Лекционный курс по частной вирусологии вирусы вызывающие болезни жвачных и однокопытных для студентов факультета ветеринарной медицины
|
|
Скачать 1.85 Mb.
|
|
^
Вирусную природу ИНАН лошадей впервые установили Карре и Балле в 1904-1906 гг. Морфология и химический состав. Вирус имеет внешний оболочечный гликопротеин gp90 и трансмембранный гликопротеин gp45. В настоящее время консервативные эпитопы белков gp90 и gp45 служат основной целью поисков компонентов вакцины против ИНАН. Вирус ИНАН имеет конический капсид длиной около 120 нм и шириной 60 и 20 нм соответственно на широком и узком конце. В его структуре обнаружено 6 основных белков с мол.м. от 9 до 90 кДи 4 минорных полипептида. В состав наружного слоя оболочки вирионов входит 2 гликопротеина - gp90 и gp45. Устойчивость. Вирус устойчив к действию трипсина, РНК- и ДНК-азы, чувствителен к эфиру; термолабилен, при 60°С теряет вирулентность за 30 мин. Кипячение разрушает его через 1-2 мин, солнечные лучи инактивируют за 1-3 ч При 0°С до -2°С сохраняется до 3-х лет, в глицерине - 7 мес., в моче и навозной жиже - до 2,5 мес., в высушенной крови в комнатных условиях - 7 мес., в стерильной воде - до 160 дн. Инфицированное сено и пастбища безопасны через 9 мес. после заражения В осенне-зимний период в овсе вирус теряет патогенные свойства только через 8,5 мес. Устойчив к высушиванию и гниению. В лиофилизированном состоянии при комнатной температуре сохраняет вирулентность в течение 7 мес. Замораживание на его активность не влияет. При биотермической обработке навоза вирус инактивируется через 30 дн, 2-4%-ный р-р NaOH убивает его за 20 мин, 35%-ный р-р креалина - через 30 мин, 20%-ная хлорно-известковая смесь, содержащая 29,5% активного хлора, обезвреживает вирус в сточных водах за 3 сут. Вирус относительно устойчив к воздействию химических средств. Глицерин частично инактивирует его в течение 4 нед и полностью - за 7 мес., 2%-ный р-р формалина инактивирует вирус за 5 мин, но через 5 мин можно реактивировать его р-ром аммиака. ^ У вируса ИНАН описаны 3 группы АГ р29, р12 и р14. АГ р29 представляет собой белок, обозначенный как G-AT Он находится внутри вириона, освобождается при обработке вируса эфиром, является общим для всех штаммов вируса ИНАН и обнаруживается в РСК, РДП и РИФ Помимо общего специфического G-AT, вирус содержит поверхностные АГ р12 и р14, различающиеся в опытах перекрестного заражения гомологичными и гетерологичными штаммами. Кроме 2-х негликолизированных вирусных пептидов (р29 и р12), вирионы ИНАН содержат гликопротеины gp77/79 (основной гликопротеин вириона) и gpl0 AT вирусной оболочки gp77/79 ответственен за продукцию ВНА и подвержен АГ-изменчивости под влиянием AT. Установлено, что наиболее АГ- активная область белка gp45 (оболочечного гликопротеина) располагается на аминном конце и лежит между гидрофобными доменами слияния и трансмембранным доменом . В состав сердцевины вирионов входит 4 негликолизированных белка (р26, р15, р11, р9), однако основная масса состоит из белков р26 и р15. Известно, что штаммы возбудителя ИНАН различаются в 1 РН и перекрестной защиты на лошадях. Установлено, что в процессе инфекции происходят изменения поверхностных АГ вируса, что сопровождается появлением антигенных вариантов, т.е. большое разнообразие вариантов вируса ИНАН может генерироваться в организме инфицированных животных. Установлено быстрое появление новых АГ вариантов вируса в процессе персистентной инфекции. Существенная изменчивость генов поверхностных гликопротеинов gp20 и gp45 в процессе инфекции у одного и того же животного выявляется с помощью монАТ. ^ . Штаммы вируса ИНАН, выделенные в различных частях земного шара, в АГ-отношении идентичны Они различаются в РН, но имеют общий АГ, выявляемый в РСК, РЗСК и РДП Помимо того, вирус ИНАН дает перекрестные серологические реакции с вирусом ВИЧ (СПИД), но не дает таких перекрестов со всеми другими ретровирусами животных. У лошадей, экспериментально зараженных клонированным вирусом ИНАН, развивается хронически протекающая болезнь с периодическими рецидивами лихорадки, сопровождающаяся виремией. Изоляты вируса, выделенные во врем приступов лихорадки, были неодинаковы по АГ-свойствам и отличались друг от друга в РН и ЭФ-ПААГ, но не в РСК и РДП. ^ . Вирус проникает в организм восприимчивых животных, главным образом, парентерально и разносится по всем органам и тканям. Особенно интенсивно размножается в костном мозге и крови, вызывая угнетение эритропоэза и гемолиз части эритроцитов во время приступа лихорадки. Наиболее высокие титры вируса наблюдают у зараженных лошадей во время первого подъема температуры. Затем титр вируса снижается, но в период повышения температуры вновь возрастает. У лошадей без симптомов болезни титр вируса низкий, иногда его даже невозможно выявить (в культуре лейкоцитов). ИНАН - лимфопролиферативная болезнь с непрерывной виремией при наличии AT. Это можно объяснить повреждением лимфоцитов, вызванным вирусом, в результате чего защитный клеточный иммунный процесс нарушается. Возбудитель в крови находится в виде комплекса вирус-АТ. У большинства лошадей наблюдают гипергаммаглобулинемию и снижение в сыворотке крови количества комплемента С-3. При изучении локализации вирусного АГ с помощью ИФ у экспериментально зараженных лошадей установлено следующее. Через 6-38 дн. после заражения животных АГ обнаруживали в цитоплазме клеток селезенки, лимфоузлов, печени, почек, легких, костного мозга, зобной железы, головного мозга, мозжечка, гипофиза и желудка. Он обычно находился в единичных клетках или в макрофагах в виде небольших капелек, включенных в цитоплазму. Вирусовыделение. Из организма больной лошади вирус выделяется с мочой, калом, носовой слизью, секретом конъюнктивы, молоком. Загрязненные выделениями больных корма, навоз и другие субстраты могут быть факторами передачи инфекции. ^ У инфицированных лошадей образуются AT к гликопротеинам оболочки и мажорному протеину сердцевины (р26) вирионов Однако гликопротеины оболочки вирионов очень вариабельны, что является одним из основных механизмов защиты возбудителя от элиминирующего воздействия факторов иммунитета. В организме инфицированных лошадей в процессе персистенции возбудителя образуется большое количество различающихся по гликопротеину антигенных вариантов вируса КСА у больных животных впервые обнаружены в 1966 г. Сыворотка экспериментально зараженных лошадей становится положительной в РСК с 14-го по 29-й день после инокуляции и удерживается в таком значении в течение нескольких недель Величину КС-титра у больных животных можно разделить на 4 стадии предшествующую - перед развитием AT, раннюю - увеличение титра с высоким плато, снижающую - с уменьшением титра, и позднюю стадии болезни. Специфические ПА появляются в крови лошадей в течение 45 дн. после заражения Основные симптомы болезни, включая анемию, тромбоцитонемию и гломерулит, являются следствием развития специфического иммунного ответа. ПА к группоспецифическому АГ выявляют РИД, используя АГ из зараженные культур клеток или тканей селезенки или из очищенного вируса ПА обнаруживают на 14-38-й день после заражения; они могут сохраняться до 7 лет. Преципитины более постоянно обнаруживают в сыворотках крови хронически больных животных. В селезенке больных лошадей выявлен АГ, участвующий в реакции преципитации с AT сыворотки крови больных животных. Сыворотка крови зараженных лошадей содержит антивирусные AT, реагирующие как в РСК, так и в РЗСК Выделенный IgG реагировал в РСК, в то время как иммуноглобулин IgG(T) ингибировал РСК и связывался в РЗСК В РЗСК AT выявляли с 28-го по 120-й день после заражения животного. АГ детерминанты для индукции ВНА расположены в вариабельной области gp90. Основная гуморальная реакция направлена против высоко АГ домена, представленного 83 аминокислотами. Низкие титры ВНА и высокий уровень антигликопротеинной активности сывороток свидетельствует о том, что иммунный ответ направлен прежде всего не на нейтрализующие эпитопы, а на вирусные гликопротеины. Большинство иммуногенных сайтов на поверхности вириона не чувствительно к нейтрализации. Нейтрализующей активностью обладает фракция IgG, которую обнаруживают через 40 дн после заражения животного. У некоторых лошадей она сохраняется в течение всей болезни и действует на поверхностные АГ вириона, т. е. реагирует с типо-, но не группоспецифическим компонентом вируса ИНАН. Опыты показали, что 99% инфекционного вируса циркулирует в сыворотке больных животных в комплексе с AT . ^ . Подкожное или внутривенное введение 20-50 мл, а часто даже 0,01 мл крови или сыворотки, вызывает у лошадей, в частности у жеребят, через 9-93 дня остро или хронически протекающую болезнь или только вирусоносительство. Заражение per os удается с трудом даже при введении массивных доз вируса. Требуется повторная дача большого количества инфицированных крови или мочи. Ослов и мулов заразить искусственно удается не всегда Удавалось заражать свиней, в их организме вирус находился 30-197 дн. Культивирование. Вирусразвивается в переживающей ткани селезенки, надпочечников и лимфоузлов жеребят, в культурах эмбриональных тканей лошади, но без признаков ЦПД, в культуре клеток лошадиных лейкоцитов, а также клеточной линии кожи лошади. ^ Вирус обладает ГА активностью в отношении эритроцитов морской свинки ГА АГ вируса типоспецифичны и отличаются от АГ, выявляемых в РН. ГА не отделим от вирусных частиц. Рецепторы эритроцитов разрушаются протеолитическими ферментами и формальдегидом, но устойчивы к нейраминидазе, дезоксихолату натрия и перйодату калия. В сыворотке больных лошадей содержатся анти-ГА. В РТГА вирус каждого штамма ингибируется только гомологичной антисывороткой. Появление в сыворотках крови анти-ГА предшествует появлению у них ВНА. Вирус ИНАН адсорбируется на лошадиных эритроцитах, гемолиз их происходит после инкубации со свежей сывороткой крови лошади или морских свинок при 37°С Эритроциты, обработанные 4 ед. ГА и неразведенной свежей сывороткой лошади, лизируются на 20%, в то время как при обработке 4 ед комплемента морской свинки - на 100%. Специфическая сыворотка лошади подавляет способность вируса агглютинировать эритроциты, но гемолиз не тормозит. Добавление специфической сыворотки к вирусу, уже прикрепившемуся на эритроцитах, усиливает гемолиз. Гемадсорбирующие свойства. Наблюдали адсорбцию эритроцитов морской свинки на инфицированной вирусом культуре клеток кожно-мышечной ткани эмбриона лошади. ^ Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больные лошади. Особенно опасны животные в период острого течения болезни и хроники в период обострения болезни, так как в это время вирус в организме лошадей находится в наибольшей концентрации. Источниками инфекции могут быть также лошади с латентными формами болезни. Вирусоносительство у них может продолжаться 7-10 и даже 18 лет. Необходимо также учитывать возможность распространения возбудителя лошадьми при латентном течении инфекции. Факторами передачи возбудителя могут быть загрязненные выделениями больной лошади корма, вода, навоз, предметы ухода и т.д. В организме восприимчивого животного вирус попадает через кожу, слизистые оболочки и ЖКТ. Последний путь заражения, по наблюдениям многих авторов, не считается ведущим. Заражение ИНАН возможно при случке и конгенитально - жеребят больными кобылами. Передача вируса может произойти при проведении различных манипуляций с кровью, шприцем, при маллеинизации, искусственном осеменении и т.д.. Однако основной путь переноса возбудителя от больных лошадей к здоровым - кровососущие насекомые: слепни, мухи-жигалки, комары, а также от кобылы к жеребенку - внутриутробно или с молоком. Установлено заражение при совместном содержании животных. ИНАН характеризуется выраженной стационарностью, сезонностью и определенным ареалом. Болезнь чаще встречается в летне-осеннее время, в лесисто-болотистых с кислыми неполноценными почвами, в период массового размножения и лета жалящих насекомых (гнус). Массовое заболевание лошадей наблюдают преимущественно в годы с жарким и сухим летом, а зимой и весной и в горных местностях - в виде спорадических случаев. Эпизоотия может продолжаться от 3-5 мес. до 1-2 лет, протекая остро и подостро. Затем начинает преобладать хроническое (медленное) и латентное течение. Факторы, ослабляющие резистентность животного, - неполноценное кормление и сильное раздражение нервной системы животного, вызванное укусами кровососущих насекомых. ^ В естественных условиях болеют лошади всех возрастов и пород, а также ослы и мулы Заболевшие жеребята часто погибают. Ослы более устойчивы к вирусу ИНАН. ^ Болезнь развивается после периода инкубации в течение от 15 дн. до нескольких недель в природных условиях и от 10 до 20 дн. в эксперименте. Различают сверхострое, или септицемическое, острое, подострое и хроническое или латентное течение анемии. В развитии болезни характерна определенная цикличность с чередованием периодов обострения (рецидивов) и затухания (ремиссий), что создает в конечном счете большое многообразие ее форм. При сверхостром течении отмечают быстрый подъем температуры тела, геморрагический гастроэнтерит, асфиксию, сердечную слабость, атаксию, параличи задних конечностей и гибель животных через несколько часов или 1-2 дня. ^ болезни также характеризуется лихорадкой (41-42°С), угнетением или легким возбуждением, гиперемией и отеком конъюнктивы и слизистой оболочки носовой и ротовой полостей, нарушением сердечной деятельности, иногда кровавым поносом, исхуданием при сохраненном аппетите, набуханием и бледностью с наличием кровоизлияний оболочек третьего века, отеками в области живота, препуция, конечностей, шаткостью походки, одышкой, быстрым развитием анемии. Кровь становится водянистой (разжижение), количество эритроцитов падает до 1 млн. в 1 см3. В крови появляются комплексы "инфекционный вирус - антитело" и отложение их в клубочках почек. Количество гемоглобина снижается до 20-30%, СОЭ ускорена (70-80 делений в первые 15 мин), отмечается гипергам-маглобулинемия и тромбоцитопения. В церебральной жидкости регистрируют увеличение количества белка и белых клеток крови. Продолжительность болезни 1-3 нед, иногда месяц, и животные погибают. ^ болезни длится 2-3 мес., сопровождается ремиссирующей лихорадкой и такими же симптомами в период рецидива, что и при остром течении. В период ремиссии указанные признаки постепенно исчезают, и животные выглядят здоровыми. Чем чаще и продолжительнее приступы лихорадки, тем быстрее истощаются защитные силы организма, и животные в конце концов погибают. ^ болезни чаще является продолжением подострого течения Оно отличается чередованием лихорадочных периодов (через 1-3 дн.) и продолжительными периодами покоя (ремиссии) - до нескольких месяцев. Во время рецидивов наблюдаются те же симптомы, что и при остром течении болезни: утомляемость, одышка, сердцебиение, потливость, тремор мышц, исхудание В период ремиссий они исчезают. ^ ИНАН наблюдается обычно в стационарно неблагополучных пунктах у резистентных лошадей. Для него характерны резкие и кратковременные подъемы температуры. Такие животные внешне кажутся здоровыми, но являются вирусоносителями представляют большую опасность для окружающего поголовья, служат источником возбудителя инфекции. Болезнь может длиться годами, проявляясь иногда лишь заметным исхуданием, быстрым утомлением и учащенным сердцебиением на работе и при быстрой езде. Персистенция вируса в организме таких внешне здоровых животных может наблюдаться на протяжении 18 лет. ^ варьируют в зависимости от тяжести и продолжительности течения болезни. Отмечают выраженный геморрагический диатез в виде многочисленных кровоизлияний на слизистых, серозных оболочках и в паренхиме органов, увеличение селезенки и лимфоузлов, дистрофические изменения в паренхиматозных органах. Картина вскрытия после острого течения болезни характеризуется септическими явлениями. Наблюдают (непостоянно) исхудание животного, желтушные оттенки слизистых оболочек глаз, носа, рта, с точечными кровоизлияниями, наиболее часто на третьем веке и слизистых губ. Подкожная и межмышечная клетчатка желтушна, пронизана кровоизлияниями, местами имеет студневидные серозно-геморрагические инфильтраты. Лимфоузлы, особенно портальные и почечные, набухшие, сочны, покрасневшие, окружающая их ткань отечна. Скелетные мышцы крестца и крупа кое-где серого или глинистого цвета, на разрезе рисунок сглажен. Селезенка сильно увеличена (спленомегалия), кровенаполнена, с кровоизлияниям под капсулой, пульпа дряблая. Печень увеличена, дрябловата, мозаичного цвета. Почки увеличены, бледны, усеяны кровоизлияниями, граница слоев стушевана. Сердце увеличено, миокард серого или серо-глинистого цвета. В ЖКТ геморрагическое воспаление слизистой оболочки с кровотечением в полость. В легких кровоизлияния под плерву и в паренхиму. Кровь водянистая, светло-красного (алого) цвета. В головном и спинном мозге иногда находят полнокровие, кровоизлияния, отек и дряблость мозгового вещества. Патологоанатомические изменения после хронического течения болезни характеризуются отсутствием выраженных септических явлений, истощением, бледностью и желтушностью слизистых оболочек, наличием мелких кровоизлияний на серозных покровах кишечника, сердца и в подкожной клетчатке, студневидных отеков клетчатки конечностей, подгрудка и брюшных стенок, увеличением селезенки и лимфоузлов, их плотной консистенцией Печень увеличена, плотная, имеет мускатный рисунок на разрезе. Почки увеличены, плотны, серо-желтоватого цвета Миокард в состоянии зернистой и жировой дистрофии с очагами склероза (серо-белые участки). После латентного течения болезни в трупах не обнаруживают характерных изменений Иногда отмечают изменение цвета селезенки (пульпа ее приобретает светло-красное окрашивание), следы старых кровоизлияний (пигментные пятна) на эндокарде, под серозньми оболочками и очаговые некрозы миокарда. ^ . Наиболее характерны и постоянны изменения со стороны мезенхимы в виде пролиферации клеток мононуклеарно-макрофагальной системы и нарушения обмена железа (гемосидерина). При остром течении болезни уже через 11-12 дн. после заражения в селезенке отмечают сильное инфильтрирование ткани незрелыми эритроцитами, уменьшение количества гемосидерина и хаотичное его расположение по всей пульпе, а не в присинусных зонах (как это бывает в норме), атрофию лимфофолликулов, набухание и пролиферацию ретикулярных клеток, увеличение числа лимфобластов, эозинофильных гранулоцитов. Патогенез. Патогенез изучен недостаточно. Вирус, проникая в организм восприимчивого животного парентерально с кровью, широко распространяется по органам и тканям. Чаще всего он выявляется в селезенке, лимфоузлах и печени. Методом ФА АГ вируса четко определяется в цитоплазме макрофагов в виде зерен или гранул. Возбудитель размножается в эритроцитах крови и кроветворных клетках костного мозга, сильно наводняя органы и ткани больного животного, достигая максимума в крови в период лихорадки. В это время он легко выявляется различными методами. В то же время в период ремиссии вирус можно обнаружить лишь путем заражения здоровой лошади. Наиболее характерный признак болезни - анемия - сопровождается резким уменьшением количества эритроцитов, гемоглобина, разжижением крови, ухудшением её свертываемости. Согласно современным представлениям, анемия может быть обусловлена двумя механизмами. Первый механизм связан с непосредственным действием вируса на кроветворный орган -костный мозг, вызывая угнетение его деятельности, нарушение эритропоэза, лизис эритроцитов, снижение (или прекращение) усвоения железа Второй механизм, который считают главным в формировании анемии, связан с образованием противовирусных AT. Показано, что 3-я фракция комплемента (СЗ) и AT, синтезирующиеся в организме в ответ на проникновение вируса, покрывают зараженные эритроциты лошади, из-за чего последние становятся хрупкими, быстро и в большом количестве разрушаются и фагоцитируются макрофагами. Вирус вызывает раздражение клеток ретикулоэндотелия, вследствие чего происходит интенсивная пролиферация и накопление клеток мононуклеарно-макрофагальной системы в селезенке, печени, почках и других органах Селезенка утрачивает способность перерабатывать погибшие эритроциты, и эту функцию берут на себя другие органы, в клетках которых откладывается большое количество гемосидерина. Исследование пунктатов костного мозга показывает, что основной симптом болезни - анемия - возникает вследствие угнетения эритропоэза, а также лизиса эритроцитов, подвергшихся воздействию вируса и фагоцитированных клетками РЭС. При остром течении болезни эригробластическая группа клеток уменьшается с 40 до 4,6%, а гистиоцитарная группа, клетки которой, обладая фагоцитарной функцией, пожирают эритроциты, увеличивается с 31 да 40%. Считают, что в развитии анемии играет роль снижение деятельности костного мозга. ДИАГНОСТИКАДиагноз на ИНАН ставят комплексно Учитывают эпизоотологические особенности болезни, результаты клинического, гематологического и лабораторного исследований, патологоанатомические и гистологические изменения. Эпизоотологические данные собирают непосредственно в хозяйстве, учитывая давность и характер болезни, пути заноса инфекции, динамику заболеваемости и падежа лошадей за несколько предшествующих лет. Принимают во внимание, что массовые вспышки ИНАН наблюдаются исключительно летом и осенью, а спорадические случаи - в любое время года. Кроме традиционного подсчета эритроцитов, убедительным диагностическим методом является подсчет числа звездчатых лейкоцитов. При клиническом обследовании учитывают различия в течении болезни, рецидивирующий тип лихорадки при подострой и хронической анемиях, кровоизлияния на слизистых оболочках, исхудание при нормальном аппетите, шаткость зада, отеки, повышенную возбудимость сердца (аритмия, учащение пульса) Повышенную возбудимость сердца устанавливают функциональной пробой: пробег 50 м, подсчет пульса каждые 5 сек в течение 0,5 мин. Результат от деления первой цифры подсчета на последнюю цифру у больных анемией лошадей должен составлять 2,5-3. Гематологическим исследованием обнаруживают лимфоцитоз, анемию (уменьшение числа эритроцитов в 4-8 раз по сравнению с нормой), увеличенную СОЭ Убедительным диагностическим тестом является подсчет звездчатых лейкоцитов. Из патоморфологических изменений для острого течения болезни наиболее характерными являются бледность и желтушность слизистых и серозных покровов и подкожной клетчатки, точечные геморрагии в конъюнктиву, слизистую оболочку носа, увеличение селезенки, печени, почек, усиление пролиферации лимфоидных клеток и гистиоцитов в этих органах и отложение гемосидерина в печени при одновременном уменьшении количества его в селезенке. Указанные изменения наблюдают в период рецидива болезни. В хронических случаях характерными признаками являются почти полное отсутствие гемосидерина в селезенке и накопление его в других органах, гломерулонефрит, эндо- и миокардит, интенсивная лимфоидно-гистиоцитарная реакция в селезенке, лимфоузлах, печени, почках в сочетании с некродистрофическими изменениями паренхиматозных клеток. Из серологических реакции для диагностики ИНАН вначале была предложена РСК, в которой первоначально использовали AT, полученный из селезенки больной лошади, а затем культуральный. ^ В лабораторию направляют для серологического исследования 5-6 мл сыворотки крови лошадей, которую консервируют мертиолятом 1:10000 или путем добавления антибиотиков (пенициллина и стрептомицина по 1000 ЕД/мл) и хранят при температуре 4-8°С. Сыворотки без консерванта хранят в замороженном состоянии. Для гематологического исследования направляют 10-12 мл. крови, стабилизированной 20%-ным р-ром лимоннокислого натрия. Кровь берут до поения и кормления животного. Дм гистологического исследования берут кусочки печени, селезенки, сердца, легких, лимфоузлов и почек от павших или убитых с диагностической целью лошадей. Материал помещают в 10%-ный р-р формалина. Толщина кусочков не должна превышать 2 см. Для постановки биопробы на жеребятах берут по 300-500 мл крови от наиболее подозрительных по заболеванию ИНАН лошадей во время подъема температуры. ^ Биопроба. В сомнительных случаях для проверки особо ценных лошадей ставят биопробу на жеребятах. При исследовании сывороток лошадей-продуцентов ставят групповую биопробу. С этой целью из благополучного хозяйства берут 2-х жеребят в возрасте 6-12 мес., 4-кратно, с интервалом 7 дн, их обследуют клинико-гематологически и серологически. Затем жеребят заражают сывороткой крови или плазмой, полученной от больных лошадей Сыворотку крови и плазму предварительно проверяют на стерильность (на МПА, МПБ и МЛПБ) и безвредность (на 3-х белых мышах, вводя ее подкожно или внутривенно в дозе 1 мл.). Сыворотку вводят жеребятам подкожно или внутривенно в дозе 100-200 мл, дефибринированную кровь - только подкожно в той же дозе. За зараженными животными наблюдают 90 дн, через каждые 10-15 дн проводят гематологические и серологические (в РДП) исследования. Биологическую пробу считают положительной при наличии у зараженных жеребят характерных клинических симптомов, рецидивирующей лихорадки, слабости, бледности или желтушности слизистых оболочек, исхудания и при получении положительных результатов серологических и гематологических исследований. Жеребят, давших сомнительные результаты клинико-гематологических и серологических исследований, убивают и исследуют патологоанатомически и гистологически. При положительном результате обнаруживают серозно-геморрагическую инфильтрацию подкожной и межмышечной клетчатки, гиперемию и отек лимфоузлов, зернистую или жировую дистрофию скелетных мышц, миокарда, почек. Селезенка сильно увеличена вследствие кровенаполнения пульпы. Печень гиперемирована, увеличена, с выраженной дольчатостью на разрезе, паренхима имеет мускатный рисунок. Во всех органах появляется реакция ретикулоэндотелиоза. Биопробу считают отрицательной при отсутствии у подопытных жеребят симптомов болезни, отрицательных результатов серологических и гематологических исследований. Групповую биопробу проводят путем заражения двух жеребят смесью сыворотки (плазмы) крови 10-15 лошадей-продуцентов. Смесь вводят подкожно по 100-200 мл каждому жеребенку ^ . Приготовленные срезы органов окрашивают гематоксилин-эозином общепринятым методом. Срезы для исследования на гемосидерин окрашивают по Перлсу. Характер и степень изменений зависят от стадии болезни, количества рецидивов, ремиссий и их продолжительности. Наиболее характерные изменения выражены в печени и селезенке. При остром течении болезни в капиллярах печени - скопление гистиоцитов, макрофагов и лимфоидных клеток. В макрофагах и клетках Купфера – гемосидерин. Печеночные клетки в состоянии жировой или зернистой дистрофии. В селезенке красная пульпа переполнена кровью, количество гемосидерина резко снижено или, наоборот, кровенаполнение слабое, а фолликулы гиперплазированы, количество гемосидерина в норме или несколько выше. В почках и сердце - гиперемия, кровоизлияния, серозный отек интерстиция, слабые пролифераты гистиоцитарных лимфоидных клеток, жировая или зернистая дистрофия, иногда небольшие отложения гемосидерина в эндотелиальных клетках и гистиоцитах. Лимфоузлы гиперемированы, с кровоизлияниями. Под плеврой - кровоизлияния. ^ Включают определение количества гемоглобина, эритроцитов и лейкоцитов, СОЭ, лейкоцитарной формулы У больных животных отмечается лимфоцитоз, особенно при подостром и хроническом течениях болезни СОЭ резко увеличена, особенно в первые 15 мин (60-70 делений). Исследование крови проводят через каждые 3 дн. во время приступов лихорадки и не реже 1 раза в 10 дн. в период ремиссий. Количество эритроцитов и лейкоцитов подсчитывают в камере Горяева (или в электронном счетчике) по общепринятой методике. Гемоглобин определяют по общепринятому методу гемометром Сали, полученный результат выражают в процентах. При анализе лейкоцитарной формулы следует учитывать, что у здоровых жеребят в возрасте до 4-6 мес. может иногда наблюдаться повышенный процент лимфоцитов (до 60 %). В начале болезни при первом подъеме температуры резкие отклонения от нормы количества эритроцитов и процента гемоглобина, как правило, отсутствуют. У хронически больных ИНАН животных эти показатели восстанавливаются до нормы, а СОЭ остается повышенной. В качестве дополнительных методов диагностики ИНАН используют исследование костномозгового пунктата в динамике болезни - наиболее характерные изменения появляются во время лихорадки резко уменьшается количество клеток эритробластической группы и увеличивается количество клеток гистиоцитарно-моноцитарной группы. Во время длительных ремиссий при хроническом течении болезни состояние клеток костного мозга не отличается от такового у здоровых лошадей. ^
Определяют количество сидероцитов в периферической крови, которое увеличивается с приступами лихорадки в течение 3-4 дн. и часто продолжает нарастать после снижения температуры тела. При рецидивах количество сидероцитов достигает 2 тыс. и более на 10 тыс. лейкоцитов в 1 мм3 крови, у лошадей с незначительной реакцией повышение числа сидероцитов иногда является единственным ранним показателем заболевания ИНАН. Определяют количества гамма-глобулина в сыворотке крови, содержание которого у больных лошадей резко возрастает, а отношение между альбуминовой и глобулиновой фракциями понижается. Делают биопсию - прижизненное извлечение кусочков печени с последующим гистологическим исследованием. ИФ. В 1970 г. японские исследователи разработали метод непрямой ИФ для идентификации вируса ИНАН лошадей в культурах лейкоцитов лошади. Для этого используют цельную сыворотку крови лошади или очищенную фракцию иммуноглобулинов Метод эффективен только при высокой концентрации вируса. С его помощью можно проследить динамику репродукции вируса в инфицированной клетке. ^ РДП. Реакция нашла широкое применение в бывшем СССР. Она выявляет AT к вирусу в сыворотке крови при остром, хроническом и латентном течении инфекции. Помимо селезенки от больных животных в качестве АГ можно использовать вирус ИНАН, культивируемый в культуре лейкоцитов лошадей и инактивированный твином-80 и эфиром. В СНГ да РДП биопромышленность выпускает диагностикум. РСК. Одна из первых серологических реакций, предложенных для диагностики ИНАЯ Японскими исследователями показано, что вирус, полученный в культуре лейкоцитов, можно использовать в качестве АГ в РСК с сыворотками больных ИНАН лошадей КСА появлялись у 79,1% экспериментально зараженных лошадей через 17-40 дн. после введения им вируса, у 78,2% - через 7-20 дн. после появления первой температурной реакции, у некоторых больных лошадей титр AT возрастал непосредственно перед температурной реакцией или сразу после нее AT в крови больных лошадей обнаруживали от 2 до 60 дн. Вторично 1 крови больных они не выявлялись. РТГА. В отличие от РДП РТГА - более простой метод количественного определения AT к вирусу ИНАН. Авторы обнаруживали анти-ГА в крови жеребят одновременно с AT, выявляемыми в РДП. РТГА проводили в объеме 0,1 мл с 0,2%-ной взвесью эритроцитов морской свинки и 4 ГАЕ вируса. Перед постановкой ее сыворотки прогревают и адсорбируют активированным углем. В качестве АГ служит концентрированная вируссодержащая культуральная жидкость. Для культивирования вируса используют субкультуру кожно-мышечной ткани эмбриона лошади. НИФ. Установлена возможность использовать ее для определения AT к вирусу ИНАН 5-го дня после заражения монослоя дермальных клеток очаги концентрации АГ в виде ярких пятен флюоресценции располагались внутри цитоплазмы в околоядерной области и мели диаметр 0,5-3 мкм. Тест ИФ выявляет более низкие уровни AT, чем РДП. ELISA. Разработан ELISA с очищенным вирусньм протеином Р26 в качестве АГ с онъюгатом, реагирующим с IgG лошадей Источником вируса служит сокультура перевиваемой линии дермальных клеток лошади, персистентно инфицированная вирусом, и клеток почки эмбриона лошади. Обработка АГ в аффинной хроматографии позволяет освободиться от появления неспецифических линий преципитации в РДП и повышает специфичность. Сказался более чувствительным и эффективным по сравнению с РСК и РДП Титр AT, выявляемый методом, был в 1-2 тыс раз выше, чем в РДП, и в 4 раза выше, чем в РСК . Наибольшая корреляция между 2-мя тестами отмечена на 21-й день и позднее после поражения AT в ELISA удается обнаружить через 1-4 г после заражения. Метод предложено использовать и для определения вирусного АГ, а также для оценки качества вакцин. С 1983 г. в США диагностика ИНАН осуществляется конкурентным ИФА. Дифференциальная диагностика. При постановке диагноза на ИНАН следует исключить пироплазмоз, нутталиоз, трипаносомоз, лептоспироз, грипп, ринопневмонию. Для пироплазмоза характерна сезонность: апрель-май или август-сентябрь. Болезнь протекает остро, при исследовании крови обнаруживают пироплазмы. При нутталиозе максимум больных выявляют в июне. Болезнь протекает остро и подостро. В крови находят нутталии. У лошадей, больных гемоспоридиозами, наблюдается резкая желтушность слизистых оболочек, имеющая стойкий характер, при ЖАН она отсутствует. При гемоспоридиозах с первых же дней наблюдается резкое учащение дыхания - одышка (отек легких), у больных ИНАН со стороны органов дыхания, как правило, особых отклонений от нормы нет Наконец, при гемоспоридиозах у жеребят болезнь протекает латентно, а при ИНАН - тяжело, сопровождаясь высокой смертностью. Лептоспироз исключается на основании исследования сывороток крови больных по реакции микроагглютинации и лизиса, отсутствия лейкоцитоза и наличию лептоспир в моче Болезни вирусной этиологии (грипп, ринопневмония) отличаются от ИНАН высокой контагиозностыо, быстрым распространением, коротким течением При диагностике этих болезней применяют лабораторные методы выделение вируса на КЭ и культурах клеток и дальнейшая их идентификация в серологических реакциях. Характерным симптомом гриппа лошадей является сухой резкий кашель, вирус ринопневмонии вызывает у жеребых кобыл аборты во второй половине жеребости Однако отличием абортов, вызванных вирусом ринопневмонии, является отсутствие повышения температуры тела в день аборта и после него. Аборты, причиной которых служит ИНАН, происходят во время лихорадки или выраженной анемии и истощения.^Иммунитет изучен недостаточно Долгое время затяжной характер течения ИНАН и длительное переживание (персистенция) возбудителя в организме животных объясняли нарушением или снижением иммунной реакции организма на вирус. И лишь исследованиями последних 2-х десятилетий были обнаружены в сыворотке крови больных лошадей КСА, ПА, ВНА и ИФ AT. AT выявляют в период между 14-120-м дн. после заражения, а иногда и на протяжении всей жизни животного. Однако связь между AT и степенью невосприимчивости лошадей к вирусу выяснена недостаточно. Так, образующиеся ВНА не способны предотвратить рецидивы болезни или нейтрализовать вирус. Последние, покрывая эритроциты, способствуют их быстрому разрушению, вызывая анемию. Установлено, что 99% инфекционного вируса ИНАН, циркулирующего в крови, связано с AT в виде комплексов "АГ-АТ". Недавно японские исследователи, изучая действие иммунодепрессантов на лошадей, зараженных вирусом ИНАН, пришли к выводу, что иммунитет при этой болезни обусловлен функцией лимфоцитов. Показано также, что вирус ИНАН в процессе длительного персистирования в организме лошади значительно изменяет свои биологические свойства, что ставит под сомнение возможность эффективной вакцинации против этой болезни. В последнее время ведут интенсивные исследования по созданию вакцинных препаратов. ^ СОДЕРЖАНИЕ Семейства: Herpesviridae…………………………………….3 Flaviviridae……………………………….……..24 Retroviridae……………………………………..53 Список рекомендуемой для студентов монографической литературы по теме лекций.
«Курс лекций по частной вирусологии» Часть первая Б– «Вирусы вызывающие болезни жвачных и однокопытных»учебное пособие подготовлено - Васильевым Д.А, Луговцевым В.Ю. |
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям