Правила совпадения аллелей в генотипах родственников Существуют следующие
|
|
Скачать 60.52 Kb.
|
|
Методы установления родства при проведении генетических анализов Правила совпадения аллелей в генотипах родственников Существуют следующие правила для генотипов родственных лиц по хромосомным локусам в случае отсутствия мутаций - Для аутосом, вне зависимости от пола: в генотипе ребенка по любому локусу один из аллелей всегда совпадает с одним из аллелей в генотипе биологического отца по данному локусу, а другой аллель всегда совпадает с одним из аллелей в генотипе биологической матери по данному локусу. ^ : в генотипе ребенка по любому локусу X-хромосомы один из аллелей всегда совпадает с аллелем в генотипе биологического отца по данному локусу, а другой аллель всегда совпадает с одним из аллелей в генотипе биологической матери по данному локусу. ^ : в генотипе ребенка по любому локусу X-хромосомы аллель (он единственный, так как у мужчин, как уже упоминалось, в ядрах клеток в норме находится одна X-хромосома) всегда совпадает с одним из аллелей в генотипе биологической матери по данному локусу. ^ : генотип ребенка всегда совпадает с генотипом биологического отца. Для митохондриальной ДНК, вне зависимости от пола: генотип (митотип) ребенка всегда совпадает с генотипом (митотипом) биологической матери. ^ Генетический анализ родства основан на изложенных выше принципах и заключается в получения генотипов лиц, участвующих в исследовании и анализе полученных генотипов на предмет соответствия проверяемой степени родства. Нуклеотидная последовательность ДНК остается неизменной в течение всей жизни человека, поэтому генетический анализ родства может быть проведен в любое время, независимо от возраста исследуемых лиц. Суть методики генетического исследования биологического родства сводится к поиску и анализу совпадающих аллелей. Действительно, при различных степенях родства родственники либо должны иметь общие аллели во всех исследуемых локусах, либо вероятность обнаружения общих аллелей у родственников выше, чем у неродственных лиц. При выявлении противоречия с законами передачи наследственной информации делается вывод об исключении родства. Согласованность анализируемых генотипов и предполагаемого родства может быть обусловлена как истинным родством, так и случайностью. По этой причине в случае, когда генетические данные свидетельствуют в пользу родства, проводятся вероятностные расчеты для оценки достоверности полученного положительного заключения. Если уровень достоверности превышает требуемое минимальное значение, делается вывод об истинном родстве. Конечно, вероятность случайного совпадения генетических признаков для одного локуса сравнительно высока, однако современные системы, использующие десятки локусов, позволяют достигать уровня достоверности 99,99 % и выше. ^ При установлении родства могут использоваться различные системы генетических маркеров. Главное, чтобы входящие в систему локусы были полиморфными, то есть имели несколько аллелей в популяции человека. Чем больше аллелей существует у данного локуса, тем меньше вероятность случайного совпадения аллелей у неродственных лиц и тем больше этот локус подходит для задач установления родства. В разное время для этих целей использовались системы основанные на:
Наиболее адекватным и информативным на сегодня является использование метода полимеразной цепной реакции (ПЦР). При использовании данного метода число копий определенных участков молекулы ДНК увеличивается в сотни миллионов раз, что позволяет непосредственно определить генотип человека по конкретному локусу, например при помощи электрофореза. На Рис. 1А показана динамика относительного использования различных систем генетических маркеров для установления родства в США с 1990г. по 2004 г. по данным Американской ассоциации банков крови (AABB). Как видно из рисунка, к 2004 году почти 100% анализов проводилось методом ПЦР с использованием аутосомных маркеров. Рис. 1А. Доля использования различных систем генетических маркеров при проведении исследований по установлению родства в США.  ^ В настоящее время для установления биологического родства почти повсеместно используются так называемые STR-локусы. Аббревиатура STR происходит от английского словосочетания Short Tandem Repeat – дословно: короткий тандемный повтор. Локусы данного типа представляют собой цепочки, состоящие из небольших, длиной 2-5 нуклеотидов, одинаковых последовательностей (мономеров) или «повторов». Аллели данных локусов различаются между собой количеством этих повторов. STR-локусы имеют следующие преимущества:
Методы типирования STR-локусов Получение генотипов исследуемых лиц осуществляется следующим образом:
На Рис. 2 показан фрагмент электрофореграммы амплифицированных аллелей двух локусов лиц, участвующих в анализе на установление отцовства (AF – предполагаемый отец, C – ребенок, M – мать) и двух аллельных леддеров (дорожки L1 и L2). Отрезками красного цвета на рисунке соединены полосы, соответствующие фрагментам молекул ДНК одинаковой длины.  Из рисунка 2 видно, что в локусе, данные о котором расположены в верхней части электрофореграммы, один из аллелей в генотипе ребенка (161 пара нуклеотидов (п.н.)) совпадает с одним из аллелей в генотипе матери, а другой (149 п.н.) с одним из аллелей в генотипе предполагаемого отца. Во втором локусе аллель размером 108 п.н. совпадает с одним из аллелей в генотипе матери, а аллель размером 98 п.н. совпадает с одним из аллелей в генотипе предполагаемого отца. Как видим, генотипы ребенка, матери и предполагаемого отца по двум рассмотренным локусам удовлетворяют описанным выше правилам совпадения аллелей для родственников, то есть свидетельствуют в пользу истинного отцовства предполагаемого отца в отношении ребенка. В настоящее время разработаны и являются общедоступными специальные коммерческие наборы реактивов, предназначенные для амплификации аллелей стандартных STR-локусов (см. системы STR-локусов аутосом и системы STR-локусов Y-хромосомы). Данные наборы предназначены для использования совместно с существующими аппаратно-программными комплексами, с помощью которых осуществляется автоматическое разделение и идентификация аллелей. На Рис. 3 показан пример представления результатов типирования исследуемых лиц аппаратно-программным комплексом ^ , выпускаемым фирмой Applied Biosystems, для трех STR-локусов (D3S1358, TH01, D21S11). В верхнем ряду данных в виде пиков представлена панель аллельных леддеров трех локусов с указанием аллелей, соответствующих каждому пику. Во втором, третьем и четвертом рядах показаны результаты разделения и идентификации аллелей по исследуемым локусам для предполагаемого отца, матери и ребенка соответственно. Например, для локуса D3S1358 получены следующие генотипы: предполагаемый отец – (15,18), мать – (14,18), ребенок – (18,18). Числовые обозначения аллелей соответствуют количеству содержащихся в них повторов.  Материал взят с сайта http://www.dnalab.ru/ |
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям