Генетические и иммунологические параллели у больных раком легкого и бронхиальной астмой 14. 00. 14 онкология 14. 00. 36 аллергология и иммунология
|
|
Скачать 396.78 Kb.
|
|
На правах рукописи ВАСИЛЬЕВА МАРИЯ ВЛАДИМИРОВНА ГЕНЕТИЧЕСКИЕ И ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАЛЛЕЛИ У БОЛЬНЫХ РАКОМ ЛЕГКОГО И БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ 14.00.14 – онкология 14.00.36 – аллергология и иммунология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Томск - 2006 Работа выполнена в ГУ Научно-исследовательский институт онкологии Томского научного центра Сибирского отделения РАМН и в ГОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор Климов Владимир Васильевич доктор биологических наук, профессор Чердынцева Надежда Викторовна Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ Удут Владимир Васильевич доктор биологических наук, профессор Ветлугина Тамара Парфеновна Ведущая организация: ФГУ НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова, г. Санкт-Петербург Защита состоится «____» _______________ 2005г. в ________часов на заседании диссертационного совета Д 001.32.01 при ГУ НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН (634009, г. Томск, пер. Кооперативный, 5) С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН Автореферат разослан «____» _______________ 2006г. Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук Фролова И.Г. ^ Актуальность проблемы Постоянный прирост заболеваемости раком легкого (РЛ) и смертности от него во всем мире делает чрезвычайно актуальным исследования по изучению факторов, способствующих формированию этого заболевания. Эпидемиологические и фундаментальные молекулярно-генетические исследования четко показали этиологическую роль ряда канцерогенных факторов среды, ведущее значение среди которых имеют связанные с курением метаболиты, а также вовлечение генетических факторов, в первую очередь ответственных за взаимодействие с экзогенными и эндогенными агентами, способствующими злокачественной трансформации, и обеспечивающих целостность генома, в патогенез РЛ. Однако существует еще один аспект, на который мало обращается внимания, а именно, предполагаемая возможность снижения риска РЛ при определенных патологических состояниях, в частности, при аллергических заболеваниях. Свидетельством такой возможности являются довольно многочисленные сведения в литературе на протяжении нескольких десятилетий, указывающие на оппозитные взаимоотношения аллергических и раковых заболеваний (Бережная Н.М., Ялкут С.И., 1983; Адо В.А., Васильев Н.В., Горячкина Л.А., 1986; Васильев Н.В. и соавт., 1994; Бережная Н.М., Чехун В.Ф., Сепиашвили Р.И., 2005; Sanchez-Borges et al., 1986; K.E. Osann, 1991;Mills et al., 1992; Negri et al., 1999; Talbot-Smith et al., 2003; Bosetti et al., 2004; Lightfoot et al., 2004; Wiemels et al., 2004). Однако немало и противоположных сведений о положительной взаимосвязи этих заболеваний ( McWhorter, 1988; Mills et al., 1992; Eriksson et al., 1995). Вопрос о взаимоотношении аллергических и злокачественных патологий был поставлен еще в первой половине 20 века А.А.Богомольцем, когда были сформированы представления о различных наследственно конституционных типах, один из которых был определен как аллергический. В настоящее время на основании накопленных экспериментальных данных и результатов клинико-эпидемиологических наблюдений сформулированы 2 оппозитные теории взаимоотношения аллергии и рака, однако ни одна из них не объясняет, почему в одних случаях аллергия препятствует развитию рака, а в других – способствует. Между тем, данные, полученные в процессе исследований в рамках этой проблемы, могут способствовать разработке подходов по вторичной профилактике злокачественных новообразований и новых методов иммунотерапии рака. Для повышения эффективности исследований в плане прояснения вопроса о векторе взаимоотношений аллергии и рака, представляется целесообразным исследование различий или сходства патогенетических признаков бронхиальной астмы (БА) и РЛ как заболеваний, развивающихся на основе общей ткани-мишени. РЛ и БА являются заболеваниями мультифакториальной природы, риск формирования которых обусловлен взаимодействием большого количества генов с этиологически значимыми средовыми факторами. Общим атрибутом и пусковым моментом канцерогенеза является нарушение регуляции клеточного цикла. Мутация гена опухолевого супрессора р53 – одно из наиболее часто встречающихся генетических изменений в клетках различных опухолей, в частности, при РЛ они отмечаются в 50-90%, случаев. Инактивация генов в результате соматических мутаций зависит от регуляторного влияния внешних факторов и генетических механизмов, определяющих ответ на канцерогенные воздействия (Zhao et al.,1999; Rom et al., 2000; Yokota & Kohno, 2004). Нормальный бронхиальный эпителий подвергается риску повреждения вдыхаемыми или эндогенными окислительными метаболитами, а индивидуальная чувствительность к повреждению существенно зависит от различий в экспрессии ферментов биотрансформации ксенобиотиков (ФБК) 2 фазы, а именно глутатион-S-трансфераз (GST), катализирующих реакцию инактивации высокоактивных генотоксических агентов путем их коньюгации с глутатионом (Crаwford, 2000). Показано, что нулевые генотипы GSTM1 и GSTТ1, которые характеризуются частичной или полной делецией гена и, следовательно, потерей функции фермента, ассоциируются с повышенной чувствительностью к генотоксическому действию продуктов табачного дыма. Это выражается в повышении частоты хромосомных аберраций и хроматидных обменов в клетках эпителия, а также частоты мутаций гена р53 в связи со снижением детоксикационного потенциала (Norrpa, 2004; Alexandrov et al., 2002). Существуют многочисленные данные, свидетельствующие о важном значении хронического воспаления в патогенезе рака, в качестве подтверждения могут служить результаты когортных исследований по длительному применению нестероидных противовоспалительных агентов, которое приводило к значимому снижению риска РЛ, кишечника, желудка и пищевода (Baron & Sandler, 2000; Garcia-Rodriguez & Huerta-Alvarez, 2001; Martins–Green et al, 1994; Ness & Cottreau, 1999). Механизмы пролиферации, злокачественной трансформации тканей и хроническое воспаление тесно сопряжены с дисбалансом иммунитета и реализуются через нарушения кооперации иммунокомпетентных клеток и межклеточных взаимодействий на других уровнях с формированием соответствующего микроокружения (Пальцев М.А., Иванов А.А., 2003; Шварцбурд П.М, 2006; Makarthur et al., 2004, Philip et al, 2004). Анализ экспрессии онкомаркеров при различных дисрегенераторных изменениях легочного эпителия на фоне хронических воспалительных заболеваний легких позволяет говорить об их предполагаемом злокачественном потенциале. Следует отметить, что практически при всех вариантах дисрегенераторных и предраковых изменений обнаруживаются мутации р53 (Коган Е.А., 2001, 2003; Rom et al., 2000). К предопухолевым изменениям бронхиального эпителия, повышающим риск малигнизации, относят плоскоклеточную метаплазию, дисплазию и гиперплазию эпителия, эти состояния могут считаться предраком легкого (Франк Г. А., 2000, Коган Е. А., 2003). Часто рак легкого возникает на фоне хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ), для которой характерны диспластические изменения и метаплазия бронхиального эпителия. ХОБЛ характеризуется наличием хронического воспаления в бронхолегочном тракте с преимущественным вовлечением CD8+ лимфоцитов, нейтрофилов и макрофагов. Принципиальным различием патогенеза БА и ХОБЛ являются эпизодические и реверсируемые нарушения функции бронхолегочного тракта в первом случае и прогрессирующая легочная обструкция во втором на фоне ремоделирования дыхательных путей. При исследовании биоптатов бронхиального эпителия у больных ХОБЛ в 70% случаев были обнаружены различные изменения клеточной архитектоники: гиперплазия базальных клеток, плоскоклеточная метаплазия и дисплазия бронхиального эпителия (Jeffery, 2001; Cappello et al., 2006). В настоящее время в литературе имеются лишь отдельные указания, позволяющие сделать вывод об ассоциации ХОБЛ с повышенным риском рака легкого (Mannino et al., 2004; Pap et al., 2004; Mayne et al., 1999; Kishi et al., 2002). Таким образом, ХОБЛ является хроническим воспалительным заболеванием легких, которое протекает с участием иммунологических механизмов без формирования гиперчувствительности немедленного типа и сопровождается диспластическими изменениями бронхоальвеолярного эпителия, ассоциированными с повышенным онкогенным потенциалом. Механизмы патогенеза БА включают в себя взаимодействие иммунологической и воспалительной компонент, особенности которых наряду с системой ФБК определяют реакцию на ксеногенные раздражители и выход в патологическое состояние. Механизм воспаления при классической атопической БА вовлекает Т хелперы 2 типа и эозинофилы как основные эффекторные клетки. В патогенезе инфекционно-аллергической формы БА наряду с IgE-опосредуемым механизмом играют роль клеточно-опосредуемые реакции по типу реакций гиперчувствительности замедленного типа к аллергенам микробного происхождения (Хаитов Р.М., 2002). Хроническое воспаление в респираторном тракте у больных астмой ассоциировано с ремоделированием дыхательных путей, основными проявлениями которого являются эрозии дыхательного эпителия, гиперплазия и гипертрофия слизистых желез, гиперплазия клеток дыхательного эпителия и гладкомышечных волокон, субэпителиальный фиброз и ангиогенез (Reader et al., 2003; Wang et al., 2003; Bai et al., 2005). Нами не выявлено в литературе сведений об обнаружении диспластических изменений бронхиального эпителия при атопической астме. Интересен тот факт, что несмотря на полярные различия иммунопатогенеза БА и ХОБЛ, около 10% больных манифестируют признаки обоих заболеваний, что, скорее всего, следует рассматривать как их сочетание (Barnes , 2003). Таким образом, РЛ, ХОБЛ и БА ассоциированы с хроническим воспалением, в формирование и поддержание которого вовлекаются участники воспалительного каскада, включая цитокины, хемокины, ростовые факторы, ферменты, рецепторы и адгезионные молекулы. Принимая во внимание общность ткани-мишени, а также вовлекаемых в патогенез этих заболеваний систем, представляется актуальным исследование различий или сходства их патогенетических признаков для выявления предпосылок, свидетельствующих о повышении или снижении риска РЛ у больных БА. При этом следует особо отметить, что выявление объективных клинических и лабораторных признаков аллергических состояний у больных со злокачественными новообразованиями не может рассматриваться как непреложное доказательство связи аллергии и рака, так как в данном случае может сказываться влияние роста опухоли либо противоопухолевого лечения (Schwartzbaum et al, 2005). Литературные сведения также не принимают во внимание широкий клинический полиморфизм БА, который предполагает высокую генетическую гетерогенность, а, следовательно, и различия механизмов патогенеза. При эпидемиологических исследованиях влияния астмы на риск развития РЛ необходимо проводить стандартизацию групп больных по фактору курения, что также представляет определенные сложности, поскольку 85-90% больных РЛ являются курильщиками, а больные астмой курят значительно реже в связи с гиперреактивностью бронхов. Перечисленные обстоятельства свидетельствуют о необходимости поиска новых подходов к оценке возможного влияния БА на риск развития РЛ. Для получения более объективных данных о взаимосвязи БА и РЛ мы сочли целесообразным изучение генетических полиморфизмов, для которых есть сведения о значимой ассоциации с РЛ, у больных ХОБЛ и БА. Сравнение частоты встречаемости отдельных аллелей, генотипов и их сочетаний у больных БА с соответствующими показателями у больных РЛ дает возможность составить представление о сходстве или различии изучаемых генетических особенностей при этих заболеваниях. В качестве промежуточной группы сравнения между РЛ и БА была выбрана группа больных ХОБЛ - хроническим воспалительным заболеванием легких, которое протекает с участием иммунологических механизмов без формирования гиперчувствительности немедленного типа и сопровождается метаплазией и диспластическими изменениями бронхоальвеолярного эпителия, предрасполагающими к малигнизации. Выбор полиморфизмов осуществляли на основе литературных данных об их ассоциации со злокачественными новообразованиями, в частности, с РЛ, не менее, чем в 2 разных популяциях, а также вовлечении функционирования этих генов в патогенез аллергических заболеваний или физиологию бронхиального тракта (Schwartzbaum et al, 2005). В литературе представлены данные о связи РЛ с полиморфизмом генов ФБК 2 фазы GSTT1 и GSTM1 (Spitz et al, 2000; Yang et al., 2004; Wenzlaff et al., 2005; Stucker et al., 2002, Belogubova et al, 2004), гена онкосупрессора р53 в различных популяциях (Ляхович В.В. и соавт., 1997; Papadakis et al., 2002; Miller et al, 2004; Wu et al, 2002). Это свидетельствует, что указанные полиморфные гены являются маркерами предрасположенности к онкопатологии легкого. Изучение связи гена рецептора хемокинового рецептора CCR5 с онкологическими заболеваниями началось недавно, в литературе есть сведения о его способности регулировать транскрипционную активность р53 и об ассоциации делеционного аллеля CCR5del32, кодирующего функционально неактивный белок-рецептор, с прогрессией рака молочной железы (Manes et al, 2003). В НИИ онкологии г.Томска были получены данные об ассоциации полиморфизма гена CCR5 с прогрессией РЛ (Севостьянова Н.В., 2004). Исследование связи различных генотипов изучаемых генов с патогенетически важными для астмы и ХОБЛ качественными и количественными признаками, характеризующими состояние факторов местного и системного иммунитета, позволит выявить их роль в развитии предрасположенности к РЛ и может быть полезным при формировании групп повышенного онкологического риска. Для уменьшения гетерогенности выборок, на наш взгляд, целесообразно было бы отдельно рассматривать разные формы БА. Для повышения эффективности выявления ассоциаций полиморфизмов изучаемых генов с РЛ, ХОБЛ и БА необходима также стратификация контрольных выборок в соответствии с группами больных по полу, возрасту, географическому региону. ^ : Оценить в сравнительном аспекте частоту распределения генотипов патогенетически значимых для рака легкого генов (ферментов биотрансформации ксенобиотиков 2 фазы, апоптоза и рецептора хемокинов) и особенности местного иммунитета бронхиального эпителия у больных хронической обструктивной болезнью легких, бронхиальной астмой и раком легкого. Задачи исследования:
^ Получены новые данные о повышенной частоте «нулевого» генотипа гена GSTM1, сравнимой с таковой у больных РЛ, у курящих больных ХОБЛ по сравнению с популяционным контролем для лиц европеоидного происхождения Западно-Сибирского региона. Показано, что частота «нулевых» генотипов генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков второй фазы GSTT1 и GSTM1 и их сочетаний у больных БА смешанного генеза существенно превышает уровень популяционного контроля и сравнима с таковой у больных РЛ. У больных с астмой атопического генеза не отмечено повышения частоты генотипа GSTM1”0/0” по сравнению с контролем. Получены новые данные о повышенной частоте Arg аллеля гена р53 (BstU1- полиморфизм 72 кодона 4 экзона) у больных ХОБЛ, которая не отличалась от таковой у больных РЛ. Напротив, частота генотипа Pro/Pro у больных ХОБЛ, как и у больных РЛ, была более низкой по сравнению с популяционным контролем. Одинаковое распределение генотипов гена р53 у больных ХОБЛ и РЛ можно рассматривать с одной стороны, как свидетельство сходства механизмов вовлечения р53 в патогенез ХОБЛ и РЛ, а с другой – как указание на повышенный риск формирования РЛ у больных ХОБЛ. Выявлена связь Pro аллеля гена р53 с повышенным уровнем лимфоцитов в индуцированной мокроте у больных ХОБЛ и БА. Получены приоритетные данные о более низкой частоте встречаемости делеционного аллеля гена хемокинового рецептора ССR5 у больных БА по сравнению с популяционным контролем в Западно-Сибирском регионе. Впервые в пределах одной популяции проведен сравнительный анализ полиморфизма патогенетически значимых для формирования РЛ генов у больных БА различного генеза, результаты которого свидетельствуют о различной степени предрасположенности к формированию РЛ у больных астмой с атопическим и смешанным генезом заболевания. У 50% обследованных больных РЛ выявлены признаки вторичной иммунной недостаточности, которые предшествовали развитию злокачественного процесса, сходные со структурой инфекционного синдрома вторичного иммунодефицита у больных ХОБЛ и БА. ^ В работе выявлены существенные различия в распределении генотипов и частоте встречаемости вариантных аллелей между группами больных с атопической астмой и больных старше 40 лет, в которой превалируют больные с астмой смешанного генеза. Во-первых, это свидетельствует о различной роли изучаемых генов в патогенезе разных форм БА, во-вторых, указывает на неоднородность группы БА в плане возможной предрасположенности к РЛ. Это позволяет объяснить хотя бы частично неоднозначность результатов проводившихся ранее клинико-эпидемиологических исследований о взаимосвязи БА и РЛ. В результате анализа полиморфизма гена онкосупрессорного белка р53 у больных БА получены данные об ассоциации Pro аллеля и Pro/Pro генотипа гена р53, а также сочетания генотипов ССR5/CCR5-Pro/Pro с тяжелым течением БА смешанного генеза, что свидетельствует о целесообразности исследования роли полиморфизма гена р53 в формировании резистентности к кортикостероидной терапии. Сведения о наличии «нулевых» генотипов ФБК 2 фазы и Arg аллеля гена р53 (BstU1-полиморфизм) у больных ХОБЛ могут быть использованы в качестве дополнительных критериев при формировании групп повышенного риска по РЛ. Полученные данные об ассоциации CCR5del32 с низким риском формирования БА атопического генеза указывают на актуальность дальнейшего исследования связи полиморфизма CCR5 с предрасположенностью к БА у лиц с отягощенным семейным анамнезом. ^ Основные положения и результаты научных исследований были доложены на бъединенном иммунологическом форуме с международным участием, г. Екатеринбург (2004); IX Всероссийском научном Форуме с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге», г. Санкт-Петербург (2005); Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 15-летнему юбилею Красноярского Краевого Центра по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями, «Дни иммунологии в Сибири», г. Красноярск (2005); научно-практической конференции НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН «Иммунология на рубеже веков: к 75-летию со дня рождения академика РАМН Н.В. Васильева», г. Томск (2005); 15 ежегодном конгрессе Европейского респираторного общества, г. Копенгаген (2005); III ежегодном национальном конгрессе молодых исследователей в области сердечно-сосудистых и респираторных заболеваний, г. Виннипег (2006); VII конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке», г. Томск (2006); VI съезде аллергологов и иммунологов СНГ, Российском национальном конгрессе аллергологов и иммунологов, III Российской конференции по иммунотерапии, г. Москва (2006); 16 ежегодном конгрессе Европейского респираторного общества, г. Мюнхин (2006). Публикации Результаты исследования опубликованы в 15 печатных работах, отражающих основные положения диссертации. ^ Диссертационная работа изложена на 148 страницах машинописного текста, состоит из введения, трех глав, включающих обзор литературы, материалы и методы исследования, главы с изложением собственных результатов, заключения, выводов, списка цитируемой литературы. Библиографический указатель включает 205 источников, из них 38 отечественных, 167 зарубежных. Работа иллюстрирована 29 таблицами и 16 рисунками. ^ Характеристика групп больных В исследование были включены 420 больных с патологией легких, из них 180 больных РЛ, 158 больных БА и 83 больных ХОБЛ (табл. 1). Работа проводилась с соблюдением принципов добровольности и конфиденциальности в соответствии с «Основами законодательства РФ об охране здоровья граждан» (указ Президента РФ от 24.12.1993 № 2288). Таблица 1. Характеристика групп обследованных
РЛ – группа больных раком легкого БА – группа больных бронхиальной астмой Больные РЛ находились на стационарном лечении в торако-абдоминальном отделении ГУ НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН (зав. отделением – д.м.н. С.А. Тузиков). Подавляющее число больных РЛ было мужского пола: обследовано 165 мужчин (92%) и 15 женщин (8%), возрастной интервал составил от 32 до 78 лет (средний возраст манифестации заболевания 59,1±0,9 лет). Анамнез курения был известен у 86 обследованных, среди них доля курящих составила 87,2%. Клинический диагноз РЛ устанавливался на основании клинического, морфологического, эндоскопического и рентгенологического обследования. Стадия онкологического процесса определялась в соответствии с четвертым пересмотром Международной классификации опухолей по системе TNM (Женева, 1987), а также вторым пересмотром (UICC, 1992) и дополнением к классификации TNM (UICC, 1993), одобренным Американским комитетом по раку (AJCC). Образцы опухолей легкого и прилежащих к опухоли тканей легкого были получены в результате диагностических биопсий и/или после оперативных вмешательств по поводу РЛ, гистологическое исследование проводилось в отделении патологической морфологии ГУ НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН (руководитель отделения – д.м.н., профессор В.М. Перельмутер). Больные БА находились на стационарном лечении в аллергологическом отделении Межвузовской больницы (при кафедре иммунологии и аллергологии СибГМУ, зав. кафедрой д.м.н., профессор Климов В.В.) и в пульмонологическом отделении Городской больницы № 3 (при кафедре терапии педиатрического факультета СибГМУ, зав. кафедрой – д.м.н., профессор Волкова Л.И.). Диагноз устанавливался в соответствии с Глобальной стратегией лечения и профилактики БА (GINA, 2003) на основании жалоб на приступы затрудненного дыхания или приступообразный кашель, купирующиеся ингаляцией 2-агонистов, наличия обратимой бронхиальной обструкции, подтвержденной объективными методами обследования (суточный разброс ПСВ > 20%, прирост ОФВ1 > 15%), положительных результатов кожного тестирования с наиболее часто встречаемыми аллергенами для Западно-Сибирского региона (домашняя пыль, библиотечная пыль, шерсть кошки, береза, полынь, одуванчик, лебеда, овсяница, ольха, костра, одуванчик, производитель – ОАО «Биомед», г. Москва). Больные ХОБЛ находились на стационарном лечении в пульмонологическом отделении Городской больницы № 3 (при кафедре терапии педиатрического факультета СибГМУ, зав. кафедрой – д.м.н., профессор Волкова Л.И.) и в торако-абдоминальном отделении ГУ НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН (зав. отделением – д.м.н. С.А. Тузиков). Всего обследовано 83 человека, из них 70 мужчин (84,3%) и 13 женщин (15,6%), в возрасте от 33 до 87 лет, средний возраст составил 58,3±1,1 лет. Доля курящих составила 80,7%. Диагноз устанавливался по рекомендациям, представленным программой «GOLD» (2003) на основании жалоб на хронический кашель с мокротой и одышку, наличия факторов риска в анамнезе и результатов исследования функции внешнего дыхания (ОФВ1/ФЖЕЛ<70% и постбронходилатационное значение ОФВ1<80% от должного). Подавляющее большинство составили больные с тяжелой и крайне тяжелой стадией заболевания: стадия I диагностирована у 12 пациентов (14,4%), стадия II диагностирована у 20 пациентов (24,0%), стадия III у 27 (32,5%), стадия IV – у 24 (28,9%). При оценке полиморфизма генов GSTT1 и GSTM1 у больных РЛ, БА и ХОБЛ в качестве популяционного контроля использовали выборки здоровых лиц европеоидного происхождения, проживающих в г. Томске и г. Новосибирске, которые не отличались по распределению генотипов (Ляхович В.В., 1997; Севостьянова Н.В., 2003). Контрольные выборки были сформированы из здоровых мужчин и женщин отдельно для больных ХОБЛ и РЛ, и для больных БА, с учетом соответствия возрастного и полового состава, данные любезно предоставлены В.А. Белявской (Новосибирск). ^ Материалом для исследования служили периферическая кровь и индуцированная мокрота (ИМ). Для выявления делеции гена хемокинового рецептора (CCR5del32-полиморфизм) использовали аллель-специфичную полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Амплифицировали фрагмент гена размером 276 п.н., несущий потенциальную делецию в 32 п.н., с использованием фланкирующих праймеров (Юдин Н.С. и соавт., 1998). Применяли праймеры CCR5F: 5’ – GAA-GGT-CTT-CAT-TAC-ACC-TG и CCR5R: 5’ – AGA-ATT-CCT-GGA-AGG-TGT-TC из генетического банка, каталожный номер U54994. Наличие продукта амплификации размером только 276 п.н. интерпретировалось как гомозиготное состояние по нормальному аллелю (генотип CCR5/CCR5), наличие продукта размером только 244 п.н. – как гомозиготное состояние по делеционному аллелю CCR5del32 (генотип CCR5del32/CCR5del32), наличие фрагментов 276 и 244 п.н. – как гетерозиготное (генотип CCR5/CCR5del32). Генотипирование гена р53 осуществляли методом анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПЦР-ПДРФ) с помощью праймеров: Pr1: 5’ – TTG CCG TCC CAA GCA ATG GAT GA – 3’ и Pr2: 5’ – TCT GGG AAG GGA CAG AAG ATG AC – 3’. Для рестрикции фрагмента гена р53 использовали эндонуклеазу BstFN1. Визуализацию рестрикционных фрагментов гена р53 (199, 113 и 86 п.н.) проводили с помощью электрофореза в 7% полиакриламидном геле. Типирование образцов по генам GSTT1 и GSTM1 проводили путем мультиплексной ПЦР (Spurdle et al., 2001). Использовали три пары олигонуклеотидных праймеров, специфичных к участку гена рецептора эстрогенов, ER (F: 5’ – CAA-GTC-TCC-CCT-CAC-TCC-CC; R: 5’ –GTG-CGA-GTG-GCT-CAG-TGT-GT) и генов GSTT1 (F: 5’ –GGT-CAT-TCT-GAA-GGC-CAA-GG; R: 5’ –TTT-GTG-GAC-TGC-TGA-GGA-CG), и GSTM1 (F: 5’ –TGC-TTC-ACG-TGT-TAT-GGA-GGT-TC; R: 5’-GTT-GGG-CTC-AAA-TAT-ACG-GTG-G). Гомозиготность по нулевым аллелям (0/0) генов GSTT1 и GSTM1 определяли по отсутствию на электрофореграммах продуктов амплификации фрагментов размером 131 п.н. и 114 п.н., соответственно. Наличие этих фрагментов свидетельствовало о присутствии, по крайней мере, одной нормальной (без делеции) копии генов (гомо- и гетерозиготы, генотипы +/+ и +/0). Участок гена ER размером 183 п.н. использовали в качестве внутреннего контроля амплификации. Для тестирования субпопуляций лимфоцитов применяли метод иммуноцитохимии с использованием моноклональных антител для дифференцировочных и активационных антигенов СD3, CD4, CD8, CD16, CD22, CD25, CD95, HLA-DR («DAKO», «Novocastra»). Концентрацию сывороточных иммуноглобулинов: IgG, IgM, IgA определяли методом радиальной иммунодиффузии в геле по Манчини (Mancini et al., 1965). Функциональную активность нейтрофилов определяли по их способности генерировать активные формы кислорода в реакции восстановления нитросинего тетразолия (Нестерова И.В. с соавт., 1999). ИМ получали и обрабатывали согласно рекомендациям Института пульмонологии (1998). При помощи иммерсионной микроскопии на 400 клеток мазка подсчитывали процентное соотношение плазматических клеток, лимфоцитов, нейтрофилов, макрофагов, и эозинофилов, не учитывая клетки плоского и бронхиального эпителия. Содержание фактора некроза опухоли- (ФНО-), интерферона- (ИНФ-), интерлейкинов 4, 2, 8 и 10 (ИЛ-4, ИЛ-2, ИЛ-8 и ИЛ-10) в ИМ определяли иммуноферментным методом с использованием наборов реагентов «ИФА-TNF-alpha» и «ИФА-IL-10» (ГНЦ НИИ особо чистых биопрепаратов, Санкт-Петербург), «гамма-Интерферон-ИФА-БЕСТ» и «ИЛ8-ИФА-БЕСТ» (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск), «Human IL2 ELISA BMS221INST» («Bender MedSystems», Австрия), «ИЛ-4-ИФА-БЕСТ» (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск). Статистическая обработка материала проводилась с использованием пакета прикладных программ «Statistica for Windows 6.0». Выборки данных проверяли на нормальность распределения (критерий Колмогорова-Смирнова). При соответствии нормальному закону распределения признака в исследуемых выборках проверку гипотезы о равенстве средних выборочных величин проводили с использованием t-критерия Стьюдента. Для оценки статистической значимости различий показателей выборок, не подчиняющихся закону нормального распределения, использовали непараметрический критерий Манна-Уитни (U-тест). С целью обнаружения связи между исследуемыми показателями проводили корреляционный анализ путем вычисления коэффициента ранговой корреляции Спирмена (r). Коэффициент корреляции считали значимым, если вероятность ошибки не превышала 0,05. При сравнении частот генотипов использовался стандартный критерий 2 Пирсона, при условии, когда объем выборки не превышал 5 случаев, использовали критерий 2 с поправкой Йетса и критерий Фишера. Подсчитывали отношение шансов (OR - odd ratio) для оценки ассоциации между определенными генотипами и риском развития заболевания по стандартной формуле OR=a/b x d/c, где a и b – количество больных, имеющих и не имеющих мутантный генотип, соответственно, и d и с – количество человек в контрольной группе, имеющих и не имеющих мутантный генотип. OR указан с 95%-ным доверительным интервалом (Confidence interval CI) (Лакин Г.Ф., 1989; Дж. Флейс, 1989). Для всех изученных полиморфных вариантов генов в выборках популяционного контроля и пациентов распределение генотипов соответствовало ожидаемому при равновесии Харди-Вайнберга. ^ Мультифакториальный характер аллергических заболеваний и злокачественных новообразований предполагает определенную генетическую детерминированность функционирования патогенетически важных звеньев, связанных с обеспечением взаимодействия с ксенобиотиками, поддержания целостности генома и функционирования иммунной системы. Возникновение изменений в структуре ДНК, приводящих при определенных условиях к злокачественной трансформации эпителия, напрямую зависит от интенсивности воздействия мутагенов внешней среды и генотоксических агентов эндогенного происхождения, что, в свою очередь, определяется эффективностью работы систем контроля стабильности генома и ферментативной детоксикации, в соответствии генетическими особенностями индивидуума (Palli et al., 2004; Yokota & Kohno, 2004). * * * *  * * * * * Рис.1. Частота встречаемости «нулевых» генотипов генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков GSTT1 и GSTM1 у больных раком легкого, ХОБЛ и бронхиальной астмой. Примечание: * - значимые различия с группой контроля, p<0,05. Здесь и далее: БАI - больные атопической астмой; БАII – больные астмой смешанного генеза. Результаты осуществленного нами генотипирования генов ФБК 2 фазы, которые обеспечивают инактивацию генотоксических агентов, у больных, ХОБЛ и БА, а также РЛ (данные П.А.Гервас, 2006) представлены на диаграмме (рис.1). У больных ХОБЛ мы не выявили значимых отличий в распределении генотипов генов ^ и GSTM1 от контрольной выборки, при этом частота нулевого генотипа гена GSTT1 была существенно ниже, чем у больных РЛ. Частота нефункционального генотипа GSTM1”0/0” как в общей группе, так и среди курящих пациентов с ХОБЛ была значимо повышена по сравнению с контролем и не отличалась от таковой в группе больных РЛ. Литературные сведения свидетельствуют об отсутствии ассоциации нулевого генотипа гена GSTT1с ХОБЛ в большинстве популяций (Д.Г.Янбаева и соавт., 2005, Yim et al., 2000). Наши результаты об ассоциации «нулевого» генотипа GSTM1 с риском заболевания ХОБЛ согласуются с данными для европеоидов Великобритании и Франции (H. Baranova et al., 1997; D.J. Harrison et al., 1997), а также для Тайваньской популяции (S.L. Cheng et al., 2004), однако находятся в противоречии с данными Д.Г.Янбаевой и соавт., (2005), полученными на более представительной (240 человек) выборке жителей России. Ассоциация генотипа GSTM1”0/0” с ХОБЛ и РЛ свидетельствует об общих патогенетических механизмах формирования этих заболеваний и о наличии определенной генетической предрасположенности пациентов с ХОБЛ к формированию РЛ. В общей группе БА показано существенное повышение частоты встречаемости нулевых генотипов гена^ 1 и GSTM1 по сравнению с популяционным контролем (рис.1). Известно, что для истинно атопической астмы характерно раннее начало заболевания (до 40 лет), а в группе больных БА с дебютом после 40 лет преобладают пациенты со смешанным механизмом формирования заболевания. Также есть литературные данные о различиях распределения вариантных аллелей генов ФБК и хемокинового рецептора CCR5 у больных бронхиальной астмой разных возрастных групп (С.И. Макарова и соавт., 2002; Srivastava et al, 2003). Поэтому мы сочли целесообразным оценить полиморфизм генов GSTT1 и GSTM1 раздельно в вышеозначенных группах больных БА. Оказалось, что в группе с превалированием пациентов с астмой смешанного генеза частота генотипа GSTM1”0/0” сравнима с таковой в группе больных РЛ и значительно выше, чем у больных БА с манифестацией заболевания в молодом возрасте (атопическая БА), у которых этот показатель не отличается от контрольного уровня. Поскольку курение является ведущим этиологическим фактором развития РЛ, мы провели анализ частот генотипов генов GSTT1 и GSTM1 у курящих больных БА и ХОБЛ, соответствующих по половому и возрастному составу, в сравнении с группой больных РЛ. Оказалось, что ассоциация генотипа GSTM1”0/0” с повышенным риском заболевания ХОБЛ наблюдается только для курящих лиц. Это свидетельствует о модифицирующем влиянии курения у носителей генотипов GSTM1”0/0” на предрасположенность к ХОБЛ, а также указывает на более высокий риск заболевания РЛ курящих пациентов с ХОБЛ. Такой зависимости от курения у больных БА не выявлено. Наши данные о повышении частоты нулевых генотипов генов глутатион-S-трансфераз GSTT1, GSTM1 у больных БА не противоречат литературным сведениям (Ляхович В.В. и соавт., 2000; Иващенко Т.Э. и соавт., 2001). В этиологии БА значимая роль придается загрязнению окружающей среды ксенобиотиками, в том числе и токсическими веществами, которые снижают барьерную функцию кожи и слизистых; при этом многие ксенобиотики сами являются аллергенами или гаптенами либо приобретают свойства аллергенов после ферментативной биотрансформации in vivo (Казначеева Л.Ф. и соавт., 2002). Оказалось, что курение матери во время беременности и пассивное курение является фактором риска формирования БА у детей (Gilliland et al., 2002; Kabesch et al., 2004). Хотя показано, что активное курение не влияет на риск развития заболевания у взрослых, однако оно способствует более тяжелому течению астмы (Siroux et al., 2000). Согласно нашим данным, рисковая значимость GSTM1”0/0” для формирования БА повышается с возрастом, что согласуется с результатами других авторов (С.И. Макарова и соавт., 2002). Вероятно, здесь играют роль временной фактор экспозиции ксенобиотиков у носителей GSTM1”0/0”, а также изменение метаболизма эндогенных биологически активных веществ вследствие нарушения функции GSTM1, в том числе продуктов перекисного окисления и метаболитов арахидоновой кислоты, которые участвуют в патогенезе хронического инфекционного воспаления у лиц со смешанным генезом БА. Для формирования РЛ важное значение имеют нарушения функции одного из ключевых генов, осуществляющих охрану целостности генома - онкосупрессора р53. Чувствительность р53 к генотоксическим повреждениям существенно зависит от функциональной активности генов детоксикации, в число которых входят глутатион-S-транферазы. Важное значение в плане подверженности р53 к повреждению генотоксическими агентами может иметь Arg/Pro полиморфизм 72 кодона 4 экзона, оказывающий модифицирующий эффект на чувствительность гена р53 к инактивации путем мутаций ( Bonafe et al, 2003, Tada et al, 2001). У больных ХОБЛ нами выявлено повышение частоты Arg аллеля (76,7%) гена р53 при снижении частоты Pro аллеля (23,2%) и Pro/Pro генотипа (1,75%) по сравнению с популяционным контролем (65,9%, 34%, 12,7% соответственно). Различий в распределении генотипов и частоте аллелей р53 в группе ХОБЛ с больными РЛ не выявлено. Больные РЛ демонстрируют повышение частоты Arg аллеля по сравнению с популяционным контролем и тенденцию к снижению частоты Pro/Pro генотипа (П.А.Гервас, 2006). Полиморфизм гена р53 у больных ХОБЛ практически не изучен. Лишь в одной известной нам работе получены данные, свидетельствующие об ассоциации аллеля Pro с риском заболевания ХОБЛ у курящих лиц в популяции монголоидной расы (Wang et al., 2005). Таким образом, нами обнаружено сходство распределения генотипов гена р53 (BstU1-полиморфизм 72 кодона 4 экзона) у больных РЛ и ХОБЛ: при обоих заболеваниях выявлено повышение частоты Arg аллеля и снижение частоты Pro/Pro генотипа по сравнению с популяционным контролем. Наши результаты находятся в согласии с представленными ранее В.В.Ляховичем с соавторами данными для Западно-Сибирской популяции о повышении частоты Arg аллеля в группах больных раком желудка и РЛ (1997), а также данными ряда зарубежных авторов (Papadakis et al, 2002, Wang et al, 1999). Следует отметить, что литературные сведения об ассоциации Arg/Pro полиморфизма 72 кодона 4 экзона гена р53 с РЛ достаточно противоречивы, и это не является только следствием популяционных различий. Показано, что в опухолях происходит селекция полиморфных аллелей р53 с более высокой способностью к мутациям, в частности, для опухолей легкого, молочной железы, головы и шеи и ряда других было установлено селективное преимущество опухолевых клеток, несущих р53 Arg (Furihata et al., 2002; Papadakis et al., 2002; Langerod et al., 2002; Bonafe et al., 2003). Полученные нами данные свидетельствуют об отсутствии ассоциации полиморфизма р53 с риском заболевания БА, однако у больных БА смешанного генеза выявлена ассоциация Pro аллеля с тяжестью течения заболевания (рис. 2). Поскольку известно, что степень тяжести БА зависит от степени дефекта апоптоза лимфоцитов и эозинофилов, а Pro аллель менее эффективен в индукции апоптоза, можно полагать, что гомозиготное состояние по аллелю Pro у больных БА ассоциировано с нарушением индукции запрограммированной гибели иммунокомпетентных. Степень дефекта апоптоза при БА прямо пропорциональна активности процесса и степени тяжести заболевания (Невзорова В.А. и соавт., 2001; Мамонтова Т.В., Кайдашев И.П., 2004; Woolley et al., 1996; Kankaanranta et al., 2001). *  * Рис. 2. Частота аллелей гена р53 (BstU1-полиморфизм 72 кодона 4 экзона) у больных бронхиальной астмой смешанного генеза с различной степенью тяжести заболевания. Примечание: * - значимость различий по сравнению с контролем, p<0,05 Так, при исследовании биоптатов бронхиального эпителия показано, что уровень экспрессии гена р53 у больных БА меньше показателей здоровых лиц и наиболее низкий у больных с тяжелой степенью астмы (Vignola et al., 2001; Ivanchuk et al., 2005; Sazonov et al., 2005). Кроме того, в ряде исследований выявлен повышенный уровень хромосомных аберраций в лимфоцитах, микроядрах в эритроцитах и буккальных клетках у больных БА, что косвенно свидетельствует о нарушении систем контроля стабильности генома при этом заболевании (Буторина О.К. и соавт., 1992; Семенов А.В. и соавт, 2003). С другой стороны, ген р53 участвует в регуляции экспрессии рецептора глюкокортикостероидов (Ganguli et al., 2002; Maiyar et al., 2006). Базисная противовоспалительная терапия тяжелой БА предполагает использование глюкокортикостероидных препаратов в высоких дозах, а тяжелое течение астмы в ряде случаев ассоциировано с устойчивостью к стероидной терапии. Возможно, вариантные генотипы р53 обладают различной функциональной активностью в отношении регуляции экспрессии рецептора глюкокортикостероидов. Полученные данные свидетельствуют о необходимости дальнейшего исследования роли функционального полиморфизма гена р53 в патогенезе тяжелой БА и в резистентности к стероидной терапии. Хемокины продуцируются практически всеми видами клеток, в том числе и опухолевыми, которые экспрессируют хемокиновые рецепторы. Показано, что хемокины непосредственно вовлечены в процесс неоангиогенеза и принимают участие в формировании лимфогенных и органо-специфических метастазов (Strieter et al., 2004; Kakinuma et al., 2006; Zlotnik, 2006). Лигандами для CCR5 являются хемокины RANTES, MIP1-α и β, MCP-2 и MCP-4. CCR5-опосредованный сигнал ведет к активации иммунокомпетентных клеток и их миграции в очаг воспаления, то есть CCR5 функционально вовлечен в процессы естественного и специфического противоопухолевого иммунитета (Lavergne et al., 2004). Имеются свидетельства о роли CCR5 в метастазировании опухолей (Deventer et al., 2005). Важными представляются и уже упоминавшиеся выше данные о вовлечении CCR5 в регуляцию транскрипционной активности р53 модифицированных клеток и связи CCR5del32 полиморфизма с прогрессией рака молочной железы (Manes et al., 2003), а также о накоплении CCR5/CCR5del32 генотипов у больных РЛ с метастазами в регионарные лимфоузлы (Севостьянова Н.В и соавт., 2004). Все вышесказанное послужило весомым основанием для исследования полиморфизма гена хемокинового рецептора CCR5 у больных ХОБЛ и БА (рис. 3).  * Рис. 3. Частота делеционного аллеля гена CCR5 (CCR5del32) у больных раком легкого, ХОБЛ и бронхиальной астмой. Примечание: * - значимость различий по сравнению с контролем, p<0,05 К1 – популяционный контроль для больных РЛ и ХОБЛ К2 – популяционный контроль для больных БА У больных ХОБЛ не выявлено изменений в распределении генотипов гена CCR5 по сравнению с популяционным контролем и больными РЛ. Однако отмечена более низкая, чем в контроле, частота сочетаний генотипов CCR5/CCR5-Pro/Pro, при этом значимых различий с группой РЛ не выявлено (рис.4). С одной стороны, это указывает на протективное значение данного сочетания генотипов в отношении формирования ХОБЛ и подтверждает данные, представленные выше, в отношении Pro/Pro генотипа и Pro аллеля. С другой стороны, это дает основания заключить об отсутствии различий в распределении генотипов гена CCR5 (полиморфизм CCR5del32) у больных ХОБЛ и РЛ. У больных БА частота делеционного аллеля CCR5del32 существенно ниже, чем в популяционном контроле, и минимальна при БА атопического генеза с легкой степенью тяжести (2,5% против 11% в популяционном контроле, р<0,05). Интересно, что частота делеционного аллеля у больных БА с вовлечением нескольких органов-мишеней в аллергический процесс и у больных ХОБЛ с латентной сенсибилизацией была значительно снижена, а у больных БА без других сопутствующих аллергических заболеваний и у больных ХОБЛ без латентной сенсибилизации не отличалась от показателя популяционного контроля и больных РЛ. Инверсная направленность изменений частоты CCR5del32 у больных РЛ и атопической БА указывает на защитное значение атопической конституции в плане предрасположенности к развитию РЛ. В группе с атопической БА частота сочетания генотипов CCR5/CCR5del32-Arg/Arg ниже, а комбинации генотипов CCR5/CCR5del32-Pro/Pro выше, чем в контрольной группе, то есть можно говорить об ассоциации последней комбинации с повышенным риском формирования БА атопического генеза. Среди больных РЛ и ХОБЛ вообще не найдено лиц с сочетанием CCR5/CCR5del32-Pro/Pro, при этом интересно, что для БА и ХОБЛ выявлены ассоциации с разными сочетаниями генотипов (рис. 4). Это служит дополнительным указанием на различия механизмов вовлечения генов CCR5 и р53 в патогенез этих заболеваний и указывает на разный характер накопления генетических изменений в группах больных атопической БА и РЛ.  * * * * Рис. 4. Распределение частот сочетаний генотипов генов р53 (BstU1- полиморфизм 72 кодона 4 экзона) и CCR5 у больных раком легкого, ХОБЛ и бронхиальной астмой. Примечание: * - значимость различий по сравнению с контролем, p<0,05 К1 – популяционный контроль для больных РЛ и ХОБЛ К2 – популяционный контроль для больных БА Инфильтрация тканей легких эозинофилами у больных астмой ассоциирована с повышенной экспрессией хемокинов СС семейства: MCP-3 , MCP-4 и RANTES. Дефицит экспрессии ССR5 на клетках может снижать хемотаксический потенциал указанных хемокинов. Установлено, что нейтрализация RANTES у мышей уменьшает гиперреактивность бронхов, а у мышей с удалением гена CCR5, кодирующего белок-рецептор для RANTES, понижен уровень воспалительных клеток и их медиаторов в респираторном тракте (Schuh et al., 2001). Эти данные подтверждают, что наличие дефектного аллеля CCR5del32 может снижать риск заболевания БА, и указывают на возможные механизмы такой связи. У больных ХОБЛ и БА в 70% случаев формируются вторичные иммунодефицитные состояния, проявляющиеся хроническими рецидивирующими инфекционными заболеваниями. Структура клинических проявлений вторичного иммунодефицита сходна с особенностями преморбидного фона у больных РЛ, у 50% которых отмечены признаки иммунной недостаточности в анамнезе, предшествующем развитию опухоли. Можно полагать, что вторичный иммунодефицит у больных ХОБЛ и БА выступает дополнительным фактором, повышающим риск развития РЛ. Несмотря на различия иммунопатогенеза, мы не выявили у больных БА и ХОБЛ выраженных различий иммунологических показателей крови. У пациентов всех обследованных групп уровень общего IgЕ превышал границы нормы, при этом значимых межгрупповых различий не выявлено. Вероятно, повышение уровня IgЕ у больных ХОБЛ и РЛ связано с высокой частотой латентной сенсибилизации, о чем свидетельствуют данные литературы (А.В. Зурочка и соавт., 2005) и полученные нами результаты, а также с активизацией локального иммунного ответа вследствие нарушения проницаемости слизистой бронхиального дерева. В связи с низкой частотой делеционного аллеля гена CCR5 в общей популяции и у обследованных нами больных, в работе не представлялось возможным исследовать ассоциацию CCR5del32 с параметрами иммунной системы у больных РЛ и БА. У больных ХОБЛ с генотипом CCR5/CCR5del32 показатели клеточного состава и цитокинового профиля ИМ не различались с группой носителей нормального генотипа. Мы выявили более высокие показатели содержания эозинофилов в ИМ у больных БА и РЛ - носителей генотипа GSTM1”0/0” по сравнению с нормальным генотипом. Это может быть следствием изменения метаболизма производных арахидоновой кислоты (простагландинов и лейкотриенов) и повышением образования иммуногенных (аллергенных) соединений в слизистой бронхиального дерева. В ИМ больных ХОБЛ и БА выявлен высокий уровень основного хемотаксического фактора нейтрофилов ИЛ-8 и повышенное содержание нейтрофилов, более выраженное при ХОБЛ (табл. 2). Эти результаты согласуются с полученными ранее в НИИ онкологии данными (Л.В.Гердт, 2006) о том, что уровень экспрессии ИЛ-8 существенно повышен у больных хроническим бронхитом с диспластическими изменениями бронхиального эпителия 1 и 2 степени тяжести, что свидетельствует о его ассоциации с предраковыми состояниями эпителия слизистой. В этой связи в дальнейшем представляется целесообразным исследование на предмет наличия диспластических изменений эпителия у больных с разными формами БА. У больных БА в ИМ выявлено преобладание функциональной активности Th2 лимфоцитов, о котором судили по соотношению цитокинов ИЛ-4/ ИНФ-, по сравнению с больными ХОБЛ и больными РЛ, что можно рассматривать как свидетельство относительного дефицита клеточно-опосредованного иммунного ответа. Таблица 2. Цитокиновый профиль индуцированной мокроты у больных раком легкого, бронхиальной астмой и ХОБЛ (М ± m)
Таким образом, в настоящем исследовании впервые применен оригинальный подход к исследованию характера взаимосвязи РЛ и БА, основанный на анализе сходства и различия патогенетических признаков этих заболеваний. В пределах одной популяции проведен сравнительный анализ полиморфизма патогенетически значимых для формирования РЛ генов ферментов биотрансформации GSTT1 и GSTM1, гена онкосупрессорного белка р53 и гена хемокинового рецептора CCR5 у больных БА и больных РЛ. Сходство распределений генотипов или одинаковый характер изменения частоты встречаемости генотипов и аллелей у больных ХОБЛ или БА с таковым у больных РЛ позволяет судить о сходстве механизмов патогенеза и указывает на наличие генетических предпосылок для формирования РЛ у таких индивидуумов. Нами получены результаты о сходстве распределения генотипов генов ФБК GSTT1 и GSTM1, р53 и ССR5 у больных ХОБЛ и РЛ, что дает основания говорить о наличии генетической предрасположенности у индивидуумов, страдающих ХОБЛ, к формированию РЛ. В группе пациентов с БА позднего дебюта, в которой преобладали больные с астмой смешанного генеза, распределение генотипов генов ФБК свидетельствовало об ассоциации нулевых генотипов с формированием заболевания, при этом характер распределения не отличался от такового у больных РЛ. У больных атопической астмой не найдено ассоциации с нулевым генотипом GSTM1, важная роль которого доказана в повышении предрасположенности к РЛ, особенно у лиц молодого возраста (Belogubova et al,2004). При этом важными являются данные об инверсии связи полиморфизма CCR5 с астмой, особенно выраженной для больных с ранним дебютом заболевания (атопическая БА), по сравнению с полученными данными для РЛ. Характер генетических изменений у больных БА атопического и смешанного генеза свидетельствует, во-первых, о различной роли изучаемых генов в патогенезе разных форм БА, во-вторых, указывает на неоднородность группы БА в плане возможной предрасположенности к РЛ. С одной стороны, это объясняет противоречивость результатов клинико-эпидемиологических исследований влияния БА на риск формирования РЛ, с другой стороны, позволяет говорить о существовании факторов, как способствующих, так и не предрасполагающих к развитию РЛ у больных БА. Выявленные особенности системного и локального иммунитета, ассоциированные с формированием вторичной иммунной недостаточности клеточного звена иммунного ответа и клеточно-молекулярные особенности бронхиального эпителия, ассоциированные с высокой вероятностью появления диспластических изменений, свидетельствуют о наличии молекулярно-генетических предпосылок для реализации злокачественной трансформации эпителия у больных БА смешанного генеза. Выводы
^
Благодарности Автор выражает глубокую признательность и благодарность д.б.н., профессору Н.В. Чердынцевой, д.м.н., профессору В.В. Климову, д.м.н., профессору Л.И. Волковой, П.А. Гервас, к.м.н. М.Н. Стахеевой, д.б.н. В.А. Белявской, д.м.н. В.А. Евтушенко, д.м.н. С.А. Тузикову, к.м.н. С.Ю. Добродееву, к.м.н. М.Б. Фрейдину, к.м.н. С.А. Миллеру, к.м.н. Е.А. Геренг, Д.В. Капитановой, д.м.н. Н.В.Севостьяновой за помощь, оказанную при проведении исследований и обсуждении результатов. ^ БА – бронхиальная астма БАI – бронхиальная астма атопического генеза БАII – бронхиальная астма смешанного генеза ИЛ-4,8,10 – интерлейкины 4,8,10 ИМ – индуцированная мокрота ИНФ- - интерферон гамма К1 – популяционный контроль для больных РЛ и ХОБЛ К2 – популяционный контроль для больных БА ОФВ1 – объем форсированного выдоха за первую секунду п.н. – пар нуклеотидов ПСВ – пиковая скорость выдоха ПЦР – полимеразная цепная реакция РЛ – рак легкого ФБК – ферменты биотрансформации ксенобиотиков ФЖЕЛ – форсированная жизненная емкость легких ФНО-α, TNF-alpha – фактор некроза опухоли альфа ХОБЛ – хроническая обструктивная болезнь легких IgЕ – иммуноглобулин Е IL-10 – интерлейкин -10 |
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям