Хисамова назиля фагильевна иммунологическая реактивность, плоидность и кинетика клеточного цикла клеток периферической крови при различных патологических состояниях у детей
|
|
Скачать 373.11 Kb.
|
|
На правах рукописи ХИСАМОВА НАЗИЛЯ ФАГИЛЬЕВНА ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ РЕАКТИВНОСТЬ, ПЛОИДНОСТЬ И КИНЕТИКА КЛЕТОЧНОГО ЦИКЛА КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЯХ У ДЕТЕЙ 14.00.36 – аллергология и иммунология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук УФА - 2009 Работа выполнена в Государственном учреждении здравоохранения «Республиканская детская клиническая больница» ^ - доктор медицинских наук, профессор Хайруллина Раиса Масгутовна Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Теплова Светлана Николаевна доктор медицинских наук, Азнабаева Лиля Фаритовна ^ - ГОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. академика И.П.Павлова» Росздрава Защита диссертации состоится « ___ » марта 2009 года в .…..часов на заседании Объединенного совета по защите докторских и кандидатских диссертаций ДМ 208.006.05 при ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Росздрава по адресу: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Росздрава, по адресу: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3. Автореферат разослан «____» февраля 2009г. Учёный секретарь диссертационного совета К.А. Лукманова ^ Актуальность проблемы Перспективным направлением клинической иммунологии является комплексный подход к изучению процессов, протекающих в иммунокомпетентных клетках и характеристика взаимосвязей между различными звеньями системы иммунитета. Физиологическое состояние клеток и способность к осуществлению присущих им функций характеризуется, в частности, уровнем ДНК (плоидностью) и показателями кинетики клеточного цикла. Для объективной оценки этих параметров широкое распространение получает проточная цитофлуориметрия, разделом которой является ДНК-цитометрия [Saha I. et al., 2000]. По прогнозам специалистов [Шмаров Д.А., Козинец Г.И., 2004], в самом ближайшем будущем можно ожидать внедрения проточной ДНК-цитометрии в практику работы клинико-диагностических лабораторий. Согласно консенсусу по стандартизации методов проточной цитометрии, созданному по инициативе Совета Европейского Общества Целлюлярной Аналитической Патологии, материалом для определения плоидности клеток и кинетики клеточного цикла могут быть клетки крови, костный мозг, хирургические биоптаты, жидкости тела [Ormerod M.G., Tribukait B., 2001]. К настоящему времени большое количество научных работ посвящено изучению плоидности и кинетики клеточного цикла в биоптатах органов и тканей [Rytwiński K. et al., 1999, 2000; Tsuji Y. et al., 2000; García-Escudero A. et al., 2001; Both C.T. et al., 2001; Wnuk A. et al., 2001; Takes R.P. et al., 2002; Driemel O. et al., 2005]. Наряду с ДНК-цитометрией биоптатов, развивается направление, включающее оценку функционального состояния иммунной системы с использованием качественных параметров клеток, участвующих в иммунном ответе. Так, методом проточной ДНК-цитометрии исследовали функциональное состояние иммунокомпетентных клеток и пролиферативную активность лимфоцитов цельной крови при сочетанной травме. В условиях инкубации с митогенами и специфическими антигенами, было установлено угнетение функции лимфоцитов в первые дни и восстановление пролиферативной активности к четвёртой неделе после травмы [Бычкова Н.В. и др., 2004]. В методическом плане наименьшие сложности возникают при работе с периферической кровью, но исследования в этой области носят фрагментарный характер и в литературе отражены результаты ДНК-цитометрии клеток периферической крови лишь в условиях профессионального длительного радиационного воздействия [Ястребов А.П., Сазонов С.В., 1995]. В отделении клинической иммунологии Республиканской детской клинической больницы с 2002 года внедрено в практику изучение иммунного статуса и функционального состояния клеток на проточном цитофлуориметре, включающее ДНК-цитометрию клеток периферической крови. Комплексные исследования проводятся при хронических инфекционно-воспалительных процессах, новообразованиях, хронических гломерулонефритах на фоне иммуносупрессии, врождённых пороках развития - состояниях, оказывающих влияние на уровень ДНК и клеточный цикл. Несмотря на преимущества проточной цитометрии (высокая точность, быстрота анализа), множество вопросов возникает при изучении функциональной активности клеток периферической крови и особенно процессов пролиферации. В связи с этим, актуальным является определение роли и места проточной ДНК-цитометрии в диагностике и прогнозе различных патологических состояний в педиатрической практике. ^ Определить диагностическое и прогностическое значение ДНК-цитометрии периферической крови в комплексной оценке иммунного статуса и функционального состояния клеток при различных патологических состояниях у детей. ^ 1 Провести клинико-иммунологическое обследование, ДНК-цитометрию клеток периферической крови у здоровых детей, определить корреляционные взаимосвязи между изучаемыми параметрами. 2 Оценить иммунологическую реактивность у детей с врождёнными пороками развития мочеполовой системы, хроническими гломерулонефритами, опухолями головного мозга и острыми лейкозами. 3 Методом ДНК-цитометрии охарактеризовать плоидность и кинетику клеточного цикла клеток периферической крови у детей с врождёнными пороками развития мочеполовой системы, хроническими гломерулонефритами, опухолями головного мозга и острыми лейкозами. 4 Оценить корреляционные взаимосвязи между параметрами, характеризующими иммунный статус и показателями ДНК-цитометрии клеток периферической крови при различных патологических состояниях у детей. ^ Впервые дана характеристика плоидности и кинетики клеточного цикла клеток периферической крови методом проточной ДНК-цитометрии и установлена взаимозависимость между иммунологическими параметрами, показателями ДНК-гистограмм у практически здоровых детей, при хронических инфекционно-воспалительных процессах на фоне врожденных пороков развития мочеполовой системы и хронических гломерулонефритов, иммуносупрессивной терапии, при опухолевой трансформации. ^ Определены области применения ДНК - цитометрии клеток периферической крови при различных патологических состояниях у детей в качестве показателей:
Установлены особенности иммунологической реактивности, проявляющиеся у здоровых детей активацией, а при хронических инфекционно-воспалительных процессах супрессией клеточных эффекторных механизмов иммунной защиты, которые необходимо учитывать при разработке адаптационных норм и назначении иммунокоррекции. ^ Материалы комплексных исследований, включающих показатели ДНК-цитометрии клеток периферической крови и иммунного статуса, используются в работе отделений клинической иммунологии, нефрологии, урологии, онкогематологии, нейрохирургии, отделении гемодиализа и трансплантации почки Республиканской детской клинической больницы, на циклах повышения квалификации врачей клинической лабораторной диагностики Института последипломного образования Башкирского государственного медицинского университета. ^ 1 ДНК-гистограммы клеток периферической крови практически здоровых детей соответствуют диплоидному содержанию ДНК. Основная масса клеток находится в G1 фазе клеточного цикла. Иммунный статус характеризуется высоким уровнем цитотоксических Т-лимфоцитов и естественных киллерных клеток. 2 При врождённых пороках развития мочеполовой системы у детей развивается комплекс иммунопатологических реакций в виде депрессии показателей противовирусной защиты (CD8+; CD16+56+), высокого содержания циркулирующих иммунных комплексов. Компенсированная стадия хронической почечной недостаточности характеризуется диплоидным типом гистограмм, в терминальной стадии выявляется анеуплоидия. 3 Иммунологическая реактивность у больных хроническим гломерулонефритом характеризуется снижением уровня естественных киллерных клеток, высоким содержанием клеток, несущих маркёры активации (CD25+) и циркулирующих иммунных комплексов. При хроническом гломерулонефрите на фоне базисной терапии отмечаются достоверные различия с контрольной группой по показателям кинетики клеточного цикла (фазы пролиферации). 4 К особенностям иммунологической реактивности при опухолях головного мозга относится высокое содержание в крови В-лимфоцитов и клеток, несущих маркеры ранней активации (CD25+), при остром В-лимфобластном лейкозе - В-лимфоцитоз. Доброкачественные и злокачественные новообразования головного мозга характеризуются диплоидным типом гистограмм, анеуплоидия выявляется при остром В-лимфобластном лейкозе. 5 Корреляционным анализом взаимосвязей между параметрами иммунного статуса и показателями ДНК-цитометрии установлены различные типы межклеточной кооперации. ^ Основные положения диссертации обсуждены на научно-практической конференции «Педиатрия в Приволжском Федеральном Округе» (Казань, 2004); научно-практической конференции «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге», (СПб., 2007); Всероссийской научно-практической конференции «Современные аспекты оказания стационарной медицинской помощи детям, новые технологии специализированной медицинской помощи. Роль стационарных детских учреждений в выполнении федеральных программ» (Уфа, 2007). Апробация диссертации проведена на расширенном межкафедральном заседании кафедр лабораторной диагностики ИПО, педиатрии и детской хирургии ИПО, госпитальной педиатрии с курсом поликлинической педиатрии, детской хирургии, ортопедии и анестезиологии ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Росздрава (протокол № 1 от 11.12.2008), на заседании Объединенного совета ДМ 208.006.05 (протокол №1 от 29.01.2009). Публикации По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ, в том числе 3 в изданиях журналов, рекомендованных ВАК. Объём и структура диссертации Диссертация изложена на 123 страницах компьютерного текста и состоит из обзора литературы, пяти глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций. Работа содержит 28 таблиц, 25 рисунков. Список литературы включает 204 источников (106 отечественных и 98 иностранных авторов). ^ Материалы и методы исследования Работа выполнена на базе отделения клинической иммунологии Республиканской детской клинической больницы (г. Уфа). В соответствии с поставленной целью и задачами исследования проводили в несколько этапов. На первом этапе осуществляли клинико-лабораторное обследование практически здоровых детей (контрольная группа, n=30), отвечавших следующим требованиям [Хайруллина Р.М., 1999]: - отсутствие жалоб на нарушения состояния здоровья в момент осмотра; - эпизоды вирусных заболеваний не более 4 раз в течение года; - отсутствие признаков аллергии и другой хронической патологии. Следующим этапом работы было комплексное клинико-лабораторное обследование 84 детей с различными нозологическими формами заболеваний: - врожденные пороки развития мочеполовой системы (ВПРМПС), осложненные пиелонефритом и хронической почечной недостаточностью различной степени тяжести: двухсторонний мегауретер (n=10), гипоплазия (n=5), поликистоз (n=4) или удвоение почек (n=4); - хронический гломерулонефрит (ХГН) (нефротическая и смешанная формы) с начальными признаками нарушений детоксицирующей и выделительной функции почек. Обследование пациентов (n=20) проводили на фоне базисной терапии ХГН, включающей прием гормонов (преднизолон) и цитостатиков (хлорбутин, азатиаприн), механизм иммуносупрессивного действия которых связан с влиянием на пролиферативную фазу иммунного ответа [Цыгин А.Н., Сергеева Т.В., 1998]; - опухоли головного мозга: 10 больных с доброкачественными (краниофарингеома, зрелая тератома), 12 - со злокачественными новообразованиями головного мозга (опухоль лобной доли, III желудочка, медуллобластома, саркома, астроцитома, диффузная глиома ствола мозга). Клинико-иммунологическое обследование проводили до удаления массива опухоли. Злокачественный характер опухоли подтверждался результатами гистологических исследований; - острые лейкозы: 16 больных с острым В-лимфобластным лейкозом (В-ОЛЛ), 3 – с острым миелобластным лейкозом (ОМЛ); обследование проводили в день постановки диагноза до назначения соответствующей терапии. Комплексное обследование больных включало сбор анамнеза, анализ клинических данных, проведение лабораторных исследований. Иммунологическое обследование проводилось с использованием комплекса стандартизированных тестов, включающих оценку: - клеточного звена иммунитета на проточном цитофлуориметре FACSCalibur с программным обеспечением SimulSet c использованием моноклональных антител фирмы Becton Dickinson и определением относительного содержания основных популяций и субпопуляций иммунокомпетентных клеток (CD3+, CD4+, CD8+, CD16+56+, CD19+, CD25+, CD95+, HLA-DR+); - плоидности и кинетики клеточного цикла клеток периферической крови методом проточной ДНК - цитометрии, основанным на связывании ДНК с флуоресцентным зондом - пропидиума йодидом, который позволяет определить долю клеток в различных фазах митотического цикла (G0/1, S и G2+M). Образцы (не менее 20 000 клеток) анализировали на проточном цитофлуориметре, оборудованном модулем дискриминации дуплетов в программе ModFit; - концентрации сывороточных иммуноглобулинов классов А, М, G (Ig A, Ig М, Ig G) определяемых методом радиальной иммунодиффузии в геле [Manchini G. et al.,1965]; - уровня циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) осаждением полиэтиленгликолем (мол. масса –6000) [Имельбаева Э.А. и др., 2006]. Статистическую обработку результатов исследования проводили в операционной среде «Windows-XP» с использованием современных пакетов прикладных программ «STATISTICA 6.0». Для показателей, имеющих нормальное распределение признака, вычислялись среднее арифметическое значение (М) и стандартная ошибка среднего значения (m). Для показателей, не имеющих нормального распределения, вычислялись медиана и интеркартильный размах (25 - 75 перцентили). Достоверность различий оценивалась по критерию Манна-Уитни. Корреляционный анализ выполнялся по методу Спирмена с определением коэффициента ранговой корреляции (rs). Значения р 0,05 приняты статистически значимыми [Гланц С., 1999]. ^ Показатели иммунологической реактивности и ДНК-цитометрии клеток периферической крови у здоровых детей и при различных патологических состояниях. Изучение особенностей иммунологической реактивности при различных патологических состояниях невозможно без чёткого представления о норме. Нормативные показатели для каждого региона формируются при воздействии на организм человека различных внешних факторов. Изучение особенностей иммунологической реактивности практически здоровых детей проводилось в сравнении с нормативными показателями по РФ [Луговская С.А., Морозова В.Т., 2006] (табл. 1). Таблица 1 - Иммунологические показатели практически здоровых детей
*- различие статистически значимо (р0,05) Клеточное звено иммунитета у детей контрольной группы характеризовалось высоким уровнем содержания эффекторных клеток: цитотоксических Т-лимфоцитов (CD8+), естественных киллерных клеток (CD16+56+), а также повышенным количеством клеток, несущих маркёры ранней активации (CD25+). При сравнительной оценке состояния гуморального звена иммунитета в сыворотке крови у здоровых детей было выявлено снижение уровня Ig G. Перечисленные различия, очевидно, являются отражением адаптационных особенностей иммунологической реактивности. Наряду с клинико-иммунологическими исследованиями, у детей контрольной группы была проведена ДНК - цитометрия клеток периферической крови. Как следует из таблицы 2, в 100% случаев выявлялся диплоидный тип гистограмм, причём основная масса клеток (99,86  0,02%) находилась в G0/1-фазе клеточного цикла, т.е. на стадии реализации присущих клетке функций в интересах ткани и организма в целом [Мазурик В.К., 2001].^
Доля клеток в стадии синтеза ДНК (S-фаза) составляла 0,1 0,01%, в фазе G2-М - 0,040,01%. На рисунке 1 представлена типичная гистограмма распределения популяции клеток (46XY) по содержанию ДНК, позволяющая идентифицировать клетки в фазах G0/1 (диплоидные), S (в стадии синтеза ДНК) и G2+М (тетраплоидные и в стадии митоза).  Рисунок 1 - Гистограмма распределения клеток по фазам клеточного цикла в контрольной группе. Одним из основных направлений работы было изучение взаимного влияния иммунных механизмов и функционального состояния клеток периферической крови на клинической модели инфекционно-воспалительного процесса при врождённых пороках развития, хронических гломерулонефритах на фоне иммуносупрессии и опухолевой трансформации. В последние годы в Республике Башкортостан отмечается тенденция к увеличению числа детей, родившихся с пороками развития МПС [Мурзабаева С.Ш., Марданова А.К., и др., 2005]. Учитывая актуальность проблемы, проведено комплексное клинико-иммунологическое обследование больных с различными пороками развития почек и мочевых путей, осложненных пиелонефритом и хронической почечной недостаточностью (ХПН) различной степени тяжести. Согласно классификации Н.А Лопаткина и И.Н. Кучинского (2007) и на основании клинического течения заболевания было выделено две подгруппы детей: у пациентов первой подгруппы была установлена интермитирующая и терминальная стадии ХПН, во 2-ой – латентная и компенсированная. По данным ДНК-цитометрии, в первой подгруппе была выявлена анеуплоидия клеток периферической крови: 40,96% клеток были анеуплоидными, 52,64%- диплоидными. Во второй подгруппе гистограммы характеризовались диплоидным типом (таблица 3). Таблица 3 - Распределение клеток периферической крови у детей с врождёнными пороками развития МПС по плоидности и фазам клеточного цикла
* - различие с контролем статистически значимо (р0,05), ** - различие с контролем статистически значимо (р0,01) При изучении кинетики клеточного цикла было установлено, что основная масса клеток у детей с врождёнными пороками развития МПС находилась в G0/1-фазе клеточного цикла. Пролиферативная активность клеток периферической крови превышала показатели контрольной группы. Так, при диплоидном типе гистограмм доля клеток в S-фазе составила 0,76%, при гиперплоидии - 5,70%. Дети обеих подгрупп на момент обследования не принимали химиопрепараты, способные повлиять на клеточный цикл. Можно предположить, что митогенами для клеток являлись инфекционные агенты. В таблице 4 приведены данные иммунологических показателей у детей обеих подгрупп. Таблица 4 - Сравнительная характеристика иммунологических показателей у детей с врождёнными пороками развития мочеполовой системы
* - различие с контролем статистически значимо (р0,05), ** - различие с контролем статистически значимо (р0,01) В результате сравнительного анализа выявлены однотипные иммунопатологические реакции, а именно: увеличение содержания ЦИК, повышение значений иммунорегуляторного индекса (CD4+/CD8+), низкий уровень цитотоксических Т-лимфоцитов (CD8+), естественных киллерных клеток (CD16+56+). На рисунке 2 представлена гистограмма больного Л. с диагнозом: Нейромышечная дисплазия мочевой системы. Двухсторонний нерефлексирующий мегауретер. Хронический пиелонефрит. Ренальная гипертензия. ХПН, терминальная стадия.
Рисунок 2 - ДНК- гистограмма клеток периферической крови больного Л. Таким образом, у детей с врожденными пороками развития в терминальной стадии хронической почечной недостаточности, выявлялась анеуплоидия клеток периферической крови. После билатеральной нефрэктомии, в отдельных случаях, отмечалась трансформация анеуплоидного типа гистограмм в диплоидный. Возможно, одной из причин выявленного транзиторного изменения плоидности клеток, являлась деструкция почечной ткани, так как проведенными ранее морфологическими исследованиями было установлено наличие деструктивно- дистрофических нарушений в интерстиции почек в терминальной стадии ХПН при врождённых пороках мочеполовой системы [Казанская И.В., 1987]. Важную роль в патогенезе хронических гломерулонефритов играют аутоиммунные и иммунокомплексные процессы. В связи с этим, одной из актуальных проблем детской нефрологии является оценка эффективности иммуносупрессии как необходимого элемента базисной терапии. ДНК- гистограммы периферической крови у детей с хроническим гломерулонефритом в 100% случаях характеризовались диплоидным набором хромосом (таблица 5). Таблица 5 - Распределение клеток периферической крови по плоидности и фазам клеточного цикла у детей с хроническим гломерулонефритом
* - различие с контролем статистически значимо (р0,05), ** - различие с контролем статистически значимо (р0,01) Различия отмечались во всех фазах клеточного цикла, но наиболее значимыми они были в фазах пролиферации (S+G2/M), несмотря на то, что дети получали базисную иммуносупрессивную терапию. Показатели иммунного статуса характеризовались увеличением количества общих Т-лимфоцитов (CD3+ клеток), высоким уровнем маркёра ранней активации (CD25+), низким содержанием иммуноглобулинов класса G, естественных киллерных клеток (CD16+56+) (таблица 6). Таблица 6 - Характеристика иммунологических показателей у детей с хроническими гломерулонефритами
* - различие с контролем статистически значимо (р0,01), ** - различие с контролем статистически значимо (р0,001) Перечисленные особенности иммунологической реактивности и ДНК-цитометрии клеток периферической крови отражают реакцию организма на базисную терапию. Комплексный подход, объединяющий клиническую картину заболевания, иммунологические показатели, кинетику клеточного цикла, позволяет всесторонне оценить активность процесса и эффективность иммуносупрессивной терапии. В структуре летальности от новообразований у детей одно из ведущих мест занимают лейкемии и опухоли головного мозга. Для характеристики иммунологической реактивности и функционального состояния клеток периферической крови в условиях опухолевой трансформации нами проведено комплексное клинико-иммунологическое обследование детей с острыми лейкозами, доброкачественными и злокачественными новообразованиями головного мозга. Группы были подобраны с учётом прямого и опосредованного воздействия опухолевого процесса на клетки периферической крови. По данным ДНК-цитометрии у детей со злокачественными и доброкачественными опухолями головного мозга клетки периферической крови имели диплоидный набор хромосом. Во всех группах наблюдений количество клеток в G0/1 фазе клеточного цикла было достоверно ниже, чем в контроле. Доля клеток в фазе синтеза ДНК, характеризующей пролиферативную активность, превышала данные контрольной группы, и составило 0,16% и 0,20% (таблица 7). Таблица 7 - Распределение клеток периферической крови у детей с опухолями головного мозга и контрольной группы
* - различие с контролем статистически значимо (р0,05) Иммунофенотипирование лимфоцитов методом проточной цитометрии выявило достоверное повышение содержания В-лимфоцитов (CD19+) и высокий уровень клеток с маркёром ранней активации (CD25+) у детей обеих групп. Показатели гуморального звена иммунитета в группе детей с доброкачественными опухолями головного мозга не имели достоверных различий с контролем. У детей со злокачественными новообразованиями отмечалось достоверное, в сравнении с контрольной группой, снижение уровня Ig G (таблица 8). Таблица 8 - Характеристика иммунологических показателей детей с опухолями головного мозга
* - различие с контролем статистически значимо (р0,05), ** - различие с контролем статистически значимо (р0,005) Диагноз острого лейкоза устанавливался на основании клинической картины заболевания, цитоморфологических исследований и иммунофенотипирования бластных клеток костного мозга. У детей с ОМЛ выявлялся диплоидный тип гистограмм. В зависимости от плоидности клеток периферической крови больные с В-ОЛЛ были разделены на две группы: с диплоидным и анеуплоидным типом гистограмм. Результаты ДНК-цитометрии у детей с В-ОЛЛ отражены в таблице 9. При диплоидном типе гистограмм были выявлены достоверные различия по количеству клеток в G0/1 и S-фазах клеточного цикла. Так, в фазе G0/1 находилось 99,00% клеток (в контрольной группе - 99,89%). Доля клеток в S-фазе составила 0,90%, в контроле- 0,10%. При анеуплоидии различия касались лишь количества диплоидных клеток, что составило 80,0%. Таблица 9 - Распределение клеток периферической крови по плоидности и фазам клеточного цикла у детей с острым В-лимфобластным лейкозом
* - различие с контролем статистически значимо (р0,05), ** - различие с контролем статистически значимо (р0,001) В группе с диплоидным типом гистограмм отмечалось снижение уровня IgG, во 2-ой группе достоверных различий с контролем по показателям гуморального звена не выявлено (таблица 10). Показатели клеточного иммунитета в 1-группе характеризовались низким уровнем содержания общих Т-лимфоцитов (CD3+), цитотоксических Т-лимфоцитов(CD8+), ЕКК (CD16+56+) и В-лимфоцитозом (CD19+). При анеуплоидии (2-ая группа), наряду с высоким уровнем В-лимфоцитов, отмечался дефицит естественных киллерных клеток. Таблица 10 - Характеристика иммунологических показателей детей с острым В-лимфобластным лейкозом
* - различие с контролем статистически значимо (р0,05), ** - различие с контролем статистически значимо (р0,001) ^ Для изучения взаимосвязей между различными звеньями системы иммунитета и данными ДНК-цитометрии проведён корреляционный анализ (рисунок 3). В контрольной группе прямые взаимосвязи высокой степени интенсивности установлены между количеством диплоидных клеток, находящихся в G0/1-фазе и количеством CD4+, CD25+-клеток, что, очевидно, отражает нормальное содержание ДНК в клетках-индукторах.  При врождённых пороках развития МПС была выявлена прямая корреляционная зависимость между количеством анеуплоидных клеток и ЕКК (CD16+56+) клетками (rs = 0,94), что мы расценили как высокую степень сопряженности естественных киллерных клеток с феноменом анеуплоидии. Анализ корреляционных связей в популяции Т-лимфоцитов с хелперной активностью (CD4+) позволил сделать вывод о том, что наиболее типичным вариантом для CD4+ клеток является диплоидный набор хромосом, причём большая часть Т-хелперов - индукторов находилась в фазе синтеза ДНК. Особенности кинетики клеточного цикла в группе детей с хроническим гломерулонефритом отражены в корреляционных взаимосвязях между числом диплоидных клеток в G1-фазе и количеством сегментоядерных нейтрофилов (rs =0,71), а также числом диплоидных клеток в S-фазе и содержанием лимфоцитов (rs = 0,79). Исследованиями в области онкологии доказано, что цитотоксические Т-лимфоциты (CD8+), проникая через гематоэнцефалический барьер, вступают в непосредственный контакт с опухолевыми клетками и течение злокачественного процесса зависит, наряду с прочими факторами, от уровня цитотоксической активности иммунокомпетентных клеток [Perrini G., et al. 1999]. Корреляционная матрица в группе больных с опухолями головного мозга, отражающая обратную связь между цитотоксическими Т-лимфоцитами и способностью клеток к пролиферации, по нашему мнению, характеризует клеточные механизмы, обеспечивающие противоопухолевую защиту. Анализ корреляционных взаимосвязей у больных с острыми лейкозами выявил различные типы межклеточной кооперации в зависимости от плоидности клеток. При диплоидном типе гистограмм наиболее выраженной (rs = 0,70) была взаимосвязь между количеством клеток в G1-фазе и цитотоксическими Т-лимфоцитами (CD8+). Высокий уровень сопряжённости между В-лимфоцитами и количеством клеток с анеуплоидией (rs = 0,81), установлен во второй группе, что вполне логично, так как именно эта популяция подвержена неконтролируемой пролиферации при В-ОЛЛ. Таким образом, прикладное значение проведенных комплексных исследований заключается в определении диагностических и прогностических возможностей ДНК - цитометрии клеток периферической крови и установлении взаимосвязей между иммунологическими показателями и функциональными характеристиками клеток у здоровых детей и при различных патологических состояниях. Изучение процессов, протекающих в иммунокомпетентных клетках, включающих определение плоидности и кинетики клеточного цикла, способствует оптимизации диагностики и лечения детей с различными заболеваниями. Результаты проведённых исследований, особенности ДНК-цитометрии периферической крови, внесут свой вклад в формирование лабораторного перечня для характеристики функционального состояния клеток. Выводы 1 ДНК-цитометрия клеток периферической крови у практически здоровых детей характеризуется диплоидным типом гистограмм: (99,86 0,02)% клеток находится в G0/1- фазе, (0,10,01)% в стадии синтеза ДНК (S-фазе), в G2/М - фазе – (0,040,01)%. К особенностям иммунологической реактивности у здоровых детей относится высокий уровень цитотоксических Т-лимфоцитов и естественных киллерных клеток (CD16+56+).2 Иммунопатологические реакции при врождённых пороках развития мочеполовой системы у детей характеризуются снижением цитотоксических Т-лимфоцитов и естественных киллерных клеток, высоким уровнем циркулирующих иммунных комплексов. При хронических гломерулонефритах отмечается снижение количества естественных киллерных клеток, высокое содержание клеток с маркёрами активации (CD25+) и циркулирующих иммунных комплексов. При доброкачественных и злокачественных опухолях головного мозга выявляется высокое содержание В-лимфоцитов и клеток с маркёрами активации (CD25+), при остром В-лимфобластном лейкозе - В-лимфоцитоз (CD19+). 3 ДНК-гистограммы во всех группах наблюдения характеризуются диплоидным типом. Анеуплоидия выявляется у детей с врождёнными пороками развития мочеполовой системы в терминальной стадии хронической почечной недостаточности и остром В - лимфобластном лейкозе. При хроническом гломерулонефрите на фоне базисной терапии отмечаются достоверные различия с контрольной группой по показателям кинетики клеточного цикла (фазы пролиферации). 4 При врождённых пороках развития мочеполовой системы в терминальной стадии хронической почечной недостаточности анеуплоидия сопряжена с естественными киллерными клетками, а при остром В-лимфобластном лейкозе - с В-лимфоцитами. ^ 1 Результаты иммунофенотипирования и ДНК-цитометрии клеток периферической крови в группе здоровых детей рекомендуются в качестве ориентировочных нормативных показателей при сравнительной оценке иммунного статуса и функционального состояния клеток. 2 Рекомендовано включение ДНК-цитометрии клеток периферической крови в иммунологический мониторинг перед трансплантацией почки для исключения анеуплоидии. 3 Мониторинг показателей пролиферативной активности клеток по данным ДНК-цитометрии периферической крови рекомендован в качестве маркера активности процесса и эффективности иммуносупрессивной терапии при хронических гломерулонефритах. ^ 1 ДНК-цитометрия в диагностике лейкозов / З.Р. Хаматдинова, Р.М. Хайруллина, Т.Н. Красавцева, Е.В. Чувилина // Нижегородский медицинский журнал «Здравоохранение Приволжского Федерального Округа». - 2004. - С. 53.2 Проточная цитометрия в диагностике острых лейкозов у детей / Р.М. Хайруллина, З.Р. Хаматдинова, А.Ж. Гильманов, Е.В. Чувилина, Н.Ф. Хисамова // Медицинская иммунология. - 2005. – Т. 7, № 2-3. - С. 212.3 ДНК - цитометрия клеток периферической крови у детей с патологией мочеполовой системы / Н.Ф. Хисамова, З.Р. Хаматдинова, Р.М. Хайруллина, Р.З. Ахметшин // Медицинская иммунология. - 2007. – Т. 9, № 2-3. - С. 343. 4 Иммунофенотипическая характеристика бластных клеток при верификации острых лейкозов / З.Р. Хаматдинова, Р.М. Хайруллина, Н.Ф. Хисамова, Т.Н. Красавцева // Современные аспекты оказания стационарной медицинской помощи детям: материалы Всероссийской научно-практической конференции. - Уфа, 2007. - С. 213. 5 ДНК-цитометрия периферической крови в педиатрической практике / Н.Ф. Хисамова, Р.М. Хайруллина, З.Р. Хаматдинова, А.Ж. Гильманов // Клиническая лабораторная диагностика. - 2007. - № 9 - С. 57. 6 DNA CONTENT IN PERIFERAL WHITE BLOOD CELL AT CONGENITAL URINARY TRACT MALFORMATIONS IN CHILDREN / N. Khisamova, R. Khairullina, Z. Khamatdinova, A. Gilmanov // Laboratorine MEDICINA. - 2008. – Vol. 10: Program and Abstracts 9th Baltic Congress of Laboratory Medicine. - P. 27. ^ РФ – Российская Федерация ХГН – хронический гломерулонефрит ХПН - хроническая почечная недостаточность ВПРМПС – врождённые пороки развития мочеполовой системы ^ кластеры дифференцировки Ig A – иммуноглобулины класса А Ig M - иммуноглобулины класса М Ig G - иммуноглобулины класса G ЦИК – циркулирующие иммунные комплексы ЕКК - естественные киллерные клетки ИКК - иммунокомпетентные клетки СОЭ – скорость оседания эритроцитов В-ОЛЛ - острый В-лимфобластный лейкоз ХИСАМОВА ^ ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ РЕАКТИВНОСТЬ, ПЛОИДНОСТЬ И КИНЕТИКА КЛЕТОЧНОГО ЦИКЛА КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЯХ У ДЕТЕЙ АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук Лицензия на издательскую деятельность ЛР № 021319 от 05.01.99 г. Подписано в печать 25.02.2009 г. Формат 60×84/16. Усл. Печ. Л. 1,04. Уч.-изд. Л. 1,08. Тираж 100 экз. Заказ 104. Редакционно-издательский центр Башкирского государственного университета 450074, РБ, г. Уфа, ул. З. Валиди, 32. Отпечатано на множительном участке Башкирского государственного университета 450074, РБ, г. Уфа, ул. З. Валиди, 32. |
Фазы клет.
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям