Министерство здравоохранения республики узбекистан ташкентский институт усовершенствования врачей на правах рукописи
|
|
Скачать 303.86 Kb.
|
|
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН ТАШКЕНТСКИЙ ИНСТИТУТ УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ ВРАЧЕЙ На правах рукописи УДК 616.831-001-053.31-07:616.153.1-074 РАШИДОВА Нилуфар Сафаевна ЗНАЧЕНИЕ НЕЙРОН – СПЕЦИФИЧЕСКОГО БЕЛКА ЕНОЛАЗЫ В ПОВРЕЖДЕНИИ НЕЙРОНАЛЬНЫХ СТРУКТУР ГОЛОВНОГО МОЗГА ПРИ ЭПИЛЕПСИИ 14.00.13 – нервные болезни АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Ташкент 2011 Работа выполнена на кафедре нервных болезней Ташкентской Медицинской Академии ^ доктор медицинских наук, профессор Рахимбаева Гулнора Саттаровна Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор ^ доктор медицинских наук, профессор Мирджураев Эльбек Миршавкатович Ведущее учреждение: Самаркандский медицинский институт Защита состоится ________________ 2011 г. в ____часов на заседании Специализированного Совета Д.087.49.02 при Ташкентском институте усовершенствования врачей (100007, г. Ташкент, ул. Паркентская, 51) С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ташкентского института усовершенствования врачей Автореферат разослан «_____» ____________________ 2011 г. Ученый секретарь Специализированного совета Доктор медицинских наук С.З. Ешимбетова ^ Актуальность работы. Эпилепсия - одна из наиболее сложных и недостаточно решенных проблем современной неврологии и психиатрии. Это обусловлено неуклонным ростом заболеваемости и смертности, трудностями своевременной диагностики и недостаточностью эффективного лечения. Считаясь болезнью детского возраста, эпилепсия имеет второй пик заболеваемости в старшей возрастной группе, являясь третьим по частоте неврологическим диагнозом у пожилых [Гехт А.Б. и соавт.,1997; Jallon P.,Loiseau P., 1995]. В настоящее время во многих экономически развитых странах мира отмечается тенденция к увеличению числа заболеваемости эпилепсией, и она составляет 45-50 больных на 100.000 населения, а в развивающихся странах вдвое больше (Hirsch E Schmitz B 2003; А. Б. 2006). Эта цифра не включает в себя фебрильные судороги, которое встречается у 5% детей и однократные судороги. Распространенность эпилепсии в целом по всем возрастным группам составляет 5% следовательно, каждому 20 представителю населения предстоит испытать приступ в течение жизни. По нашей Республике распространенность эпилепсии составляет 5,45% на 100.000 населения. В связи с ростом заболеваемости среди наиболее трудоспособной части населения эта проблема приобретает социальное значение. Сложность этой проблемы обусловлена существованием различных, порой противоположных точек зрения на подходы к диагностике и лечению больных с эпилепсией [сообщение комиссии ILAE, 2004]. За последние десятилетия, вследствие углубленного изучения факторов, повреждающих головной мозг, существенно изменились взгляды патофизиологов и клиницистов на степень повреждения нейронов и нейрональных структур головного мозга. Данные компьютерной томографии (КТ) и магнитно-резонансной томографии (МРТ) показывают локальность поражения, но не способны полностью отразить степень и глубину поражения структур головного мозга. Диагностическая задача усложняется многообразием клинических форм заболевания, обусловленных не только поражением различных отделов головного мозга, но и своеобразной реакцией клеточных структур, вызывающей нарушение обмена нейросцифических белков (НСБ). Это, в свою очередь, имеет большое значение с точки зрения диагностики и прогнозирования тяжести течения заболевания. Биохимические маркеры, высвобождаемые при поражении нейронов, могут служить значимым прогностическим индикатором лечения в ответ на случаи повторного развития патологии головного мозга (Del Bigio M.R., 1997), в частности, это касается нейро - специфического белка енолазы, который является маркером повреждения нейрональных структур головного мозга и обусловливает тяжесть течения заболевания. По одним литературным данным, при заболеваниях, сопряженных с непосредственным вовлечением нервной ткани в патологический процесс, качественное и количественные определение этого белка в сыворотке крови дает ценную информацию о степени выраженности повреждения нейронов и нарушения общей целостности гематоэнцефалического барьера [Garga N, Lowenstein DH , 2006]. По другим сообщениям, энзимная активность НСЕ бывает более высокой при распространении патологического процесса на оболочки мозга, по сравнению с повреждением только паренхимы мозга [DeGeorgio C.M., Correale J.D., Gott P.S., et al .,1995]. По результатам различных проведенных исследований доказана также возможность применения этого показателя в качестве клинико-диагностического критерия оценки степени повреждения нейронов головного мозга при различных деструктивных заболеваниях центральной нервной системы [Royds JA, 1993]. Это позволяет считать данный энзим специфическим маркером повреждения нервной системы, в частности при эпилепсии, что и определило актуальность настоящего исследования. ^ Работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательской работы Ташкентской Медицинской Академии Министерства здравоохранения Республики Узбекистан. Номер Госрегистрации: 01.070070. ^ Выявить протеины, свойственные для генетической модели эпилепсии и определить их значение у больных с эпилепсией, в зависимости от частоты, типа и формы заболевания. Задачи исследования: 1. Определить в эксперименте (протеомическим методом) изменение протеинов свойственных для эпилепсии в генетической модели Монгольских хомяков. Выявить экспериментальным методом НСЕ в генетической моделей Монгольских хомяков.
^ Работа основана на экспериментальном и клиническом наблюдении. Экспериментальное исследование проводилось на генетических моделях Монгольских хомяков количеством 80 штук, полученные из Центра Экспериментальных Животных, Hallym University, Chunchon (Южная Корея). Животные были разделены на две группы: 1. чувствительные к приступу хомяки (seizure-sensitive SS-хомяки) 2. не чувствительные к приступу хомяки (seizure-resistant SR-хомяки). Клиническим материалом послужили данные 86 больных, страдающих эпилепсией (основная группа) получавших стационарное и амбулаторное лечение на базе клиники нервных болезней ТМА в РКБ №1. ^ Экспериментальные исследования, клинико-неврологическое исследование, РЭГ, ЭхоЭС, ЭЭГ, КТ или МРТ головного мозга, биохимические исследования. Основные положения, выносимые на защиту:
^ 1. Впервые экспериментально исследовано изменение экспрессии белков при эпилепсии в генетической модели Монгольских хомяков.
3. Впервые в Республике произведено и внедрено клинико-лабораторное исследование определения НСЕ, как маркера клеточного повреждения у больных с эпилепсией. 4. На основании произведенных исследований впервые показано, что клинико-лабораторное исследование определения содержания НСЕ, в сыворотке крови больных эпилепсией, прогностически важно для характеристики тяжести и частоты судорожных припадков при эпилепсии. 5. Впервые показано преимущество диагностических возможностей выявления НСЕ, указывающее на глубину повреждения нейронов головного мозга при эпилепсии перед нейровизуализационными методами (КТ, МРТ). ^ . Изучение на современном уровне механизмов возникновения повреждения клеточных структур при эпилепсии, может явиться основой для дальнейшей оптимизации терапии судорожных припадков. Установленные экспериментально-клинические критерии позволяют прогнозировать характер и длительность течения судорожных состояний и глубины повреждения нервной системы у больных с эпилепсией. Разработанные клинико-лабораторные и экспериментальные методы исследования значительно облегчат задачи специалистов по проведению диагностики и определению степени тяжести заболевания. ^ Данные исследования легли в основу информационного письма «Значение нейрон-специфической енолазы в диагностике эпилепсии» (2011), в котором приводятся практические рекомендации по вопросам диагностики и тактики ведения больных эпилепсией. Основные положения работы используются в педагогической и клинической деятельности кафедры нервных болезней Ташкентской Медицинской Академии. Результаты исследования внедрены в работу городских поликлинических и стационарных учреждений. ^ Материалы диссертационной работы доложены на Международном Конгрессе Детских Неврологов (Кушадаси, Турция 2007), на 13 Конгрессе EFNS (Флоренция, Италия 2009), на 14 Конгрессе EFNS (Женева, Швейцария, 2010), на 15 Конгрессе EFNS (Будапешт, Венгрия 2011), 159 заседании Ассоциации Неврологов Узбекистана (2011). Обсуждены на: кафедральном научном семинаре Ташкентской Медицинской Академии (2011), межкафедральном научном семинаре с участием кафедр: биохимии, неврологии и психиатрии ТМА (2011), на научном семинаре при Специализированном Совете ТашИУВ (2011). ^ По материалам работы опубликовано 14 научных работ, из них 7 журнальных статей (3 за рубежом), 7 тезисов из них 7 за рубежом, в том числе одно информационное письмо. ^ Диссертационная работа изложена на 112 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы материалы и методы исследований, 2 главы с изложением результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы, содержащего 220 источников. Работа иллюстрирована 1 диаграммой, 20 рисунками и 7 таблицами. ^ Материалы и методы исследования. Данная работа состоит из экспериментального и клинического исследования. Экспериментальная часть работы выполнялась в Gyengsang National University, Jinju city, South Korea, на кафедре нейробиологии под руководством проф. Чо К. Материалом экспериментальной части данной работы послужили генетические модели Монгольские хомяки, полученные из Центра Экспериментальных Животных, Hallym University, Chunchon (Южная Корея). У генетических моделей Монгольских хомяков приступы классифицировались в соответствии со шкалой припадков (Loskota et al., 1974; Kang et al., 2004, в частности, 1 степень характеризуется короткими паузами в нормальной активности, сопровождающимися подергиванием вибрисс и стягиванием ушек; 2 степень характеризуется прекращением активности, подёргивание вибрисс и стягиванием ушек; 3 степень - прекращение активности и миоклоническими судорогами; 4 степень: тонико-клоническими припадками; 5 степень: тонико-клоническими припадками и вращением тела. Животные были разделены на две группы: Ι группа – животные с припадочными приступами четвёртой и пятой степени 40 животных, обозначенные как SS-хомяки (Seizure – Sensitive); ΙΙ группа – животные у которых не обнаруживалась припадочная активность 40 животных SR-хомяки (Seizure – Resistant). Для проведения экспериментальной части работы проводилось исследование протеинов двухмерным электрофорезом (2DE). Далее проведен двухмерный-гель электрофорез, элюция белков из геля, масс-спектрометрия и идентификация по отпечаткам пептидных масс с помощью программы PDQust. Белки определялись с помощью иммуноблотинга, для определения локализации НСЕ и альфа-енолазы использована иммуногистохимия. Клиническим материалом послужили данные 86 больных страдающих эпилепсией. Среди них мужчин 47 (43,5%), 39 (56,5%) женщин. Среди обследованных больных с генерализованной эпилепсией (grand mal) было 40 (46,5%) больных. 24 мужчин (60%), 16 (40%) женщин. Средний возраст больных составил ± 31,5 лет. Нами также наблюдались больные с малыми приступами (petit mal), которые составили 12 больных – 7 мужчин (58,3%) и 5 (41,7%) женщин соответственно. Больные с парциальными (фокальными, очаговыми) приступами составили 46 больных: среди них мужчин – 26 (56,5%), женщин – 20 (43,5%). Средний возраст больных составил ± 29,6 лет. Больные со сложными парциальными приступами (височной формой эпилепсии) составили – 16 пациентов (18,6%), из них 9 (56,2%) мужчин и 7 (43,8%) женщин; Джексоновской эпилепсией составили 18 (20,9%) больных, 10 (55,5%) мужчин, 8 (44,5%) женщин соответственно. Из 86 больных страдавших эпилепсией 44 больных страдали симптоматической эпилепсией, среди причин развития которой были: с посттравматической эпилепсией - 26 больных и сосудистой эпилепсией – 18 больных. 42 больных составили больные генуинной эпилепсией и идиопатической (неизвестной этиологии) эпилепсией, 19 и 23 больных соответственно. Больные симптоматической эпилепсией были разделены на подгруппы в зависимости от частоты приступов и возраста больных. Больные с посттравматической эпилепсией (Ι группа), 26 больных (30,2%), были разделены на 3 подгруппы в зависимости от частоты приступов: первую подгруппу (1 подгруппа) составили 6 больных (23%), где частота приступов составила 7-9 раз в месяц, из них 4 мужчин (66,6%) и 2 женщин (33,4%); у 9 больных (34,6%), которые составили вторую подгруппу (2 подгруппа), частота приступов были 4-6 раз в месяц, из них 5 мужчин (55,5%) и 4 женщин (44,5%); третью подгруппу (3 подгруппа) составили 11 больных (42,3%) с частотой приступов от 1 до 3 раз в месяц, из них 7 мужчин (63,6%) и 4 женщин (45,4%). Возраст больных посттравматической группы варьировал от 19 до 55 лет. Средний возраст больных І группы составил ± 35,3 лет. Больные с сосудистой эпилепсией (ΙΙ группа) 18 больных (20,9%), также были разделены на 3 подгруппы с аналогичной частотой приступов. Первая подгруппа (1 подгруппа) – 5 больных (27,7%), из них 3 мужчин (60%) и 2 женщин (40%), вторую подгруппу (2 подгруппа) составили – 9 больных (50%), из них 6 мужчин (66,6%) и 3 женщин (33,4%), третья подгруппа (3 подгруппа) – 4 больных (22,2%) с эпилепсией сосудистого генеза, из них 3 мужчин (75%) и 1 (25%) женщина. Возраст больных сосудистой эпилепсией варьировал от 46 до 70 лет. Средний возраст больных ΙІ группы составил ± 43,8 лет. Контрольную группу составили 20 практически здоровых лиц не страдающих эпилепсией и не имеющих в анамнезе эпилептические припадки. Средний возраст больных составил ± 26,7 лет. Больные с генуинной эпилепсией (Ι группа), 19 больных (45,2%) были разделены на 3 подгруппы в зависимости от частоты приступов: первую подгруппу (1 подгруппа) составили 5 больных (26,3%), где частота приступов составила 7-9 раз в месяц, из них 3 мужчин (60%) и 2 женщин (40%); 10 больных (52,6%) составили вторую подгруппу (2 подгруппа), частота приступов были 4-6 раз в месяц, из них 6 мужчин (60%) и 4 женщин (40%); третью подгруппу (3 подгруппа) составили 4 больных (21%), частота приступов от 1 до 3 раз в месяц, из них 3 мужчин (75%) и 1 женщина (25%). Средний возраст больных генуинной группы составил ± 27,3 лет. Больные с идиопатической эпилепсией (ΙІ группа) 23 больных (54,7%), также были разделены на 3 подгруппы с аналогичной частотой приступов. Первая подгруппа (1 подгруппа) 8 больных (34,7%), из них 5 мужчин (62,5%) и 3 женщин (37,5%), вторую подгруппу (2 подгруппа) составили 9 больных (39,1%), из них 4 мужчин (44,4%) и 5 женщин (55,5%), третья подгруппа (3 подгруппа) – 6 больных, из них 4 мужчин (66,6%) и 2 женщин (33,3%). Средний возраст больных ІΙ группы составил ± 27,8 лет. Обследованы пациенты, в анамнезе у которых, имелось 2 и более эпилептических припадков, что согласно Международной Классификации эпилепсий и эпилептических синдромов (ILAE 1989) позволило диагностировать эпилепсию. Для обследования отбирались больные, у которых имелись повторяющиеся эпилептические припадки симптоматического генеза и больные эпилепсией наследственного генеза. В процессе клинико-неврологического обследования проводился тщательный сбор анамнеза. Особое внимание уделялось начальным проявлениям эпилептических припадков, их частоте, давности эпилептических проявлений, клинической картине, течению постприпадочного состояния, наличию в анамнезе эпилептического статуса, серий эпиприпадков, отягощенности семейного анамнеза (данные были получены от самих больных, так и от родственников). Для определения типа эпилептического припадка была использована Международная классификация эпилептических приступов (ILAE 1981) и Международная Классификация эпилепсий и эпилептических синдромов (Нью-Дели, 1989 г.). Для оценки тяжести течения эпилепсии была использована классификация Luhdorf et al: мягкое течение (легкая степень тяжести) – 3 и менее эпилептических припадков в год. Средняя степень тяжести – 12 и менее эпиприпадков в год, тяжелое течение (тяжелая степень тяжести) – 13 и более эпиприпадков в год. У всех больных проводили комплексное клинико-лабораторное обследование, включая неврологическое, офтальмологическое, электроэнцефалографическое, эхоэнцефалоскопическое, компьютерно-томографическое, магнитно-резонансное исследования, а также биохимическое исследование крови на выявление нейрон - специфической енолазы. ^ проводили по схеме Гусева Е.И. с детальной оценкой общемозговых и очаговых симптомов. Основная часть исследования была проведена на базе кафедры нервных болезней в РКБ №1. Ряд исследований были выполнены в ЦНИЛ Ташкентского Института Усовершенствования врачей. При изучении ЭЭГ проанализированы частотно-временные параметры основных ритмов, наличие эпилептических феноменов фоновой ЭЭГ, при применении функциональных проб. Учитывая, что по данным литературы, наличие истинно эпилептических феноменов фоновой ЭЭГ регистрируется лишь в небольшом проценте случаев, нами учитывалось также условно-эпилептические графоэлементы: гиперсинхронный, заострённый по форме альфа-ритм, гиперсинхронный высокоамплитудный (> 40 мкв) бета-ритм, вспышки высокоамплитудных альфа-бета, тета- и дельта или полифазных волн с крутыми фронтами, возникающие билатерально-синхронные или локально на фоне относительно нормальной или дезорганизованной активности (Зенков Л.Р.,2002). ^ головного мозга проводили в MDS-serviсe, Сафо Тиббиёт на аппарате «Somatom CR» фирмы «Siemens» (Германия). ^ Определение содержания нейрон - специфической енолазы в сыворотке крови проводили в ЦНИЛ ТашИУВ с помощью Human Neuron Specific Enolase ELISA Kit (Alpha diagnostic, USA) в соответствии с инструкцией производителя. Забор проб крови производился из локтевой вены утром натощак в лаборатории РКБ №1 при Ташкентской Медицинской Академии. Для определения содержания енолазы измерялось поглощение образцов при 450 нм в течение 30 мин на ELISA-reader (USA). Концентрация енолазы определялась по калибровочному графику, построенному по прилагаемым к ELISA-Kit стандартам. ^ проводили с использованием Student’s t-test. Значения Р<0.05 рассматривались как статистически достоверные. Результаты представлены как среднее значение ± стандартная ошибка. ^ Выявление припадок - специфичных белков с помощью протеомного анализа. Сравнительный анализ белков между SS и SR группами. Профили белков, выделенных из гиппокампа сорока SS и сорока SR Монгольских хомяков анализировались методом двухмерного электрофореза (изоэлектрическое фокусирование и ДДС-Na-ПААГ) и окрашивания серебром (Рис.1). Полученные в результате трёх независимых экспериментов белковые пятна были проанализированы с помощью программного обеспечения PDQust. Эти пятна были вырезаны, обесцвечены и элюированы трипсинацией. Трипсиновые пептиды были проанализированы методом MALDI-TOF масс спектрометрии, поиском в базе данных (Рис.2) Обзор протеинов, идентифицированных MALDI-TOF масс спектрометрией представлен в Таблице 1. Были обнаружены различия между SS и SR группами в экспрессии альфа-енолазы, гамма-енолазы и β-субъединицы АТФ-синтазы (Рис.3). Экспрессия этих белков оказалась повышенной в SS группе по сравнению с SR группой. Из рисунка 1 видно, экспрессия белков в двух группах животных различается по выраженности экспрессии и количеству экспрессирумых белков. Количество и выраженность экспрессии белков была относительно выражена в основной группе животных SS- хомяки.  pH 4-7 SR  SS Рис.1. Типичные результаты двухмерного электрофореза экстрактов гиппокампальных белков SS и SR групп.  Рис. 2. Масс-спектры пептидных фрагментов белкового пятна, полученные методом MALDI-TOF масс-спектрометрии. В результате проведенного комплексного анализа были идентифицированы три протеина, экспрессия которых оказалась значительно повышенной в гиппокампе эпилептических животных по сравнению с контрольными животными. Данными протеинами оказались два фермента гликолиза: альфа-енолазa и гамма-енолазa, a также β-субъединицa АТФ-синтазы.  ^ Стрелками показаны идентифицированные протеины. Таблица 1. Протеины, идентифицированные масс-спектроскопией
Для подтверждения разницы в экспрессии енолазы в гиппокампе SS и SR групп был проведён вестерн-блоттинг с использованием специфичных к енолазе антител. После ДДС-Na ПААГ электрофореза экстрактов клеток гиппокампа SS и SR групп, белки переносились на мембраны для иммуноблоттинга. В результате было обнаружено, что содержание НСЕ и альфа-енолазы в SS группе повышено по сравнению с SR группой (Рис.4-5)  Рис. 4. Анализ экспрессии нейрон - специфической енолазы (γ-НСЕ) в SS и SR группах. (А) Типичный результат вестерн-блоттинга НСЕ. (Б) Сравнение экспрессируемой НСЕ между SS и SR группами, сделанное на основании результатов вестерн-блоттинга.  Рис. 5. Анализ экспрессии альфа енолазы (α-енолаза) в SS и SR группах. (А) Типичный результат вестерн-блоттинга НСЕ. (Б) Сравнение экспрессируемой α-енолазы между SS и SR группами, сделанное на основании результатов вестерн-блоттинга. Одним из значимых результатов нашего экспериментального исследования было окрака белков гематоксилин-эозином. Результат исследования показал, что повышенное содержание нейрональных клеток в SR группе по сравнению с SS группой (Рис.6).  ^ Примечание: CA – cornu ammonius 1, CA3 – cornu ammonius 3, DG – dentate gyrus. Окраска гематоксилин-эозин (х 100). Для определения локализации НСЕ был использован иммуногистохимический анализ срезов мозга SS и SR групп. В результате анализа были обнаружены позитивные сигналы НСЕ, локализованные в цитозоле нейронов пирамидального и гранулярного слоёв зубчатой извилины гиппокампа животных SS группы. В срезах SR группы позитивный сигнал в данной области не обнаруживался. Позитивный сигнал альфа-енолазы локализовывался в астроцитах и дендритах пирамидальных нейронов, причём иммунореактивность была повышена в срезах SS группы по сравнению с SR группой. Позитивный сигнал глиальных фибриллярных кислых белков обнаруживался в обеих группах. ^  Рис.7. Определение локализации нейрон-специфической енолазы (НСE), альфа - енолазы и глиальных фибриллярных кислых белков (ГФКБ) методом иммуногистохимии. На основании проведенных исследований в экспериментальной модели эпилепсии, нами было сделано следующее заключение:
Анализ исследования сНСЕ у больных посттравматической эпилепсией (Ι группа) зависела от частоты приступов и возраста больных. Повышение НСЕ в сыворотке крови больных посттравматической эпилепсией (Ι группа) отмечено по подгруппам: в 1 подгруппе обнаружено значительное увеличение уровня сНСЕ после припадков у 5 больных (83,3%). Содержание сНСЕ в 1 подгруппе составило 24.9±3.2 нг/мл (P=2.4*10-7). Во 2 подгруппе повышение сНСЕ было обнаружено у 6 больных (66,6%), со средним значением концентрации 19.1±2.3 нг/мл (P=1.0*10-5). В 3 подгруппе количество больных, у которых отмечалось повышение сНСЕ, составило 6 больных (54,5%), концентрация сНСЕ в этой подгруппе 16.8±2.0 нг/мл (P=8.5*10-5). Для выявления возрастной зависимости нейронального повреждения вызванного эпилептическими припадками нами был проведен сравнительный анализ содержания сНСЕ у пациентов Ι группы различных возрастных групп: 19-29 лет, 30-39 лет, 40-59 лет. Полученные результаты свидетельствуют об относительно более высоком содержании сНСЕ после припадков у молодых пациентов по отношению к более старшим и, следовательно, о более серьезных повреждениях мозга у пациентов молодого возраста. Содержание сНСЕ по группам составило 22.3±2.4 нг/мл (P=4.3*10-7), 17.3±2.0 нг/мл (P=6.6*10-5) и 15.9±2.3 нг/мл (P=8.3*10-4) у пациентов 19-29, 30-39 и 40-59 лет соответственно. Сравнительный анализ содержания сНСЕ у больных сосудистой эпилепсией (ІІ группа) по подгруппам: повышенное содержание сНСЕ было обнаружено у 3 (60%) больных 1 подгруппы, у 6 (66,6%) больных 2 подгруппы, 2 (50%) больных 3 подгруппы. Колебание уровня сНСЕ в данной группе больных составлял от 9.7 до 34.5 нг /мл в зависимости от частоты приступов. Содержание сНСЕ во ΙΙ группе составило 25.5±6.2 нг/мл (P=1.1*10-5), 16.7±2.0 нг/мл (P=5.5*10-5) и 14.7±1.8 нг/мл (P=8.5*10-4) в 1, во 2 и в 3 подгруппах соответственно. Определение с НСЕ в зависимости от возраста больных ΙΙ группы распределялось по следующим возрастным критериям: 47-55 лет , 56-64 лет , 65-70 лет. Результаты исследований показали, что наибольшее повышение содержания сНСЕ отмечается у больных в возрасте 47-55 лет по сравнению с более старшими возрастными категориями. А именно, содержание сНСЕ составило 27.3±4.7 нг/мл (P=1.5*10-2), 18.1±2.1 нг/мл (P=2.5*10-5) и 12.6±1.1нг/мл (P=1.0*10-6) в возрастных категориях 47-55 лет, 56-64 лет, 65-70 лет соответственно. В контрольной группе повышение уровня НСЕ зарегистрировано только в 1 случае (5%), содержание сНСЕ в этой группе составило 8.09±0.9 нг/мл. Содержание сНСЕ в контрольной группе варьировало от 2.9 нг/мл до 13.6 нг/мл, в одном случае содержание сНСЕ оказалось выше нормы и составило 15.4 нг/мл. Среднее значение концентрации сНСЕ в контроле 8.09±0.9 нг/мл. На основании полученных данных можно заключить, что повышенный уровень НСЕ отмечался у 65,3% больных с посттравматической эпилепсией, и возрастал в зависимости от частоты эпилептических приступов. Возможно, в период между травматическим повреждением мозга и дебютом эпилептических припадков происходит патофизиологический процесс структурной реорганизации нейрональной сети, клетки мозга образуют новые синапсы и аксоны, что может, приводит к повышению возбудимости участков мозга, непосредственно не пострадавших от травмы, то есть к расширению очага гипервозбудимости, и, следовательно, к большим повреждениям нервной ткани вызванных эпилептическими припадками (Rabinowicz AL et. al., 1996; Woertgen C., et.al., 2001). Таким образом, анализ сывороточной НСЕ у больных с симптоматической эпилепсией является информативным диагностическим критерием оценки нейронального повреждения головного мозга. Сравнительный анализ содержания сНСЕ после припадков вызванных, посттравматической и сосудистой эпилепсией показал относительно повышенный уровень НСЕ при посттравматической эпилепсии по сравнению с сосудистой формой заболевания (P<0,005). Наиболее высокое содержание сНСЕ наблюдается у больных с относительно высокой частотой припадков. При одинаковой частоте припадков содержание сНСЕ при посттравматической эпилепсии у пациентов старших возрастных групп в среднем сравнительно ниже, чем у молодых, хотя и повышено по отношению к контрольной группе (P<0,001). Анализ сывороточной сНСЕ у больных сосудистой группы выше в первой возрастной категории, чем у больных относительно старших возрастных категорий (P<0,005). ^  Больные генуинной и идиопатической эпилепсией также были поделены на группы и подгруппы. В результате проведенного исследования по содержанию сНСЕ в зависимости от частоты приступов у больных генуинной эпилепсией (І группа) было выявлено повышенное содержание сНСЕ у больных 1 подгруппы, 4 больных (80%). Содержание сНСЕ в 1 подгруппе составило 21,8±4,3 нг/мл (P=1.8*10-6). Во 2 подгруппе повышение сНСЕ отмечалось у 6 больных (60%), в которой содержание сНСЕ составило 15,7±2,3 нг/мл (P=3.8*10-5). В 3 подгруппе количество больных, у которых отмечалось повышение сНСЕ, было у 2 больных (50%), содержание сНСЕ составило 13,0±2,6 нг/мл (P=1.6*10-3). Колебание уровня сНСЕ в І группе было в пределах 6,8-33,5 нг/мл. Наиболее повышенный уровень сНСЕ отмечался у больных 1 подгруппы, где частота приступов самая высокая. Сравнительный анализ содержания сНСЕ у больных идиопатической эпилепсией (ΙІ группа) по подгруппам: повышенное содержание сНСЕ было обнаружено у 6 (75%) у пациентов 1 подгруппы, у 6 (66,6%) больных 2 подгруппы, у 3 (50%) больных 3 подгруппы. Колебание уровня сНСЕ в данной группе больных составлял от 5.9 нг/мл до 30.4 нг/мл. Содержание сНСЕ во ΙΙ группе составило 17,6±2,9 нг/мл (P=1.6*10-5), 15,0±1,7 нг/мл (P=5.4*10-6), 11,6±2,0 нг/мл (P=6.2*10-3), в 1, во 2 и в 3 подгруппах соответственно. Таким образом, можно заключить, что увеличенное содержание сНСЕ наблюдается у больных генуинной и идиопатической эпилепсией (табл.3), и что повышенный уровень сНСЕ у пациентов с относительно высокой частотой приступов. ^  Анализ результатов иммуноферментного исследования НСЕ у больных эпилепсией в зависимости от формы, показал, что у больных с генерализованными приступами, повышение сНСЕ у 31 (77,5%) больных и составил 16.2±1.3 нг/мл (P=2.2*10-6), у больных с Джексоновскими приступами показал повышение уровня сНСЕ у 16 (69,5%) больных. Среднее значение сНСЕ составило 14.9±1.5 нг/мл (P=4.4*10-5), с малыми приступами - повышение уровня сНСЕ у 4 (41,6%) больных. Средние показатели сНСЕ у больных данной группы варьировал в пределах 12.1±2.2 нг/мл (P=1.4*10-2), с височной эпилепсией - у 8 (50%) больных. Средний показатель сНСЕ варьировал в пределах 12.1±1.3 нг/мл (P=7.2*10-4). ^  Таким образом, из полученных нами данных можно заключить, что повышение уровня нейрон – специфической енолазы наблюдается у больных с различными формами эпилепсии, и что относительно повышенный уровень сНСЕ отмечался у больных с генерализованными приступами (Табл.4). Анализ исследования НСЕ у больных эпилепсией в зависимости от этиологии заболевания показал, относительно повышенное содержание наблюдалось у больных генуинной эпилепсией.  Рис.1 Сравнительная характеристика повышения уровня нейрон - специфической енолазы в зависимости от этиологии эпилепсии. (A) Абсолютные значения содержания сНСЕ. (Б) Среднее содержание сНСЕ в подгруппах по отношению к контролю. 1 – контроль (P=2.2*10-6); 2 – генуинная (P=4.4*10-5), 3 – идиопатическая эпилепсия (P=2.2*10-6), 4 – посттравматическая (P=1.4*10-2); 5 – сосудистая (P=7.2*10-7). Резюмируя общие результаты проведенных нами исследований, можно заключить, что два ключевых фермента гликолиза, альфа-енолаза и НСЕ могут являться биохимическими маркерами эпилептического мозга. Нами также доказано, что содержание сНСЕ значительно повышено при эпилепсии и зависит от степени тяжести заболевания, частотой эпилептических припадков, и формой приступов, что позволяет рассматривать НСЕ как достаточно информативный маркер повреждений мозга при различных формах эпилепсии и уровень НСЕ в сыворотке крови может быть использован в качестве биохимического показателя в диагностике эпилепсии. ЗАКЛЮЧЕНИЕ ВЫВОДЫ:
^
^
Тиббиёт фанлари номзоди илмий даражасига талабгор Рашидова Нилуфар Сафаевнанинг 14.00.13 – Асаб касалликлари ихтисослиги буйича «Нейрон-специфик оксил енолазанинг тутканок касаллигида нейронал тузилмаларининг зарарланишидаги ахамияти» мавзусидаги диссертациясининг РЕЗЮМЕСИ Таянч (энг мухим) сузлар: тутканок, нейронал зарарланиш, НСЕ Тадкикот объектлари: Монгол каламушлар генетик модели, тутканок касалланган беморлар ва соглом одамлар. ^ Эпилепсиянинг генетик моделига хос булган протеинларни аниклаш шунинг дек тутканоги бор беморларда уларни касаллик турига, шаклига, кайталаниб туриш даражасига богликлигини асослаб бериш. ^ Иммуногистокимёвий, иммуноблотинг (Western blot), масс спектрометрия, биохимик текширувлар, клиник, неврологик текширувлар, компьютер-томографик, нейрофизиологик текширувлар. ^ Илк бор тутканок касаллигида оксиллар экспрессиясининг узгариши Монгол каламушлари генетик моделида текширув уткизилди. Илк бор тутканок касаллигида Монгол каламушлари миясида бош мия нейронал тузилмаларини жарохатини чакирувчи НСЕ эксперимент текширув асосида исботланди. НСЕ хужайра жарохатланиши маркери сифатида клиника-лаборатор текширув утказилди. Илк бор тутканок касаллигида клиника-лаборатор текширув билан тутканок хуружи сони ва огирлиги хусусиятини прогностик ахамияти бахоланди. НСЕ илк бор бош миянинг нейронал жарохатини чукурлигини курсатувчи нейровизуализацион усуллар (КТ, МРТ) олдида диагностик ахамияти устунлиги бахоланди. ^ Тутканок касаллигида хужайра тузилмаларининг жарохатланиши механизмини заминавий усулда урганиши тутканок хуружларини даволашда асос булиб хизмат килади. Урнатилган экспериментал-клиник критерийлар асосида тутканок билан огриган беморларда асаб тизимини жарохатланиш чукурлиги ва тутканок давомийлиги шунинг дек унинг хусусияти тугрисида хулоса чикариш мумкин. Ишлаб чикилган экспериментал ва клиника-лаборатор текширув усуллари касаллик огирлигини даражасини аниклаш ва ташхис куйиш учун мутахассис вазифаларини енгиллаштиради. ^ Утказилган текширувлар «Нейрон-специфик енолазанинг тутканок касаллигида диагностик ахамияти» мавзусидаги информацион хат куринишидаги кулланма асосига киритилган булиб тутканок касаллиги билан огриган беморларни олиб бориш ва ташхислаш учун асосий кулланма хисобланади. Илмий ишнинг холати ТТА асаб касалликлари кафедрасининг педагогик ва клиник фаолияти учун хизмат килади. ^ Неврология. РЕЗЮМЕ диссертации Рашидовой Нилуфар Сафаевны на тему: «Значение нейрон-специфической белка енолазы в повреждении нейрональных структур головного мозга при эпилепсии» на соискание ученой степени кандидата медицинских наук по специальности 14.00.13 – Нервные болезни ^ эпилепсия, нейрональное повреждение, сНСЕ. Объекты исследования: Генетическая модель Монгольских хомяков, больные с эпилептическими припадками, здоровые лица. ^ Выявить протеины, свойственные для генетической модели эпилепсии и определить их значение у больных с эпилепсией, в зависимости от частоты, типа и формы заболевания. ^ Иммуногистохимия, иммуноблотинг, масс спектрометрия, клинические, неврологические исследования, нейрофизиологические исследования, oбщеклинические: лабораторный, инструментальные - ЭхоЭС, ЭЭГ, КТ или МРТ головного мозга, биохимические исследования. ^ Впервые экспериментально исследовано изменение экспрессии белков при эпилепсии в генетической модели Монгольских хомяков. Впервые при эпилепсии экспериментально показано выявление в мозге Монгольских хомяков НСЕ указывающая повреждение нейрональных структур головного мозга. Впервые производиться клинико-лабораторное исследование выявления НСЕ как маркер клеточного повреждения у больных с эпилепсией. Впервые показано клинико-лабораторным исследованием определения содержания НСЕ, которое прогностически важно для характеристики тяжести и частоты судорожных припадков при эпилепсии. Впервые показано преимущество диагностических возможностей выявления НСЕ, указывающее на глубину повреждения нейронов головного мозга перед нейровизуализационными методами (КТ, МРТ). ^ Изучение на современном уровне механизмы возникновения повреждения клеточных структур при эпилепсии может явиться основой для дальнейшей оптимизации терапии судорожных припадков. Установленные экспериментально-клинические критерии позволяют прогнозировать характер и длительность течения судорожных состояний и глубины повреждения нервной системы у больных с эпилепсией. Разработанные клинико-лабораторные и экспериментальные методы исследования значительно облегчат задачи специалистов по проведению диагностики и определения степени тяжести заболевания. ^ Данные исследования легли в основу информационного письма «Значение нейрон-специфической енолазы в диагностике эпилепсии» (2011), в которой приводятся практические рекомендации по вопросам диагностике и тактике ведения больных эпилепсией. Основные положения работы используются в педагогической и клинической деятельности на кафедре нервных болезней Ташкентской Медицинской Академии. Результаты исследования внедрены в работу городских поликлинических и стационарных учреждений. ^ Неврология. RESUME Thesis of Rashidova N. S. On the scientific degree competition of the philosophy doctor of medical sciences in 14.00.13 specialty – nervous diseases subject: “The role of a neuron-specific protein enolase in the damage of neural structures of brain at epilepsy”. ^ Epilepsy, neuronal damage, sNSE. Subjects of the inquiry: Genetic model of Mongolian gerbil, patients with epilepsy and healthy people. Aim of the inquiry: To identify the proteins characteristic for the genetic model of epilepsy and to determine their value in patients with epilepsy, depending on the frequency, type and form of the disease. ^ Immunohistochemistry, Western blot, mass spectrometry, ELISA assay, clinic neurological methods, common clinical methods, including laboratory and biochemical methods. The results achieved and their novelty: In the present work we studied, for the first time, changes in protein expression in genetic model of epilepsy in Mongolian gerbil. We found the enhanced expression of NSE in the brain of seizure sensitive group of animals as compared to seizure resistant group. We performed clinical and experimental analysis aimed to test serum NSE as a marker of neuronal damage in patients with epilepsy. It was shown in our work that the level of serum NSE is an informative marker of epilepsy and it may correlate with the frequency of seizures, which may suggest the sNSE may reflect a degree of the brain damage. It was shown as well for the first time that biochemical analysis of sNSE may have an advantage over neurovisualising methods, such as CT and MRI. ^ The understanding of mechanisms of epilepsy-caused neuronal cells damage may create a basis for further optimization of seizure preventing therapy. The experimental and clinical criteria found in the present work allow us to make prognosis about the character and course of seizures as well as estimation of the severity of neural system damages caused by epilepsy. The clinical and experimental methods elaborated in our work may be used in diagnostics of epilepsy and for estimation of a degree of severity of the disease. Degree of embed and economic effectivity: These studies formed the basis of the newsletter "The significance of neuron-specific enolase in the diagnosis of epilepsy" (2011), which provides practical advice on diagnosis and therapy tactics of patients with epilepsy. Main results elaborated methodology of the present work is used in teaching and clinical activities at the Department of Nervous Diseases of the Tashkent Medical Academy. Results of the study are introduced in the work of urban outpatient and inpatient facilities. Sphere of usage: Neurology. |
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям