Иммуногенетические параметры, изменения клинико-лабораторных показателей и их коррекция при атопическом дерматите у детей раннего возраста
|
|
Скачать 0.5 Mb.
|
|
На правах рукописи Галанина Алёна Васильевна ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ, ИЗМЕНЕНИЯ КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ И ИХ КОРРЕКЦИЯ ПРИ АТОПИЧЕСКОМ ДЕРМАТИТЕ У ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА 14.00.09 – педиатрия Автореферат диссертации на соискание учёной степени доктора медицинских наук Пермь – 2008 г. Работа выполнена в ГОУ ВПО «Кировская государственная медицинская академия» и ФГУ «Кировский научной-исследовательский институт гема-тологии и переливания крови» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Научные консультанты: доктор медицинских наук, профессор Иллек Ян Юрьевич доктор медицинских наук, профессор Зайцева Галина Алексеевна Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Аверьянова Наталья Ивановна доктор медицинских наук, профессор Марушков Владимир Иванович доктор медицинских наук, профессор Санникова Наталья Евгеньевна Ведущая организация: Российский государственный медицинский университет. Защита диссертации состоится «_____» _____________2008 г. в ______ часов на заседании диссертационного совета Д.208.067.02 при ГОУ ВПО «Пермс-кая государственная медицинская академия имени академика Е.А. Вагнера» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию по адресу: 614990, г. Пермь, ул. Куйбышева, 39. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия имени академика Е.А. Вагнера» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию по адресу: 614990, г. Пермь, ул. Коммунистическая, 26. Автореферат разослан «__» _____________2008 г. Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук Щекотов В.В. ВВЕДЕНИЕ Актуальность проблемы. Атопический дерматит является самым рас-пространённым и самым ранним проявлением аллергии у детей. В большин-стве случаев заболевание начинается в первые месяцы жизни, проявляется хроническим аллергическим воспалением кожи и вовлечением в процесс многих органов и систем, трудно поддаётся лечению. Дети с атопическим дерматитом отличаются склонностью к возникновению инфекционного пора-жения кожи, заболеваний ЛОР-органов и респираторной системы, приблизи-тельно у трети больных формируется бронхиальная астма. В этой связи необ-ходимо дальнейшее изучение предрасполагающих и причинно-значимых факторов, механизмов патогенеза и особенностей клинического течения, внедрение в практику более совершенных методов диагностики, новых более эффективных методов лечения и профилактики атопического дерматита у де-тей раннего возраста. В развитии атопического дерматита ведущая роль принадлежит эндо-генным факторам – наследственной предрасположенности, атопии, гиперре-активности кожи. Реализации генетической предрасположенности к форми-рованию атопического дерматита способствуют воздействия различных фак-торов внешней среды. Дебют атопического дерматита у детей первого года жизни связан чаще всего с пищевой аллергией (Студеникин М.Я., Балабол-кин И.И., 1998; Гомберг М.А. с соавт., 1998; Ладодо К.С. с соавт., 1998; Бара-нов А.А., Балаболкин И.И., 2006), но в последующих обострениях заболевания этиологическую значимость также приобретают бытовые, клещевые, эпидермальные, пыльцевые, грибковые, бактериальные и вирусные аллергены (Ревякина В.А., 1993; Мазурин Н.А. с соавт., 1996; Казначеева Л.Ф., 1999; Балаболкин И.И. с соавт., 2006; Armerding D. с соавт., 1993), воздействие которых через повреждённую кожу может быть весьма интенсивным. У детей с атопическим дерматитом выявляются изменения иммунологической реактивности, нейро-эндокринные нарушения, расстройство обмена веществ и дисфункция органов пищеварения (Торопова Н.П., Синявская О.А., 1993; Вельтищев Ю.Е., Святкина О.Б., 1995; Балаболкин И.И., 1996, 1998; Корюкина И.П. с соавт., 1997; Смирнова Г.И., 1998; Иллек Я.Ю. с соавт., 2003; Ковязина Н.А., 2005; Федосимова Н.А., 2006; Шутова О.В., 2006; Балаболкин И.И., 2006; Высотина А.В., 2007), что поддерживает хроническое течение заболевания. В последние годы достигнут определённый прогресс в изучении меха-низмов развития атопического дерматита, уточнены клинико-лабораторные критерии тяжести течения, внедрены новые технологии лечения обострений заболевания и программы профилактической терапии. Современное комлекс-ное лечение детей с атопическим дерматитом основано на создании гипоал-лергенных условий быта и назначении гипоаллергенной диеты с исключени-ем из рациона индивидуально непереносимых продуктов, тщательном лечеб-но-косметическом уходе за кожей, использовании противовоспалительных, антимедиаторных и иммуномодулирующих препаратов, коррекции нарушен-ного метаболизма (Балаболкин И.И., 1998; Гомберг М.А. с соавт., 1998; Ревя-кина В.А. с соавт., 1999; Короткий Н.Г. с соавт., 2000; Научно-практическая программа «Атопический дерматит у детей: диагностика, лечение и профи-лактика», 2000; Рахманова Л.К., 2002; Согласительный документ Ассоциации детских аллергологов и иммунологов России «Современная стратегия тера-пии атопического дерматита: программа действий педиатра», 2004; Делягин В.М., Румянцев А.Г., 2004; Макарова И.В., 2005; Балаболкин И.И. с соавт., 2006). Но, несмотря на большое количество исследований, посвящённых изу-чению проблемы атопического дерматита, остаются недостаточно изученны-ми иммуногенетические параметры, характер иммунных, эндокринных и ферментных нарушений у детей раннего возраста с тяжёлым течением забо-левания. Вместе с тем, известно, что современная комплексная терапия дале-ко не всегда обеспечивает наступление продолжительной клинической ре-миссии у больных младенческой формой тяжёлого распространённого атопи-ческого дерматита. В литературе последних лет приведены данные о высокой терапевти-ческой эффективности при тяжёлом атопическом дерматите у детей раннего возраста иммуномодуляторов нового поколения – имунофана и полиоксидо-ния (Леушина Н.П., 1998; Швецова Н.В., 2002; Иллек Я.Ю. с соавт., 2003, 2004, 2005; Шутова О.В., 2006; Высотина А.В., 2007), обладающих противо-воспалительным, детоксикационным, иммунокоррегирующим, мембраноста-билизирующим и антиоксидантным свойствами. Вместе с тем, приведен ма-териал о высокой терапевтической эффективности магнитоинфракрасного лазерного излучения у детей раннего возраста с тяжёлым атопическим дерма-титом (Иллек Я.Ю. с соавт., 2005; Ковязина Н.А., 2005; Федосимова Н.А., 2006; Высотина А.В., 2007), которое оказывает противовоспалительное, про-тивоотёчное, аналгезирующее, иммуномодулирующее, мембраностабилизи-рующее и антиоксидантное действия, улучшает крово- и лимфообращение, стимулирует репаративные процессы. Представленные выше данные литературы и результаты собственных клинических наблюдений и специальных исследований послужили основани-ем для определения цели и формулирования задач настоящей работы. ^ Изучить клинические проявления, иммуногенети-ческие параметры, иммунные, эндокринные и ферментные нарушения у де-тей раннего возраста с тяжёлым течением распространённого атопического дерматита, разработать более эффективные методы комплексного лечения больных с применением иммуномодуляторов нового поколения и магнито-инфракрасной лазерной терапии. ^ 1) уточнить факторы, предрасполагающие к развитию атопического дерматита, изучить клинические проявления и сдвиги лабораторных показа-телей у детей раннего возраста с тяжёлым течением распространённого ато-пического дерматита; 2) исследовать особенности распределения антигенов главного комп-лекса гистосовместимости, их внутрилокусных и межлокусных комбинаций у больных младенческой формой тяжёлого распространённого атопического дерматита; 3) изучить показатели иммунологической реактивности, функциональ-ное состояние эндокринных и пищеварительных желез при младенческой форме тяжёлого распространённого атопического дерматита в периодах обо-стрения и клинической ремиссии заболевания; 4) сравнить влияние современной общепринятой терапии и комплекс-ного лечения в сочетании с иммуномодуляторами нового поколения (имуно-фан, полиоксидоний) на клиническое течение, состояние иммунитета, функ-циональное состояние эндокринных и пищеварительных желез у больных тя-жёлым распространённым атопическим дерматитом; 5) дать сравнительную оценку влияния общепринятой терапии и комп-лексного лечения в сочетании с магнитоинфракрасным лазерным излучени-ем на клиническое течение, состояние иммунологической реактивности, функцию эндокринных и пищеварительных желез у больных тяжёлым рас-пространённым атопическим дерматитом; 6) провести катамнестическое наблюдение детей раннего возраста с тя-жёлым распространённым атопическим дерматитом, получавших общепри-нятое лечение, и детей с тяжёлым распространённым атопическим дермати-том, получавших комплексное лечение в сочетании с иммуномодулирующей и магнитоинфракрасной лазерной терапией. ^ - у детей раннего возраста с тяжёлым течением распространённого ато-пического дерматита выявлялась ассоциативная связь с антигенами главного комплекса гистосовместимости, их внутрилокусными и межлокусными соче-таниями; - у детей раннего возраста с тяжёлым течением распространённого ато-пического дерматита в периоде обострения заболевания отмечались выра-женные сдвиги клинико-лабораторных показателей, параметров иммунологи-ческой реактивности, функционального состояния эндокринных и пищевари-тельных желез; - у больных младенческой формой тяжёлого распространённого атопи-ческого дерматита, получавших комплексную общепринятую терапию, на-ступала непродолжительная клиническая ремиссия, во время которой сохра-нялись значительные сдвиги параметров периферической крови и иммуноло-гической реактивности, изменения функционального состояния эндокринных и пищеварительных желез; - включение иммуномодуляторов нового поколения и магнитоинфра-красной лазерной терапии в комплексное лечение больных младенческой формой тяжёлого распространённого атопического дерматита приводило к наступлению длительной клинической ремиссии, нормализации или выра-женной тенденции к нормализации показателей периферической крови и им-мунологической реактивности, функционального состояния эндокринных и пищеварительных желез. ^ Подтверждено существование ассоциативной связи атопического дерматита с иммуногенетическими параметрами, выявлены особенности распределения антигенов главного комплекса гистосовместимо-сти, их внутрилокусных и межлокусных комбинаций при младенческой фор-ме тяжёлого распространённого атопического дерматита. Изучены сдвиги клинико-лабораторных показателей, параметры иммунологической реактив-ности, функциональное состояние щитовидной железы, коры надпочечников и инкреторного аппарата поджелудочной железы, функциональное состояние желудка, экзосекреторного аппарата поджелудочной железы, печени и ки-шечника у детей с тяжёлым распространённым атопическим дерматитом в периодах обострения и клинической ремиссии заболевания. Впервые прове-дена сравнительная оценка влияния современной общепринятой терапии и комплексного лечения в сочетании с имунофаном, полиоксидонием и магни-тоинфракрасным лазерным излучением на клинико-лабораторные показатели и параметры иммунологической реактивности, показатели функционального состояния эндокринных и пищеварительных желез у больных младенческой формой тяжёлого распространённого атопического дерматита. Впервые ис-следован противорецидивный эффект имунофана, полиоксидония и магнито-инфракрасной лазерной терапии у детей раннего возраста с тяжёлым течени-ем распространённого атопического дерматита. ^ Выявленные особенности распределения антигенов главного комплекса гистосовместимо-сти, их внутрилокусных и межлокусных комбинаций у детей раннего возрас-та с тяжёлым распространённым атопическим дерматитом позволяют с из-вестной долей вероятности выявлять предрасположенность к заболеванию и прогнозировать тяжесть его течения, они могут быть использованы в качест-ве иммуногенетического маркера болезни. Исследованы особенности клини-ко-лабораторных и иммунологических параметров, функционального состоя-ния эндокринных и пищеварительных желез у детей с младенческой формой тяжёлого распространённого атопического дерматита в периодах обострения и клинической ремиссии заболевания, влияние современного общепринятого лечения, иммуномодулирующей терапии и магнитоинфракрасного лазерного излучения на указанные показатели у этих больных. Установлено, что вклю-чение имунофана, полиоксидония и магнитоинфракрасной лазерной терапии в комплексное лечение больных младенческой формой тяжёлого распростра-нённого атопического дерматита способствовало более быстрой положитель-ной динамике клинических показателей, обеспечивало нормализацию гемо-граммы и большинства параметров иммунологической реактивности, норма-лизацию функции эндокринных желез и выраженную тенденцию к нормали-зации функции пищеварительных желез, снижение тяжести течения и значи-тельное увеличение продолжительности клинической ремиссии заболевания. Высокие клинический, иммуномодулирующий и противорецидивный эффек-ты, безопасность и доступность, отсутствие осложнений и побочных реакций позволили рекомендовать широкое использование иммуномодуляторов ново-го поколения и магнитоинфракрасного лазерного излучения в комплексном лечении детей раннего возраста с тяжёлым течением распространённого ато-пического дерматита. Материал клинических наблюдений и специальных исследований ис-пользуется в практической деятельности врачей Кировского областного дет-ского консультативно-диагностического центра, областной и городской дет-ских клинических больниц г. Кирова, в учебном процессе на педиатрическом факультете и в институте последипломного образования Кировской государ-ственной медицинской академии. ^ Результаты клинических наблюдений и специальных исследований доложены и обсуждены на VIII Международной научной конференции «Здоровье семьи – XXI век» (Гоа, Ин-дия, 2004), II Всемирном конгрессе по иммунопатологии и аллергии (Москва, 2004), II Всероссийской научно-практической конференции «Здоровье и об-разование» (Пермь, 2004), научно-практической конференции «Состояние окружающей среды и здоровье детей» (Ижевск, 2005), IX Международной научной конференции «Здоровье семьи – XXI век» (Далянь, Китай, 2005), Республиканской научной конференции «Иммунология репродукции» (Ива-ново, 2005), заседании проблемной комиссии «Охрана материнства и детст-ва» Кировской государственной медицинской академии (2007). По теме диссертации опубликовано 28 работ. ^ Диссертация включает следующие разде-лы и главы: «Введение», «Обзор литературы», «Материал и методы исследо-вания», три главы, посвящённые результатам собственных клинических на-блюдений и специальных исследований, «Заключение», «Выводы», «Практи-ческие рекомендации», «Список литературы». Материал диссертации изло-жен на 202 листах машинописи, содержит 25 таблиц и 40 рисунков, 5 приме-ров из числа собственных клинических наблюдений, список литературы включает 269 названий работ отечественных (215) и иностранных (54) авто-ров. ^ Для достижения цели и решения задач, поставленных в работе, были проведены клинические наблюдения и специальные исследования с примене-нием общеклинических, клинико-лабораторных, биохимических, инструмен-тальных и аллергологических методов, выполненных в кабинетах и лаборато-рии Кировской областной детской клинической больницы (главный врач А.В. Терёхин), являющейся клинической базой кафедры детских болезней (заведующий – профессор Я.Ю. Иллек) Кировской ГМА. Иммуногенетичес-кие и иммунологические исследования выполнялись в лаборатории иммуно-гематологии (руководитель – профессор Г.А. Зайцева) Кировского НИИ ГиПК. Под нашим наблюдением в период с 2002 по 2007 г. находилось 418 де-тей восточнославянской принадлежности (259 мальчиков и 159 девочек) в во-зрасте от 8 месяцев до 2 лет с тяжёлым течением распространённого атопи-ческого дерматита. У наблюдаемых больных атопическим дерматитом (АД) изучали дан-ные анамнеза и общеклинические показатели, проводили электрокардиогра-фические и ультразвуковые исследования, оценивали результаты кожных ал-лергопроб, исследовали особенности распределения антигенов главного ком-плекса гистосовместимости, их внутрилокусных и межлокусных комбина-ций, параметры иммунологической реактивности, показатели функциональ-ного состояния щитовидной железы, коры надпочечников и инкреторного аппарата поджелудочной железы, определяли содержание гидролаз и амино-трансфераз в сыворотке крови, моче и кале, функциональную активность ге-мо-гистоцитарных барьеров по отношению к пищеварительным ферментам. Обследование больных атопическим дерматитом и все лечебные мероприя-тия проводили с согласия родителей. Распределение наблюдаемых больных атопическим дерматитом в зави-симости от характера исследований и проводимого лечения представлено в таблице 1. ^ в клиническое исследование включались больные младенческой формой тяжёлого распространённого атопического дерматита. Критерии исключения из исследования: в клини-ческие исследования не включались больные атопическим дерматитом с при-знаками врождённых дефектов развития, рахита, клинических проявлений неврологической и эндокринной патологии, декомпенсированного дисбактериоза кишечника; интеркуррентных инфекционных заболеваний в периоде обострения у наблюдаемых пациентов не регистрировалось. Группы больных атопическим дерматитом были сопоставимы по возрасту и полу, выраженности клинических проявлений заболевания, месту фак-тического проживания, этнической принадлежности. Число больных в груп-пах было достаточным для сравнения эффективности предлагаемых про-грамм лечения. Общеклинические, электрокардиографические, ультразвуковые и гема-тологические исследования проводили у больных атопическим дерматитом общепринятыми методами. Результаты исследования показателей перифери-ческой крови у 145 пациентов сравнивали с данными, полученными у 80 практически здоровых детей того же возраста. Постановку кожных скарификационных аллергопроб с бытовыми, эпи-дермальными и пыльцевыми аллергенами проводили у 145 больных атопи-ческим дерматитом в периоде клинической ремиссии, используя аллергены, изготовленные НПО «Аллерген» (г. Ставрополь), согласно прилагаемым ин-струкциям; параллельно ставили контрольные пробы с гистамином и экстра-гирующей жидкостью. Возникающую при тестировании аллергическую реак-цию оценивали через 20 минут после выполнения проб с учётом выраженно-сти местных воспалительных явлений. Таблица 1 Группы наблюдаемых детей с тяжёлым течением распространённого атопического дерматита
Серологическое типирование лимфоцитов по антигенам HLA I класса выполнялось у 76 больных атопическим дерматитом в стандартном микро-лимфоцитотоксическом тесте (Terasaki P. с соавт., 1970) с помощью гистоти-пирующих панелей HLA-A, B ЗАО «Гисанс» (г. Санкт-Петербург), которые позволяют идентифицировать 19 антигенов А-локуса и 38 антигенов В-локу-са. Лимфоциты для постановки микролимфоцитотоксической пробы выделя-ли из гепаринизированной крови методом градиентного центрифугирования с применением раствора фиколл-верографина; пробу выполняли в микро-планшетах Терасаки. Молекулярное типирование HLA-генов DRB1 и DQB1 проводилось у 43 больных атопическим дерматитом методом полимеразной цепной реакции с набором сиквенс-специфических праймеров (НПФ «ДНК-Технология», г. Москва). Используемый метод включает в себя серию различных участков HLA-генов II класса и называется PCR-mSSR (polymerase-chain reaction sequ-ence specific primer mixed). Набор реагентов позволяет выявлять 14 аллелей гена DRB1 (DRB1* 01, 04, 07, 08, 09, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18) и 12 алле-лей гена DQB1 (DQB1* 0201, 0301, 0302, 0303, 0304, 0305, 0401-2, 0501-4, 0503, 0601, 0602-8). ДНК выделяли из мононуклеаров периферической крови путём трёкратной обработки лизирующим буфером и центрифугированием; выделенную ДНК амплифицировали в полимеразной цепной реакции. Расчёт иммуногенетических параметров осуществляли с помощью фор-мул, принятых в популяционной генетике. Частоту встречаемости изучав-шихся антигенов определяли как процентное отношение индивидов, несущих антиген, к общему числу обследованных в группе (Зарецкая Ю.М., 1983) и сопоставляли с характером распределения антигенов в здоровой популяции детей, проживающих в Кировской области. Частоту внутрилокусных сочета-ний HLA-антигенов находили отдельно для локусов А и В, частоту межлоку-сных сочетаний HLA-антигенов рассчитывали по формуле, предложенной Mattius P. (1970). Для установления существенности различий в характере распределения антигенов в сравниваемых группах определяли критерий со-гласия (χ2) с поправкой на непрерывность вариаций; с помощью специальных математических формул χ2 переводили в коэффициент достоверности разли-чий Стъюдента (р), используя программу по статистике для IBM PC «Био-стат». Степень ассоциации того или иного иммуногенетического параметра с особенностями иммунологической реактивности оценивали по критерию от-носительного риска RR (Woolf B., 1995), который показывает, насколько ча-ще данное заболевание или ответная реакция организма развивается у лиц, имеющих определённый HLA-антиген, по сравнению с теми, у кого его нет. При нулевом значении одного из составляющих величину RR рассчитывали по формуле Haldane J. (Певницкий Л.А., 1988). Принято считать, что при RR, равном 2,0 и больше, существует положительная ассоциация признака с за-болеванием (предрасположенность к развитию болезни), тогда как значения RR меньше 1,0 указывают на резистентность индивида к данной патологии. Этиологическую фракцию (EF), характеризующую силу положительной ас-социации (Svejgaard A., Ryder L.P., 1994), рассчитывали при значении вели-чины RR более 2,0; превентивную фракцию (PF) , характеризующую силу от-рицательной HLA-ассоциации, рассчитывали при значении RR менее 1,0. Математическую обработку результатов типирования у больных атопичес-ким дерматитом выполняли на персональном компьютере с использованием специальной программы, составленной сотрудниками лаборатории иммуно-гематологии Кировского НИИ ГиПК на основании указанных выше формул. Контрольную группу в этих исследованиях составили 153 практически здо-ровых ребёнка. Для выявления сдвигов показателей иммунитета у 145 больных атопи-ческим дерматитом в первые 1-2 дня наблюдения (период обострения заболе-вания) и через 1-2 дня после наступления полной клинической ремиссии ис-следовали содержание Т- и В-лимфоцитов, CD4- и CD8-лимфоцитов в крови, определяли концентрацию иммуноглобулинов (Ig) классов G, A, M, E и цир-кулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови, фагоцитар-ную активность нейтрофилов (ФАН), фагоцитарный индекс (ФИ) и тест вос-становления нитросинего тетразолия в цитоплазме нейтрофилов (НСТ-тест), содержание интерлейкина-1бета (ИЛ-1β) и фактора некроза опухолей-альфа (ФНО-α) в сыворотке крови. Взятие крови для исследования указанных пока-зателей иммунологической реактивности у больных атопическим дерматитом осуществляли в одинаковых условиях в одно и то же время суток (утром, на-тощак), что является важным в связи с наличием биоритмов в функциониро-вании иммунной системы (Лебедев К.А., Понякина И.Д., 1990; Abe T. с со-авт., 1981; Mijawaki T. с соавт., 1984). Результаты исследования показателей иммунологической реактивности у больных атопическим дерматитом срав-нивали с данными, полученными у 80 практически здоровых детей того же возраста. Содержание Т- и В-лимфоцитов в крови больных атопическим дерма-титом определяли унифицированным методом (Петров Р.В. с соавт., 1992). Содержание субпопуляций Т-лимфоцитов (CD4- и CD8-клетки) в крови больных атопическим дерматитом определяли методом непрямой иммуно-флюоресценции с помощью моноклональных антител (ИКО-86 и ИКО-31), выпускаемых Нижегородским НПК «Препарат». Результаты исследования содержания популяций и субпопуляций лимфоцитов в крови больных атопи-ческим дерматитом выражали в процентах и абсолютных числах. Концентрацию IgG, IgA, IgM в сыворотке крови у больных атопичес-ким дерматитом определяли методом радиальной иммунодиффузии с исполь-зованием моноспецифических антисывороток, выпускаемых Нижегородским предприятием по производству бактерийных препаратов, по прилагаемым инструкциям; результаты выражали в г/л. Содержание общего IgE в сыворот-ке крови у больных атопическим дерматитом определяли методом иммуно-ферментного анализа с использованием реагентов, выпускаемых Нижегород-ским предприятием «Препарат», по прилагаемым инструкциям; результаты выражали в МЕ/мл. Содержание ЦИК в сыворотке крови у больных атопи-ческим дерматитом определяли унифицированным методом преципитации с раствором полиэтиленгликоля (Белокриницкий Д.В., 1987); результаты выра-жали в ед.опт.пл. ФАН у больных атопическим дерматитом оценивали, используя в ка-честве фагоцитируемого объекта частицы латекса размером 0,8 мк, по методу Потаповой С.Г. с соавт. (1977); результаты выражали в процентах. ФИ рас-считывали как среднее количество латекса, поглощённое одним фагоцитом. При постановке НСТ-теста активацию нейтрофилов проводили латексом, подсчитывали количество клеток, образующих гранулы диформазана (Пет-ров Р.В. с соавт., 1992); результаты выражали в процентах. Исследование содержания провоспалительных цитокинов (ИЛ-1β и ФНО-α) в сыворотке крови у больных атопическим дерматитом проводили методом иммуноферментного анализа с применением наборов реагентов, вы-пускаемых ТОО «Протеиновый контур» (г. Санкт-Петербург), по прилагае-мым инструкциям; результаты выражали в пкг/мл. Для выявления сдвигов показателей функционального состояния щито-видной железы, коры надпочечников и инкреторного аппарата поджелудоч-ной железы у 145 больных атопическим дерматитом в периодах обострения заболевания и клинической ремиссии исследовали уровни тиреотропного гормона (ТТГ), трийодтиронина (Т3) и тироксина (Т4), кортизола, инсулина и фруктозамина в сыворотке крови. Результаты исследования указанных пока-зателей у больных атопическим дерматитом сравнивали с данными, получен-ными у 44 практически здоровых детей того же возраста. Уровни ТТГ (мед/л), Т3 (нмоль/л) и Т4 (нмоль/л) в сыворотке крови у больных атопическим дерматитом исследовали методом иммуноферментного анализа с применением наборов реагентов, выпускаемых НПО «Иммунотех» (г. Москва), по прилагаемым инструкциям. Содержание кортизола в сыворот-ке крови у больных атопическим дерматитом определяли методом иммуно-ферментного анализа с применением набора реагентов, выпускаемых фирмой «IDS» (Англия), по прилагаемой инстукции; результаты выражали в нг/мл. Содержание инсулина в сыворотке крови у больных атопическим дермати-том исследовали методом иммуноферментного анализа с применением набо-ра реагентов, выпускаемых фирмой «DAKO» (Швейцария); результаты выра-жали в пмоль/л. Содержание фруктозамина в сыворотке крови у больных атопическим дерматитом определяли турбодиметрическим методом с приме-нением набора реагентов, выпускаемых фирмой «Хоффман-ла-Рош» (Дания); результаты выражали в мкмоль/л. Для оценки ферментного гомеостаза у 128 больных атопическим дер-матитом в периодах обострения заболевания и клинической ремиссии прово-дили количественное определение содержания пепсиногена, амилазы, липа-зы, щелочной фосфатазы (ЩФ), аспартат-аминотрансферазы (АсАТ) и ала-нин-аминотрансферазы (АлАТ) в сыворотке крови, моче и кале. Забор крови (в количестве 6-8 мл) для приготовления сыворотки проводили из локтевой вены в одно и то же время суток (утром, натощак); сбор мочи проводили об-щепринятым методом в течение суток; для приготовления копрофильтрата 1 г кала смешивали с 10 мл дистиллированной воды и пропускали через бу-мажный фильтр (Лопатина Л.А., 1997). Результаты исследования содержания гидролаз и аминотрансфераз в биосредах у больных атопическим дерматитом сравнивали с данными, полученными у 44 практически здоровых детей того же возраста. Определение содержания пепсиногена в биосредах у больных атопи-ческим дерматитом проводили по протеолитической активности при рН = 1,5-2,0 по тирозину спектрофотометрически (Кост Е.А., 1975); результаты выражали в тир.ед/мл. Cодержание α-амилазы (ед/мл) в биосредах у больных атопическим дерматитом определяли унифицированным амилокластическим методом со стойким крахмальным субстратом по Caraway W.T. (Меньшиков В.В., 1987), активность липазы (ед/мл) в биосредах у больных атопическим дерматитом исследовали унифицированным методом с использованием в ка-честве субстрата оливкового масла (Меньшиков В.В., 1987). Определение ак-тивности ЩФ (ед/мл) в биосредах у больных атопическим дерматитом про-водили унифицированным методом с применением наборов реагентов, выпу-скаемых фирмой «Lachema Diagnosticum» (Чехия). Для отпределения актив-ности АсАТ (ед/мл) и АлАТ (ед/мл) в биосредах у больных атопическим дер-матитом использовали калориметрический динитрофенилгидразиновый ме-тод по Reitman S. и Frankel S. (Меньшиков В.В., 1987). Для оценки функциональной активности гемо-ренального и гемо-ин-тестинального барьеров (ГРБ и ГИБ) по отношению к пищеварительным фер-ментам у больных атопическим дерматитом определяли коэффициент рас-пределения (КР), который представляет собой отношение содержания иссле-дуемого вещества в сыворотке крови к содержанию этого вещества в других биосредах (Ипатов Ю.П. с соавт., 1997). При этом, во внимание принимали только те значения КР у больных атопическим дерматитом, которые значи-тельно отличались (в 1,5 раза и больше) от его величины у практически здо-ровых детей. Наряду с исследованием лабораторных показателей в периодах обост-рения заболевания и клинической ремиссии у детей с атопическим дермати-том осуществлялось катамнестическое наблюдение в течение 9 месяцев. При этом у пациентов анализировались жалобы родителей, изучался анамнез, ам-булаторные карты, проводился осмотр и физикальные исследования. Данные, полученные при исследовании гематологических и иммуноло-гических параметров, показателей функционального состояния эндокринных и пищеварительных желез у больных атопическим дерматитом, обрабатыва-ли на персональном компьютере с определением среднеарифметической ве-личины (М) и среднеквадратической ошибки (m). Статистическую достовер-ность различий (р) между сравниваемыми показателями у больных атопичес-ким дерматитом и здоровых детей определяли по таблице Стъюдента-Фише-ра. Вместе с тем, при оценке изменений ряда показателей иммунологической реактивности и функционального состояния эндокринных желез у больных атопическим дерматитом рассчитывали коэффициент r, используя метод кор-реляционного анализа (Мерков А.М., Поляков Л.С., 1974). Следует отметить, что имеющиеся в литературе данные по изучавшим-ся гематологическим, иммуногенетическим и иммунологическим парамет-рам, показателям функционального состояния эндокринных и пищеваритель-ных желез у практически здоровых детей, проживающих в разных регионах страны, несколько отличаются друг от друга. Это обстоятельство может быть обусловлено влиянием местных климато-географических, эндемических, эко-логических и социально-бытовых факторов, этнической принадлежностью. Поэтому в качестве контроля нами использовались данные, полученные сот-рудниками лаборатории иммуногематологии Кировского НИИ ГиПК и сот-рудниками кафедры детских болезней Кировской ГМА при исследовании указанных показателей у практически здоровых детей соответствующего воз-раста востночнославянской принадлежности, проживающих в г. Кирове и Кировской области. |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям