Трансплантация аутологичных клеток костного мозга для лечения длительно незаживающих язв желудка 14. 00. 41 трансплантология и искусственные органы 14. 00. 16 патологическая физиология icon

Трансплантация аутологичных клеток костного мозга для лечения длительно незаживающих язв желудка 14. 00. 41 трансплантология и искусственные органы 14. 00. 16 патологическая физиология





НазваниеТрансплантация аутологичных клеток костного мозга для лечения длительно незаживающих язв желудка 14. 00. 41 трансплантология и искусственные органы 14. 00. 16 патологическая физиология
страница1/3
Аскаров Манарбек Бапович
Дата04.04.2013
Размер0.76 Mb.
ТипАвтореферат
  1   2   3
На правах рукописи


Аскаров Манарбек Бапович


ТРАНСПЛАНТАЦИЯ АУТОЛОГИЧНЫХ КЛЕТОК КОСТНОГО МОЗГА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ДЛИТЕЛЬНО НЕЗАЖИВАЮЩИХ ЯЗВ ЖЕЛУДКА


14.00.41 – трансплантология и искусственные органы

14.00.16 – патологическая физиология


Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

доктора медицинских наук


Москва - 2009

Работа выполнена в ФГУ Научно-исследовательский институт трансплантологии и искусственных органов Росмедтехнологий


^ Научные консультанты:

А
Валерий Иванович Шумаков
кадемик РАН и РАМН,

доктор медицинских наук, профессор


доктор медицинских наук, профессор Нина Андреевна Онищенко


^ Официальные оппоненты:


доктор медицинских наук Сергей Николаевич Шурыгин


доктор медицинских наук,

профессор Геннадий Николаевич Сушкевич


доктор медицинских наук,

профессор Игорь Михайлович Ильинский


Ведущее учреждение: ФГУ Научно-исследовательский институт физико-химической медицины Росздрава


Защита состоится «___»____________ 2009 г. в 14.00 часов на заседании Диссертационного совета Д. 208.055.01 при ФГУ НИИ трансплантологии и искусственных органов Росмедтехнологий по адресу: 123182, Москва, ул. Щукинская, дом 1.


С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ НИИ трансплантологии и искусственных органов Росмедтехнологий.


Автореферат разослан: «___»_____________2009 г.


Ученый секретарь

Диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессор Ольга Павловна Шевченко

ВВЕДЕНИЕ

В последние 10-15 лет в связи с развитием клеточных технологий и пробудившимся в мире интересом к регенерационным свойствам стволовых клеток костного мозга, появилась возможность их легитимного применения у больных с тяжелой хронической патологией. Клеточные биотехнологии стали использовать для лечения острой и хронической сердечной недостаточности [Шумаков В.И и др., 2003, 2004; Assmus B. et al., 2002], ряда гнойно-септических и аутоиммунных заболеваний [Витязев Г.А., 1993; Шумаков В.И и др., 1995, 1998; Онищенко Н.А и др., 2006], острой и хронической печеночной недостаточности разного генеза [Parekkadan B. et al., 2007], длительно незаживающих язв, ран и ожогов [Колосов Н.Г и др., 2000; Расулов М.Ф., 2007; Badiavas E. et al., 2003] и др.

Для клеточной трансплантации используют гемопоэтическую или стромальную фракции клеток аутологичного костного мозга (КМ), которые содержат стволовые и прогениторные клетки [Kusmartsev S. et al., 1998; Terrazas L. et al., 2001; Caplan A. et al., 1997]. Эффективность гемопоэтических клеток КМ обусловлена иммунорегуляторной активностью, выделяемых ими биорегуляторных пептидов [Terrazas L. et al., 2001]. Эффективность стромальной фракции клеток КМ, обусловлена не только тем, что эти клетки секретируют широкий спектр цитокинов и ростстимулирующих факторов, но и тем, что являясь предшественниками мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК), они способны активно пролиферировать в культуре, дифференцироваться в мезенхимальные клетки других фенотипов и непосредственно участвовать в процессах восстановительной регенерации поврежденных тканей [Потапов И.В и др., 2005; Amado L. et al., 2005; Parekkadan B. et al., 2007; Caplan A. et al., 2008]. Кроме того, известно, что ММСК КМ могут участвовать в регуляции дифференцировки Т-клеток, вызывают супрессию пролиферации эффекторных клеток (цитотоксических Т-лимфоцитов, натуральных киллеров), а также, ограничивают дифференцировку дендритных клеток [Fallarino F. et al., 2002; Aggarwal S., 2005], способствуя ингибированию системной воспалительной реакции. Именно благодаря регуляторным эффектам пептидов, продуцируемых клетками КМ, оказалось оправданным их применение при лечении многих хронических заболеваний, сопровождающихся угнетением репаративных процессов, иммунной дизрегуляцией и развитием вторичного иммунодефицита [Шумаков В.И и др., 2004; Расулов М.Ф., 2007; Parekkadan B. et al., 2007].

К таким заболеваниям относится и язвенная болезнь (ЯБ) желудка и двенадцатиперстной кишки (ДПК), поиск путей повышения эффективности лечения которой является по – прежнему актуальной задачей современной медицины, ибо ЯБ остается одним из самых распространенных и социально значимых хронических рецидивирующих заболеваний желудочно– кишечного тракта по срокам временной и стойкой нетрудоспособности больных [Ивашкин В.Т., 2004., Васильченков А.В., 2006; Захараш М.П и др., 2009].

При ЯБ желудка и ДПК имеет место местный иммунный дисбаланс, в результате чего начинает реализовываться патогенное действие Helicobacter pylori (Hp), которые часто (до 80-90%) бессимптомно инфицируют слизистую желудка и ДПК [Мансуров Х.Х., 2005; Васильченков А.В., 2006; Borody T., 2002], но в условиях иммунодефицита предопределяют хроническое течение заболевания [Логинов А.С., 1998; Циммерман Я.С., 2000].

Пораженная ткань в области язвенного дефекта настолько изменяет индивидуальную биологическую принадлежность, что приобретает свойства аутоантигена [Чернин В.В., 2000], а в условиях иммунодефицита становится фактором активизации и прогрессирования аутоиммунных процессов, отягощающих течение заболевания и развитие осложнений [Кириченко Б.Б., 1990]. Дизрегуляция иммунной системы поддерживает деструктивно-воспалительные изменения в зоне язвенного дефекта и ингибирует пролиферативно-репаративную фазу регенераторного процесса, что связано с нарушением не только синтеза структурных белков, но и синтеза молекул межклеточного взаимодействия (пептиды) [Потапова В.Б., 2004]. В этой связи, для улучшения результатов лечения через устранение дизрегуляции иммунной системы при ЯБ стали использовать пептиды селезенки, доставляемые в организм больного путем экстракорпорального подключения донорской свиной селезенки (ЭКПДС) или в виде нативных пептидов из селезенки свиньи (Спленопид) [Васильченков А.В., 2006] и клеток КМ (Миелопид) [Михайлова Л.П., 1998]. Однако экстракорпоральное подключение донорской селезенки свиньи связано с организационными трудностями заготовки донорского материала, а также с иммунологическими проблемами и опасностью переноса трудно диагностируемых инфекций у животных. Применение нативных пептидов (Спленопид, Миелопид) ограничивается их ксенногенным происхождением, а также необходимостью курсового применения препаратов, производство которых имеет ограниченные масштабы и пока не может обеспечить потребности всех больных. Кроме того, все еще присутствует опасность переноса трудно диагностируемых инфекций.

Для клеточной терапии ЯБ желудка и ДПК использовали также трансплантацию фетальных клеток печени, селезенки и тимуса [Стрункин Д.Н. и др. 2000]. Однако применение фетальных клеток остается нелегитимным в связи с нерешенностью этических и юридических проблем забора и использования этого материала.

Выше изложенные ограничения побудили нас для стимуляции устойчивого заживления хронических язв желудка через регуляцию местных и системных иммунных механизмов репаративного морфогенеза – использовать регенерационные возможности стволовых клеток, и прежде всего, ММСК КМ, из-за возможности их легитимного и аутологичного применения.

Однако, приступая к этим исследованиям, мы не обнаружили работ, касающихся применения клеток аутологичного костного мозга для лечения длительно незаживающих язв желудка. Кроме того, мы не только не обнаружили сведений о влиянии клеток костного мозга на состояние показателей иммунного (цитокинового) статуса организма и на связь иммунного (цитокинового) дисбаланса с состоянием регенераторных процессов в слизистой оболочке желудка, но и не обнаружили адекватной модели аутоиммунных длительно незаживающих язв желудка для изучения этих вопросов.

Отсутствие в литературе выше указанных сведений и важность учета их для разработки эффективной терапии длительно незаживающих язв желудка позволили нам сформулировать цель и задачи настоящего исследования.

^ Цели и задачи исследования

Цель исследования – изучить и обосновать целесообразность трансплантации в слизистую оболочку желудка мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток и фракции мононуклеарных клеток аутологичного костного мозга для обеспечения устойчивой регенерации длительно незаживающих язв желудка

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Создать модель длительно незаживающей аутоиммунной язвы желудка и изучить иммунопатологические механизмы развития язвенной болезни, а также выбрать наиболее информативные показатели для контроля эффективности клеточной терапии длительно незаживающих язв желудка.

2. Отработать технологию выделения клеток из аутологичного костного мозга, идентифицировать в культуре получение мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК) и показать целесообразность их предварительного культивирования у животных с хроническими язвами желудка для восстановления функциональной и биорегуляторной активности этих клеток.

3. Изучить особенности процессов репаративной регенерации длительно незаживающих аутоиммунных язв желудка (ДНЯЖ) при трансплантации мультипотентных мезенхимальных стромальных и мононуклеарных клеток (МНК) аутологичного костного мозга.

4. Показать на моделях ДНЯЖ взаимосвязь активизации регенераторных процессов в язве желудка с присутствием в ней трансплантированных клеток. 5. Изучить влияние ММСК костного мозга на состояние микроциркуляторного русла, содержание биологически активных веществ (ПГЕ2) и циклических нуклеотидов, а также на апоптоз эпителиоцитов в слизистой оболочке желудка при ДНЯЖ и клеточной терапии.

6. Установить влияние клеток аутологичного костного мозга на коррекцию иммунного (цитокинового) статуса и восстановление морфофункциональных компартментов органов иммуногенеза (тимуса и селезенки) у животных с длительно незаживающими аутоиммунными язвами при клеточной терапии.

7. Установить предпочтительность использования прекультивированных мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток перед мононуклеарными клетками аутологичного костного мозга в качестве более эффективного средства патогенетической терапии у больных с длительно незаживающими аутоиммунными язвами желудка и двенадцатиперстной кишки.

^ Научная новизна

В настоящей работе, выполнявшейся в рамках программы «Клеточные технологии – медицине» по заданию Росздрава (регистрационный номер – 01.2.00 305442) впервые представлены патогенетически обоснованные результаты применения прекультивированных клеток аутологичного костного мозга для эффективного лечения длительно незаживающих аутоиммунных язв желудка.

Впервые разработана модель аутоиммунной длительно незаживающей язвы желудка, позволяющая изучить иммунопатологические механизмы развития хронической язвы в слизистой оболочке желудка и влияние на них клеточной терапии.

Впервые в эксперименте для ускоренного заживления аутоиммунных ДНЯЖ применены культуры мультипотентных мезенхимальных стромальных и мононуклеарных клеток аутологичного костного мозга и выявлена предпочтительность (более высокая эффективность) ММСК.

Показано, что при использовании клеток аутологичного костного мозга при лечении ДНЯЖ необходимо проводить предварительное культивирование этих клеток для восстановления их биорегуляторной активности, ингибированной хроническим заболеванием. Установлен оптимальный срок культивирования ММСК костного мозга (9-12 суток), при котором восстанавливается до нормы цитокиновый баланс и пролиферативная активность клеток. С помощью рекомбинантного аденовирусного вектора (содержащего LacZ ген E.coli), внедренного в клетки (аутологичные ММСК) на этапе культивирования, доказано, что ускорение темпа регенерации ДНЯЖ после трансплантации клеток костного мозга связано с присутствием и функционированием (продукция факторов роста, цитокинов) их в зоне язвенного дефекта (в сроках не менее 30 суток).

Установлено, что аутологичные прекультивированные ММСК КМ, трансплантированные в зону язвенного дефекта, ускоряют процессы регенерации ДНЯЖ (сокращение сроков и выраженности деструктивно-воспалительной фазы и активизация пролиферативно-регенераторной фазы язвенного процесса) и это происходит за счет усиления ангиогенеза, улучшения микроциркуляции, активизации регуляции в системе «простагландины–циклические нуклеотиды» и ингибирования процессов клеточного апоптоза.

Показано, что ММСК и МНК костного мозга устраняют иммунный (цитокиновый) дисбаланс в организме и восстанавливают морфофункциональные компартменты органов иммуногенеза (тимус и селезенка), дисфункция которых развивается при хронической длительно незаживающей аутоиммунной язве желудка и становится фактором ее хронического течения. На клиническом и экспериментальном биопсийном материале иммуногистохимически и электронно–микроскопически подтвержден цитотоксический эффект лимфоцитов (CD8+;CD16+) в отношении фибробластов собственной пластинки слизистой оболочки желудка и установлено снижение активности молекулярного маркера иммунорегуляторных клеток–FOXP3, что подтверждает важное патогенетическое значение глубокой иммунной дизрегуляции в организме при развитии ДНЯЖ.

^ Практическая значимость работы

Разработана модель аутоиммунной длительно незаживающей язвы желудка у крыс, на которой могут быть изучены иммунопатологические механизмы развития хронических язв желудка, типичных для патологии человека. Разработанная модель может быть использована для скрининга медикаментозных препаратов, пригодных для лечения язв желудка, а также для разработки оптимальных режимов применения клеточной терапии.

Установлена необходимость и оптимальные сроки прекультивирования клеток костного мозга при аутологичном применении для эффективного лечения ДНЯЖ. Показано, что аутологичный костный мозг после предварительной подготовки может служить источником оптимального биоматериала для эффективной клеточной терапии ДНЯЖ, так как клетки костного мозга, особенно ММСК, продуцируют широкий спектр разнообразных биорегуляторных пептидов и факторов роста и способны возместить дефицит их регуляторных функций в организме у больных с длительно незаживающими аутоиммунными язвами.

Показана необходимость включения в комплексную терапию язвенной болезни иммунокорректоров, так как доказано, что в патогенезе ДНЯЖ иммунопатологические (аутоиммунные) механизмы занимают ведущую роль.

^ Основные положения, выносимые на защиту

- Предварительное культивирование клеток костного мозга in vitro – важный этап подготовки клеток при проведении клеточной терапии хронической длительно незаживающей аутоиммунной язвы желудка, так как устраняет дисрегуляторное влияние на них хронического патологического процесса и восстановливает биорегуляторную активность.

- Культивированные in vitro и трансплантированные в слизистую оболочку желудка аутологичные ММСК или МНК КМ, ускоряют процессы регенерации ДНЯЖ за счет быстрой смены фаз язвенного процесса: сокращения сроков и выраженности деструктивно-воспалительной фазы и активизации пролиферативно-регенераторной фазы язвенного процесса, что обусловлено длительным (30 суток – срок исследования) функционированием трансплантированных клеток в зоне язвенного дефекта.

- Трансплантированные клетки костного мозга (ММСК и МНК) способствуют эффективной регенерации ДНЯЖ путем усиления процессов ангиогенеза и улучшения микроциркуляции в слизистой оболочке желудка, восстановления регуляции иммунного (цитокинового) гомеостаза в организме и местной регуляции системы «простагландины – циклические нуклеотиды», а также ингибирования апоптоза эпителиоцитов.


^ Внедрение результатов работы

Разработанная модель экспериментальной язвы желудка с аутоиммунным компонентом и технология приготовления водно–солевого антигена для ее моделирования внедрены и используются в научно – исследовательской работе: лаборатории патологической физиологии ГУ ЦНИИ гастроэнтерологии Департамента здравоохранения г. Москвы; в лаборатории иммуноморфологии воспаления ГУ НИИ морфологии человека РАМН, г.Москва; в лаборатории клеточных технологий ГУН Центр биомедицинских технологий РАМН, г.Москва. Результаты экспериментальной работы используются в лекционном курсе на кафедре трансплантологии и искусственных органов ММА им. И.М. Сеченова, а также приняты за основу при разработке медицинских клеточных технологий для лечения больных с язвенной болезнью в ГУ ГКБ им. С.П.Боткина Департамента здравоохранения г. Москвы.

^ Апробация диссертации

Апробация работы состоялась 7 октября 2008 года на межлабораторной конференции в ФГУ НИИ трансплантологии и искусственных органов Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи.

Основные положения работы доложены и обсуждены: на Международной конференции «Новые технологии в трансплантации фетальных клеток и их медиаторов» (Казахстан, г. Астана, ноябрь 2005г.); на 7съезде Научного общества гастроэнтерологов России (г. Москва, март 2007г.); на Научной конференции «Клеточные технологии в травматологии и ортопедии» (г. Москва, апрель 2007); на Ежегодной Всероссийской и международной научной конференции «Стволовые клетки и перспектива их использования в здравоохранении» (г. Москва, май 2007); на 8 съезде Научного общества гастроэнтерологов России (г. Москва, март 2008); на 15 Национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (г. Москва, апрель 2008); на Ежегодной Всероссийской и международной научной конференции «Стволовые клетки и перспектива их использования в здравоохранении» (г. Москва, май 2008); на Всероссийской школе-конференции «Аутологичные стволовые и прогениторные клетки: экспериментальные и клинические достижения» (г.Москва, июнь 2008); на Всероссийской конференции с международным участием «Инновационные технологии в трансплантации органов, тканей и клеток», посвященной 25-летию Самарского банка тканей и 45-летию ЦНИЛ СамГМУ (г.Самара, июнь 2008); на 4 Всероссийском съезде трансплантологов памяти академика В.И.Шумакова (г. Москва, 9-10 ноября 2008); на 9 съезде Научного общества гастроэнтерологов России (г. Москва, 2-5 марта 2009).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 35 работ, в том числе 10 работ в центральной печати и 2 главы в монографии. По теме диссертации получены решения о выдаче патентов на 2 изобретения: № 2007128128/14 (030617) от 11.11.2008г и № 2007128125/14 (030614) от 09.02.2009г.


Объем и структура работы

Диссертация изложена на 251 странице компьютерного текста. Состоит из введения, 8 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка цитированной литературы (492 источника, из них 277 – отечественных и 215 – зарубежных). Работа иллюстрирована 61 рисунком и 17 таблицами.


^ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Общая характеристика экспериментального и

клинического материала

Экспериментальный раздел работы выполнен на 687 лабораторных животных: 670 крысах-самцах Вистар массой 250-300г, а также на 17 трансгенных мышах B 10. GFP, которых содержали в виварии ФГУ НИИТ и ИО Росмедтехнологий при свободном доступе к пище и воде, на рационе питания, соответствующем нормативам ГОСТа.

Экспериментальный раздел состоит из 3-х основных частей (табл. 1). В 1 части работы проводилась отработка методов культуральных исследований и моделирования ДНЯЖ. Во 2 части работы была дана цитохимическая характеристика фенотипических свойств культур, подготовленных и использованных для трансплантации. В 3 разделе работы производили изучение патогенетических нарушений при развитий ДНЯЖ и процессов репаративной регенерации этих язв с помощью клеток КМ. В 1 разделе работы было выполнено 5 групп исследований: отрабатывалась технология получения первичных культур МНК и ММСК и выбор сроков их прекультивирования; отрабатывалась техника мечения ММСК в культуре; идентификация пригодности использования флуоресцирующих ККМ от трансгенных мышей В. 10 GFP; отрабатывалась технология приготовления водно-солевого антигена и моделирования с его помощью длительно незаживающих аутоиммунных язв желудка. Всего в 1 разделе работы было использовано 552 животных. Во 2 разделе работы была дана цитоморфологическая и цитохимическая характеристика клеток, подготовленных для трансплантации: ММСК КМ, ММСК, меченых геном LacZ и ММСК от трансгенных мышей В. 10 GFP, содержащих ген зеленого белка. Всего во втором разделе работы было израсходовано 60 животных. В 3 разделе работы было выполнено 3 группы исследований: определение сроков формирования монослоя при культивировании ММСК от животных с ДНЯЖ, а также выявление терапевтических эффектов аутологичных мононуклеарных клеток и ММСК при лечении животных с ДНЯЖ.


Таблица 1. Распределение животных (крысы Вистар и мыши B 10.GFP), по разделам экспериментальной работы



^ Разделы работ


Выполненные исследования



Вид животных


Всего

1

Отработка методов культуральных исследований и моделирования ДНЯЖ


Получение и ведение первичных культур ММСК КМ и их прекультивирование

Крысы-самцы, мыши B 10.GFP

30

7

Получение и ведение первичных культур МНК КМ и их прекультивирование

Крысы-самцы

30

Отработка техники мечения ММСК КМ в культуре и способов идентификации клеток

Крысы-самцы, мыши B 10.GFP

35

10

Приготовление водно-солевого антигена для моделирования ДНЯЖ

Крысы-самцы

350

Моделирование ДНЯЖ и изучение иммунопатогенетических механизмов их формирования*

Крысы-самцы

90

2

Изучение фенотипических характеристик клеточных культур in vitro и жизнеспособности клеток in vivo после трансплантации


Характеристика мезенхимальных клеточных культур для определения степени их зрелости

Крысы-самцы

25

Идентификация ММСК, маркированных LacZ геном и ММСК от трансгенных мышей, содержащих ген GFP, в культуре и в зоне язвенного дефекта после трансплантации


Крысы-самцы, мышиB10.GFP

35

15**

3

Изучение процессов регенерации и устранения патогенетических нарушений ДНЯЖ на фоне клеточной терапии

Изучение сроков формирования монослоя ММСК КМ при ДНЯЖ

Крысы-самцы

30

Трансплантация суспензий ММСК КМ в зону язвенного дефекта

Крысы-самцы

30

Трансплантация суспензий МНК КМ в зону язвенного дефекта



Крысы-самцы

15

Итого:

687

*- Исследование проводилось параллельно и на биопсийном материале от больных с ДНЯЖ

**- Были использованы мыши из первого раздела работы



При моделировании ДНЯЖ и лечении этих язв клетками аутологичного костного мозга всего было израсходовано 100 крыс. Распределение животных в группах при лечении ДНЯЖ прекультивированными МНК и прекультивированными ММСК, представлено в таблице 2.

Таблица 2. Распределение крыс Вистар при клеточной терапии ДНЯЖ


^ Группы исследований

Серии выполненных экспериментов

Расход животных

Включено в стат. обработку

1

Трансплантация суспензии ММСК КМ в зону ДНЯЖ


ДНЯЖ без применения клеточной терапии (введение физиологического раствора)

20

19

ДНЯЖ с трансплантацией суспензии ММСК КМ

30

28


2

Трансплантация суспензии МНК КМ в зону ДНЯЖ



ДНЯЖ без применения клеточной терапии (введение физиологического раствора)

20

20

ДНЯЖ с трансплантацией суспензии МНК КМ

30

29




Всего:

100

96


Приготовленные суспензии клеток МНК и ММСК, во всех сериях опытов трансплантировали периульцерозно в 4 равноудаленные точки в количестве 6 млн. и 4 млн. клеток в 0,5 мл. физиологического раствора, соответственно на 35- 40 сутки после моделирования аутоиммунных ДНЯЖ и визуального подтвердждения формирования язвенного дефекта. Контролем служило обкалывание язвенного дефекта 0,5 мл 0,9% NaCl.

Животных выводили из эксперимента на 10, 20 и 30 сутки после трансплантации клеток и соответственно в эти же сроки изучали динамику заживления язвенного дефекта, а также проводили оценку эффективности клеточной терапии ДНЯЖ.

Для иммунопатогенетической характеристики аутоиммунных длительно незаживающих язв желудка, а также оценки эффективности используемой терапии аутологичными прекультивированными МНК и ММСК КМ, нами было проведено 8 серий исследований с использованием комплекса морфологических, иммуногистохимических, биохимических и физиологических методов исследования, перечень и количество которых представлены в таблице 3.


Таблица 3. Исследования иммунопатогенетических механизмов развития ДНЯЖ и их коррекция путем трансплантации ККМ в эксперименте на животных



^ Серии выполненных работ


Методика исследования

Количество исследований, провед-ых на 150 животных

1. Гистологическое исследование СОЖ при формировании ДНЯЖ и при ДНЯЖ+ККМ

Окраска гематоксилином и эозином

246

2. Исследование цитокинового статуса организма

ИФА с использованием тест-систем «Diamed» Швейцария .

190

3. Исследование системы «простагландины-циклические нуклеотиды»

Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии

ИФА с помощью тест-систем «R&D Systems» США

45

4. Исследование апоптоза эпителиоцитов СОЖ

Иммуногистохимическое исследование с помощью моноклональных антител к каспазе-9,«Novocastra» США

20

5. Исследование морфофункционального состояния органов иммуногенеза (тимус и селезенка)



Окраска гематоксилином и эозином

Морфометрическое исследование компартментов методом точечного счета с помощью сетки Автандилова

45



6. Исследование цитотоксического эффекта лимфоцитов в СОЖ



Электронно-микроскопическое исследование зоны язвенного дефекта

15

7. Исследование микроциркуляции в зоне язвенного дефекта

Лазерная допплеровская флоуметрия


197

8. Исследование динамики заживления язвенного дефекта

Метод планиметрии


100

Всего:

948
  1   2   3

Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:

Похожие:

Трансплантация аутологичных клеток костного мозга для лечения длительно незаживающих язв желудка 14. 00. 41 трансплантология и искусственные органы 14. 00. 16 патологическая физиология iconТрансплантация аутологичных клеток костного мозга для коррекции патогенетических нарушений при аутоиммунном

Трансплантация аутологичных клеток костного мозга для лечения длительно незаживающих язв желудка 14. 00. 41 трансплантология и искусственные органы 14. 00. 16 патологическая физиология icon«Использование мезенхимальных стволовых и прогениторных клеток костного мозга для разработки новых

Трансплантация аутологичных клеток костного мозга для лечения длительно незаживающих язв желудка 14. 00. 41 трансплантология и искусственные органы 14. 00. 16 патологическая физиология iconРегуляция иммунного гомеостаза при трансплантации аутологичных клеток костного мозга кардиохирургическим

Трансплантация аутологичных клеток костного мозга для лечения длительно незаживающих язв желудка 14. 00. 41 трансплантология и искусственные органы 14. 00. 16 патологическая физиология iconМетодические рекомендации для самостоятельной работы студентов Тема: Трансплантация костного мозга.

Трансплантация аутологичных клеток костного мозга для лечения длительно незаживающих язв желудка 14. 00. 41 трансплантология и искусственные органы 14. 00. 16 патологическая физиология iconИзолированная и сочетанная трансплантация почки и поджелудочной железы 14. 00. 41 трансплантология

Трансплантация аутологичных клеток костного мозга для лечения длительно незаживающих язв желудка 14. 00. 41 трансплантология и искусственные органы 14. 00. 16 патологическая физиология iconХроническая дисфункция трансплантированной почки: морфологическая картина, особенности течения, подходы

Трансплантация аутологичных клеток костного мозга для лечения длительно незаживающих язв желудка 14. 00. 41 трансплантология и искусственные органы 14. 00. 16 патологическая физиология iconСтимуляция ангио/миогенеза при сердечно-сосудистой патологии с использованием генной терапии и аутотрансплантации

Трансплантация аутологичных клеток костного мозга для лечения длительно незаживающих язв желудка 14. 00. 41 трансплантология и искусственные органы 14. 00. 16 патологическая физиология iconПрограмма-минимум кандидатского экзамена по специальности 14. 00. 41 «Трансплантология и искусственные
В основу настоящей программы положены следующие разделы современной трансплантологии: трансплантационная...
Трансплантация аутологичных клеток костного мозга для лечения длительно незаживающих язв желудка 14. 00. 41 трансплантология и искусственные органы 14. 00. 16 патологическая физиология iconМинимизация иммуносупрессии при трансплантации почки 14. 01. 24. трансплантология и искусственные

Трансплантация аутологичных клеток костного мозга для лечения длительно незаживающих язв желудка 14. 00. 41 трансплантология и искусственные органы 14. 00. 16 патологическая физиология iconКлинические и хирургические аспекты трансплантации почки от живого родственного донора 14. 00. 41

Разместите кнопку на своём сайте:
Медицина


База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2019
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
Документы