Токсикологическая оценка и экспериментальное обоснование применения полиферментных препаратов в птицеводстве и свиноводстве 16. 00. 04 ветеринарная фармакология с токсикологией
|
|
Скачать 0.59 Mb.
|
|
На правах рукописи Данилова Надежда Ивановна ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ ПОЛИФЕРМЕНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ В ПТИЦЕВОДСТВЕ И СВИНОВОДСТВЕ 16.00.04 – ветеринарная фармакология с токсикологией АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Казань – 2009 Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана»
Защита диссертации состоится «20» октября 2009 года в 10оо часов на заседании диссертационного совета Д 220.012.01 при ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» (420075, Казань, Научный городок-2) С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» Автореферат диссертации разослан «_____» ____________ 2009 года Ученый секретарь диссертационного совета кандидат ветеринарных наук, ст. научный сотрудник /В.И. Степанов/ ^ Актуальность темы. Опыт использования в животноводстве ферментных препаратов микробиологического происхождения имеет многолетнюю историю. Целесообразность применения ферментных препаратов обусловлена необходимостью внесения в состав рационов сельскохозяйственных животных местных зерновых кормов с высоким содержанием трудногидролизуемых и ингибирующих веществ, нарушающих процессы пищеварения, снижающих продуктивность и повышающих затраты кормов, а также несовершенством ферментной системы органов пищеварения у молодняка. Особое значение применения ферментных препаратов актуально для моногастричных животных (свиней и птиц) из-за отсутствия в их организме соответствующих ферментов для разрушения межклеточных стенок зерна, вырабатываемых микрофлорой желудочно-кишечного тракта у жвачных животных. (В.И. Фисинин и др., 2003; А.Б. Мальцев и др., 2005) В настоящее время для повышения переваримости и доступности кормов с низкой питательностью используют ферментные препараты, содержащие комплекс ферментов амилолитического, пектолитического, целлюлозолитического и протеолитического действия (Э.В. Удалова, 1998; Н.А. Балакирев, 2006). Конкретный набор ферментов, входящих в состав таких препаратов, определяется видом животного и характером кормов, способствуя повышению степени расщепления питательных веществ и росту секреторной функции собственных ферментов. Причем выгодно применение таких ферментных препаратов, которые можно использовать как в виде кормовых добавок, так и ферментировать часть кормов вне организма. Применение экзогенных ферментов позволяет решить многие проблемы, и в первую очередь это расщепление вне организма высокомолекулярных компонентов корма — белков, углеводов, жиров и т.д. до низкомолекулярных. В организме подготовленный корм более полно расщепляется собственными ферментами, способствуя его лучшей усвояемости. Разрушение ферментами некрахмалистых полисахаридов, содержащихся в большом количестве в ячмене и ржи, способствует снижению вязкости корма, и в конечном итоге приводит к нормализации микрофлоры кишечника, что особенно актуально для свиней и птиц. (P.M. Siba 1993, 1995; И.А. Егоров, 2003; Т.М. Околелова и др., 2003; Н. Кравченко и др., 2006) Кроме того, перед птицеводством стоит проблема повышения поедаемости кормов (В.И. Дорожкин и др., 2003), чему способствует нарушение параметров микроклимата (Н.К. Кириллов и др., 2005), технологические стрессы, иммунодепрессивное состояние, именно поэтому для улучшения вкуса возможно применение корма, обработанного экзогенными ферментами. При этом все препараты, перед широким применением в животноводстве, должны предварительно пройти токсикологическую оценку и быть изучены по их влиянию на организм животных и птиц, в связи, с чем исследования новых отечественных полиферментных препаратов «НИСТ» и «ГИМИЗИМ», является актуальным. ^ Целью данного исследования является изучение токсичности полиферментных препаратов «НИСТ» и «ГИМИЗИМ», разработка различных технологий при их использовании для более глубокого расщепления компонентов корма, влияния их на организм птиц и свиней и их продукцию, а также расчет экономической эффективности при различных способах их применения. Исходя из вышеизложенного и в соответствии с отраслевой темой: «Влияние кормов, обработанных полиферментными препаратами на организм животных» (№ госрегистрации 01200404200) для разрешения были поставлены следующие задачи: 1. Провести токсикологическую оценку полиферментных препаратов «НИСТ» и «ГИМИЗИМ» 2. Изучить возможность использования полиферментного препарата «ГИМИЗИМ» в качестве лечебно-профилактического средства при отравлении животных солями тяжелых металлов 3. Изучить влияние препарата «ГИМИЗИМ» на степень расщепляемости высокомолекулярных соединений (in vitro) в зерне (пшеница, ячмень, рожь) при различных температурных режимах. 4. Установить влияние препарата «НИСТ» и «ГИМИЗИМ» на организм и продуктивность птиц и свиней. 5. Провести ветеринарно-санитарную экспертизу мяса цыплят-бройлеров и свиней, при применении полиферментных препаратов. 6. Провести гистологические исследования органов пищеварения птиц и свиней. ^ Впервые установлены токсикологические параметры изучаемых полиферментных препаратов «НИСТ» и «ГИМИЗИМ», разработана оптимальная технология обработки ими концентрированных кормов и боенских отходов, получены новые данные по влиянию этих препаратов на физиологическое состояние, белковый, углеводный и минеральный обмены, морфобиохимические и иммунологические показатели птиц и свиней, их продуктивность. Проведена оценка полученной от них продукции и потомства от кур, а также показана возможность использования полиферментного препарата «ГИМИЗИМ» в качестве лечебно-профилактического средства при отравлении животных солями тяжелых металлов. Новизна полученных данных подтверждена патентом: «Применение корма, обработанного полиферментным препаратом «Гимизим», при отравлении животных и кур тяжелыми металлами» / Патент RU 2308188. - Заявка № 2005 120763/13. – 05.07.2005. – Опубл. 20.10.2007. – Бюл. № 29. - с 2. и положительным решением о выдаче патента на изобретение. Способ приготовления корма / По заявке №2007116781/13(018239) / – ФГУ ФИПС, 07.04.09. Практическая ценность работы. Экспериментально обоснованы оптимальные режимы и даны рекомендации использования полиферментных препаратов «НИСТ» и «ГИМИЗИМ» для применения их в птицеводстве и свиноводстве. По материалам диссертации разработаны и утверждены: Временные рекомендации «Применение полиферментных препаратов «ГИМИЗИМ» и «НИСТ» в высокотемпературной ферментации кормов в птицеводстве», утвержденные Заместителем Директора Департамента ветеринарии и животноводства Минсельхоза России Х.А. Амерхановым (2007); «Инструкция по применению полиферментного препарата «ГИМИЗИМ» в животноводстве и птицеводстве», «Инструкция по применению полиферментного препарата «НИСТ» в животноводстве и птицеводстве», «Инструкция по применению красителя «ПОНСО» и полиферментного препарата «ГИМИЗИМ», утвержденные начальником ГУВ КМ РТ Б.В. Камаловым (2007). ^ Основные положения и результаты доложены на ежегодных проблемных советах по итогам НИР в Казанской академии ветеринарной медицины (2004-2008); международных и научно-производственных конференциях (Казань, 2001, 2002, 2004, 2005, 2006, 2009; Чебоксары, 2001; Яльчик, Республика Марий Эл, 2005; Быково, Московской области, 2007) Публикации. По материалам диссертации опубликовано 37 научных работ, в том числе 11 - в изданиях, включенных в перечень ведущих рецензируемых научных журналов и изданий, рекомендованных ВАК (Птицеводство, Зоотехния и Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана), в которых отражено основное содержание диссертационной работы. ^
^ Диссертация изложена на 297 страницах текста в компьютерном исполнении и состоит из общей характеристики работы, обзора литературы, материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений и списка использованной литературы. Работа содержит 67 таблиц и 25 рисунков. Список литературы состоит из 523 источника, в том числе 92 иностранных. ^ 2.1 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Экспериментальные исследования были проведены на кафедре зоогигиены и внутренних незаразных болезней сельскохозяйственных животных, базе учебно-опытного хозяйства Казанской государственной академии ветеринарной медицины, птицефабрике «Ак Барс Пестрецы» Пестречинского района РТ, ООО «Газовик» отделение «Татарский» Пестречинского района РТ и «Звезда» Елабужского района РТ в период с 2000 по 2007 г.г. Исследования по изучению влияния полиферментного препарата «НИСТ» и «ГИМИЗИМ» на организм животных выполнены на 108 белых мышах, 208 белых крысах, 120 кроликах, 132738 цыплятах-бройлерах, 520 курах-несушках и 120 свиньях. Животных подбирали по принципу аналогов: с учетом возраста, пола и массы тела. Схема опытов по группам представлена на рис. 1. В период проведения экспериментов поддерживали одинаковые условия кормления и содержания опытных и контрольных животных, согласно существующим зоогигиеническим нормам (НТП-АПК 1.10.05.001-01 и НТП-АПК 1.10.02.001-00). Контроль над ростом и развитием птиц и свиней проводили путем ежемесячного взвешивания. Всех подопытных животных подвергали клиническому обследованию по общепринятым методам. Для экспериментальных исследований использовали полиферментные препараты «НИСТ» и «ГИМИЗИМ», которые являются комплексными поли-ферментными препаратами для глубокого расщепления вне организма и увеличения усвояемости жира, целлюлозы, крахмала и белков, а также расщепления антипитательных веществ кормов, затрудняющих пищеварение у животных. Они содержит комплекс протеолитических, амилолитических, липолитических, целлюлозолитических, пектолитических и ксиланазных ферментов, позволяющих увеличить усвояемость зернофуражных смесей на основе ячменя, пшеницы, и, что особенно важно, ржи. Изучаемые препараты отличаются по протеолитической активности, которая для препарата «ГИМИЗИМ» составляет 2 ед./г и 4 ед./г - «НИСТ», амилолитической – 900 и 700 ед./г, экзо-β-глюконазной – 140 и 120 ед./г, кроме того препараты обладают целлюлазной, ксиланазной, липазной и фитазной активностью. Корм, подвергаемый высокотемпературной ферментации, готовили следующим образом: в непротекающую емкость наливали горячую (50-60°С) воду в количестве 600 л на 1 тонну требуемого корма и добавляли препарат «НИСТ» или «ГИМИЗИМ», предварительно размешанный в такой же воде, из расчета 1,5 кг или 1 кг препарата соответственно на 1 тонну подлежащего обработке корма. Образующуюся влажную мешанку периодически перемешивали, поддерживая с помощью пара температуру около 50-55°С в течение часа, с последующим доведением температуры до 70-100°С, затем остужали и скармливали животным соответственно рационам.
Определение параметров острой токсичности полиферментных препаратов рассчитывали по методу Кербера (1931 г). Кумулятивные свойства определяли по Лиму (1961) с вычислением коэффициента кумуляции по формуле Ю.С.Кагана и В.В.Станкевича (1964). Изучение местного раздражающего действия на слизистую оболочку глаза и раздражающего действия вещества при аппликации на кожу проводили согласно «Методическим указаниям к постановке исследований по изучению раздражающих свойств и обоснованию предельно-допустимых концентраций избирательно-действующих веществ в воздухе рабочей зоны» (1989). Оценку эмбриотоксического действия изучаемых препаратов проводили согласно «Методическим указаниям по изучению эмбриотоксического действия фармакологических веществ и влияния их на репродуктивную функцию» (1986), а тератогенного - состояние внутренних органов методом Wilson (1965) и скелета эмбрионов методом Dawson (1926). Токсикологические исследования проводили совместно с сотрудниками кафедры терапии КГАВМ К.Х. Папуниди и О.А. Грачевой. Лечебную и профилактическую эффективность полиферментного препарата «ГИМИЗИМ» испытывали на белых крысах и курах при острой и хронической комплексной затравке животных сульфатом кадмия и ацетатом свинца. Количественное содержание тяжелых металлов в кормах, яйцах, выделениях и органах убитых животных определяли на атомно-абсорбционном спектрофотометре «Квант–АФА» по ГОСТ 30178-96, а сульфгидрильные группы – методом амперометрического титрования по Kalthoff в модификации В.В. Соколовского (1962). Изменение состава корма под воздействием исследуемого препарата при различных температурных режимах проводили по следующим показателям: фракции белка по А.И. Ермакову (1972), сахара и крахмала по ГОСТ 26176-91 и ГОСТ 10845-98, кислотность – ГОСТ 13496.12-98, показатели чисел жира – ГОСТ 13496.18-85, определение жирных кислот – на хроматомасспектрометре «Clarus 500», вязкость - вискозиметром (В.Н. Кочкурова,1985), а относительную биологическую ценность зерновых кормов - с использованием тест-организма Tetrahimena pyriformis (Н.Г. Беленький и др., 1977). Оценку питательности рационов осуществляли по фактическому составу кормов, а рационы составляли по нормам кормления сельскохозяйственных животных (А.П. Калашников и др., 2003). Морфологические исследования крови белых крыс, птиц и свиней включали определение количества эритроцитов, лейкоцитов по общепринятым методам; содержание гемоглобина – гемометром Сали. Содержание белка и его фракций в сыворотке крови определяли методом вертикального электрофореза, а мочевину, креатин, креатинин, холестерин, глюкозу, активность щелочной фосфатазы, амилазу, АЛТ- и АСТ-азы, общий кальций и неорганический фосфор определяли на автоматическом анализаторе «Express plus» фирмы Bayer. Фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови определяли по З.Е. Матусис и С.И. Пылаевой (1972) в модификации Е.А. Олейниковой с соавт. (1975), объектом фагоцитоза служила однодневная культура Staphylococcus Aureus. НСТ-тест – реакция восстановления нитросинего тетразолия, учет которой проводился по количеству нейтрофилов с отложениями диформазана в контроле – спонтанно активированные, а опыте – при применении стимулятора вакцины S. marcescens. (Г. Фримель, 1987). Уровень Т- и В-лимфоцитов определяли методом иммунофлюоресценции с помощью моноклональных антител ИКО-90 против CD-4 и ИКО-12 против CD-22. Циркулирующие иммунные комплексы определяли методом преципитации с 3,5% раствором полиэтиленгликоля. Количественное определение иммуноглобулинов в сыворотке крови проводили методом радиальной иммунодиффузии в геле (по Манчини (1965), в модификации О.Н. Грызловой с соавт. 1976). Физиологические (балансовые) исследования по изучению переваримости и использованию питательных веществ рационов птиц и животных, проведены в соответствии с методикой, разработанной в ВИЖе (А.И. Овсянников, 1976) и ВНИТИП (В.И. Фисинин и др., 2003) в специально оборудованных клетках. Сбор кала с мочой (у свиней) и помета (у птиц) проводили 1 раз в сутки в одно и то же время, взвешивая и отбирая среднюю пробу по ГОСТ 27262-87. Разделение азотистых веществ помета у птиц, на азот кала и азот мочи, осуществляли по методу М.И.Дьякова (А.И. Овсяников, 1976). За время опыта учитывались химический состав выделений животных, перевариваемость и усвояемость ими питательных веществ рациона и изменение их живой массы путем взвешивания в одно и то же время утром до кормления в начале и конце каждого из периодов), а также дали оценку действия препарата на структуру помета методом ЯМР-релаксометрии на кафедре молекулярной физики КГУ. При исследовании кормов и выделений определяли: сырой жир - согласно ГОСТ 13496.3-92; влажность – ГОСТ 29143-91, сухое вещество – по разнице между первоначальным весом и влажностью; сырую клетчатку – ГОСТ 13496.2-91, сырой протеин – титрометрическим методом Кьельдаля - ГОСТ Р 50466-93; фосфор - ванадиево-молибдатным методом - ГОСТ 26657-85; кальций – комплексонометрическим методом с использованием индикатора эриохрома сине-черного Р - ГОСТ 26570-95. Бактериологические исследования проб корма и содержимого кишечника животных проводили общепринятыми методами (А.С. Лабинская, 1978). Послеубойную ветеринарно-санитарную экспертизу мяса убитых птиц и свиней проводили согласно требованиям «Правила ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясопродуктов» (1988). Отбор проб для физико-химических, органолептических и микробиологических исследований проводили в стерильную посуду - ГОСТ 25391-82, ГОСТ 7269-79 и ГОСТ Р 50396.0-92. Микробную обсемененность мышц осуществляли по ГОСТ Р 50396.1-92. Органолептические исследования (внешний вид, запах, консистенция, степень обескровливания), биохимические и бактериологические исследования по ГОСТ 9959-91 и ГОСТ Р 51944-2002. При дегустации вареного и жареного мяса определяли запах, прозрачность и вкус бульона (ГОСТ Р 51944-2002), а кислотное и перекисное числа жира определяли по ГОСТ 8285-74 и ГОСТ 13496.18-85. Химический состав мяса и яиц определяли по следующим показателям: влагу по ГОСТ 9793-74, внутримышечный жир – методом экстрагирования в аппарате Сокслета (ГОСТ 13496.15-85), золу – путем сжигания в муфельной печи (ГОСТ 26226-95), количество белка – по Кьельдалю (ГОСТ 10846-91), а также калорийность общепринятым методом (А.С. Зенько и др., 1990). Оценку пищевых яиц проводили по ГОСТ 27583-88, а изучение влияния изучаемого препарата на воспроизводительную способность кур-несушек – по яйценоскости, инкубационным показателям яиц и качеству потомства (Б.Ф. Бессарабов, 1985). Для проведения гистологических исследований по окончании эксперимента у животных и птиц были взяты кусочки органов с последующей окраской гематоксилином и эозином. Экономическую эффективность рассчитывали по И.Н. Никитину и др. (1999) с учетом действующих цен. Экспериментально полученный цифровой материал обрабатывали по методике, разработанной Р.Х. Тукшаитовым и Н.Р. Нигматуллиным (1984) с последующим применением критерия t Стьюдента и использованием программы Microsoft Excel на персональном компьютере. Библиографическое описание, использованных в диссертации литературных источников, осуществляли в соответствии с требованиями действующего ГОСТ 7.1-84 и ГОСТ 7.80-2000. ^ 2.2.1 Изучение токсических свойств полиферментных препаратов «НИСТ» и «ГИМИЗИМ» 2.2.1.1 Определение параметров острой токсичности Опыты по определению острой токсичности были проведены на самцах и самках половозрелых белых мышей массой тела 18-20 г и белых крыс массой 180-220 г. Ферментные препараты «НИСТ» и «ГИМИЗИМ», вводили животным в желудок с помощью металлического зонда с напаенной оливой на конце. В опытах с каждым из двух препаратов животные были разделены на 6 групп (по 3 самца и три самки в каждой): 5 опытных, которым задавали препарат в различных дозах и одна контрольная, животным которой вводили дистиллированную воду в аналогичных объемах. Среднесмертельная доза (ЛД50) препарата «НИСТ» для мышей составила 9,3 и крыс 6,9 г/кг, а препарата «ГИМИЗИМ» - 7,8 и 4,6 г/кг соответственно. Исходя из этого препарат «НИСТ» по ГОСТ 12.1.007.76 относится к IV классу опасности, а - «ГИМИЗИМ» - III-IV классу, а по гигиенической классификации по основным параметрам вредности - малотоксичным соединениям. ^ Опыты проводили на 10 крысах для каждого препарата (по 5 самок и 5 самцов). Для этого в течение первых 4 суток крысам внутрижелудочно вводили препараты в виде суспензии, разведенные дистиллированной водой в дозе 0,1 ЛД50 в остром опыте. Затем через каждые 4-е дня предыдущую дозу препарата увеличивали в 1,5 раза до конца опыта, т.е. до полной гибели животных. Установлено, что среднесмертельная, субхроническая доза препарата «НИСТ» для крыс составила 63,7 г/кг и «ГИМИЗИМ» - 19,1 г/кг живой массы, коэффициент кумуляции - 9,2 и 4,2 соответственно, что по принятой классификации (Л.И.Медведь (1986) препарат «НИСТ» относится к веществам со слабовыраженной кумуляцией, а «ГИМИЗИМ» - умеренной. ^ Эксперименты были проведены на 4 кроликах обоего пола для каждого препарата, наблюдение вели в течение 7 дней. Для этого участки кожи 5x5 см за день эксперимента тщательно выстригли на спине слева, и справа от позвоночника. Препарат наносили на кожу в нативном виде (слегка смешивали с дистиллированной водой - в виде кашицы) из расчета 20 мг/см2, контроль -0,02 мл дистиллированной воды/см2, время экспозиции составляло 4 часа. Спустя этого времени нанесенный препарат удаляли теплой водой с мылом. Реакцию кожи регистрировали через 1 и 18 часов, оценивали в сравнении с симметричными участками кожи того же животного, где была нанесена дистиллированная вода. В период наблюдения в опытах с препаратом «НИСТ» через один час после окончания экспозиции каких-либо функциональных нарушений со стороны кожи отмечено не было, спустя 18 часов на левом боку появилась слабая (розовая) эритема с небольшим отеком при толщине кожной складки 0,4 мм. Спустя 1-2 суток вышеописанные изменения участка кожи при нанесении на нее препарата не отличались от контрольного. В опытах с препаратом «ГИМИЗИМ» через 18 часов после экспозиции наблюдалась умеренно выраженная эритема, которую можно было оценить в 2 балла и отек, который оценили в 1 балл. Через 1-2 дня эритема и отек полностью исчезли. По выраженности раздражающего влияния на кожу кроликов препараты «НИСТ» и «ГИМИЗИМ» можно отнести к первому классу препаратов, т.е. обладающих слабовыраженным действием. ^ В опыт были взяты по 4 кролика на каждый испытуемый препарат, для чего в конъюнктивальный мешок левого глаза кроликов вносили препарат в количестве 50 мг, правый глаз служил контролем. После внесения препарата на 1 минуту, прижимали слезноносовой канал у внутреннего угла глаза. Наблюдение за состоянием слизистой оболочки и прозрачностью роговицы проводили в течение недели. В опытах с препаратом «НИСТ» гиперемии и отека слизистой оболочки глаз не наблюдалось, роговицы глаз были чистые, а препарата «ГИМИЗИМ» - сосуды были инъецированы со слабым отеком век, которые полностью исчезали спустя 1-2 дня с момента аппликации. Повреждающее действие изучаемого препарата «ГИМИЗИМ» на слизистые оболочки глаза кроликов было оценено - 1 балл. Данные опытов показывают, что «НИСТ» и «ГИМИЗИМ» являются веществами, вызывающими слабое раздражение слизистых оболочек глаз кроликов. ^ Опыты были проведены на 4 кроликах (на каждый испытуемый препарат), которым предварительно выстригали участки кожи (2x3 см) на спине, слева и справа от позвоночника. Правый бок служил для аппликации изучаемого препарата, левый - для контроля (дистиллированная вода). Препарат наносили на кожу: «НИСТ» - в нативном виде, а «ГИМИЗИМ» - в разведении с водой 1:2. Эксперимент проводился в течение 30 дней. Поскольку аллергических реакций с нативным препаратом «НИСТ» отмечено не было, а положительная слабая аллергическая реакция с препаратом «ГИМИЗИМ» наблюдалась только у двух кроликов из четырех, испытуемые препараты можно отнести к слабым аллергенам. ^ В опытах были использованы белые крысы массой 180 - 200 г, для чего сформировали три группы по 12 голов. Первой группе препарат «НИСТ» вводили внутрижелудочно в виде вводной взвеси из расчета 1/20 ЛД50 (340 мг/кг), второй группе – препарат «ГИМИЗИМ» из расчета 1/20 ЛД50 (224 мг/кг). Контрольным животным (третья группа) вводили дистиллированную воду. Изучаемые препараты вводили на протяжении всего срока беременности (21 день). Применение крысам препарата «ГИМИЗИМ» способствовало некоторому угнетению репродуктивной функции самок, что выражалось в уменьшении количества желтых тел в яичниках и количеством мест имплантации и приводило к более высоким показателям предимплантационной гибели (на 1,79 % в сравнении с контрольной группой). Вскрытие на 20-день беременных самок показало, что у крыс после применения препарата «НИСТ» количество мертвых и живых плодов не различалось, а - «ГИМИЗИМ» было незначительно большее появление мертвых плодов, что выражалось увеличением показателя постимплантационной гибели (на 2,83%) и общей эмбриональной смертности (на 4,38 %) по сравнению с контрольной группой, однако различия в показателях были недостоверны. Исходя из вышесказанного можно сделать вывод, что препараты «НИСТ» и «ГИМИЗИМ» не обладают эмбриотоксическими свойствами. При изучении тератогенного действия данных препаратов при внешнем осмотре эмбрионов не было обнаружено признаков уродств. При исследовании состояния внутренних органов не было выявлено аномалий в развитии органов у всех подопытных животных. Изучение скелета эмбрионов также показало, что изучаемые препараты не влияли на закладку и развитие костной системы крыс. Наблюдениями в постнатальный период за крысятами, полученными от крыс, которым внутрижелудочно вводили изучаемые препараты, было установлено, что рост и развитие опытных особей не отличалось от контрольных животных. Таким образом, из результатов проведенных исследований видно, что препараты «НИСТ» и «ГИМИЗИМ» не обладают эмбриотоксическим и тератогенным действием. ^ 2.2.1.5.1 Изучение детоксицирующей способности кормов, обработанных препаратом, в опытах на белых крысах Опыты проводили на белых крысах самцах живой массой 180 – 220 г, разделенных на две группы по 30 животных в каждой: первая служила контролем, а вторая – опытом. Крысам перорально вводили сульфат кадмия и ацетат свинца, среднесмертельная комплексная доза которых составляла 350 и 3000 мг/кг соответственно. Животным второй группы в течение месяца до постановки опыта и на протяжении всего эксперимента (14 дней) скармливали зернофураж, обработанный полиферментным препаратом «ГИМИЗИМ», а первой – прошедший всю технологическую обработку, но без внесения ферментов. Для подготовки кормов к скармливанию 1 г препарата растворяли в 5 мл теплой воды, перемешивали с 1 кг зернофуража, добавив в него 600 мл воды, нагревали до 50-55°С и оставляли вызревать 1-2 часа. По окончании ферментации температуру доводили до 70-100°С и остывший корм скармливали опытным крысам. Гибель животных в 1-й группе началась в 1-й день после введения тяжелых металлов и продолжалась в течение 3-х дней. Всего пало 15 белых крыс из 30 (на 1-е сутки -10, 2-е 4, 3-и – 1), выживаемость составила 50%. Во 2-й опытной группе из 30 отравленных белых крыс пало 23,3% (2-е сутки -2, 3-и – 4 и 4-е - 1). При этом по сравнению с животными контрольной группы клинические признаки отравления развивались в более поздние сроки, а именно на 2-е сутки с момента введения тяжелых металлов и были менее выражены. Выжившие животные выглядели достаточно активными, охотно принимали корм и воду. ^ при затравке кур солями кадмия и свинца в дозе 1/20 ЛД50 Учитывая, что в природных условиях более вероятно заражение живот- ных и птиц в меньших количествах, доза вводимых тяжелых металлов была уменьшена до 1/20 ЛД50, а именно сульфат кадмия и ацетат свинца задавали подопытным курам в хлебных болюсах в комплексной дозе 26,25 мг/кг и 200 мг/кг соответственно, в течение 120 дней. В контроле гибель птиц началась на 18-е сутки с момента комплексного введения тяжелых металлов, и при этом за 35 дней из 30 кур погибло двадцать шесть (18-е - 1, 19-е - 2, 20-е - 4, 21-е - 10, 22-е - 6, 25-е - 1, 28-е - 1, 35-е - 1). Применение опытным курам в течение 120 дней зернофуража, обработанного полиферментным препаратом «ГИМИЗИМ», позволило отодвинуть начало их гибели на 25-й день, и из 30 кур за все время исследования погибло три птицы (25-е - 1, 26-е - 1, 27-е - 1), что свидетельствует о его лечебно-профилактическом эффекте. У подопытных кур наблюдались изменения показателей крови. Количество эритроцитов в крови контрольных кур на 10-е сутки уменьшилось по сравнению с фоновыми данными на 19% и гемоглобина - 21%, на 20-е - 28,1 и 33,4%, на 30-е - 57,8 и 51,1%, опытных - на 6,0 и 5,1 %, 4,5 и 15,1 %, 41,2 и 39,1 % соответственно. Отравление тяжелыми металлами способствовало повышению уровня холестерина, количество которого на 10-е сутки опыта превышали фоновые данные в контроле на 47,8%, на 20-е - 62% и 30-е - 98,4 %, а в опытной группе - на 21,6%, 39,3% и 56,5 % соответственно. У контрольных кур наблюдалось снижение фагоцитарной активности на 10-е сутки с начала затравки до 23,9, 20-е – 22,1 и 30-е –19,3%, а опытных - 25,2, 24,3 и 21,5% соответственно, приблизившись к фоновым показателям к 60-90 дню эксперимента. Количество сульфгидрильных групп, у контрольных птиц на 10 сутки опыта уменьшилось по сравнению с фоном на 19 %, 20-е – 31,4% и 30-е –49,7%, а опытных - на 9,4%, 12,7% и 15,9%, на 60-е – 12,3 % соответственно. К 90-120 дню эксперимента этот показатель у опытных птиц приблизился к фоновым данным. На протяжении всего исследования наблюдалось снижение общего белка в сыворотке крови по сравнению с фоновыми показателями, у контрольных кур на 10-е сутки на 16,5, 20-е – 28,4 и на 30-е – 36,9 %, а опытных - 8,7 %, 19,2 % и 28,8 %. У опытных кур менее резкое снижение общего белка по сравнению с контролем происходило благодаря альбуминам и γ-глобулиновой фракции, что вероятно, объясняется применением в их кормлении полиферментного препарата, содержащего протеолитические ферменты, под действием которых протеин корма расщепляется на множество более простых соединений, легкоусвояемых организмом птиц. Все исследуемые морфобиохимические и иммунологические показатели крови имели тенденцию к снижению, как в опыте, так и в контроле, однако у опытных кур оно было менее выраженным по сравнению с контролем, а у выживших - они приходили в норму к 60 – 120 дню, несмотря на продолжение затравки их тяжелыми металлами в дозе 1/20 ЛД50. Исследование тяжелых металлов при контрольном убое в органах, тканях (на 10-й день: кадмия и свинца в печени в 1,66 и 1,27, почках - 1,03 и 1,44 и желудке – 2,25 и 2,26 раза; на 20-й - кадмия в печени в 1,5 и свинца в почках в 1,4 раза, желудке в 1,9 и 2,1 раза; у погибших птиц (кадмия и свинца в печени в 1,11 и 1,13, желудке – 1,27 и 1,21, почках – 1,52 и мышцах - 1,95 и 1,47 раза) и яйцах (кадмия в 1,78 и свинца - 1,68 раза) содержание было выше у кур контрольной группы по сравнению с опытными, что вероятнее всего объясняется большим их выведением с пометом (кадмия в 3,42 и свинца - 3,02 раза). |
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям