|
|
Скачать 88.15 Kb.
|
Стом. ф-т, 2006ЗАНЯТИЕ 23Тема: Микробиологическая диагностика сифилиса. Микробиологическая диагностика хламидийных и микоплазменных инфекций. Цель: На основе знаний биологии возбудителей сифилиса, хламидийных и микоплазменных инфекций, особенностей их взаимодействия с макроорганизмом уметь обосновать тактику микробиологической диагностики, профилактику и терапию, вызываемых ими заболеваний. Знать:
Уметь:
Контрольные вопросы:
Задания, выполняемые в ходе занятия (УИРС): 1. Провести серодиагностику сифилиса, для чего:
На основании полученных результатов сформулировать вывод. 2. Провести микробиологическую диагностику урогенитального хламидиоза, для чего:
На основании полученных результатов сформулировать вывод; заполнить бланк-направление и бланк-ответ из бак. лаборатории.
Методические указания, выполняемые в ходе УИРС:
^ пастеровской пипеткой набирают инактивированную сыворотку крови каждого обследуемого и вносят по 3 капли в лунки планшета, куда затем добавляют по 1-й капле кардиолипинового антигена. Ингредиенты смешивают встряхиванием планшета в течение 5-ти минут, добавляют 3 капли физ. раствора, перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 5 минут (оптимальный температурный режим реакции 23-28°С). Одновременно ставят контроли сывороток: КС"+"- сыворотка, заведомо содержащая антитела к возбудителю сифилиса, КС"-"-сыворотка, заведомо не содержащая антитела к возбудителю сифилиса. ^ положительная МПР с контрольной сывороткой КС"+" и отрицательная реакция - с контрольной сывороткой КС"-". Оценка: положительная реакция микропреципитации свидетельствует о возможном наличии антител в сыворотке обследуемых и выявлении заболевания сифилисом. Отрицательный результат свидетельствует о серологическом не подтверждении заболевания. В настоящее время при серодиагностике сифилиса рекомендовано использовать в качестве скрининговых (отборочных) методов МПР с кардиолипиновым антигеном, РСК с кардиолипиновым антигеном – реакцию Вассермана (приказ №87 от 26.03.2001 МЗ РФ «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса»). Поскольку МПР технически более простая, требует меньше времени на постановку, то при микробиологической диагностике она используется чаще.
МПР и РСК не являются специфическими и в ряде случаев дают ложноположительный результат. Для распознавания ложноположительных результатов и подтверждения результатов отборочных реакций используют специфические, чувствительные реакции. К их числу относятся РПГА, ИФА, РИТ (реакция иммобилизации трепонем), РИФн. Недостатками РИТ и РИФн является техническая сложность, длительность постановки, высокая стоимость исследования; кроме того, приблизительно у 85% адекватно пролеченных больных эти реакции остаются положительными в течение нескольких лет и даже в течение всей жизни, поэтому не могут быть использованы в качестве контроля излеченности.
Результат РИФн считается положительным, если в мазке выявляют ярко-зеленые светящиеся мелкие, круглые (элементарные тельца хламидий) или овальные (ретикулярные тельца хламидий) частицы. Тельца располагаются отдельно, на поверхности эпителиальных клеток или внутриклеточно. Эпителиальные клетки окрашены в красно-оранжевый цвет. Результат считается отрицательным, если в мазке отсутствует специфическое свечение при обязательном наличии не менее 50 эпителиальных клеток.
Набор Mуcoplasma DUO позволяет культивировать, идентифицировать и дифференциально титровать урогенитальные микоплазмы, а также определять чувствительность культуры к антибиотикам. Метод позволяет получить результаты в течение 24-48 ч. Материалом для исследования являются соскобы из уретры, цервикального канала, влагалища (реже – из глотки, назофарингиальной зоны, конъюнктивы у детей). Так как микоплазмы прилипают к поверхности эпителиальных клеток, следует хорошо поскоблить слизистую. Затем тампончик (предпочтительно специальный цитологический тампончик Bactopick) погружается в 2 мл транспортной среды и взбалтывается, чтобы смыть все клетки в среду. ^ урогенитальных микоплазм основаны на специфических метаболических свойствах каждого микроорганизма, которые гидролизуют:
При этом образуется ион аммония и происходит защелачивание среды. Вследствие этого изменяется цвет (с желтого на красный) индикатора кислотности среды, что позволяет визуализировать реакцию. Таким образом, при желтой окраске содержимого лунок – микоплазмы отсутствуют, при красной окраске – микоплазмы присутствуют в пробе. Если покраснела лунка U – в пробе присутствует UU; если покраснела лунка Н – в пробе присутствует МН; если покраснели лунки U и Н – в пробе присутствуют и UU, и МН. Т и т р о в а н и е (определение количества) основано на принципе разведения исследуемого материала в жидкой среде. Проба последовательно разводится в транспортной среде, в лунке D (разведение 10-1) и, наконец, в лунках U 104 и Н 104 (разведение 10-2). Таким образом, может быть определен титр микоплазм. Этот титр соответствует лунке, цвет которой изменился на красный через 24-48 ч инкубации. Данный набор позволяет определить титры порядка 10-3 – 10-4 мл, которые уже считаются этиологически значимыми. ^ : первые результаты считываются через 24 ч инкубации. При наличии положительной реакции в лунке с высоким титром (104), получают окончательный результат. Второй раз считывают результаты через 48 ч в следующих случаях:
Микроплата для определения чувствительности к антибиотикам включает два ряда по 8 лунок, содержащих различные антибиотики. Разные концентрации антибиотиков в лунках позволяют получить профиль чувствительности тестируемых микоплазм (чувствительная, умеренно устойчивая, устойчивая). Лунки Тс служат контролем роста без антибиотиков. Определение осуществляется с использованием содержимого лунки Х набора Mуcoplasma DUO. Оценка-интерпретация. Тест интерпретируется тогда, когда контрольные лунки роста изменят цвет с желтого на красный. На практике плата исследуется через 24 ч и через 48 ч для установления низкой резистентности:
Для клиндамицина и пристинамицина используется лишь одна концентрация антибиотика, поэтому возможны только два варианта результата: культура чувствительная или устойчиваяая. ^
Вопросы для самоконтроля:
Литература: Учебники:
Лекции по микробиологии. Тесты программированного контроля, 2004 г. |
![]() |
«Микробиологическая диагностика стафилококковых и стрептококковых инфекций» |
![]() |
Этиология и патогенез сифилиса. Течение сифилиса. Сифилис первичный |
![]() |
Сифилис третичный и врожденный. Лабораторная диагностика сифилиса. Принципы лечения больных сифилисом. |
![]() |
Сифилис третичный и врожденный лабораторная диагностика сифилиса принципы лечения больных сифилисом |
![]() |
1. Микробиологическая эффективность |
![]() |
Методические указания для самостоятельной работы студентов Тема: Грибковые заболевания кожи Тема: Грибковые заболевания кожи (микроспория, трихофития, эпидермофития, кандидоз). Характеристика.... |
![]() |
Тема: Лабораторная диагностика возбудителей иппп |
![]() |
Тема: Дифференциальная диагностика менингеального синдрома |
![]() |
Тематический план практических занятий по терапевтическому разделу для студентов IV курса стоматологического Тема: «Анатомо-физиологические особенности периодонта у детей различного возраста. Этиология, патогенез... |
![]() |
Тема.«Диагностика». Доктор медицинских наук Кезля О. П |