1Биохимия липидов Занятие 13 Классификация, биологические функции. Переваривание и всасывание. Обмен липопротеидов Цель занятия

Скачать 187.13 Kb.

Название	1Биохимия липидов Занятие 13 Классификация, биологические функции. Переваривание и всасывание. Обмен липопротеидов Цель занятия
Дата конвертации	22.03.2013
Размер	187.13 Kb.
Тип	Документы

Содержание

Лабораторные работы
Ход работы.
Эмульгирование жира
Ход работы.
Определение концентрации триглицеридов в сыворотке (плазме) крови энзиматическим колориметрическим методом
Ход работы.
Определение концентрации общего холестерина в сыворотке (плазме) крови энзиматическим колориметрическим методом.
Ход работы.
Клинико-диагностическое значение.
Ход работы.

1Биохимия липидов

Занятие 13

Классификация, биологические функции. Переваривание и всасывание. Обмен липопротеидов

Цель занятия: сформировать представления о строении, классификации основных липидов, их биологической функции, о молекулярных механизмах переваривания и всасывания липидов в желудочно-кишечном тракте. Изучить строение, химический состав, метаболизм и функциональную роль основных классов липопротеидов.

Исходный уровень знаний и навыков

Студент должен знать:

Строение и свойства основных классов липидов (жирные кислоты, их производные, производные изопрена).
Строение мембран, модели мембран.

Студент должен уметь:

Проводить качественные реакции на продукты гидролиза липидов.

Структура занятия

Теоретическая часть

Липиды – их строение, классификации и биологическая роль.

Жирные кислоты и их производные (PG, LT, TxA), а также:

простые липиды: воска, диолы, триацилглицерины (триглицериды);
сложные липиды: фосфоглицериды – фосфолипиды (фосфатиды: кефалины, лецитины, серинфосфатиды, инозитолфосфатиды, кардиолипины, плазмалогены); сфинголипиды (сфингомиелины, цереброзиды и ганглиозиды); гликолипиды, сульфолипиды, липопротеиды.

Производные изопрена;

стероиды (стерины и стериды);
каротиноиды (растительные пигменты, витамины);
терпены.

Роль липидов в построении мембран. Современные модели мембран, их биологическая роль.
Переваривание и всасывание липидов в желудочно-кишечном тракте (строение и функции желчных кислот). Механизм эмульгирования жира. Печеночно-кишечный цикл желчных кислот. Значение липаз. Особенности переваривания липидов у детей. Ресинтез ТГ в энтероцитах.
Липопротеиды (ЛП) – строение, классификация, химический состав, функциональная роль. Метаболизм ЛП в норме. Экзогенный и эндогенный пути транспорта липидов в организме.
Роль рецепторов ЛП в метаболизме липидов.

Практическая часть
1. Решение задач.
2. Лабораторные работы.

Задачи

1 Кардиолипины встречаются главным образом в составе мембран:

а) лизосом; б) митохондрий; в) ядра; г) эритроцитов; д) микросом; е) аппарата Гольджи?

2 Желчные кислоты у человека представлены главным образом в виде:

а) конъюгатов с глицином; б) конъюгатов с ацетил-КоА; в) конъюгатов с таурином; г) конъюгатов с сульфатом; д) метилированных производных; е) свободных желчных кислот?

3 Роль холестерина в структуре мембраны связана с превращением ее в:

а) более "жидкую" – текучую; б) более "твердую" – инертную; в) более упругую и прочную; г) несущественна; д) менее упругую и прочную; е) более проницаемую?

4 ЛП-липаза обеспечивает гидролиз:

а) пристеночный липидов пищи в кишечнике;

б) липидов пищи в полости кишечника;

в) внутриклеточный ЛП;

г) ТГ, входящих в состав ХМ;

д) ТГ, входящих в состав ЛПНП;

е) ФЛ, входящих в состав ЛПВП?

5 Все глицеролсодержащие липиды синтезируются из:

а) ТГ; б) кефалина; в) серина; г) фосфатидной кислоты; д) моноглицеридов; е) кардиолипина?

6 ХМ:

а) синтезируются энтероцитами;

б) являются транспортной формой экзогенных ТГ;

в) являются транспортной формой эндогенных ТГ;

г) транспортируют ХС из периферических тканей в печень;

д) транспортируют ТГ из печени в периферические ткани;

е) являются атерогенными;

ж) не являются атерогенными?

7 Превращение насцентных ХМ в ремнантные связано с действием:

а) фосфолипазы А;

б) ЛП-липазы;

в) ТГ-липазы;

г) ЛХАТ;

д) фосфолипазы С;

е) аденилатциклазы?

8 ЛПОНП:

а) синтезируются в жировой ткани;

б) синтезируются в печени;

в) являются транспортной формой эндогенных ТГ;

г) являются транспортной формой экзогенных ТГ;

д) являются транспортной формой холестерин;

е) являются атерогенным;

ж) не являются атерогенным?

9 ЛППП:

а) синтезируются в печени;

б) образуются в кровяном русле;

в) синтезируются энтероцитами;

г) имеют несколько фракций;

д) являются транспортной формой эндогенных ТГ;

е) являются атерогенными;

ж) не являются атерогенными?

10 ЛПНП:

а) синтезируются в печени;

б) образуются в кровяном русле;

в) являются транспортной формой холестерина;

г) являются транспортной формой экзогенных ТГ;

д) являются атерогенными;

е) не являются атерогенными?

11 Жирные кислоты, мобилизуемые из жировой ткани, циркулируют в крови в виде:

а) ХМ; б) ЛПОНП; в) ЛПНП; г) ЛПВП; д) ЛПОВП; е) связанном с альбумином?

12 Превращение насцентных ЛПВП в ремнантные обусловлен действием:

а) фосфолипазы А; б) ЛП-липазы; в) ТГ-липазы; г) ЛХАТ; д) насыщением эфирами холестерина; е) аденилатциклазы?

13 Апо В-100:

а) образуется в печени; б) образуется в энтероцитах; в) является маркером ЛПНП; г) является маркером ЛПВП; д) активирует ЛХАТ; е) активирует ЛП липазу?

14 Апо В-48:

а) образуется в печени; б) образуется в энтероцитах; в) активирует ЛХАТ; г) является маркером ЛПВП; д) является маркером ЛПНП; е) является маркером ХМ?

15 Апо Е:

а) образуется в печени; б) образуется в энтероцитах ; в) маркер ремнантов ХМ; г) активирует ЛХАТ; д) является маркером ЛПВП; е) маркер насцентных ХМ?

^ Лабораторные работы

Лабораторная работа № 1. Влияние желчи на активность липазы

Принцип метода. Липаза ускоряет гидролиз нейтрального жира на глицерин и жирные кислоты (см. уравнение), что приводит к снижению pH и исчезновению розовой окраски индикатора – фенолфталеина. Активность панкреатических липаз, определяемых титрометрически, резко возрастает при действии желчных кислот.

^ Ход работы. Готовят три колбы – две опытные и одну контрольную. В них смешивают препарат липазы и субстрат (молоко или подсолнечное масло), как указано в таблице 1.

Т
аблица 1

Состав инкубационной смеси, мл	Опытные пробы		Контроль
Состав инкубационной смеси, мл	без желчи	с желчью	Контроль
Молоко разведенное (1:10)	10	10	10
Глицериновый экстракт поджелудочной железы	1	1	1*
Раствор желчи	-	1	1
Вода	1	-	1
* Экстракт предварительно кипятят 10 мин для инактивации липаз.

Приготовленные инкубационные смеси тщательно перемешивают. Затем из каждой колбы отбирают по 1 мл смеси в заранее приготовленные стаканчики для титрования. Добавляют в каждый стаканчик по 1-2 капли раствора фенолфталеина и титруют 0,01М раствором NaOH до слабо-розового окрашивания. При первом титровании нейтрализуются органические кислоты – молочная и другие, которые присутствовали в молоке до начала действия липазы.

Оставшуюся в колбах смесь помещают в термостат (при t = 40 C) и через определенные интервалы времени (15, 30, 90 мин) отбирают из каждой колбы (не извлекая их из термостата) по 2 мл смеси и титруют 0,01М раствором NaOH. Время титрования и объем израсходованного NaOH фиксируют в таблице 2.

Таблица 2

Время инкубации, мин	Объем (мл) 0,01М NaOH, пошедшего на титрование
	Опытные пробы		Контроль
	без желчи	с желчью	Контроль
0
15
30
90

Результаты первого титрования, полученные до начала действия липаз, вычитают из результата последующих титрований.

На основании полученных данных строят график, где по оси абсцисс откладывают время (в минутах), а по оси ординат – активность липазы, выраженную объемом (мл) 0,01 М раствора NaOH, пошедшего на нейтрализацию жирных кислот, образовавшихся за данный отрезок времени. Сравнивают активность липазы в присутствии желчи и без нее.

Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагностическую оценку.

Лабораторная работа № 2. ^ Эмульгирование жира

Принцип метода. Эмульгирование жира различными амфифильными веществами происходит благодаря их адсорбции на границе раздела двух фаз – гидрофобной и гидрофильной.

^ Ход работы. В пять пробирок вносят по 1 капле растительного масла. Затем в каждую пробирку соответственно приливают по 1-2 капли растворов NaOH, NaHCO₃, яичного белка, моющего средства и желчи. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и наблюдают образование эмульсии жира. Объясните механизм образования эмульсии жира в этих растворах и значение процесса эмульгирования.

Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагностическую оценку.

Рекомендуемая литература

Основная

Материал лекций.

2.Кухта В.К.,Морозкина Т.С. Олецкий Э.И., Таганович А.Д. Биологическая химия .

Бином –Асар 2008. –с.193-213.

3.Биохимия: под ред. чл.-корр. РАН, проф Е.С. Северина: М. Геотар-Медицина. 2006г. –с. 370-391.

4.Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. М.: Медицина; 1998. С. 363–372, 574–577.

5.Николаев А. Я. Биологическая химия. М.: Медицинское информационное агентство, 2004. с. 287-289, 297-307.

6.Марри Р. и др. Биохимия человека. М.: Мир, 2004г. Т. 1.- с. 151–164, 256–262.

7.Филиппович Ю. Б. Основы биохимии. М.: Флинта, 1999. с.370-390 .

Занятие 14

Тканевой обмен липидов

Цель занятия: изучить главные метаболические пути основных классов липидов (ТГ, ФЛ, жирных кислот, кетоновых тел, ХС). Научиться определять содержание общих липидов крови.

Исходный уровень знаний и навыков

Студент должен знать:

Характеристику основных классов ЛП.
Метаболизм ЛП в норме.
Пути передачи гормонального сигнала на клетку (аденилатциклазный, инозитолтрифосфатный).
ЦТК, его энергетический баланс.
Структуру и функцию полиферментных комплексов (на примере пируват-ДГ).

Студент должен уметь:

Проводить исследование на фотоэлектроколориметре.

Структура занятия

Теоретическая часть
1. Механизм мобилизации жира (роль гормонов, цАМФ и Ca²⁺).
2. Свойства и физиологическая роль свободных жирных кислот (СЖК). Транспорт СЖК в крови.
3. Окисление ТГ в тканях, окисление глицерина, его энергетический баланс.
4. Этапы -окисления насыщенных жирных кислот. Механизм активации и транспорта жирных кислот через митохондриальную мембрану. Роль карнитина. Особенности -окисления ненасыщенных жирных кислот и жирных кислот с нечетным числом атомов. Энергетический баланс окисления C₁₆, C₁₅, C_18:2.
5. Энергетический баланс окисления тристеарата. Физиологическая роль СЖК при стрессе.
6. Обмен ацетил-КоА (пути образования и утилизации).
7. Кетоновые тела – биосинтез, утилизация, физиологическая роль.

Практическая часть
1. Решение задач.
2. Лабораторная работа.

Задачи

1 Жирная кислота C₁₅ будет вступать в ЦТК в виде:

а) цитрата; б) сукцинил КоА; в) ацетил КоА; г) -кетоглутарата; д) сукцината; е) малонил КоА?

2 Мембрана митохондрий проницаема для:

а) ацил-АПБ; б) ацил-КоА; в) малонил-КоА; г) ацетил-КоА; д) ни одного из названных соединений; е) всех названных соединений?

3 Гормончувствительная липаза обеспечивает:

а) гидролиз эфирных связей в гормонах;

б) адреналин-зависимый гидролиз пищевых липидов;

в) мобилизацию ТГ жировой ткани;

г) гидролиз ТГ в печени;

д) гидролиз ТГ в мозге?

4 Главным энергетическим субстратом для мозга в нормальных условиях является:

а) глюкоза; б) аминокислоты; в) кетоновые тела; г) жирные кислоты; д) молочная кислота; е) ТГ?

5 При голодании окисление СЖК или кетоновых тел приводит к торможению гликолиза в мышцах, потому что:

а) ацетил-КоА подавляет активность пируват-ДГ;

б)увеличение отношения АТФ/АДФ лимитирует гексокиназу;

в) гипоинсулинемия ограничивает потребление глюкозы мышцей;

г) увеличение отношения NADH/NAD⁺ лимитирует 3-ФГА-ДГ;

д) жирные кислоты обладают контринсулярным эффектом;

е) активируется ГНГ?

6 Кофакторы, общие как для -окисления СЖК, так и для аэробного гликолиза, включают:

а) витамин B₁₂; б) NAD⁺; в) АДФ; г) HS-KoA; д) аскорбат; е) биотин?

7 Мобилизация липидов из депо происходит при:

а) уменьшении концентрации цАМФ;

б) увеличении концентрации цАМФ;

в) увеличении концентрации инсулина;

г) уменьшении концентрации инсулина;

д) увеличении концентрации адреналина;

е) увеличении концентрации ионизированного Ca²⁺ в крови?

8 Для транспорта CH₃CO-SКоА из митохондрии в цитоплазму при биосинтезе пальмитиновой кислоты необходимо наличие:

а) карнитин-ацилтрансферазы; б) ацетил-КоА-карбоксилазы; в) КоА-гидролазы; г) АТФ-цитратлиазы; д) цитратсинтетазы; е) малонил КоА?

9 Что является ключевым метаболитом при биосинтезе кетоновых тел в печени?

а) ацетил-КоА; б) малонил-КоА; в) ацетоацетил-КоА; г) -окси-метилглютарил-КоА; д) цитрат; е) NADH?

10 Какие из следующих ферментов необходимы для превращения ПВК в ацетил-КоА:

а) пируват ДГ; б) цитратсинтетаза; в) пируваткарбоксилаза; г) ФЕПКК; д) АТФ-цитрат-лиаза; е) дигидролипоат ДГ?

Лабораторная работа. ^ Определение концентрации триглицеридов в сыворотке (плазме) крови энзиматическим колориметрическим методом

Принцип метода.

Триглицериды → глицерин + жирные кислоты (липаза);

Глицерин + АТФ → глицерил-3-фосфат + АДФ (глицерокиназа);

глицерил-3-фосфат + О₂ → диоксиацетон фосфат + 2 Н₂О₂ (ГФО)

Н₂О₂ + 4-ААР + 4-хлорфенол → хинонимин + 4 Н₂О (пероксидаза)

Концентрация хинонимина, определяемая фотометрически, пропорциональна концентрации триглицеридов в пробе.

^ Ход работы. Готовят опытную пробу по схеме:

	Опытная проба (мл)
Сыворотка (плазма) крови	0,02
Рабочий реагент	2,0

Реакционную смесь тщательно перемешивают и инкубируют в течение 5 минут в термостате при температуре 37⁰С, измеряют оптическую плотность опытной пробы против дистиллированной воды в кюветах с толщиной поглощающего слоя 5мм при длине волны 490нм.

Примечание: окраска стабильна не менее часа после окончания инкубации при предохранения от прямого солнечного света.

Расчёт концентрации триглицеридов (С) производят по формуле:

С = Е_оп./Е_ст. • 250 – 10 мг/100мл

или

С = Е_оп./Е_ст. • 2,85 – 0,11 ммоль/л

где Е_оп. – экстинкция опытной пробы,

Е_ст. – экстинкция стандартной пробы,

10 мг/100мл (0,11 ммоль/л) – поправка на содержание свободного глицерина в сыворотке (плазме) крови.

Нормы.

Нормальные величины: 13-160мг/100мл (0,14-1,82ммоль/л)

Группы риска: 160-200мг/100мл(1,82-2,29ммоль/л)

Патологические показатели: выше 200мг/100мл (более 2,29 ммоль/л)

Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагностическую оценку.

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Рекомендуемая литература

Основная

1.Материал лекций.

2.Кухта В.К.,Морозкина Т.С. Олецкий Э.И., Таганович А.Д. Биологическая химия .

Бином –Асар 2008. –с.229-241, 258-260.

3.Биохимия: под ред. чл.-корр. РАН, проф Е.С. Северина: М. Геотар-Медицина. 2006г. –с. 392-395, 399-409.

Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. М.: Медицина; 1998. С. 373–381, 388-398, 574-577.

5.Николаев А. Я. Биологическая химия. М.: Медицинское информационное агентство, 2004. с.289-291, 305-310

6.Марри Р. и др. Биохимия человека. М.: Мир, 2004г. Т. 1.- с. 262–273. 286–294.

7.Филиппович Ю. Б. Основы биохимии. М.: Флинта, 1999. с.387-410.

Занятие 15

Биосинтез липидов. Регуляция и патология липидного обмена

Цель занятия: изучить основные типы и механизмы нарушений липидного обмена. Научиться определять уровень общего холестерина в крови.

Исходный уровень знаний и навыков

Студент должен знать:

Механизмы регуляции углеводного обмена.
Механизмы нарушения обмена веществ при сахарном диабете.
Строение и биологическую роль желчных кислот.
Характеристику основных классов ЛП.
Метаболизм ЛП в норме.
Пути передачи гормонального сигнала на клетку (аденилатциклазный, инозитолтрифосфатный).
ЦТК, его энергетический баланс.
Структуру и функцию полиферментных комплексов (на примере пируват-ДГ).

Студент должен уметь:

Проводить исследование на фотоэлектроколориметре.

Структура занятия

Теоретическая часть
1. Биосинтез насыщенных жирных кислот. Роль ацилпереносящего белка (АПБ), пантотеновой кислоты, биотина, NADPH + H⁺ и ферментов. Источники ацетил-КоА для биосинтеза жирных кислот (ЖК). Регуляция биосинтеза ЖК.
2. Биосинтез триглицеридов (ТГ) и фосфатидов.
3. Биосинтез холестерина, его регуляция, биологическая роль холестерина. Пул холестерина в клетке, его регуляция.
4. Механизм регуляции липидного обмена. Гормоны, регулирующие липолиз и липогенез. Интеграция липидного и углеводного обменов.
5. Жироуглеводный цикл Рэндла. Цикл триглицериды – жирные кислоты. Их механизмы и физиологическое значение. Взаимоотношения кетоновых тел, СЖК и глюкозы.
6. Нарушение переваривания и всасывания липидов, его проявления.
7. Жировая инфильтрация и дегенерация печени – механизмы развития и профилактика.
8. Ожирение – виды, механизмы развития и осложнения.
9. Дислипопротеидемии. Классификация по Фридриксону, биохимическая и клинико-диагностическая характеристика основных групп.
10. Липидозы – наследственные нарушения липидного обмена.
11. Перекисное окисление липидов мембран. Механизм возникновения. Реакции, метаболиты. Биологическое значение в норме и при патологии.
12. Антиоксидантная защита (см. тему «Биологическое окисление»).

Практическая часть
1. Решение задач
2. Лабораторная работа.

Задачи

1 Кетоз является состоянием, когда в крови повышен уровень:

а) ацетил КоА; б) ацетоацетил-КоА; в) бета-оксибутирата; г) лактата; д) ацетона; е) ацетоацетата?

2 Ацетил-КоА карбоксилаза:

а) активируется цитратом; б) является лиазой; в) ограничивает скорость окисления жирных кислот; г) содержит биотин; д) является лигазой; е) является трансферазой?

3 Ацетил КоА карбоксилаза ингибируется:

а) цитратом; б) карнитином; в) авидином; г) лактальбумином; д) цианидом; е) NADH?

4 Какие кофакторы являются общими для бета-окисления и биосинтеза ЖК:

а) FAD; б) NAD⁺; в) NADP⁺; г) HS-KoA; д) биотин; е) карнитин?

5 Биосинтез ТГ высокоактивен:

а) в печени; б) мозге; в) жировой ткани; г) мышце; д) энтероцитах; е) эритроцитах?

6 При утилизации избытка глюкозы активируется биосинтез СЖК, потому что возрастает содержание:

а) ацетил-КоА; б) NADH⁺; в) NADPH⁺; г) кетоновых тел; д) гликогена; е) инсулина?

Лабораторная работа. ^ Определение концентрации общего холестерина в сыворотке (плазме) крови энзиматическим колориметрическим методом.

Принцип метода. При гидролизе эфиров холестерина холестеролэстеразой образуется свободный холестерин. Образовавшийся и имеющийся в пробе холестерин окисляется кислородом воздуха под действием холестеролоксидазы с образованием эквимолярного количества перекиси водорода. Под действием пероксидазы (POD) перекись водорода окисляет хромогенные субстраты с образованием окрашенного продукта. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации холестерина в пробе.

^ Ход работы.

Реагенты	Опытная проба, мл	Стандартная проба, мл
Сыворотка (плазма)	0,02	-
Рабочий реагент	2,0	2,0
Стандартный раствор холестерина	-	0,02

Реакционную смесь тщательно перемешивают и инкубируют не менее 5 минут при комнатной температуре (20-25⁰С) или в термостате при температуре 37⁰С. Измеряют оптическую плотность опытной и стандартной проб против дистиллированной воды в кюветах с толщиной поглощающего слоя 5мм при длине волны 490нм. Окраска стабильна не менее 2 часов после окончания инкубации при предохранении от прямого солнечного света.

Примечание. При хранении в холодильнике стандартный раствор холестерина может мутнеть. В этом случае следует нагреть раствор при 35-40⁰С до исчезновения мутности.

Расчёт концентрации (С) холестерина проводят по формуле:

С = Е_оп./Е_ст. • 5,17 (ммоль/л)

или

С = Е_оп./Е_ст. • 200 (мг/100мл)

где Е_оп. – экстинкция опытной пробы,

Е_ст. – экстинкция стандартной пробы.

Норма.

Идеальное содержание < 5,2 ммоль/л

допустимое содержание 5,2-6,5ммоль/л

Патологическое содержание > 6,5 ммоль/л

^ Клинико-диагностическое значение. Увеличение содержания ХС в плазме крови – гиперхолестеринемия – наблюдается при избыточном потреблении продуктов, богатых холестерином, механической (обтурационной) желтухе, нефрите, микседеме (гипотиреоз), диабете, атеросклерозе, сифилисе, менингитах, некоторых заболеваниях печени, а также при наследственных гиперхолестеринемиях.

Снижение содержания ХС в плазме (гипохолестеринемия) отмечается при голодании, анемии, туберкулезе, острых панкреатитах, паренхиматозной желтухе, лихорадочных состояниях, острых инфекционных заболеваниях, хронической сердечной недостаточности, хронической пневмонии, гипертиреозе, раковой кахексии и др.

Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагностическую оценку.

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Рекомендуемая литература

Основная

1.Материал лекций.

2.Кухта В.К.,Морозкина Т.С. Олецкий Э.И., Таганович А.Д. Биологическая химия .

Бином –Асар 2008. –с.240-253.

3.Биохимия: под ред. чл.-корр. РАН, проф Е.С. Северина: М. Геотар-Медицина. 2006г. –с. 396-399, 409-417, 428-436.

Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. М.: Медицина; 1998. С. 381-388, 392-406.

5.Николаев А. Я. Биологическая химия. М.: Медицинское информационное агентство, 2004. с. 291-297, 305-307

6.Марри Р. и др. Биохимия человека. М.: Мир, 2004г. Т. 1.- с.239-242, 287-290.

7.Филиппович Ю. Б. Основы биохимии. М.: Флинта, 1999. с.387-410.

Занятие 16

Лабораторная работа. Определение концентрации липопротеидов высокой и низкой плотности в сыворотке (плазме) крови.

Принцип метода. Хиломикроны, липопротеиды очень низкой плотности (VLDL) и липопротеиды низкой плотности (LDL) осаждаются при добавлении к образцу фосфорновольфрамовой кислоты и Мg²⁺. После центрифугирования в супернатанте остаются только липоротеиды высокой плотности (НDL).

^ Ход работы.

Реагенты	Опытная проба, мл	Стандартная проба, мл
Сыворотка (плазма)	0,15	-
Осаждающий реагент	0,3	0,3
Стандартный раствор	-	0,15

Хорошо перемешать и оставить на 10 мин. при комнатной температуре. Опытную пробу отцентрифугировать в течение 10 мин. при 4 000 об./мин. Прозрачный супернатант используют для определения концентрации НDL. Определить холестерин в опытной и стандартной пробах в течение часа.

Реагенты	Опытная проба, мл	Стандартная проба, мл
Супернатант	0,2	-
Рабочий реагент	2,0	2,0
Стандартный раствор + осаждающий реагент	-	0,2

Реакционную смесь тщательно перемешивают и инкубируют не менее 10 минут при комнатной температуре (18-25⁰С) и измеряют оптическую плотность опытной и стандартной проб против дистиллированной воды в кюветах с толщиной поглощающего слоя 5мм при длине волны 490нм. Окраска стабильна не менее 2 часов после окончания инкубации при предохранении от прямого солнечного света.

Примечание. Для анализа использовать только прозрачный супернатант. В случае мутного супернатанта (неполное осаждение) или при содержании триглицеридов в пробе более 4,0 ммоль/л следует провести повторное осаждение, увеличив объём осаждающего реагента в 2 раза. Полученный результат умножить на 2.

Расчёт концентрации (С) холестерина НDL проводят по формуле:

С = Е_оп./Е_ст. • 1,29 (ммоль/л)

или

С = Е_оп./Е_ст. • 50 (мг/100мл)

где Е_оп. – экстинкция опытной пробы,

Е_ст. – экстинкция стандартной пробы,

Расчёт концентрации (С) LDL проводят по формуле:

С = [общий холестерин] – [НDLхолестерин] – [триглицериды/5] мг/100 мл

или

С = [общий холестерин] – [НDLхолестерин] – [триглицериды/2,2] ммоль/л

Норма. НDL

Мужчины Женщины

Нормальные величины: > 55 мг/100мл > 65 мг/100мл

(1,42ммоль/л) (1,68ммоль/л)

Группа риска: 35-55 мг/100мл 45-65 мг/100мл

(0,9-1,42ммоль/л) (1,16-1,68ммоль/л)

Патологическое нарушение липидного обмена:

<35 мг/100мл <45 мг/100мл

(0,9ммоль/л) (1,16ммоль/л)

LDL

Группа риска: ≥150 мг/100мл ≥190 мг/100мл

(3,9ммоль/л) (4,9 ммоль/л)

Клинико-диагностическое значение. </45></35>

плохо

не очень плохо

средне

хорошо

отлично

Ваша оценка этого документа будет первой.

Ваша оценка:

	8. Обмен и функции липидов. Контрольное занятие		Занятие 8 Химия углеводов. Переваривание и всасывание. Метаболизм гликогена
	Контрольная работа №7 Тема : обмен и функции липидов цель : контроль приобретенных знаний. Вопросы		Тема: Обмен и функции липидов
	Исходный уровень знаний и навыков Цель занятия: изучить специфические биохимические функции витаминов, их роль в метаболизме		Контрольная работа №2 «Обмен углеводов, липидов, белков»
	Перечень вопросов к переводному экзамену по биологической химии для студентов стоматологического Белки как особый класс биополимеров: их классификация, биологические функции белков. Аминокислотный...		Тема занятия; цель занятия; основные вопросы темы
	Обмен и функции углеводов		Тема занятия Цель занятия: Формирование четких и правильных действий при оказании первой доврачебной помощи (Слайд...

1Биохимия липидов Занятие 13 Классификация, биологические функции. Переваривание и всасывание. Обмен липопротеидов Цель занятия

LDL

Похожие: