Работа № биуретовая реакция пиотровского впервую пробирку наливают 5 капель 5 раствора яичного белка, во вторую 5 капель 5 раствора пшеничного белка
|
|
Скачать 324 Kb.
|
|
ХИМИЧЕСКАЯ ПРИРОДА БЕЛКА Работа № 1. БИУРЕТОВАЯ РЕАКЦИЯ ПИОТРОВСКОГО В первую пробирку наливают 5 капель 5 % раствора яичного белка, во вторую - 5 капель 5 % раствора пшеничного белка, в третью -5 капель 5 % раствора желатина. Во все три пробирки приливают по 5 капель 10 % раствора едкого натра и по 1 капле 1 % раствора сернокислой меди. Во всех пробирках раствор приобретает устойчивую красно-фиолетовую (сине-фиолетовую) окраску. Работа № 2. НИНГИДРИНОВАЯ РЕАКЦИЯ В первую пробирку наливают 5 капель 1 % раствора яичного белка, во вторую - 5 капель I % раствора пшеничного белка. В каждую пробирку прибавляют по 2-3 капли 0,1 % раствора нингидрина и кипятят. Через 1-2 минуты содержимое пробирок окрашивается в розовый, красный, а затем в синий цвет. При стоянии интенсивность окраски увеличивается. Работа № 3. КСАНТОПРОТЕИНОВАЯ РЕАКЦИЯ НА ^ В первую пробирку наливают 5 капель 1 % раствора яичного белка, во вторую - 5 капель 1 % раствора пшеничного белка, в третью -5 капель 1 % раствора желатина. Во все пробирки добавляют по 2-3 капли концентрированной азотной кислоты и нагревают. В первой и второй пробирках жидкость окрашивается в лимонно-желтый цвет, в третьей наблюдается едва заметное бледно-желтое окрашивание. После охлаждения в каждую пробирку добавляют по 10 капель концентрированного раствора аммиака или 30 % раствор едкого натра. Окраска жидкости переходит в оранжевую, так как образуется аммонийная соль динидротирозина хиноидной структуры. Работа № 4. РЕАКЦИЯ МИЛЛОНА ПА ТИРОЗИН ^ В пробирку с 1 мл раствора фенола добавляют 0,5 мл реактива Миллона (свежий раствор HgNO3 в HNO3) и осторожно нагревают. Появляется розовая окраска. В другую пробирку наливают 1-2 мл раствора яичного или растительного белка и 5-6 капель реактива Миллона, осторожно нагревают. Жидкость окрашивается в красный цвет, а затем выпадает осадок коричнево-красного цвета. То же проделывают с раствором желатина. Красного окрашивания не происходит или оно проявляется очень слабо, если желатин не очищен от примеси других белков. Положительная реакция белка с реактивом Миллона свидетельствует о наличии в составе белка тирозина. По реакция не специфична и протекает также с фенолом. Проба с желатином отрицательна, так как в составе этого белка нет тирозина. Работа № 5. РЕАКЦИЯ НА ТРИПТОФАН В первую пробирку наливают 5 капель I % раствора яичного белка, во вторую - 5 капель 1 % раствора пшеничного белка, в третью - 5 капель 1 % раствора желатина. Во все пробирки добавляют по 5 капель концентрированной уксусной кислоты, слегка нагревают и добавляют равный объем концентрированной серной кислоты. В первых двух пробирках с раствором яичного и пшеничного белка на границе двух фаз появляется красно-фиолетовое кольцо, постепенно распространяющееся на всю жидкость. При нагревании на кипящей водяной бане окрашивание происходит быстрее. В пробирке с раствором желатина реакция отрицательная, так как в желатине нет триптофана. Работа № 6. РЕАКЦИЯ ФОЛЯ НА СЕРУСОДЕРЖАЩИЕ АМИНОКИСЛОТЫ В первую пробирку наливают 2 мл раствора яичного или растительного белка, во вторую - столько же раствора желатина. В обе пробирки добавляют по 1-1,5 мл раствора щелочи и осторожно нагревают до кипения и кипятят 1-2 минуты. После этого в каждую пробирку прибавляют по 2-3 капли раствора уксуснокислого свинца. В пробирке с яичным или растительным белком появляется буровато-черное или черное окрашивание, интенсивность которого зависит от концентрации раствора белка и содержания в нем цистеина и метионина. Раствор желатина не дает окрашивания. Буровато-черное или черное окрашивание свидетельствует о наличии в составе белка цистеина или метионина. Желатин этих аминокислот не содержит. ^ Работа № 7. ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ АМИНОКИСЛОТ Вырезают полоску фильтровальной бумаги длиной 12 см, шириной 1,5 см. Через верхний конец полоски протягивают нитку длиной 15 см и завязывают её узлом. На нижнем конце бумаги на расстоянии 1см от края наносят карандашом кружок диаметром 3-4 мм. В середину кружка при помощи капилляра наносят маленькую каплю исследуемого раствора смеси аминокислот. Место, где была нанесена капля раствора, подсуши- вают на воздухе или на хроматографическом столике. На дно пробирки длиной 18-20 см, диаметром 2 см осторожно, не смачивая стенок, наливают из пипетки 15-20 капель элюента - бу-танола, насыщенного водой. Приготовленную ранее бумажную полоску устанавливают в пробирке, придерживая за нитку, так чтобы она погрузилась в жидкость на 2-3 мм и висела вертикально, не касаясь стенок. Пробирку закрывают пробкой. За 1,5-2 часа фронт растворителя поднимется на 10-12 см. После этого полоску вынимают из пробирки за нитку и подвешивают её в вертикальном положении в сушильном шкафу, нагретом до 105°С. После испарения растворителя бумажную полоску вынимают из сушильного шкафа и обрабатывают раствором нингидрина, затем снова помещают в сушильный шкаф на 5-6 минут. При этом в местах присутствия аминокислот появляются линии или пятна синего или фиолетового цвета. Линейкой измеряют на бумажной полоске расстояния: а) от места нанесения капли исследуемого раствора до середины каждого пятна; б) от места нанесения капли исследуемого раствора до фронта растворителя. По полученным данным вычисляют коэффициент распределения отдельных аминокислот. Работа № 8. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИЗОЭЛЕКТРИЧЕСКОЙ ТОЧКИ БЕЛКА В пять пробирок наливают 0,2 М раствор уксусной кислоты и 0,2 М раствор уксуснокислого натрия в количествах, указанных в таблице. В каждую пробирку к 1 мл полученной смеси приливают по 0,5 мл 1 % раствора желатина или яичного белка и по 2 мл этанола. Отмечают, в какой пробирке и при каком значении рН произошло наибольшее помутнение раствора. Отсутствие мути отмечают знаком "-", а его наличие одним или двумя знаками " + ". Результаты фиксируют в таблице и по степени мутности делают вывод об изоэлектрической точке данного белка. Таблица Определение изоэлектрической точки белка
Работа № 9. РАЗДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВЫХ ФРАКЦИЙ МЕТОДОМ ВЫСАЛИВАНИЯ К 10 каплям солевого раствора яичного белка приливают 10 капель полунасыщенного раствора сернокислого аммония. При этом выпадает осадок яичного глобулина. Через 5 минут осадок отфильтровывают и к фильтрату добавляют истолченный порошок сернокислого аммония до прекращения растворения соли, т.е. до полного насыщения. Образуется осадок яичного альбумина, который всплывает наверх из-за высокой плотности жидкости. Результаты работы фиксируют в таблице. Таблица Осаждение белков высаливанием
Работа № 10. ОСАЖДЕНИЕ БЕЛКА ОРГАНИЧЕСКИМИ РАСТВОРИТЕЛЯМИ К 5 каплям яичного или пшеничного белка прибавляют 1 мл 96 % этанола или ацетона. Раствор мутнеет. Добавляют 1 каплю насыщенного раствора хлористого натрия. При стоянии выпадает осадок белка. Результаты работы по осаждению белка различными реактивами фиксируют в таблице. Таблица Реакция осаждения белка
Работа №11. ОСАЖДЕНИЕ БЕЛКА КОНЦЕНТРИРОВАННЫМИ МИНЕРАЛЬНЫМИ КИСЛОТАМИ В пробирку наливают 5 капель концентрированной азотной кислоты и, наклонив её под углом 45°, осторожно по стенке пробирки приливают равный объем 1 % раствора белка. На границе двух фаз образуется осадок белка в виде тонкой пленки. То же проделать с серной и соляной кислотами. Работа № 12. ОСАЖДЕНИЕ БЕЛКА ОРГАНИЧЕСКИМИ КИСЛОТАМИ К 5 каплям 1 % раствора белка добавляют 1-2 капли 10 % раствора сульфосалициловой кислоты. Выпадает осадок белка. То же проделывают с трихлоруксусной кислотой. Работа № 13. ОСАЖДЕНИЕ БЕЛКА СОЛЯМИ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ 1.К 5 каплям 1 % раствора яичного или пшеничного белка приливают 1 каплю 5 % раствора уксуснокислого свинца или 7 % раствор сернокислой меди. Выпадает осадок белка. К другой такой же порции раствора белка прибавляют вначале одну каплю соли тяжелого металла, а затем ещё 5-10 капель и наблюдают за растворением осадка (пеп-тизация). 2.К 5 каплям I % раствора белка прибавляют 1 каплю 5 % раствора азотнокислого серебра, получают осадок, который не растворяется в избытке реактива (в отличие от других солей тяжелых металлов). При очень малой концентрации белка осаждения солями тяжелых металлов может не произойти, так как ионы металлов могут оказаться в избытке и произвести пептизацию. ^ Работа№ 14. ГИДРОЛИЗ НУКЛЕОПРОТЕИНОВ ДРОЖЖЕЙ В коническую колбу помещают 1 г пекарских дрожжей и заливают 15 мл 10 % раствора серной кислоты. Колбу закрывают пробкой, в которую вставлена в качестве холодильника стеклянная трубка длиной 25-30 см, взбалтывают и кипятят. Через I час нагрев прекращают, охлаждают и фильтруют. В фильтрате открывают продукты гидролиза нуклеопротеинов полипептиды, пуриновые основания, рибозу, фосфорную кислоту соответствующими качественными реакциями. а). Биуретовая реакция на полипептиды. К 5 каплям гидролизата добавляют 10 капель 10 % раствора едкого натра и 1-2 капли 1 % раствора медного купороса до появления красно-фиолетового окрашивания, что свидетельствует о присутствии в пробе полипептидов - про дуктов гидролиза белковой части нуклеопротеинов. б). Серебряная проба на пуриновые основания. 10 Капель гидроли-зата нейтрализуют 1 каплей концентрированного аммиака и добавляют 5 капель 1 % раствора азотнокислого серебра. При стоянии через 3-5 минут выпадает немного рыхлого осадка серебряных соединений пуриновых оснований (аденина, гуанина), окрашенного в бурый цвет. в). ^ у и дезоксирибозу. К 5 каплям гидро-лизата добавляют 10 капель 30 % раствора едкого натра и 5-10 капель 7 % раствора сернокислой меди до появления неисчезающей мути гидроокиси меди. Жидкость перемешивают и её верхний слой нагревают до начала кипения. Выпадает красный или желтый осадок гидрата закиси меди, образующийся вследствие окисления рибозы и восстановления гидрата окиси меди до закиси. г). ^ К 10 каплям молибденового реактива (раствор молибденовокислого аммония в азотной кислоте) добавляют 5 капель гидролизата и кипятят несколько минут на открытом огне. В присутствии фосфорной кислоты жидкость окрашивается в лимонно-желтый цвет. При охлаждении выпадает желтый осадок комплексного соединения фосфорномолибденового кислого аммония. Работа № 15. ФОСФОПРОТЕИНЫ. ВЫПАДЕНИЕ КАЗЕИНА ИЗ МОЛОКА К 10 мл молока прибавляют равный объем дистиллированной воды и осаждают казеин добавлением 10 капель 10 % раствора уксусной кислоты. Казеин выделяется в виде хлопьевидного осадка, который отфильтровывают и 2-3 раза промывают на фильтре дистиллированной водой. Работа № 16. ГИДРОЛИЗ КАЗЕИНА И ОТКРЫТИЕ В ^ В 3 мл 10 % раствора едкого натра растворяют в пробирке 3/4 осадка казеина (работа № 15). Пробирку закрывают пробкой со стеклянной трубкой в качестве холодильника и кипятят в течение часа. После охлаждения нейтрализуют 12-15 каплями азотной кислоты до слабо кислой реакции на лакмус. При нейтрализации выпадает осадок высокомолекулярных продуктов частичного гидролиза белка-альбумозы и пептоны. После отстаивания жидкость фильтруют и с фильтратом проделывают молибденовую пробу на фосфорную кислоту (работа № 14 г). Для выявления белковой части фосфопротеинов проделывают биуретовую реакцию (работа № 14 а). Работа № 17. ГЛИКОПРОТНИНЫ. ВЫДЕЛЕНИЕ МУЦИНА ИЗ СЛЮНЫ В пробирку собирают около 2 мл слюны и по каплям (4-5 капель) прибавляют концентрированную уксусную кислоту. Выделяется осадок муцина, малорастворимый в избытке уксусной кислоты. Сгусток вынимают стеклянной палочкой, помещают в чистую пробирку и проделывают с ним биуретовую реакцию (работа № 14 а). Работа № 18. НАФТОЛОВАЯ ПРОБА НА УГЛЕВОДНУЮ ГРУППИРОВКУ МУЦИНА. РЕАКЦИЯ ПОДОБЕДОВА К сгустку муцина (работа № 17) добавляют 1-2 капли 1 % спиртового раствора а-нафтола, перемешивают и по стенке осторожно приливают равный объем концентрированной серной кислоты. На границе раздела фаз появляется фиолетово-красное кольцо, хорошо заметное на белом фоне. Если вместо а-нафтола использовать 1 % раствор тимола, то образуется более отчетливое красное кольцо. Работа № 19. СПЕЦИФИЧЕСКАЯ РЕАКЦИЯ НА ГЕМ ГЕМОГЛОБИНА Каплю свежей крови помещают на предметное стекло и дают ей высохнуть на воздухе. К подсушенной крови добавляют 1-2 капли концентрированной уксусной кислоты, тщательно перемешивают стеклянной палочкой, покрывают покровным стеклом и осторожно нагревают до начала кипения (не кипятить!). При этом предметное стекло следует держать высоко над пламенем горелки, чтобы избежать выкипания жидкости. Затем препарат охлаждают и рассматривают под микроскопом образовавшиеся при разрушении гемоглобина кристаллы солянокислого гемина, имеющие форму ромбоидальных палочек. Если обнаружить кристаллы не удается, то приподнимают покровное стекло, добавляют 2-3 капли концентрированной уксусной кислоты, нагревают и после охлаждения вновь исследуют под микроскопом. ^ Работа № 20. ДИАЗОРЕАКЦИЯ НА ТИАМИН (В,) К 5 каплям 1 % раствора сульфаниловой кислоты прибавляют 5 капель 5 % раствора азотистокислого натрия. Получают диазосоедине-ние. К нему прибавляют небольшое количество порошка тиамина (на кончике стеклянной палочки) и 5-7 капель 10 % раствора соды. Жидкость окрашивается в красный или оранжевый цвет вследствие образования сложного соединения тиамина с диазооензолсульфокислотой. Если раствор соды опускают осторожно, по стенке наклоненной про- бирки, то на границе раздела двух жидкостей образуется красное кольцо. Работа №21. РЕАКЦИЯ ОКИСЛЕНИЯ ВИТАМИНА В, В ТИОХРОМ Одну каплю 5 % раствора тиамина (В|) (или 1-2 мг порошка) смешивают в пробирке с 5-10 каплями !0 % раствора едкого натра и затем добавляют 1-2 капли 5 % раствора железосинеродистого калия. Нагревание смеси приводит к ее окрашиванию в желтый цвет в результате окисления тиамина в тиохром, который в щелочном растворе при облучении ультрафиолетом обладает интенсивной синей флуоресценцией. Работа №22. РЕАКЦИЯ ВОССТАНОВЛЕНИЯ РИБОФЛАВИНА (В2) В пробирку наливают 10 капель взвеси рибофлавина в воде (0,025 %) и добавляют 5 капель концентрированной соляной кислоты и небольшой кусочек металлического цинка. Выделяющийся водород реагирует с рибофлавином и раствор изменяет окраску из желтой в красную и розовую из-за образования родофлавина, а затем обесцвечивается, превращаясь в лейкофлавин. Работа № 23. ПРОБА С МЕДЬЮ НА НИКОТИНОВУЮ КИСЛОТУ В 20 каплях 10 % раствора уксусной кислоты при нагревании растворяют 10 мг никотиновой кислоты. К нагретому до кипения раствору добавляют равный объем 5 % раствора уксуснокислой меди. При постепенном охлаждении раствора выпадает синий осадок медной соли никотиновой кислоты. Работа № 24. ФЕРРИХЛОРИДНАЯ ПРОБА НА ВИТАМИН В6 В пробирке смешивают 5 капель 5 % водного раствора витамина В6 и одну каплю 5 % раствора хлорного железа и встряхивают её. Смесь окрашивается в красный цвет из-за образования комплексной соли типа фенолята железа. Работа № 25. ОТЛИЧИЕ ПИРИДОКСИНА ОТ ПИРИДОКСАЛЯ И ПИРИДОКСАМИНА В две пробирки вносят по 1 мл раствора пиридоксина и по 2 мл раствора уксуснокислого натрия, затем в первую пробирку приливают 1 мл дистиллированной воды, а во вторую - I мл раствора борной кислоты и перемешивают при нагревании. Когда пробирки остынут до комнатной температуры, быстро прибавляют в каждую из них по 1 мл раствора 2,6-дихлорхинонхлоримида В первой пробирке жидкость приобретает вначале синее окрашивание, вскоре сменяющееся красным. Эта реакция характерна только для фенолов, со свободным пара-положением. Поэтому во второй пробирке синее окрашивание не появляется. Работа № 26. ОСАЖДЕНИЕ ПИРИДОКСИНА ФОСФОРНО-ВОЛЬФРАМОВОЙ КИСЛОТОЙ К I мл раствора пиридоксина приливают I мл раствора фосфор-но-вольфрамовой кислоты. Наблюдают выпадение осадка, т.к. пири-доксин является производным пиридина и обладает основными свойствами, поэтому может быть осажден реактивами на алкалоиды. Работа № 27. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ КОБАЛАМИНА (В12) С ТИОМОЧЕВИНОЙ На беззольный фильтр наносят 2-3 капли раствора тиомочевины и высушивают при нагревании. После этого на фильтр наносят I -2 капли раствора кобаламина и снова высушивают при нагревании. На фильтре появляется зеленое окрашивание, свидетельствующее о наличии кобальта. Работа № 28. ВОССТАНОВЛЕНИЕ ФЕРРИЦИАНИДА КАЛИЯ АСКОРБИНОВОЙ КИСЛОТОЙ (С) При перемешивании в каждую из двух пробирок вносят по 2-3 капли 5 % раствора железосинеродистого калия (K3Fe(CN)6) и по 7-8 капель 1 % раствора хлорного железа. Жидкость приобретает бурую окраску. После добавления в одну из пробирок 5-10 капель 1 % вытяжки шиповника, а в другую - такого же количества дистиллированной воды, в первой пробирке жидкость окрашивается в зеленовато-синий цвет, а затем выпадает темно-синий осадок берлинской лазури Fe4[Fe(CN)6]3, который при осторожном наслаивании дистиллированной воды становится более отчетливым. Во второй пробирке жидкость не меняет окраски. Работа № 29. ВОССТАНОВЛЕНИЕ МЕТИЛЕНОВОЙ СИНЕЙ И 2,6-ДИХЛОРФЕНОЛИНДОФЕНОЛА ВИТАМИНОМ В двух пробирках смешивают по I капле 0,01 % раствора мети-леновой синей и 10 % раствора бикарбоната натрия, добавляя затем в одну из них 5 капель 1 % вытяжки из шиповника, а в другую - столько же дистиллированной воды. Нагревание пробирок над пламенем спиртовки приводит к обесцвечиванию жидкости в пробирке с вытяжкой из шиповника. В другие две пробирки наливают по 10 капель 0,01 % раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола, добавляя в одну из пробирок 1 каплю 2 % раствора соляной кислоты. В этой пробирке раствор окрашивается в красный цвет При добавлении в обе пробирки по 5-10 капель вытяжки из шиповника жидкости обесцвечиваются за счет восстановления аскорбиновой кислоты 2,6-дихлорфенолиндофенолом в бесцветное лейкосое-динение. Работа № 30. ЙОДНАЯ ПРОБА НА ВИТАМИН С В две пробирки наливают по 10 капель дистиллированной воды и по 1-2 капли раствора йода в растворе иодида калия. В одну пробирку добавляют 10 капель вытяжки из шиповника, в другую - столько же дистиллированной воды. В пробирке с вытяжкой из шиповника раствор йода обесцвечивается за счет восстановления аскорбиновой кислотой молекулярного иода и образования иодистоводородной кислоты. Работа №31. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ АСКОРБИНОВОЙ КИСЛОТЫ С 2,6-ДИХЛОРФЕНОЛИНДОФЕНОЛОМ ПО МЕТОДУ ТИЛЬМАНСА
Вытяжку ич хвои употребляют в количестве 5 мл и соляной кислоты не добавляют. ~2,6-Дихлорфснолиндофенол в щелочной среде имеет синюю окраску, в кислой - красную, а при восстановлении обесцвечивается 3. Расчет. Молекулярная масса аскорбиновой кислоты равна 176 у.е., грамм-эквивалент- 88 г. Следовательно, 1 мл 0,001 Н раствора соот ветствует 0,088 мг аскорбиновой кислоты. А) Определяют количество аскорбиновой кислоты в 1 мл исследуемой жидкости, исходя из титра 2,6-дихлорфенолиндофенола и его количества, израсходованного на титрование. Например, если на титрование I мл вытяжки из шиповника израсходовано 1,35 мл 0,001 Н раствора, то в 1 мл вытяжки содержится 0,088 х 1,35 = 0,1188 мг аскорбиновой кислоты. Б) Определяют количество аскорбиновой кислоты в 100 мл вытяжки или сока, т.е. процентное содержание в растворе. Например, если в 1 мл вытяжки содержится 0,1188 мг аскорбиновой кислоты, то в 100 мл будет содержаться 11,88 мг. В) Для шиповника и хвои вычисляют содержание витамина в 100 г продукта. Например, если 100 мл вытяжки, соответствующее 1г шиповника, содержит 11,88 мг витамина, то 100 г шиповника будет содержать 1188 г аскорбиновой кислоты. Работа № 32. РЕАКЦИЯ РУТИНА С ХЛОРНЫМ ЖЕЛЕЗОМ К 10 каплям насыщенного водного раствора рутина добавляют 3-4 капли 1 % раствора хлорного железа (окисного). Жидкость приобретает зеленое окрашивание из-за образования комплексного соединения. Работа №33. РЕАКЦИЯ ВОССТАНОВЛЕНИЯ КВЕРЦЕТИНА К 10 каплям насыщенного спиртового раствора кверцетина (или рутина) добавляют небольшое количество (на кончике стеклянной лопаточки) порошка магния и 2 капли концентрированной соляной кислоты. Жидкость приобретает красное окрашивание, усиливающееся при стоянии. Реакция обусловлена восстановлением кверцетина с образованием цианидина красного цвета. Работа № 34. РЕАКЦИЯ РУТИНА С КОНЦЕНТРИРОВАННОЙ СЕРНОЙ КИСЛОТОЙ К 1-2 мл насыщенного водного раствора рутина осторожно, по стенке пробирки, добавляют 1 мл концентрированной серной кислоты. На границе раздела двух жидкостей возникает окрашенное в желтый цвет кольцо, обусловленное образованием оксониевой соли. Работа № 35. РЕАКЦИЯ РУТИНА С ФЕЛИНГОВОЙ ЖИДКОСТЬЮ К 0.5 г рутина добавляют 5 мл 0.5 % раствора соляной кислоты. Смесь кипятят 1 мин, зачем фильтруют. К 5 мл полученного фильтрата приливают 3 мл 10 % раствора едкого натра и 3 мл фелинговой жидкости и снова нагревают до кипения. Выпадает красный осадок. При кислом гидролизе рутина отщепляется молекула рутинозы, которая далее распадается на глюкозу и рамнозу, обладающие восстанавливающими свойствами. Работа № 36. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ РУТИНА В ЧАЕ К 100 мг чая приливают 50 мл горячей дистиллированной воды и проводят экстракцию в течение 5 минут. В стаканчик или колбочку   отмеривают 10 мл экстракта чая, добавляют 10 мл дистиллированной воды и 5 капель индигокармина (появляется синее окрашивание). Титруют из микробюретки 0,05 Н раствором перманганата калия до появления устойчивой желтой окраски. Определяют процентное содержание рутина в чае по следующей формуле:X = 320AQ,/1000PQ2 X - содержание витамина Р в препарате, %; А - объем раствора КМп04, пошедшего на титрование, мл; Q, - объем, в котором растворена взятая для анализа навеска, мл; Q2 - объем раствора, взятого для титрования, мл; Р - навеска, мг. ^ Работа № 37. РЕАКЦИЯ РЕТИНОЛА С ТРЕХХЛОРИСТОЙ СУРЬМОЙ В сухую пробирку вносят 1 каплю свежего рыбьего жира и добавляют 4-5 капель 33 % хлороформного раствора треххлористой сурьмы. При смешивании содержимое пробирки окрашивается в синий цвет. Химизм реакции неизвестен. Реакцию используют для количественного определения ретинола колориметрическим методом. Работа № 38. РЕАКЦИЯ РЕТИНОЛА С КОНЦЕНТРИРОВАННОЙ СЕРНОЙ КИСЛОТОЙ В сухую пробирку вносят 1 каплю рыбьего жира и 5 капель хлороформа, перемешивают и добавляют 1 каплю кислоты. Жидкость окрашивается в красный цвет. Работа № 39. РЕАКЦИЯ РЕТИНОЛА С СУЛЬФАТОМ ЖЕЛЕЗА К 1-2 каплям рыбьего жира или 0,05 % раствора ретинола в хлороформе приливают 5-10 капель ледяной уксусной кислоты, насыщенной сульфатом железа и 1-2 капли концентрированной серной кислоты. Появляется голубое окрашивание, постепенно переходящее в розово-красное. Каротины при этой реакции дают зеленоватое окрашивание. Работа № 40. БРОМХЛОРОФОРМНАЯ ПРОБА НА КАЛЬЦИФЕРОЛ В сухую пробирку вносят 2-3 капли рыбьего жира и 2-4 капли раствора брома в хлороформе (1 : 60). Жидкость постепенно приобретает зеленовато-голубое окрашивание. Работа №41. АНИЛИНОВАЯ ПРОБА НА КАЛЬЦИФЕРОЛ В сухую пробирку вносят I каплю рыбьего жира и 5 капель хлороформа, перемешивают и добавляют 1 каплю анилинового реактива (15 частей анилина + 1 часть концентрированной НО). При нагревании жел- тая эмульсия приобретает красную окраску. Работа № 42. РЕАКЦИЯ а-ТОКОФЕРОЛА С ХЛОРИДОМ ЖЕЛЕЗА В сухую пробирку помещают 4-5 капель 0,1 % спиртового раствора а-токоферола и прибавляют 0,5 мл 1 % раствора хлорида железа (III). При тщательном перемешивании содержимое пробирки приобретает красное окрашивание. Работа № 43. РЕАКЦИЯ а-ТОКОФЕРОЛА С ^ В сухую пробирку помещают 4-5 капель 0,1 % спиртового раствора а-токоферола, прибавляют 10 капель концентрированной азотной кислоты и содержимое пробирки встряхивают. Пробирку помещают в водяную баню, нагретую до 70 °С. Образуется эмульсия, которая постепенно расслаивается: верхний маслянистый слой приобретает красную окраску. Окрашивание обусловлено окислением ос-токоферола до а-токоферилхинона, окрашенного в красный или желтовато-красный цвет. Работа № 44. РЕАКЦИЯ ВИКАСОЛА С АНИЛИНОМ К 5 каплям 0,25 % спиртового раствора викасола (синтетический аналог витамина К,) добавляют 2 капли анилина и встряхивают. Жидкость окрашивается в красный цвет из-за образования 1-метил-2-фениламинонафтохинона. Работа № 45. РЕАКЦИЯ ВИКАСОЛА С ЩЕЛОЧНЫМ РАСТВОРОМ ЦИСТЕИНА К 5 каплям 0,05 % раствора викасола добавляют 5 капель 0,025 % раствора цистеина и 1 каплю 10 % раствора едкого натра. Жидкость окрашивается в лимонно-желтый цвет. ^ Работа № 46. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ДЕЙСТВИЕ НЕОРГАНИЧЕСКИХ КАТАЛИЗАТОРОВ И ФЕРМЕНТОВ В шесть пронумерованных пробирок наливают по 2 мл 0,5 % раствора крахмала и помещают на 2-3 минуты первую, третью и пятую пробирки в кипящую водяную баню, а остальные в термостат или в стакан с водой при температуре 38 °С. Затем в первую и вторую пробирки быстро добавляют по 0,5 мл (7 капель) 10 % раствора соляной кислоты, в третью и четвертую по 0,5 мл слюны, фильтрованной и разведенной I : 10, в пятую и шестую по 0,5 мл воды. В кипящей бане  пробирки выдерживают 15 минут, а в термостате — 5 минут. Затем пробирки охлаждают проточной водой и ставят по порядку в штатив. Для проверки конца реакции из каждой пробирки палочкой или пипеткой (предварительно каждый раз тщательно промывая их водой) берут по капле содержимое, наносят на предметное стекло, положенное на белую бумагу, и добавляют к каждой порции по капле йода. О степени расщепления крахмала судят по окраске капли.Крахмал расщепляется до моносахаридов при действии неорганического катализатора - 10 % раствора соляной кислоты, или слюны, содержащей ферменты - амилазу и некоторое количество мальтазы. Амилаза расщепляет крахмал до дисахарида мальтозы, из которой под действием мальтазы образуется глюкоза. При этом следует помнить, что крахмал окрашивается раствором йода в синий цвет, промежуточные продукты расщепления крахмала - от сине-фиолетовой до бурой. После расщепления крахмала до дисахаридов и моносахаридов окраска совсем исчезает. Присутствие моносахаридов и мальтозы устанавливается реакцией восстановления меди по Троммеру, К содержимому каждой пробирки прибавляют по 5-6 капель 10 % раствора едкого натра и 2-3 капли 1 % раствора медного купороса, затем осторожно нагревают на спиртовке верхний слой жидкости. Появление желтого осадка - гидрата закиси меди - указывает на наличие в растворе восстанавливающих Сахаров - глюкозы и мальтозы. Примечание. В пробах, где проводится кислотный гидролиз, раствор предварительно нейтрализуют щелочью, добавляя по 0.5 мл 10 % раствора едкого натра. По результатам опыта заполняют таблицу, под которой помещают выводы. Таблица Сравнительные действия неорганических катализаторов и ферментов
Работа № 47. ТЕРМОЛАБИЛЬНОСТЬ ФЕРМЕНТОВ В две пробирки вносят по 5 капель слюны и по 20 капель дистиллированной воды. В одной пробирке раствор слюны кипятят 2-3 минуты и охлаждают проточной водой, в другой - оставляют без кипячения. В обе пробирки добавляют по 10 капель 0,5 % раствора крахмала, жидкость в пробирках перемешивают и оставляют при комнатной температуре. Через 5 минут содержимое каждой пробирки делят на две части. С одной частью проделывают реакцию с йодом на крахмал, с другой - пробу Феллинга или Троммера на мальтозу и глюкозу. В пробирке, где фермент разрушен кипячением, расщепления крахмала не происходит. По результатам опыта заполняют таблицу. Таблица Термолабильность ферментов
*В графах 3 и 4 необходимо отметить: положительная, отрицательная Работа № 48. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОПТИМАЛЬНОЙ ^ В 4 пронумерованные пробирки наливают по 10 капель 0,5 "А раствора крахмала и ставят первую пробирку в лед, вторую - в штатив при комнатной температуре, третью - в водяную баню при температуре 37°С и четвертую - при температуре 75 °С. В четыре другие пробирки наливают по 2-3 мл дистиллированной воды и по 1 капле 0,1 °/< раствора йода. Через 5 минут в пробирки с крахмалом добавляют по 1С капель слюны, разведенной в 10 раз, перемешивают и оставляют стоять при температуре 0, 20, 37 и 75 °С. После 5-минутного действш фермента на субстрат из каждой опытной пробы отбирают по 1-2 капли жидкости в ранее заготовленные пробирки с йодом. В случае, есл^ во всех пробирках жидкость окрашивается в синий цвет, реакцию с йодом повторяют через следующие 5 минут во вновь заготовленны> пробирках с йодом. ВЫПОДЫ;   Различная окраска при реакции с йодом, а следовательно, различная степень гидролиза крахмала обусловлены разной скоростью ферментативного катализа при разных температурах. Максимальная скорость ферментативной реакции наблюдается при температуре 75 °С, а минимальная - при О °С.В работе важно уловить нужный момент для йодной пробы, т.к. при длительном гидролизе полное расщепление крахмала может произойти и при более низкой температуре. Результаты работы фиксируют в таблице. Таблица Влияние температуры на действие фермента
Работа № 49. ВЛИЯНИЕ рН СРЕДЫ НА АКТИВНОСТЬ АМИЛАЗЫ В 7 пробирок наливают растворы 0,2 М двузамешенного фосфорнокислого натрия и 0,1 М лимонной кислоты в количествах, указанных в таблице. Получают буферные растворы с рН от 5,6 до 8,0. В каждую пробирку добавляют по 10 капель 0,5 % раствора крахмала и по 10 капель слюны, разведенной в 100 раз. Содержимое пробирок перемешивают и оставляют при комнатной температуре (или в водяной бане при температуре 38 °С, если фермент недостаточно активен). Через 5 минут из четвертой пробирки, в которой рН среды предполагается оптимальной для амилаш, берут капельную пробу для реакции с йодом. Если получают синее окрашивание, пробу повторяют через следующие 5 минут. Когда в капельной пробе будет получено красное или желтое окрашивание, во все пробирки добавляют по I капле 0,1 % раствора йода, содержимое пробирок перемешивают и наблюдают окраску. Оптимум рН для действия амилазы определяют по той пробирке, в которой произошло более глубокое расщепление крахмала (при реакции с раствором йода получается красная пли желтая окраска). Результаты работы фиксируют в таблице. Таблица Влияние рН среды на активность амилазы
ВЫВОДЫ: Работа № 50. ВЛИЯНИЕ АКТИВАТОРОВ И ИНГИБИТОРОВ НА АКТИВНОСТЬ ФЕРМЕНТОВ В три пробирки наливают: в первую - 10 капель дистиллированной воды, во вторую - 8 капель воды и 2 капли 1 % раствора поваренной соли, в третью - 8 капель воды и 2 капли 1 % раствора сульфата меди В каждую пробирку прибавляют по 10 капель слюны, разведенной 1 : 5, перемешивают, добавляют 5 капель 0,5 % раствора крахмала, вновь перемешивают и оставляют при комнатной температуре. Через 5 минут в 3 пробирки с водой, подкрашенной каплей раствора йода, приливают по 2-3 капли содержимого каждой опытной пробирки. В первой пробирке жидкость окрашивается в фиолетовый или красный цвет, во второй - в красный или желтый, в третьей в синий. Это объясняется тем, что NaCl увеличивает активность амилазы, a CuS()4 тормозит её действие.  ^ Аминокислоты. Физико-химические свойства. Стереохимия. Белковые и непротеиногенные аминокислоты. Заменимые, незаменимые и полузаменимые аминокислоты. Анализ смесей аминокислот. Пептиды. Структура и свойства. Стереохимия. Методы разделения и анализа. Определение концевых аминокислотных остатков. Фрагментация пептидных цепей. Химический и ферментативный синтез. Автоматические пептидные синтезаторы. Белки. Молекулярная масса, размер и форма. Классификация, первичная структура и методы её определения. Автоматические секвенаторы. Семейства белков и гомология первичной структуры. Вторичная структура белков и методы её определения. Стереохимия пептидной связи. Основные типы вторичной структуры белков. Третичная структура белков. Рентгено-структурный анализ биополимеров. Глобулярные и фибриллярные белки. Денатурация и ренатурация как кооперативные процессы. Связь первичной и третичной структуры. Типы стабилизации третичной структуры белков. Четвертичная структура олигомерных белков. Миог-лобин. Гемоглобин. Серповидная анемия как пример "молекулярной болезни". ^ Ферменты. Номенклатура, классификация. Белковая природа ферментов. Активный центр. Участок связывания с субстратом. Кофакторы ферментов. Коференты и простетические группы. Холофермент и апо-фермент. Кинетика ферментативных реакций. Вывод уравнения Михаэлиса-Ментен. Константа Михаэлиса-Ментен. Экспериментальное определение Vmax и Км. Механизмы ферментативных реакций. Реакции единичного замещения. Механизм типа "пинг-понг". Субстратная специфичность ферментов. Конкурентные и неконкурентные ингибиторы. Регуляторные ферменты. Аллостерические ферменты и модуляторы. Изоферменты. Витамины. Номенклатура и классификация витаминов. Жирорастворимые и водорастворимые витамины. Витамины как компоненты ко-ферментов. Тиамин (В,). Рибофлавин (В2). Пиридоксин (В6). Кобаламин (В12). Никогинамид (РР). Аскорбиновая кислота (С). Пантотеновая кислота. Биотпн. Фолиевая кислота. Витамины А, Д, Е и К как производные изопрена. Биологическая роль витаминов. Авитаминозы (цинга, рахит, пеллагра, бери-бери). Химия зрения. Липиды. Определение. Строение и номенклатура жирных кислот. Неполярная часть липидов: триацилглицериды, воски, терпено-вые соединения, стероиды, простагландины. Строение и свойства. Полярная часть липидов: фосфолипиды, сфинголипиды. Липопротеины. Строение, биологическая функция и классификация. Липидные мицеллы как компоненты биомембран. ^ Нуклеозиды. Структура нуклеозидов. Пиримидиновые и пури-новые основания. Нуклеотиды. Классификация. Строение. Полинуклеотиды и нуклеиновые кислоты. Классификация и номенклатура. Фосфодиэфирная связь. ДНК и РНК. Первичная структура нуклеиновых кислот. Секвенирование ДНК методом Максама-Гилберта. Секвенирование РНК методом Сэнджера-Коулсона. Химические и ферментативные превращения полинуклеотидов. Вторичная структура нуклеиновых кислот. Двойная спираль ДНК. Комплементарные и межплоскостные взаимодействия нуклеиновых оснований Полиморфизм двойной спирали ДНК. Циклические сверскрученные ДНК и топоизомеры. Макромолекулярная структура РНК. Структура и функции т-РНК. Химический и ферментативный синтез полинуклеотидов. Химический синтез ДНК. Синтез через фосфодиэфиры и фосфотриэфиры. Автоматический твердофазный синтез. Функции полинуклеотидов в живых организмах. Нуклеопротеи-ны. Рибосомы. Хроматин. Вирусы.  РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА
|
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
 |
Задача №1 Определение суточной потери белка, биохимические исследования сыворотки крови: определение уровня... |
|
Инструкция (информация для специалистов) по медицинскому применению препарата Церневит, порошок для Лекарственная форма: порошок для приготовления раствора для внутривенного введения |
|
Применение раствора Карловарской соли приводит |
|
Основные лекарственные средства Детям столько капель, сколько лет ребенку. Экстракт валерианы в таблетках назначают по 1-2 таблетки... |
|
Название белка |
|
2. Какое количество 0,25% раствора новокаина необходимо для выполнения односторонней внутритазовой |
|
Тесты безопасности Концентрация раствора хлорамина для обработки поверхности, загрязненной кровью |
|
Инструкция по применению дезинфицирующего средства «Концентрат коллоидного раствора наноразмерных |
|
Определение фракций общего белка (Электрофорез) |
|
1. Испытание на примеси, которые в данной концентрации раствора лекарственного вещества «не должны |
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям