобладание гомозиготного С/С и гетерозиготного С/А вариантов (31% и 53% соответственно) над гомозиготным А/А (16%). Частота аллелей С и А – 57% и 43% соответственно. Данные по распределению частот аллелей полиморфизма -592С→А гена ИЛ-10 хакаской популяции занимают промежуточное положение между кавказоидными популяциями Европы и монголоидными популяциями (Kang-Hsi Wu еt аl, 2005; Chatterjee R. еt аl 2005; Trajkov D. еt аl 2008) . При анализе распространенности генотипов по маркеру -592С→А гена ИЛ-10 обнаружено преобладание гомозигот А/А среди больных БА хакасов в сравнении с группой контроля (ОШ=2,27; 95% ДИ 1,07–4,88; р<0,05) табл. 5. Таблица 5 Распределение генотипов и частот аллелей полиморфизма в точке -592 гена ИЛ-10 у коренных жителей РХ
Анализ частот встречаемости аллелей в изучаемых группах позволил выявить преобладание носителей аллеля А среди пациентов, страдающих БА, в сравнении со здоровыми лицами (ОШ=1,67; 95% ДИ 1,07- 2,61; р<0,05). Таким образом, носительство аллеля А и гомозиготного генотипа А/А полиморфного локуса -592 гена ИЛ-10 является фактором риска формирования аллергической БА в хакасской популяции. Показана расовая специфика в распределении частот генотипов полиморфного участка -592С→А гена ИЛ-10 у больных БА коренного и пришлого населения Хакасии: отмечается достоверное преобладание гомозиготного генотипа С/С среди европеоидов 57,6%, у хакасов 19,7% соответственно (χ² = 14,43; р<0,001) и гомозиготного А/А среди хакасов 30,3% у европеоидов 12,1% (χ² = 3,916; р < 0,05). У европеоидов больных БА преобладал аллель С – 73% , а у хакасов аллель А – 55% (χ² = 13,92; р < 0,001). При сравнении частот аллелей данного локуса в зависимости от тяжести БА получены достоверные различия. Нами показало, что в группе больных БА с тяжелым течением заболевания отмечалась тенденция к увеличению встречаемости аллеля А 68,7% в сравнении с 42,5% в группе контроля (χ2=6,32; р=0,01, OШ=2,93; 95% ДИ=1,60-6,19) (табл. 6). Таблица 6 Распределение частот аллелей полиморфного локуса -592 гена ИЛ-10 в группах больных с различным течением БА и контроля у коренных жителей
Примечание: * – обозначены статистически значимые различия между группами, р<0,05 Показатели нарушения ФВД коррелировали с тяжестью заболевания. Уровень ОФВ1 является признаком, характеризующим тяжесть бронхиальной астмы. Отмечено преобладание аллеля А в точке -592 гена ИЛ-10 (р<0,001) при более низких показателях ОФВ1 (< 60%), и аллеля С при ОФВ1>80% (р<0,001) табл. 7. Таблица 7 Распределение частот аллелей в промоторном регионе -592 гена ИЛ-10 в зависимости от показателей ОФВ1
Примечание: * обозначены статистически значимые различия, р < 0,001 Результаты проведенного нами исследования доказывают наличие ассоциации аллеля А в локусе -592 гена ИЛ-10 с тяжестью течения БА в хакасской популяции. Известно, что продукция провоспалительных цитокинов Т-лимфоцитами у больных БА взаимосвязана с экспозицией аллергена и IgE-ответом (Воробьев А.А., 2006). Установлена ассоциация аллеля А в точке -592 гена ИЛ-10 с валентностью сенсибилизации. При моновалентной сенсибилизации чаще встречался аллель С (68,8%), при поливалентной аллель А (69,1%), соответственно ( р < 0,001). Таким образом, носительство аллеля А полиморфизма -592С→А гена ИЛ-10 предрасполагает к поливалентной сенсибилизации у лиц хакасской национальности. При оценке частот аллелей и генотипов полиморфного локуса -1082А→G гена ИЛ-10, у здоровых коренной национальности, нами показано значительное преобладание частоты гомозиготного А/А (54%) и гетерозиготного G/A(39%) вариантов над гомозиготным G/G(7%). Частота аллелей G-26% и А-74% соответственно. Наши данные по распределению частот аллелей полиморфизма гена ИЛ-10 А-1082G жителей Республики Хакасии занимают промежуточное положение между европейскими и азиатскими популяциями (Crawley E. еt аl, 1998; Turner D.M. еt аl, 1997). При изучении полиморфизма промоторного региона гена ИЛ-10 в точке (-1082) нами получены следующие результаты: у коренного населения Республики Хакасия с БА преобладает гетерозиготный А/G и гомозиготный А/А вариант (40% и 49,3% соответственно) над гомозиготным G/G (10,7%). Распределение частот аллелей и генотипов в группах хакасов с аллергической БА и здоровых лиц не имело статистических различий (р>0,05). При исследовании обнаружены особенности распределения частот генотипов и в точке -1082 гена ИЛ-10 у больных БА хакасов и европеоидов проживающих на одной территории: у пришлых преобладал гетерозиготный генотип А/G (54,5%), а у коренных гомозиготный А/А (49,3%) р< 0,001. Это обстоятельство представляется важным в связи с тем, что закономерности распространения БА также имеет свои особенности в популяциях различающегося национального состава. Возможно, такая специфика обусловлена различиями в частотах “патогенетически значимых” аллелей генов-кандидатов заболеваний. При анализе распределения частот аллелей в области -1082 гена ИЛ-10 в зависимости от скоростных показателей ФВД (ОФВ1) выявлены различия (табл. 8). Отмечалось преобладание аллеля А при показателях ОФВ1<80% (р<0,05), т.е. носительство аллеля А -1082 определяет выраженную обструкцию дыхательных путей. Таблица 8 Распределение генотипов и частот аллелей полиморфизма гена ИЛ-10 локуса -1082 в зависимости от показателей ФВД
Примечание: * – обозначены статистически значимые различия между группами, р<0,05. . При оценке ассоциации различных комбинаций изучаемых генотипов с риском развития БА у хакасов, страдающих данной патологией, было обнаружено значительное различие в частотах комбинации генотипов -33СТ/ -592АА полиморфных областях -33Т→С гена ИЛ-4 и -592С→А гена ИЛ-10 в группе больных с БА и в контрольной выборке. Что указывает на рисковую значимость данного сочетания генотипов в развитии БА, у хакасов 22,7% и 7% соответственно в группе контроля (χ² = 8,81; р < 0,01; ОШ =3,63; 95%ДИ 1,02 – 8,28). Так, комбинация генотипов -590ТТ / -33ТТ гена ИЛ-4 встречалась статистически значимо реже в группе хакасов с БА 10% в отличие от здоровых 33% (χ² = 5,34; р<0,05; OШ=0,39; 95% ДИ 0,07-0,33). Данная комбинация генотипов указывает на протективное значение в отношении развития БА в хакасской популяции. ВЫВОДЫ
^ 1. Исследование полиморфизма генов ИЛ-4 и ИЛ-10 у больных бронхиальной астмой / А.А. Пискунов, Е.А. Андрейчикова, А.Н. Силков, А.С. Жовмер, С.В.Сенников, В.А. Козлов // Омский научный вестник. - 2007. - №3(61). – С.202-204. 2. Состояние системного иммунитета у коренного населения с бронхиальной астмой в Хакасии / Е.А. Андрейчикова, В.А. Козлов // ΧΙ ежегодная межрегиональная научно-практическая конференция «Актуальные проблемы медицины». – Абакан. – 2008. – С. 92-96. 3. Полиморфизм гена интерлейкин 4 у коренных жителей республики Хакасия, больных аллергической бронхиальной астмой / Е.А. Андрейчикова // ΧΙΙ ежегодная межрегиональная научно-практическая конференция «Вопросы сохранения и развития здоровья Республики Хакасия». – Абакан. – 2009. – С. 54-56. 4. Популяционные особенности полиморфизма генов цитокинов (IL-4, IL-10) у коренных жителей Республики Хакасия больных аллергической бронхиальной астмой / Е.А. Андрейчикова, Ю.А. Сенникова, А.А. Пискунов, С.В. Сенников, В.А. Козлов // Цитокины и воспаление. – 2009. - № 4. – С. 37-40 5. Состояние системного иммунитета у больных аллергической бронхиальной астмой Республики Хакасия / Е.А. Андрейчикова, Ю.А. Сенникова, В.А. Козлов // Медицинская иммунология. – 2009. - № 2 . – С.273-278 6. Изменения цитокинового статуса у пациентов с бронхиальной астмой / Е.А. Андрейчикова // ΧΙY ежегодная межрегиональная научно-практическая конференция «Актуальные проблемы медицины». – Абакан. – 2011. – С. 92-96. 7. Сравнительные аспекты аллельного полиморфизма гена IL-4 у коренных и пришлых жителей Республики Хакасия больных аллергической бронхиальной астмой / / Е.А. Андрейчикова, А.А. Пискунов, С.В. Сенников, В.А. Козлов // Бюллетень СО РАМН. – 2011. - № 4 . – С.56-59 Подписано в печать .2011 Формат 60 х 84 / 16 Бумага офсетная Способ печати - оператиный Тираж 100 экз. |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям