|
|
Скачать 410.74 Kb.
|
![]() ![]() ![]() ![]() НАЗВАНИЕ Toxoplasma IgG антитела НАЗНАЧЕНИЕAxSYM Toxo IgG представляет собой тест-систему для количественного определения IgG-антител к Toxoplasma gondii в сыворотке или плазме (с ЭДТА, гепарином или цитратом натрия) методом иммуноферментного анализа на микрочастицах (МИФА). Данная система применяется для определения иммунного статуса и рекомендуется в качестве скрининг теста во время беременности. ^ Toxoplasma gondii является облигатным внутриклеточным паразитом, способным инфицировать разнообразных промежуточных хозяев, включая человека. Зараженные окончательные хозяева (кошки) выделяют с фекалиями ооцисты, которые быстро созревают в почве и становятся инфекционными. При попадании в кишечник промежуточных хозяев они превращаются в тахизоиты, быстро размножаются и образуют цисты, содержащие медленно растущие, но инфекционные брадизоиты. Таким образом, человек заражается токсоплазмозом при попадании в кишечник кошачьих фекалий или съедании непрожаренного мяса, зараженного цистами.2,3 У здорового взрослого человека заболевание обычно протекает бессимптомно. При наличии клинических проявлений, самым частым симптомом является лимфаденопатия, которая может сочетаться со множеством других симптомов, затрудняющих дифференциальную диагностику.4,5 У взрослых со сниженным иммунитетом вследствие противоопухолевой химиотерапии или иммуносупрессивного лечения, а также у пациентов со СПИДом заболевание может протекать тяжело и с летальным исходом. Считается, что у взрослых пациентов с иммунодефицитом заболевание является реактивацией латентной инфекции, при этом обычно поражается центральная нервная система, иногда другие органы.6-9 При острой инфекции у беременной может произойти трансплацентарная передача паразита, приводящая к врожденному токсоплазмозу. Риск заражения плода зависит от периода беременности, в котором протекала острая инфекция у матери. Риск заражения минимален, если женщина болела перед зачатием. Однако с увеличением срока беременности риск врожденного токсоплазмоза возрастает, при этом тяжесть его, наоборот больше, если заражение матери произошло на ранних сроках беременности. Большинство новорожденных, инфицированных внутриутроб-но, при рождении не имеют клинических проявлений заболевания, особенно при болезни матери в третьем триместре, симптомы возникают у них позже.10,11 У 20-30% новорожденных, инфицированных внутриутроб-но, врожденный токсоплазмоз приводит к тяжелым генерализованным или неврологичес-ким заболеваниям, примерно 10% имеют только поражение глаз, а остальные (около 70%) не имеют клинических симптомов при рождении.11,12 Субклиническая инфекция может привести к преждевременным родам и последующим неврологическим, интеллектуальным и слуховым нарушениям.10,13 Проспективные исследования беременных показали, что пренатальная диагностика инфекции с последующим лечением снижает риск и тяжесть врожденного токсоплазмоза.10,14 Для определения инфицирования у беременных из группы риска можно использовать серологические тесты; серонегативным на момент обследования женщинам проводится динамическое наблюдение во время беременности. Сероконверсия указывает на наличие инфекции T. gondii и на срок, в котором произошло инфицирование женщины.10,14,15 Тест-система AxSYM Toxo IgG Antibody предназначена для количественного определения IgG-антител к T. gondii в сыворотке или плазме человека (с ЭДТА, гепарином или цитратом натрия). Наличие, по крайней мере, 3 Международных Единиц антител в 1 мл образца свидетельствует об острой или перенесенной инфекции. ^ В основе теста AxSYM Toxo IgG лежит методика иммуноферментного анализа на микрочастицах (МИФА). Образец и все необходимые для одного теста реагенты набора AxSYM Toxo IgG вносятся с помощью зонда пробоотборника в лунки реакционной ячейки (RV) в дозировочном блоке. Затем RV немедленно переносится в аналитический блок, в котором дальнейшее пипетирование производится с помощью собственного дозатора. Реакции протекают в следующей последовательности: ДОЗИРОВОЧНЫЙ БЛОК
АНАЛИТИЧЕСКИЙ БЛОК
Дополнительную информацию можно найти в Инструкции по эксплуатации системы AxSYM, раздел 3. РЕАГЕНТЫНАБОР РЕАГЕНТОВ. 100 ТЕСТОВ ^
* No. 3B22-66 включает набор реагентов AxSYM Toxo IgG (100 тестов), реакционные ячейки (100 шт.) и матриксные ячейки (100 шт.). No. 3B22-20 включает те же наименования и предназначен для экспорта за рубеж. КАЛИБРАТОРЫ ^ Калибраторы соответствуют Международному Стандарту Всемирной Организации Здравоохранения для антител к T. gondii. 2 Флакона (по 3 мл каждый) с эталонными калибраторами AxSYM Toxo IgG, изготовленными на основе человеческих IgG-антител к T. gondii в рекальцифицированной плазме крови человека, не содержащей поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg), антител к вирусу гепатита С и антител к ВИЧ-1/ВИЧ-2. Выпускаются в следующих концентрациях:
Консервант: азид натрия. ^ Калибраторы соответствуют Международному Стандарту Всемирной Организации Здравоохранения для антител к T. gondii. 6 Флаконов (по 3 мл каждый) с калибраторами Toxo IgG, изготовленными на основе человеческих IgG-антител к T. gondii в рекальцифицированной плазме крови человека, не содержащей поверхностного антигена вируса гепатита В (HВsAg), антител к вирусу гепатита С и антител к ВИЧ-1/ВИЧ-2. Выпускаются в следующих концентрациях:
Консервант: азид натрия. КОНТРОЛИ ^ 2 Флакона (по 5 мл каждый) с Toxo IgG контролем, изготовленными на основе человеческих IgG антител к T. gondii в рекальцифицированной плазме крови человека, не содержащей поверхностных антигенов вируса гепатита В (HВsAg), антител к вирусу гепатита С и антител к ВИЧ-1/ВИЧ-2. Выпускаются в следующих концентрациях с допустимыми отклонениями:
Консервант: азид натрия. ДРУГИЕ РЕАГЕНТЫ ^ 2 флакона (по 220 мл в каждом) раствора для очистки пробоотборника AxSYM, содержащие 2 % тетраэтиламмонийгидроксид (ТЭАГ). ^ 4 флакона (по 230 мл в каждом) раствора 1 (MUP), содержащего 4-метилумбеллиферил-фосфат, 1,2 ммоль/л, в буферном растворе АМФ (аденозин-5'-монофосфат). Консервант: азид натрия. ^ 4 флакона (по 1000 мл в каждом) раствора 3 (для промывки ячеек с матриксом), содержащие 0,3 моль/л хлорида натрия в буферном растворе ТРИС. Консерванты: азид натрия и противомикробные реагенты. ^ (№ 8A46) 1 флакон (10 л) раствора 4 (для разведения при анализе), содержащего 0,1 моль/л фосфатного буферного раствора. Консерванты: азид натрия и противомикробные реагенты. ^ Только для использования при диагностике in vitro. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ПРИ РАБОТЕ
Более подробное описание техники безопасности и мер предосторожности при эксплуатации системы приведено в Руководстве по эксплуатации системы AxSYM, разделы 7 и 8. ^ Упаковку реагентов AxSYM Toxo IgG, калибратор и контроли необходимо хранить при 2 - 8 С (не замораживать). Упаковку реагентов AxSYM Toxo IgG, калибраторы и контроли можно использовать сразу же после извлечения из холодильника. Сразу же после использования калибратор и контроли следует убирать в место, где они хранятся при 2 - 8 С. Упаковка реагентов AxSYM Toxo IgG может находиться в системе AxSYM всего не более 336 часов; например, в течение 42 восьмичасовых рабочих смен. Для обеспечения максимальной стабильности результатов при использовании реагентов в приборе может потребоваться повторная калибровка. Для мониторинга рабочих характеристик реагентов одной и той же партии может потребоваться более частое использования контролей. Дополнительная информация по проверке времени нахождения реагентов в приборе приведена в Руководстве по эксплуатации системы AxSYM, разделы 2, 5 и Приложения. Раствор 1 (MUP) необходимо хранить при 2 - 8 С (не замораживать). Его можно использовать сразу же после извлечения из холодильника. MUP может находиться в системе AxSYM в течение не более 14 дней. Через 14 дней его необходимо выбросить. Раствор AxSYM для очистки пробоотборника, раствор 3 (для промывки ячеек с матриксом) и раствор 4 (для разведения при анализе) необходимо хранить при 15 - 30 С. ^ ИНСТАЛЛЯЦИЯ ФАЙЛА АНАЛИЗА До проведения анализов с помощью AxSYM Toxo IgG необходимо инсталлировать в систему AxSYM файл для анализа AxSYM Toxo IgG с диска с программным обеспечением, номер по каталогу 08В95-02 (для стабильного хранения в приборе в течение 112 часов) или 07D16-01 или более поздний (для стабильного хранения в приборе в течение 336 часов). Соответствующие методики инсталляции описаны в Руководстве по эксплуатации системы AxSYM, раздел 2. ПАРАМЕТРЫ АНАЛИЗА AxSYM Toxo IgG В приведенной ниже таблице представлены используемые по умолчанию значения параметров анализа AxSYM Toxo IgG. Параметры анализа, который можно редактировать, содержат символ (>). Эти параметры можно выводить на дисплей и редактировать с помощью методики, описанной в Руководстве по эксплуатации системы AxSYM, раздел 2. Для получения значений параметров, отмеченных звездочкой (*), обратитесь к конкретному экрану параметров анализа. Для печати значений параметров анализа нажмите PRINT (печать).
![]()
Подробное описание методик работы на приборе приведено в Руководстве по эксплуатации системы AxSYM. ^
ОБЪЕМ ОБРАЗЦА Объем образца, необходимый для проведения в системе AxSYM Toxo IgG одного теста без разведения, зависит от типа используемого контейнера для образца. При использовании чашечек для образцов для проведения теста ROUTINE необходимо 150 мкл, а проведения теста STAT необходимо 83 мкл. Для проведения каждого дополнительного теста на Toxo IgG (ROUTINE или STAT) с тем же контейнером для образца необходимо дополнительно 33 мкл образца. Минимальные объемы чашечки для образца при проведении тестов STAT и ROUTINE рассчитываются системой AxSYM. Они выводятся на экран Orderlist (список заданий) в момент посылки задания на проведение теста (тестов) и печатаются в Orderlist Report (протокол списка заданий). При использовании Host Order Query (запрос на выполнение заданий с главного компьютера) информация на экране Orderlist и Orderlist Report недоступна. Описание режима Host Order Query приведено в Руководстве по эксплуатации системы AxSYM, раздел 5. Если при анализе система настроена на автоматическое повторное тестирование, то в момент посылки задания на проведение теста (тестов) дополнительный объем образца, необходимый для тестирования, на экран Orderlist не выводится. Поэтому полный объем образца должен включать дополнительно 33 мкл образца. Конфигурация автоматического повторного тестирования описана в Руководстве по эксплуатации системы AxSYM, раздел 2. Для получения рекомендованного объема калибраторов и контролей для AxSYM Toxo IgG влейте в каждую соответствующую чашечку образцов по 4 капли каждого калибратора, позитивного или негативного контроля, держа флаконы вертикально. Требования к объему образца для первичных пробирок и аликвотных пробирок и к объемам калибраторов и контролей для нескольких партий реагентов приведены в Руководстве по эксплуатации системы AxSYM, раздел 5. ^ ПРЕДОСТАВЛЯЕМЫЕ МАТЕРИАЛЫ
НЕОБХОДИМЫЕ, НО НЕ ПРЕДОСТАВЛЯЕМЫЕ МАТЕРИАЛЫ
ВНИМАНИЕ:
ПРОЦЕДУРА ПРОВЕДЕНИЯ АНАЛИЗА Разделы 5 и 6 Руководства по эксплуатации системы AxSYM можно без труда отделить от Руководства и держать у прибора. В них приведено подробное описание стадий проведения калибровки и анализа образца. Перед выполнением теста убедитесь в том, что в системе находится достаточное количество реакционных ячеек, ячеек с матриксом и растворов, а уровень отходов является приемлемым. Orderlist Report содержит информацию о расположении образцов и требования к объему чашечек для образцов для всех посланных заданий. При внесении образцов в сегменты для образцов рекомендуется сверяться с этим описанием режима. При использовании Host Order Query список заказанных тестов (Orderlist Report) не доступен. Описание режима Host Order Query приведено в Руководстве по эксплуатации системы AxSYM, раздел 5. ВНИМАНИЕ: При работе системы AxSYM всегда выполняйте следующие требования:
^ Для определения Toxo IgG антител в образцах пациентов, в которых концентрация антител превышает 300 МЕ/мл, можно проводить автоматическое разведение образцов. Требуемый объем образца составляет 150 мкл. Система AxSym автоматически рассчитывает концентрацию разведенного образца и сообщает результат. Дополнительная информация по разведению образцов содержится в инструкции по эксплуатации системы AxSym, раздел 5. ^ КАЛИБРОВКА Тест AxSYM Toxo IgG следует калибровать с помощью либо эталонного (Мастер) калибратора (по 2 точкам) или стандартного калибратора (по 6 точкам). Использование конкретной калибровки зависит от индивидуальных правил лаборатории. ^ Каждая упаковка с реагентом AxSYM Toxo IgG поставляется со вкладышем, снабженным штрих-кодовой меткой, содержащей информацию по эталонной калибровочной кривой для данной конкретной партии реагента. При использовании данной партии реагентов в первый раз необходимо ввести информацию об эталонной калибровочной кривой в систему AxSYM. Для более подробной информации о введении штрих кодов с эталонной калибровочной кривой обращайтесь к инструкции по эксплуатации системы AxSYM, раздел 6. После введения данной штрих кодовой информации система автоматически производит эталонную калибровку теста. Для проведения эталонной калибровки аналитической системы AxSYM Toxo IgG необходимо дважды протестировать эталонные калибраторы 1 и 2. Для оценки калибровки анализа необходимо протестировать по одному образцу негативного и позитивного контролей Toxo IgG. ^ Для проведения стандартной калибровки аналитической системы AxSYM Toxo IgG не нужен предварительный ввод штрих кодовой информации об эталонных калибраторах. Для этого необходимо дважды протестировать стандартные калибраторы A,B,C,D,E и F теста AxSYM Toxo IgG. Для оценки калибровки анализа необходимо протестировать по одному образцу негативного и позитивного контролей Toxo IgG. После принятия результатов калибровки AxSYM Toxo IgG и их запоминания все последующие образцы можно тестировать без проведения калибровки за исключением случаев, когда:
В Руководстве по эксплуатации системы AxSYM, раздел 6, приведена информация о:
Система AxSYM проверяет, соответствуют ли результаты калибровки системы анализа спецификациям, заданным для выбранных параметров достоверности. Если результат калибровки не соответствует спецификациям, выводится сообщение об ошибке. Корректировочные действия, которые необходимо предпринять при сообщениях об ошибках, описаны в Руководстве по эксплуатации системы AxSYM, раздел 10. Описание параметров достоверности, которые может использовать система AxSYM, приведено в Руководстве по эксплуатации системы AxSYM, Приложение Е. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА Рекомендованный режим контроля для анализа AxSYM Toxo IgG заключается в тестировании одного образца позитивного и негативного контролей каждые 8 часов для каждого дня использования. Контроли можно установить в любом положении карусели для образцов. Если принятые в Вашей лаборатории методы контроля требуют более частого использования контролей, соблюдайте требования этих методов. Убедитесь в том, что значения для контролей, используемых при анализе AxSYM Toxo IgG, соответствуют диапазонам концентраций, заданных в разделе РЕАГЕНТЫ, КОНТРОЛИ данной инструкции, вложенной в упаковку. ^ Если значение для негативного или позитивного контролей Toxo IgG выходят за установленный диапазон, это может указывать на порчу реагентов или неисправность аппаратуры. Соответствующие результаты анализов могут оказаться неправильными, и потребуется повторное тестирование. Может потребоваться повторная калибровка системы анализа. Дополнительная информация по обнаружению и устранению неисправностей приведена в Руководстве по эксплуатации системы AxSYM, раздел 10. Система AxSYM обладает возможностью строить зависимость Levey-Jennings при каждом проведении контроля качества анализа. Обратитесь к Руководству по эксплуатации системы AxSYM, раздел 5. По усмотрению лаборатории результаты контроля качества можно оценивать с помощью отобранных правил контроля качества. КРИТЕРИИ ПРИЕМЛЕМОСТИ ФОНОВОЙ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ Контроль качества холостой пробы субстрата MUP прибор выполняет автоматически и проверка происходит в соответствии с Параметром анализа 64, Max Intercept-Max MUP Intercept [(Максимальный отрезок, отсекаемый на оси ординат)-(Максимальный отрезок для MUP, отсекаемый на оси ординат)], при каждом расчете результатов теста. Если значение MUP Intercept превышает максимальное допустимое значение, то результат считается неправильным. Запрос на тестирование перемещается в Exceptions List (список исключений), в котором он выводится с сообщением “1064 Invalid test result, intercept too high” и рассчитанным значением отрезка, отсекаемого на оси ординат. Если выводится это сообщение об ошибке, обратитесь к Руководству по эксплуатации системы AxSYM, раздел 10.Дополнительная информация об этом параметре приведена в Руководстве по эксплуатации системы AxSYM, раздел 2. РЕЗУЛЬТАТЫРАСЧЕТЫ Система AxSYM Toxo IgG использует поточечную обработку данных для создания стандартной калибровочной кривой, а также позволяет получить соотношение А для создания эталонной калибровочной кривой, специфичной для данного инструмента. ^ Для некоторых результатов информация может появляться в поле флажков. Описание результатов, помеченных флажком, содержится в Инструкции по эксплуатации системы AxSYM, разделы 1 и 2. ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ Образцы, в которых концентрация IgG-антител (AxSYM Toxo IgG) к T. gondii < 2 МЕ/мл расцениваются как отрицательные. Образцы, в которых концентрация IgG-антител (AxSYM Toxo IgG) к T. gondii 3 МЕ/мл расцениваются как положительные, что свидетельствует об острой или перенесенной инфекции. Образцы, в которых концентрация IgG-антител (AxSYM Toxo IgG) к T. gondii 2 МЕ/мл и 3 МЕ/мл считаются сомнительными (серая зона). Образцы, интерпретируемые как сомнительные (серая зона), могут содержать низкий уровень IgG. Необходимо повторное обследование пациента. ^
^ Частота обнаружения IgG-антител к T. gondii варьирует в зависимости от возраста исследуемой популяции и географической области. В данном исследовании обследовали 900 беременных и 500 случайно выбранных индивидов. В 601 (42,9%) случае результат анализа AxSYM Toxo IgG был положительным, в 22 (1,6%) — сомнительным и в 777 (55,5%) — отрицательным. Результаты отображены на рисунке 1. ^
СПЕЦИФИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ АНАЛИЗА ВОСПРОИЗВОДИМОСТЬ Воспроизводимость анализа исследовали в соответствии с протоколом EP5-T2.20 Национального комитета по клиническим лабораторным стандартам (NCCLS). В трех лабораториях (I, II, III) двукратно, дважды в сутки (с промежутком между сериями не менее двух часов) в течение двадцати дней (итого 80 раз для каждой панели и контрольных образцов) тестировали тринадцать панелей сыворотки и плазмы, а также отрицательный контроль и положительный контроль. Использовали одинаковые наборы реагентов и единую систему калибровки. Общую и серийную воспроизводимость оценивали по показателям стандартного отклонения (SD) для каждой панели и контроля и коэффициенту вариации (%CV) для каждой положительной панели и положительного контроля. Результаты исследования воспроизводимости отражены в таблице 1 этого раздела, из них видно, что воспроизводимость результатов (для тестируемых панелей, отрицательного и положительного контроля) оказалась допустимой. Таблица 1 ВОЗПРОИЗВОДИМОСТЬ АНАЛИЗА AxSYM Toxo IgG ^
^
^
^
^
^
^
^
^
^
^
^
^
^
^
Н/Р — расчет не проводился ОТНОСИТЕЛЬНАЯ СОГЛАСОВАННОСТЬ Анализ на наличие IgG-антител к Toxoplasma gondii с помощью методики AxSYM Toxo IgG на материале 1400 образцов проводился в двух (лаборатории I и II) американских и одной (лаборатория IV) европейской лабораториях. Дополнительно каждый образец исследовался с помощью официально зарегистрированной ИФА тест-системы. Из 1400 исследованных образцов в 21 случае результат оказался сомнительным при использовании AxSYM, в 13 — при использовании ИФА, в 1 — при использовании обеих аналитических систем. Относительная согласованность составила 99,3% (1356/1365) (95%-ный доверительный интервал: 98,8%-99,7%) (таблица 2). ОТНОСИТЕЛЬНАЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ Из 1400 исследованных образцов 590 оказались положительными при использовании ИФА. При использовании AxSYM Toxo IgG 581 образец оказался положительным, и 2 — отрицатель-ными. Относительная чувствительность составила 99,7% (581/583) (95%-ный довери-тельный интервал: 98,8%-100%) (таблица 2). ОТНОСИТЕЛЬНАЯ СПЕЦИФИЧНОСТЬ 796 из 1400 исследованных образцов оказались отрицательными при использовании ИФА. При использовании AxSYM Toxo IgG 14 результатов оказались сомнительными, 775 отрицательными и 7 — положительными. Относительная специ-фичность составила 99,1% (775/782) (95%-ный доверительный интервал 98,2%-99,6%) (таблица 2). ПРИМЕЧАНИЕ: Образцы с сомнительным результатом при использовании ИФА и/или AxSYM Toxo IgG не учитывались при расчете относительной корреляции, относительной чувствительности или относительной специфич-ности. ПРИМЕЧАНИЕ: 9 образцов с неопределенными результатами анализировали дополнительно с использованием 2-х других официально зарегистрированных методик. Из 2-х образцов, положительных в ИФА, но отрицательных в AxSYM Toxo IgG, после подтверждающего анализа 1 образец был расценен как положительный. Из 7 образцов, отрицательных в ИФА, но положительных в AxSYM Toxo IgG, после подтверждающего анализа 6 были расценены как отрицательные. ^
ПРИМЕЧАНИЕ: В лаборатории IV исследовали образцы 30 пациентов с сероконверсией. В 26 из 30 случаев образцы, положительные при использовании теста Sabin-Feldman Dye, оказывались положительными и при использовании AxSYM Toxo IgG Antibody. При сравнении с тестом Dye, методика ИФА дала положительный результат только в 15 из 30 случаев. Специфичность анализа AxSYM Toxo IgG Antibody исследовали дополнительно на материале 201 образца, в которых были выявлены антиядерные антитела, LE-клетки, ревматоидный фактор, вирус простого герпеса, вирус Эпштейна-Барра, вирус кори, парвовирус, вирус герпеса зостер, иммуноглобулинемия G или М, а также после применения противогрип-позной вакцины. В этих образцах согласованность ИФА и AxSYM Toxo IgG Antibody составила 99,5% (200/201). Дополнительно исследовали влияние на результаты разных эндогенных параметров, которые могут встречаться в обычной практике. Следующие показатели не оказывали влияния на результат исследования с помощью AxSYM Toxo IgG: гемоглобин 1000 мг/дл, билирубин 20 мг/дл, триглицериды 2000 мг/дл, общий белок 10 г/дл и эритроциты 0,4%. |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||