Drg micro-Albumin это твердофазный иммуноферментный тест, позволяющий количественно определять микроальбумин в человеческой моче icon

Drg micro-Albumin это твердофазный иммуноферментный тест, позволяющий количественно определять микроальбумин в человеческой моче





Скачать 117.46 Kb.
Название Drg micro-Albumin это твердофазный иммуноферментный тест, позволяющий количественно определять микроальбумин в человеческой моче
Дата конвертации 07.04.2013
Размер 117.46 Kb.
Тип Документы

DRG® Микроальбумин (EIA-2361)

Пересмотрено 15.02.2008


ПРЕДНАЗНАЧЕНИЕ

DRG Micro-Albumin – это твердофазный иммуноферментный тест, позволяющий количественно определять микроальбумин в человеческой моче.


КРАТКАЯ ИНФОРМАЦИЯ

Определение альбумина в моче важно, так как повышенное его значение показывает повышенный риск развития конечной стадии почечной недостаточности и сердечно-сосудистой недостаточности у людей с диабетом. Также, альбумин в моче является чувствительным показателем повреждения почек, вызванного нефротоксичными веществами. Самый важный и подмеченный случай из данных патологий – это едва уловимый рост уровня экскреции альбумина в мочу. Называется он микроальбуминурия. Микроальбуминурию нельзя измерить традиционными способами для определения протеинурий. Существует мнение, что микроальбуминурия показывает обратимую стадию почечной недостаточности, несмотря на то, что явная протеинурия отражает необратимые процессы. Протеинурия обычно появляется после 20 лет после приступа диабета, притом, что микроальбуминурия может быть обнаружена в течение первых 10 лет. Микроальбуминурия (30 – 150 мкг/мин) была обнаружена как маркер-предсказатель последующего развития диабетической нефропатии. Рекомендуется проводить периодический мониторинг (2 – 3 раза в год) уровня альбумина в моче у диабетиков для того, чтобы обнаружить возможное начало процесса повреждения почек, провести своевременное лечение и назначит соответствующий режим. Для диагностики альбумина в моче применяли радиальную иммунодиффузию, иммунонефелометрию, иммунотурбидиметрию и РИА. DRG Micro-Albumin Количественный микротитровальный конкурентный ИФА метод позволяет проводить удобный, чувствительный и специфичный тест на альбумин и не реагирует с другими компонентами мочи.


^ ПРИНЦИП АНАЛИЗА

DRG Micro-Albumin тест-сиcтема – это твердофазный, меченый ферментом иммуносорбентный анализ (ELISA). Лунки покрыты специфическим альбумином. Образцы, стандарты и контроли инкубируются в лунках с анти-альбуминовым ферментным конъюгатом. Ферментный конъюгат и альбумин в моче соперничают за связывание с антигенами альбумина на лунках. Несвязавшийся конъюгат вымывается водой. Количество связавшейся пероксидазы обратно пропорционально концентрации альбумина в образце, стандарте и контроле. При добавлении субстрата и хромогена после недолгой инкубации появляется окрашивание. Ферментная реакция прекращается после добавления стоп-раствора, и измеряется оптическая плотность при 450 нм. Если у пациента уровень альбумина в моче высокий, тем меньше конъюгата свяжется, тем бледнее будет окрашивание.


^ МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

  1. Данный набор предназначен только для диагностики «ин-витро».

  2. Компоненты набора действуют как единое целое. Компоненты из наборов разных лотов нельзя применять совместно.

  3. Стандарты, содержащие человеческую сыворотку, должны расцениваться как потенциально заразные. Все продукты, полученные от человека, должны использоваться надлежащим способом.


^ МАТЕРИАЛЫ, ПОСТАВЛЯЕМЫЕ В НАБОРЕ

  1. Микролуночные стрипы (96 лунок): лунки, покрытые микроальбумином. 8х12 стрипов.

  2. Ферментный конъюгат (11 мл): анти-микроальбуминовые антитела, конъюгированные к пероксидазе хрена.

  3. Раствор для разведения образцов (11 мл) или Нулевой стандарт: фосфатный солевой буфер со стабилизатором.

  4. Набор Референс-Стандартов (0,75 мл/ флакон): Человеческий микроальбумин. Концентрации: 0,5; 2,5; 5; 10; 20 мкг/мл.

  5. Раствор А (11 мл): буферный раствор содержащий пероксид водорода.

  6. Раствор В (11 мл): тетраметилбензидин

  7. Концентрат промывочного буфера (20Х), приготовить рабочий промывочный раствор, добавив 50мл концентрата промывочного буфера к 950 мл дистиллированной воды

  8. Стоп-раствор: 2н HCl.

  9. Держатель для лунок.


^ МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ, НО НЕ ПОСТАВЛЯЕМЫЕ С НАБОРОМ

  1. Микропланшетный ридер с возможностью считывания при 450 нм.

  2. Пипетки с наконечниками для отмеривания 25 мкл, 100 мкл.


ХРАНЕНИЕ

  1. Хранить наборы при 2 – 8 ºС, плашки держать в сухих пакетах с диссикантом.

  2. Реагенты стабильны до истечения срока годности набора. Раствор А и раствор В должны быть бесцветными. Если растворы поголубели или посинели, их нужно заменить. Не подвергать реагенты воздействию прямых солнечных лучей в процессе хранения или использования.


ОБРАЗЦЫ

Соберите одинарные, разделенные по времени, еженощные или посуточные образцы без консервантов, записывая время, длительность и общий объем сбора. Тщательно перемешайте, отберите маленькую порцию и отцентрифугируйте или отфильтруйте её. Перед анализом доведите образцы до комнатной температуры. Не грейте образцы, используя тепло.

Следующие меры должны быть соблюдены:

  1. Экскреция альбумина в моче увеличивается под воздействием физиологических факторов, таких как прямое положение тела, упражнения и острый диурез. Необходимо, чтобы метод сбора мочи был стандартизован при наблюдении за пациентами. Образцы должны собираться без дополнительных усилий пациента, а также без активного питья. Относительные интервалы должны отличать тип сбора мочи.

  2. Возможность загрязнения менструальной или семенной жидкостью, а также возможность уретральной инфекции должны приниматься во внимание.

  3. Образцы мочи оставляют при комнатной температуре на несколько минут или хранят при 4 – 8 ºС несколько часов или по большей части три дня перед анализом. Замороженные образцы с Твин-20 (1 мл/л) могут храниться до шести месяцев.


^ ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ

  1. Привести все реагенты к комнатной температуре (20 – 25 ºС) и аккуратно перемешать до начала теста.

  2. Подготовить все реагенты и образцы к анализу до начала тестирования. Начав тест, все шаги должны производиться без промедления для того, чтобы получить надежный и полный результат.

  3. Для каждого образца используйте новый наконечник.


^ ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА

  1. Закрепить необходимое количество лунок в держателе. Отметить в протоколе, в какой лунке какой образец находится.

  2. Распределить 10 мкл образцов, контролей и стандартов в каждую лунку.

  3. Распределить 100 мкл ферментного конъюгата в каждую лунку и помешать 5 секунд.

  4. Инкубировать 30 минут при комнатной температуре.

  5. Удалить инкубационную смесь и промыть лунки 5 раз промывочным рабочим раствором (300мкл на лунку за 1 раз).

  6. Распределить 100 мкл раствора А, а потом 100 мкл раствора В в каждую лунку.

  7. Инкубировать 15 минут (к. т.).

  8. Остановить реакцию добавлением 50 мкл 2н раствора HCl в каждую лунку и считать ОП при 450 нм с помощью микропланшетного ридера.


^ ЗАМЕЧАНИЯ ПО ПРОЦЕДУРЕ

  1. Для получения наилучших результатов тщательно промывайте лунки и удаляйте из них воду.

  2. Пипетируйте реагенты и образцы на дно лунки. Вращательное помешивание и встряхивание не требуется.

  3. Поглощение зависит от температуры и времени инкубации. Рекомендуется подготовить все реагенты и образцы к анализу до его начала. Проводить раскапывание за равные интервалы времени без задержек и прерываний.

  4. По той же причине должно быть ограничено количество тестируемых образцов. Не более 20 образцов пациентов с комплектом стандартов в дубле.

  5. Если образец содержит микроальбумина больше 100 мкг/мл образец следует развести раствором для разведения и обследован заново, как описано выше.


^ ПОДСЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ

  1. Начертить концентрацию (X) каждого референс-стандарта напротив поглощения (Y) на логарифмической бумаге.

  2. Получить значения образцов пациента используя стандартную кривую.




Пример:


Лунка №

Содержимое лунки

(мкг/мл)

Поглощение

(450 нм)

Микроальбумин

(мкг/мл)

А1

0

3,157




B1

2,5

2,505




C1

5

2,067




D1

25

0,458




E1

50

0,250




F1

100

0,109




G1

Пациент 1

1,222

9,7

H1

Пациент 2

0,696

16,9

A2

Пациент 3

0,555

20,8

B2

Пациент 4

0,212

56,9

C2

Пациент 5

0,175

76,0


^ ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ

  1. Рекомендуется каждой лаборатории разработать свои собственные нормы нормальных и ненормальных значений.

  2. Для исследования микроальбуминурии обычно используются ночные и суточные образцы. Верхняя граница нормы выделения альбумина в моче у здоровых людей составляет примерно 26 мг/сутки (18 мкг/мин) и 9 мкг/мин в ночное время.


Альбумин в моче, концентрация у нормальных взрослых людей:

Первый дневной 6,72 мг/л (1,89 – 23,9)

Кумулированный (сутки) 5,33 мг/л (1,31 – 22,70)

У здоровых людей альбумин обычно присутствует в низких значениях, поэтому постоянно держащиеся значения больше 15-30 мг/л расцениваются как отклонения от нормы.


  1. Альбумин в моче у 123 диабетиков составил 4,8 – 209 мг/л и в среднем 46,8-61,4 мг/л.


ОГРАНИЧЕНИЯ

  1. Для диагностических целей, значения микроальбумина должны использоваться как добавочная информация к другим данным терапевта.

  2. Образцы с pH < 4 или >8 могут соответственно уступать результатам, которые соответственно выше или ниже упомянутых значений. Подкисленные образцы непригодны для анализа.

  3. Нельзя проводить анализ, если образец имеет явные признаки бактериального роста, или пациент имеет признаки инфекции мочевыводящих путей.

  4. Образцы с кровью непригодны для анализа, даже если их очистить с помощью центрифуги, так как кровоподтек – это явный признак контаминации.


^ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА

Каждая лаборатория должна использовать внутренние контроли на нескольких уровнях, чтобы отслеживать проведение анализа. Контроли должны расцениваться как неизвестные. Полученные значения должны совпадать с заявленными значениями для данного контроля. Контроли могут быть приобретены у коммерческих организаций, но они ни в коем случае не должны содержать консервант азид натрия.


^ ХАРАКТЕРИСТИКИ АНАЛИЗА


Точность

Были проведены исследования на воспроизводимость. Смешали аликвоту разведенной отобранной заранее мочи и стандарт альбумина. Значение альбумина было подсчитано и, таким образом, было получено процентное отношение воспроизводимости.


Начальные

значения

(мкг/мл)

Ожидаемые

значения

(мкг/мл)

Наблюдаемые

значения

(мкг/мл)

Воспроизводимость

(%)

5

15

17,0

113,3

5

27,5

29,5

107,3

10

17,5

18,3

104,6

10

30

30,8

102,7

20

22,5

23,7

105,3

20

35

36,2

103,4



Четкость

Были порочены коэффициенты вариации интер- и интра-анализов при обследовании трех разных образцов.


Интра-анализ

Пул А

Пул B

Количество

8

8

^ Среднее значение (мкг/мл)

16,77

60,2

С.О. (мкг/мл)

1,91

7,6

К.В. (%)

11,39

12,6




Интер-анализ

Пул А

Пул B

Количество

8

8

^ Среднее значение (мкг/мл)

16,3

55,8

С.О. (мкг/мл)

2,18

3,46

К.В. (%)

13,4

6,19


Специфичность

Добавление каждого ниже перечисленного соединения в образец мочи не влияет на измерение альбумина набором DRG Micro-Albumin Quantitative:


Глюкоза

40 мкг/мл

Аскорбиновая кислота

2 мг/мл

Трансферрин

30 мкг/мл

Креатинин

10 мг/мл

Мочевая кислота

1,5 мг/мл

Ретинол-связывающий Белок

1 мг/мл



Антитела, используемые в наборе DRG Micro-Albumin Quantitative высоко специфичны к человеческому альбумину. Перекрестная реактивность у альбумина с другими видами белков, а также с крысиным альбумином, бычьим альбумином, куриным овальбумином, кроличьим альбумином и человеческим IgG, обнаружена не была.


Чувствительность

Для определения чувствительности анализа было проведено линейное исследование:


Начальное

(мкг/мл)

Разведение

(кратность)

Ожидаемое

(мкг/мл)

Наблюдаемое

(мкг/мл)

Воспроизводимость

(%)

100

1:2

50

52,8

105,6




1:3

33,3

34

102,1




1:4

25

24,1

96,5




1:5

20

18,7

93,4




1:10

10

11,0

110




1:20

5

6,63

133



Минимальная обнаруживаемая концентрация микроальбумина 1 мкг/мл.


ЛИТЕРАТУРА

1. Morgensen C.E. et al. N. Engl. J. Med.

2. 311, 89-93, 1984.

3. Morgensen C.E. Kidney Int 31, 673-689, 1987.

4. Herman W.et al. Am J Kidney Dis 13, 2 , 1989.

5. Lauwerys R.R. et al. Br J Ind Med 43, 433, 1986.

6. Rowe D.J.F. et al. Ann Clin Biochem 27, 297, 1990.

7. Mueller P. et al. Clin. Chem 37, 191, 1991.

8. Nathan DM. et al. Diabetes Care 10.

9. 414-418, 1987.

10. Viberti GC. et al. Lancet 1, 1430-1432, 1982.



Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:

Похожие:

Drg micro-Albumin это твердофазный иммуноферментный тест, позволяющий количественно определять микроальбумин в человеческой моче icon Вирусные болезни рептилий
Ртга – реакция торможения гемагглютинации; тэм – трансмиссивная электронная микроскопия; цнс – центральная...
Drg micro-Albumin это твердофазный иммуноферментный тест, позволяющий количественно определять микроальбумин в человеческой моче icon Инструкция по применению тест-полосок для определения: глюкозы и кетоновых тел в моче

Drg micro-Albumin это твердофазный иммуноферментный тест, позволяющий количественно определять микроальбумин в человеческой моче icon Коронарография (КГ) это рентгенконтрастный метод исследования коронарных артерий, позволяющий точно

Drg micro-Albumin это твердофазный иммуноферментный тест, позволяющий количественно определять микроальбумин в человеческой моче icon Тест полоски для определения; скрытой крови, глюкозы, кетонов, билирубина, белка, рН, уробилиногена

Drg micro-Albumin это твердофазный иммуноферментный тест, позволяющий количественно определять микроальбумин в человеческой моче icon Инструкция по применению «now legionella Urinary Antigen Test» «Быстрый тест для выявления антигена

Drg micro-Albumin это твердофазный иммуноферментный тест, позволяющий количественно определять микроальбумин в человеческой моче icon Инструкция по применению «now streptococcus pneumoniae Test» «Быстрый тест для выявления антигена

Drg micro-Albumin это твердофазный иммуноферментный тест, позволяющий количественно определять микроальбумин в человеческой моче icon Для правильной организации разведения кроликов прежде всего необходимо научиться определять их пол.

Drg micro-Albumin это твердофазный иммуноферментный тест, позволяющий количественно определять микроальбумин в человеческой моче icon 1. Внаименьшей степени тайны человеческой психики исследовались и изучались …

Drg micro-Albumin это твердофазный иммуноферментный тест, позволяющий количественно определять микроальбумин в человеческой моче icon Наш Спа-центр это не только отдых это результат, это профессиональная консультация, это шопинг, это

Drg micro-Albumin это твердофазный иммуноферментный тест, позволяющий количественно определять микроальбумин в человеческой моче icon Drg антитела класса IgA к бета 2-Гликопротеину (eia-3884)

Разместите кнопку на своём сайте:
Медицина


База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
Медицина