Встатье данной статье представлен подробный отчет об этапах разработки, испытаний и внедрении вакцины Гриппол гриппозная вакцина нового поколения гриппол петров Р. В., Хаитов Р. М., Некрасов А. В., Иванова А. С., Пучкова Н. Г

Скачать 464.42 Kb.

Название	Встатье данной статье представлен подробный отчет об этапах разработки, испытаний и внедрении вакцины Гриппол гриппозная вакцина нового поколения гриппол петров Р. В., Хаитов Р. М., Некрасов А. В., Иванова А. С., Пучкова Н. Г
Дата	03.04.2013
Размер	464.42 Kb.
Тип	Документы

Содержание

Абстракт: В статье данной статье представлен подробный отчет об этапах разработки, испытаний и внедрении вакцины Гриппол

ГРИППОЗНАЯ ВАКЦИНА НОВОГО ПОКОЛЕНИЯ – ГРИППОЛ

Петров Р.В., Хаитов Р.М., Некрасов А.В., Иванова А.С., Пучкова Н.Г.

Государственный научный центр Институт иммунологии МЗ РФ, Москва

Сборник трудов 5-го Конгресса «Современные проблемы аллергологииЮ иммунологии и иммунофармакологии», т.1, стр.134-179. Москва, 12-14 ноября 2002г

В ГНЦ Институте иммунологии МЗ РФ под руководством академиков Р.В.Петрова и Р.М.Хаитова был теоретически обоснован и экспериментально подтвержден принцип создания конъюгированных антиген-полимерных вакцин, заключающийся в структурном объединении антигенных детерминант с высокомолекулярным носителем-иммуномодулятором (1). Гриппозная полимер-субъединичная тривалентная вакцина Гриппол является первой отечественной вакциной нового поколения, не имеющей аналогов в мировой практике (2).

Основные этапы разработки, исследований и внедрения вакцины Гриппол для массовой иммунизации всех слоев населения России были выполнены научным коллективом, объединяющим специалистов трех научно-исследовательских институтов - ГНЦ Института иммунологии МЗ РФ, Государственного института стандартизации и контроля медицинских иммунобиологических препаратов им.Л.А.Тарасевича и Института вирусологии РАМН, а также ряда других организаций на отдельных этапах исследований.

С 1997 года промышленный выпуск вакцины Гриппол осуществляется на Уфимском ГУП «Иммунопрепарат», который является крупнейшим в РФ предприятием по производству высококачественных иммунобиологических препаратов и лекарственных средств.

Вакцина Гриппол широко использовалась лечебно-профилактическими учреждениями Российской Федерации в эпидсезоны 1997-2001г.г для профилактики гриппа у детей и взрослых. За эти годы было привито более 15 миллионов человек.

^

Особенности вакцинопрофилактики гриппа

Грипп сегодня, на пороге ХХ1 века, остается наиболее распространенным инфекционным заболеванием вирусной этиологии, поражающим все группы населения. Его отличает чрезвычайная быстрота распространения при возникновении эпидемий. Грипп неоднократно являлся причиной тяжелых пандемий.

Своеобразие гриппа, выделяющее его из числа типичных инфекций, передающихся воздушно-капельным путем, определяет его поистине «королевское положение».

Эпидемии, вызываемые гриппом, затрагивают всех, независимо от возраста, пола и национальности. Ежегодные эпидемии поражают в среднем 10% населения, около 20% детей до 10 лет и вызывают гибель сотен тысяч, а иногда и миллионов людей. Большой удельный вес летальности наблюдается среди лиц старше 65 лет с заболеваниями сердечно-сосудистой и дыхательной систем. Непосредственной причиной смерти обычно служит развитие на фоне гриппозной инфекции пневмонии или осложнений в виде бронхита, синусита, отита, и др.

Гриппозные эпидемии наносят экономический ущерб, исчисляемый в миллиардах долларов.

Во многих странах мира, в том числе и в России, государственные организации здравоохранения, осознающие опасность распространения гриппозной инфекции, являются инициаторами проведения широких профилактических программ по вакцинации, поскольку вакцинация - лучшая профилактика гриппа.

Решение вопроса профилактики гриппа рассматривается ВОЗ в качестве одной из первоочередных задач. На сегодняшний день единственным методом борьбы, сочетающим высокую специфичность, профилактическую эффективность и экономичность является вакцинация. Короткий инкубационный период, острое начало заболевания, высокая контагиозность инфекции способствует ее молниеносному распространению среди популяции, что резко снижает возможность применения других средств защиты, в том числе химиопрофилактики. Эпидемиологическая и (что особенно важно в настоящее время), экономическая эффективность вакцинации признается всеми ведущими учеными и практиками отечественного и зарубежного здравоохранения

Стратегия и тактика вакцинопрофилактики гриппа за последние годы подверглись, в том числе и в России, существенной корректировке. В соответствии с приказом МЗ РФ № 101 от 19.04.95 и по рекомендации ВОЗ принята стратегия избирательной вакцинопрофилактики, согласно которой в ежегодной вакцинации прежде всего нуждается группа высокого риска смерти, а также высокого риска заболевания, в том числе медработники, учителя, работники сферы обслуживания. Защита нужна школьникам (заболеваемость среди школьников обычно вдвое выше, чем среди взрослых), причем вакцинация школьников и дошкольников может не только снизить размах эпидемии, но и защитить от осложнений, в первую очередь от пневмонии. Вакцинопрофилактика показана всем, кто не может и не хочет позволить себе заболеть.

^

Краткая характеристика вируса гриппа

Возбудитель гриппа – вирус, относится к семейству Orthomyxoviridae. Известны три типа вирусов гриппа человека: А, В и С. Наибольшее эпидемиологическое значение имеет вирус гриппа типа А. Морфология и генетика вируса гриппа, химический состав, структура вириона изучены достаточно хорошо и подробно описаны в литературе (2).

Популяция вирусов гриппа типов А и В содержит сферические формы полного вируса. Выделяются структурные элементы – поверхностные субъединицы гемагглютинин и нейраминидаза и нуклеокапсид, который под белково-липидной оболочкой содержит РНК и белки репликазно-транскриптазного комплекса - нуклеопротеины. Гемагглютинин и нейраминидаза (ГА и НА), локализованные на мембране, относятся к главным антигенам вируса, они штаммоспецифичны и дрейфуют независимо друг от друга.

Вирус гриппа обладает высокой степенью изменчивости генома. В результате мутаций генома появляются новые подтипы и варианты, характеризующиеся неожиданной полной или частичной сменой одного или обоих поверхностных гликопротеидов - гемагглютинина и нейраминидазы. Это объясняет непредсказуемость и неуправляемость гриппозных эпидемий. В механизме развития поствакцинального иммунитета при гриппе именно антитела к ГА и НА обеспечивают защиту и наиболее важны для сопротивляемости инфекции.

Антитела к ГА обладают вируснейтрализующей активностью, тормозят инфекцию, антитела к НА препятствуют распространению вируса в инфицированном организме и ослабляют остроту заболевания.

^

Краткая характеристика гриппозных вакцин

В настоящее время в мировой практике вакцинопрофилактики применяется три типа вакцин: инактивированная цельновирионная вакцина, сплит-вакцина и субъединичная вакцина (7).

Автор живой гриппозной вакцины академик А.А.Смородинцев и его сотрудники исходили из пастеровского принципа необходимости воспроизведения естественного иммуногенеза. Преимуществом живой вакцины является ее дешевизна и простота применения (интраназальное введение), что делает возможным массовую вакцинацию, однако такая вакцина не является совершенным препаратом.

Существует мнение отечественных и зарубежных ученых относительно потенциальной опасности живой вакцины из-за возможности развития злокачественного вакцинального процесса, угрозы взаимодействия вакцинного вируса с клеточным геномом, воздействием на хромосомный аппарат клетки, влиянием многообразных вирусов контаминантов. Вирусная контаминация, в свою очередь, грозит развитием тяжелых последствий и развитием иммунопатологических состояний. В мире существует весьма настороженное отношение к разработке живой гриппозной вакцины и от практики иммунизации живой вакциной в мире отказались.

В инактивированных вакцинах против гриппа вирус тем или иным способом лишен репродуктивной активности и иммунитет вырабатывается в ответ на парентеральное введение вируса гриппа.

Цельновирионные вакцины представляют собой взвесь вирионов в достаточно высокой концентрации. Сплит-вакцины (расщепленные или дезинтегрированные препараты) представляют собой взвесь структурных компонентов вириона (как поверхностных, так и внутренних), разъединенных с помощью раздичных детергентов. Субъединичные вакцины содержат только поверхностные структуры вириона гемагглютинин и нейраминидазу, являющихся носителями протективных антигенов вируса. Все способы приготовления преследуют одну цель - очистку вируса и его концентрирование, без чего недостижимы безвредность и иммуногенность вакцины.

В нашей стране очистка и концентрирование вируса гриппа с помощью седиментации в градиенте плотности сахарозы лежит в основе технологии производства цельновирионных инактивированных гриппозных вакцин. При несомненных достоинствах убитых вакцин, получаемых таким способом, нельзя исключить возможности содержания в них контаминирующих клеточных белков.

Производственный процесс приготовления современных расщепленных (сплит-) вакцин (производитель "Пастер-Мерье Коннот") является многоступенчатым и включает порядка 10 последовательных операций по очистке культуры вируса, дезинтеграции вируса и его очистке. Результаты многочисленных испытаний сплит-вакцин свидетельствуют о существенном снижении реактогенности, однако, наиболее безопасной и ареактогенной является субъединичная вакцина.

Предпосылкой разработок дезинтегрированных вакцин служило соображение об отрицательном влиянии на реатогенность внутреннего аллантоисного компонента вируса - белка-"хозяина", а также всего нуклеопротеида, составляющего внутреннюю структуру вируса. Так возникла идея создания субъединичных вакцин на основе поверхностных белков антигенов вируса - гемагглютинина и нейраминидазы.

Достигнув высокого уровня безопасности и ареактогенности, преодолев большую часть недостатков, присущих живым и цельновирионным инактивированным вакцинам, вместе с тем исследователи установили низкую иммуногенность субъединичных вакцин. Исследования ученых многих стран направлены на разработку способов существенного повышения иммуногенности субъединичных вакцин, наиболее распространенным из которых является способ, связанный с введением иммуноадъювантов.

Так, на фирме "Спикозайд" в Швеции разрабатываются иммуностимулирующие комплексы (ISCOM) поверхностных белков вируса гриппа (гемагглютинина и нейраминидазы) с природным иммуностимулятором сапонином. Полученные иммуностимулирующие комплексы обладают более высокой иммуногенностью, чем исходные белки, однако, сапонин является токсичным веществом, и его применение в медицинских вакцинах не разрешено.

Известны также субъединичные и расщепленные гриппозные вакцины, адсорбированные на гидроокиси алюминия. Такие вакцины достаточно эффективны, однако реактогенность гидроокиси алюминия сильно ограничивает применение препарата для массовой вакцинопрофилактики.

Все вышесказанное наглядно демонстрирует сложность разработки безопасной и в тоже время высокоэффективной вакцины против гриппа.

По мнению ведущих вакцинологов и иммунологов в нашей стране и за рубежом решить проблему борьбы с гриппом можно только с помощью вакцин нового поколения, сконструированных из высокоочищенных протективных антигенов вируса гриппа, иммуногенные потенции которых усилены введением водорастворимых иммуноадъювантов. Только использование последних достижений науки и технологических разработок, а также возможность использования при создании вакцины Гриппол синтетического полимерного иммуномодулятора Полиоксидония позволило решить проблему сочетания безопасности и эффективности и создать вакцину Гриппол.

^

Теоретические основы создания вакцины Гриппол

Создание гриппозной полимер-субъединичной вакцины Гриппол, характеризующейся выраженной иммуногенной активностью, высоким уровнем безопасности и профилактической эффективности вобрало все передовые идеи и достижения науки о гриппе и гриппозных вакцинах, иммунологических аспектов проблемы, а также иммунобиотехнологических решений.

Во-первых - признание доминантности поверхностных структур вириона - гемагглютинина и нейраминидазы в индуцировании полноценного иммунитета.

Гемагглютинин и нейраминидаза - поверхностные гликопротеиды, локализованные на мембране, относятся к главным антигенам вируса, они штаммоспецифичны и дрейфуют независимо друг от друга. В механизме развития поствакцинального иммунитета при гриппе именно антитела к ГА и НА обеспечивают защиту и наиболее важны для сопротивляемости инфекции, т.к. обладают вируснейтрализующей активностью, тормозят инфекцию, препятствуют распространению вируса в инфицированном организме и ослабляют остроту заболевания.

Во-вторых - проведение модификации поверхностных белков ГА и НА высокомолекулярным иммуностимулятором для усиления иммуногенной активности субъединиц протективных антигенов и приближение презентации антигенов к естественной за счет образования макромолекулярных вирионоподобных полимер-антигенных структур. Кроме того, иммуностимулятор повышает неспецифическую резистентность организма к другим инфекциям, что особенно важно в период формирования специфического иммунного ответа на вакцинные антигены, сопровождающийся, как известно, имуносупрессией .

И, наконец - создание многокомпонентного полимер-субъединичного препарата, содержащего в своем составе гемагглютинины известных сероподтипов вируса гриппа для преодоления отставания антигенной композиции от естественного дрейфа вируса.

Вакцина Гриппол является первым вакцинирующим препаратом, сконструированным на принципиально новой основе.

Вакцина Гриппол состоит из высокоочищенных поверхностных протективных антигенов гемагглютинина и нейраминидазы вирусов гриппа типов А (H1N1и H 3N2) и В, связанных с высокомолекулярным носителем-иммуностимулятором Полиоксидонием. Одна иммунизирующая доза ( 0,5 мл) содержит по (5 + 1)мкг гемагглютинина каждого из трех эпидемических штаммов вирусов гриппа, ежегодно рекомендуемых ВОЗ, типов А и В и 500 мкг Полиоксидония.

Главной особенностью, отличающей вакцину Гриппол от существующих в мире вакцин, является наличие в ее составе иммуностимулятора Полиоксидония, обладающего широким спектром иммунофармакологического действия. Иммуномодулятор Полиоксидоний относится к новому классу высокомолекулярных физиологически активных соединений – гетероцепных алифатических полиаминов, синтезированных в России д.х.н. профессором А.В.Некрасовым ( ). Именно Полиоксидоний обеспечивает высокую иммуногенность и стабильность антигенов, позволяет сформировать иммунологическую память, существенно (в 3 раза по сравнению с мировым стандартом для гриппозных вакцин) снизить прививочную дозу антигенов, повысить устойчивость организма к другим инфекциям, в том числе и ОРВИ. Мы сформулировали ряд требований к высокомолекулярным носителям-иммуностимуляторам и белковым антигенам – кандидатам вакцинирующего препарата.

Требования фармакологии:

Выраженная фармакологическая активность
Отсутствие побочных эффектов, низкая острая и хроническая токсичности
Выведение из организма
Устойчивость при хранении не менее 2-х лет

Физико-химические требования:

Контролируемость синтеза
Водорастворимость
Монодисперсное или узкое молекулярно-массовое распределение
Наличие реакционноспособных функциональных групп для носителя

Технологические требования:

Технологичность процесса получения
Доступность исходного сырья
Экономическая целесообразность

Носитель, максимально удовлетворяющий всем требованиям фармакологии и иммунологии, - это полиоксидоний – N-оксидированное производное поли-1,4-этиленпиперазина, препарат относится к новому классу высокомолекулярных физиологические активных соединений – гетероцепных алифатических полиаминов, синтезированных в России д.х.н. профессором А.В.Некрасовым ( ). Полиоксидоний относится к классу водорастворимых производных гетероцепных алифатических полиаминов. Данный класс соединений не имеет аналогов в мире как по структуре, так и по свойствам. Наличие в основной цепи макромолекулы третичного атома азота открывает практически неограниченные возможности получения модификатов с широким спектром физико-химических, физиологических и фармакологических свойств. Варьирование химического строения гетероцепного полиамина, а также химического строения модифицирующих агентов и степени модификации полиамина позволяют регулировать в широких пределах указанные выше свойства.

Принципиально важным было рассматривать белковый антиген как макромолекулярный компонент реакции, для чего было необходимо исследовать его презентацию, т.е. структурно-морфологическую доступность, степень очистки, повышение его конформационной стабильности, сохранение его нативной структуры и специфической активности. В результате проведенных исследований была разработана технология выделения гемагглютинина и нейраминидазы из расщепленного с помощью детергента вируса, которая позволила получить высокоочищенный, специфически активный гемагглютинин, пригодный для дальнейшей работы по созданию вакцинирующего препарата на основе его конъюгатов с полиоксидонием. Большой этап работы был посвящен разработке методик синтеза, изучению влияния химической структуры и свойств носителя, условий синтеза конъюгатов, количества и характера связей, состава конъюгата на иммунобиологические характеристики получаемых искусственных иммуногенов.

В результате проведенной разработки экспериментальных методов получения, выделения и анализа конъюгатов белковых антигенов с полиоксидонием мы определили оптимальные условия синтеза, разработали методы анализа состава конъюгатов, включая ряд оригинальных информативных методик (электрофорез в ПААГ, электронная микроскопия, методы кругового дихроизма и флуоресцентной спектроскопии), что позволило доказать факт ковалентного связывания белка с носителем и количественно оценить степень связывания, качественно определить локализацию связи, и что достаточно важно – подтвердить конформационную стабильность белка в составе конъюгата.

^ Основные этапы разработки вакцины Гриппол

Основные этапы разработки вакцины Гриппол – это путь, пройденный нашим коллективом и коллективами-соисполнителями от научной идеи до внедрения препарата в практику здравоохранения.

В период 1984-1987 г.г. был выполнен целый ряд исследований, посвященных разработке методов синтеза и анализа конъюгатов синтетических высокомолекулярных носителей с антигенами различной природы. Нам представлялась очевидной необходимость разработки собственных подходов к методам конъюгации, стимуляции и стабилизации антигенов, учитывая специфику иммунных реакций, поскольку химическая модификация антигена может изменить его антигенную специфичность.

Параллельно и одновременно проводились оценка иммуногенных и протективных свойств полученных конъюгатов, исследование реакций иммунной системы и организма в целом на экспериментальных животных. Данные исследования проводились сотрудниками лабораторий Института. Принципиально важным был вопрос оптимизации дозы и схемы иммунизации.

После проведения в полном объеме всех требуемых КВС исследований 3 серии ИПС-В вакцины и комплект НТД были представлены в КВС. После экспертизы документации и препаратов было получение разрешение на испытание вакцины на добровольцах.

В соответствии с существующим положением о порядке внедрения в практику здравоохранения вновь разработанных вакцин совместно с ГИСКом им.Л.А.Тарасевича и большим коллективом соисполнителей были проведены Государственные клинические испытания и в 1996 году вакцина Гриппол зарегистрирована Минздравом РФ (Регистрационное удостоверение № 96/309/123/4) и была разрешена для применения у лиц в возрасте от 18 до 60 лет.

С 1997 года промышленный выпуск вакцины Гриппол осуществляется на Уфимском НПО «Иммунопрепарат», который является крупнейшим в России производителем иммунобиологических препаратов. Освоение и внедрение технологии в производство, организация выпуска опытно-промышленных и производственных серий вакцины стали возможны благодаря финансовой помощи и поддержке Министерства науки и технологий в рамках Контракта №1, заключенному с Институтом иммунологии –победителем Конкурса-тендера по разработке гриппозных вакцин нового поколения в 1996 г. Министерством науки и технологий.

^

Основные результаты Государственных испытаний вакцины Гриппол

Государственные испытания безвредности, реактогенности, антигенно-иммуногенной активности и профилактической эпидэффективности вакцины Гриппол проведены в сезон 1993-1994 и 1994-1995 г.г.на расширенном контингенте добровольцев (возраст 18-60 лет).

Исследования проводили в период сезонного подъема заболеваемости гриппом и ОРЗ. Из анализа динамики заболеваемости гриппом и ОРЗ у взрослых, очевидно, что в группе внешнего контроля показатель заболеваемости гриппом (92.3 на 1 тысячу наблюдений) существенно выше по сравнению с группой привитых вакциной Гриппол (26.7 на 1 тыс привитых ) и группой внутреннего контроля (36 на 1 тыс.наблюдений). Была проведена серологическая расшифровка этиологического диагноза гриппа.

В государственных испытаниях безопасности и профилактической эффективности вакцины Гриппол, проведенных на расширенном контингенте добровольцев установлено, что вакцина Гриппол ареактогенна (отмечается практическое отсутствие общих и местных реакций), обладает выраженной антигенной активностью и высокой профилактической эффективностью. Оптимальная прививочная доза вакцины Гриппол по гемагглютинину в три раза меньше, чем у существующих отечественных и зарубежных инактивированных и субъединичных вакцин.

Установлены высокие показатели индекса эпидемиологической эффективности составил 3,4 и коэффициента профилактической эффективности вакцины Гриппол равен 77%. Даже при вакцинации 50% контингента коэффициент противоэпидемической защиты вакцины оказался очень высоким и составил 68%. У привитых вакциной Гриппол, в случае заражения гриппом отмечалось значительно более легкое клиническое течение заболевания по сравнению с непривитыми. По результатам всех этапов государственных испытаний не выявлено побочного действия вакцины Гриппол.

Полученные в Государственных испытаниях на добровольцах 18-60 лет достоверно положительные оптимистичные результаты, обусловленные слабой реактогенностью вакцины Гриппол за счет высокой степени очистки от балластных веществ, снижением прививочной дозы антигенов при высоких показателях профилактической эффективности, дали нам все основания для проведения испытания безопасности и эффективности вакцины Гриппол для контингентов "групп повышенного риска" и надежного прогнозирования положительных результатов. В рамках Межведомственной научно-технической программы «Вакцины нового поколения и медицинские диагностические системы будущего» в 1997-2000 г.г. в проекте 01.01.01 «Конъюгированные полимер-субъединичные иммуногены и вакцины» были запланированы, активно развивались и успешно были выполнены исследования безопасности и иммунопрофилактической активности вакцины Гриппол у детей разных возрастных групп и взрослых, относящихся к “группе риска” согласно классификации ВОЗ.

^

Основные результаты Государственных пострегистрационных испытаний вакцины Гриппол у детей разных возрастных групп и взрослых, относящихся к «группе риска»

Целью пострегистрационных исследований вакцины Гриппол на этапе 1997-2001г.г. было решение вопроса о возможности и целесообразности применения вакцины Гриппол для профилактики гриппа у лиц пожилого и старческого возраста с различной соматической патологией, детей дошкольного и школьного возраста, больных с различной аллергопатологией. Отдельное внимание было привлечено к проблеме вакцинации детей младенческого возраста, начиная с 6 месяцев согласно требованиям ВОЗ.

Изучение безопасности и иммунопрофилактической эффективности гриппозной полимер-субъединичной тривалентной вакцины Гриппол у детей разных возрастных групп и взрослых, относящихся к “группе риска” проводилось под контролем специалистов Государственного института стандартизации и контроля иммунобиологических препаратов им. Л.А.Тарасевича согласно утвержденным Комитетом МИБП "Программам": протокол № 6 от 9 сентября 1997 года и протокол № 6 от 24 июня 1999 года. Испытания проводились в условиях контролируемого эпидемического опыта на базе организованных учреждений в предэпидемический период сезонного подъема острых респираторных заболеваний.

^ Методические подходы к организации испытаний вакцины Гриппол

В исследовании были использованы серии вакцины Гриппол, изготовленные на ГУП "Иммунопрепарат» (г.Уфа), прошедшие контроль в ГИСК им. Л.А.Тарасевича на соответствие НТД. В качестве контрольного препарата (плацебо) использовали 0,9% раствор хлорида натрия, расфасованный также как вакцина в ампулы по 0,5 мл. Вакцина и плацебо перед эпидиспытаниями были зашифрованы.

Вакцину и плацебо вводили внутримышечно в верхнюю треть плеча с помощью одноразового шприца.

Для вакцинации и последующего наблюдения отбирали лиц, не имеющих противопоказаний к прививке, при наличии их согласия, а при вакцинации детей - согласия родителей.

Группы формировали методом случайно выборочного распределения - единица выборки 1 человек.

За привитыми было установлено медицинское наблюдение с целью сбора материалов, характеризующих наличие, частоту интенсивность общих и местных поствакцинальных реакций. На каждого наблюдаемого была заведена индивидуальная «Карта наблюдения», в которую вносили результаты ежедневных осмотров.

Общие реакции организма оценивали по частоте и интенсивности температурной реакции, а также по нарушению общего состояния. Особое внимание было обращено на симптомы, соответствующие клиническим проявлениям гриппа, аллергическим реакциям, неврологическую симптоматику.

Характер местных реакций, в случае их наличия, было предусмотрено оценивать по диаметру и характеру проявления местных реакций. Также обращалось внимание на наличие или отсутствие болезненности кожи в области введения вакцины.

Наблюдение за привитыми проводилось ежедневно до полного исчезновения реакций, но не менее 5 дней с обязательной термометрией.

Антигенную активность оценивали в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) по стандартной методике ВОЗ на основе результатов исследований порций крови, собранных до иммунизации и через 28 дней после введения вакцины. В качестве антигенов для постановки серологических реакций использовали диагностикумы созданные на основе штаммов вируса гриппа: А/Пекин/262/95(Н₁N₁), A/Сидней/5/97(Н₃N₂) и В/Бейдэменг/184/93/В). Перед постановкой Р'ГГА для устранения неспецифических ингибиторов сыворотки обрабатывали нейраминидазой не холерных вибрионов и прогревали при 56°С 30 минут. РТГА ставили на микропланшетах с 0,75% суспензией эритроцитов 1(0) группы крови человека.

Антигенная активность охарактеризована по следующим показателям:

4-кратным сероконверсиям по сравнению с фоновой сывороткой;
уровни ответа до и через месяц после вакцинации, при этом определяли средние геометрические титры антител (СГТА), кратность нарастания титров по сравнению с фоновой сывороткой.
уровень серологической зашиты путем определения процента лиц с защитным титром антител до и через месяц после вакцинации.

Все собранные количественные показатели обрабатывали методами вариационной статистики. Достоверность различий определяли по Т-критерию Стьюдента-Фишера, при этом статистически достоверными считали различия при Р < 0,05.

^

Результаты биологического контроля производственной серии вакцины Гриппол, использованной для вакцинации школьников

Контроль безопасности вакцины Гриппол серии 20, которую предполагалось использовать для вакцинации школьников, был проведен в ГИСК им.Л.А.Тарасевича и в лаборатории лекарственно-диагностических форм ГНЦ Института иммунологии МЗ РФ.

Исследования проводились в соответствии с требованиями Временной фармакопейной статьи 42-2728-96 на вакцину Гриппол, а также” Методических указаний по проведению контроля противогриппозных препаратов”, утвержденных ГУКИ МЗ СССР от 16.11.84 и “ Методических рекомендаций по определению примесей бактериальный эндотоксинов в гриппозных вакцинах “, утвержденных Главным управлением по производству бактерийных и вирусных препаратов МЗ СССР от 01.08.83 года.

Производился контроль подлинности, рН, механических включений, стерильности, пирогенности, токсичности, специфической безвредности и наличие примесей эндотоксинов, специфической активности, антигенной активности, определялось содержание белка, иммуностимулятора полиоксидоний, овальбумина, детергента цетилтриметиламмония бромида (ЦТБА), реактогенности и иммуногенности.

В результате контроля установлено, что гриппозная полимер-субъединичная тривалентная вакцина Гриппол серии 20 контрольный номер 3115 производства НПО “ Иммунопрепарат” в одной дозе в 0,5 мл содержит: гемагглютинина типа А-1 - 11,5 мкг/мл , типа А-2 - 10,6 мкг/мл , типа В - 9,9 мкг/мл.

Раствор вакцины имеет рН равный 7,0. Вакцина стерильна, не содержит живого вируса гриппа, апирогенна: у кроликов массой 2,5 кг при внутривенном введении им человеческой дозы не вызывала подъема температуры.

Содержание белка, полиоксидония, ЦТАБ соответствовало норме: 77 мкг/мл белка, 1,1 мг/мл Полиоксидония, 6,0 мкг/ мл ЦТАБ.

Вакцина Гриппол высоко очищенный по содержанию куриного белка - овальбумина препарат: в вакцине овальбумина содержится в 12,5 раз ниже допустимой нормы, а именно 0,008 мкг/мл.

Контроль на содержание примесей бактериальных эндотоксинов и на остаточную токсичность проводился на мышах, предварительно премированных дактиномицином в дозе 750 мкг/ кг. Предварительная обработка мышей дактиномицином повышает их чувствительность к бактериальным эндотоксинам в 40 - 100 тысяч раз, позволяя выявить тысячные доли мкг. По чувствительности метод не уступает общеизвестному Limuius - тесту, но не имеет его недостатков: компоненты некоторых лекарственных средств препятствуют желированию лизата Limulus в присутствии эндотоксинов, давая ложно отрицательные результаты. Кроме того, преимуществом метода является также возможность выявить не только бактериальные эндотоксины, но и остаточную токсичность исследуемого препарата. Этот вывод основан на известных данных о механизме действия дактиномицина, который подавляет окислительные ферменты печени, то есть ингибирует обезвреживающую функцию печени, тем самым, повышая в тысячи раз чувствительность организма животного к любому токсическому действию. Контроль вакцины Гриппол серии 20 в указанном тесте показал, что вакцина является высокоочищенным препаратом, не содержит примесей бактериальных эндотоксинов или каких либо других веществ, способных вызвать токсические реакции. Следует отметить, что данный контроль проводился в сравнении с другими коммерческими гриппозными отечественными и зарубежными вакцинами. Проведенный сравнительный контроль показал, что технология производства вакцины Гриппол обеспечивает данному препарату очистку, значительно превосходящую таковую в коммерческих гриппозных цельновирионных инактивированных и сплит вакцинах.

Возможность индукции аллергических реакций немедленного типа, сопряженных с появлением гомоцитотропных антител в ответ на введение вакцины Гриппол, оценивали на морских свинках в системной анафилактической реакции, развивающейся, как известно, при повторном контакте с веществами, содержащими аллерген.

Сенсибилизацию морских свинок массой тела 250-300 г проводили по оптимальной для выявления аллергизации схеме: 3- кратно через день по 1 человеческой дозе (1 инъекция подкожно, две последующие внутримышечно). На 21 сутки от начала сенсибилизации внутрисердечно вводили разрешающую дозу вакцин соответствующую трехкратной иммунизирующей или раствор оваальбумина в дозе 2 мг в мл.

Оценку реакции проводили на основании принятой 4-балльной системы, регистрируя в течение 10 минут после разрешающей инъекции различную степень проявления системной анафилактической реакции (от почесывания мордочки до смерти животного) с вычислением среднего анафилактического индекса /Weigleet.al.,J.Immunol.,1960,95,5.

Полученные результаты показали, что ни при разрешении животных вакциной указанных серий, ни при введении им оваальбумина, признаков развития анафилактической реакции не было выявлено.

Сравнительное изучение иммуногенности вакцины Гриппол по сравнению с другими гриппозными вакцинами был проведен на мышах.

Вакцины вводили мышам (CBAхC57BI/6) F₁ внутрибрюшинно в одной человеческой дозе, то есть 0,5 мл. Через две недели после вакцинации в сыворотке крови мышей оценивали титры антител к гемагглютинину в реакции РТГА. Установлено, что несмотря на то, что в вакцине Гриппол доза гемагглютинина в три раза ниже, чем в сплит- вакцине Ваксигрипп фирмы Пастер Мерье, и в два раза ниже, чем в инактивированной цельновирионной вакцине фирмы НПО “ Иммунопрепарат”, по титрам антител к антигенам типов H1N1, H2N3 вакцина Гриппол не уступает сплит-вакцине и чуть ниже, чем в цельновирионной вакцине.

Таким образом, проведенный контроль вакцины Гриппол серии 20 с использованием широкого спектра методов показал, что вакцина данной серии является безопасным высокоочищенным препаратом, обладающим выраженными иммуногенными свойствами, и может быть рекомендована для использования в испытаниях безопосности, реактогенности и профилактической эффективности у школьников.

Гриппозные эпидемии начинаются, как правило, со школьников. Учащиеся являются своеобразным детонатором, занося инфекцию в семьи, после чего заболевают дошкольники и взрослые. Вакцинация школьников и дошкольников может не только существенно снизить размах эпидемии, но и защитить детей от тяжелых, свойственных этому возрасту осложнений, при этом особенно важна проблема вакцинации детей, имеющих различные патологии, в частности аллергозаболевания.

^ Оценка реактогенности, безвредности и иммунопрофилактической эффективности вакцины Гриппол у детей и подростков школьного возраста (7 - 17 лет)

Исследования проводились специалистами следующих научных и медицинских учреждений:

ГНЦ Институт иммунологии МЗ РФ
Государственный институт стандартизации и контроля медицинских и иммунобиологических препаратов им. Л.А.Тарасевича.
Центр государственного санитарно-эпидемиологического надзора Федерального управления медико-биологических и экстремальных проблем МЗ РФ.
Медсанчасть N8 г. Обнинск Московской области.
Участковые врачи-педиатры, школьные врачи и медсестры г.Обнинска

Поставленные задачи решались в рамках установленных законодательством России и требованиями МЗ РФ к проведению испытаний вакцинных препаратов у детей. Было осуществлено организационное и материальное обеспечение комплекса мероприятий по проведению иммунизации контингентов детей и подростков вакциной Гриппол.

На 1-ом этапе на ограниченном контингенте в школе-интернате была оценена реактогенность и безвредность вакцины Гриппол при иммунизации двух групп школьного возраста: 17 - 14 лет, 14-7 лет. Прививки в этих группах проводили последовательно, начиная с более старшей группы.

За привитыми было установлено медицинское наблюдение с целью сбора материалов, характеризующих наличие, частоту и интенсивность общих и местных поствакцинальных реакций.

Итоги наблюдения показали, что повышение температуры у привитых как в старшей группе, так и в младшей группе встречалось в единичных случаях (в 3,3% и в 2,5% соответственно), причем отмечали только слабые температурные реакции (табл. 1 и 2). В основном же, как у привитых (в 96,6% - 97,5%), так и в группах контроля (в 83,3%-100%) температура не повышалась выше нормы.

При оценке общего состояния привитых субъективные жалобы на нарушение общего характера зарегистрированы в старшей группе у привитых в 43,3%, в контрольной группе в 50%, однако разница между показателями статистически недостоверна (Р> 0,05).

Местные реакции были отмечены только в старшей школьной группе в 9 случаях из 30 привитых, и выражались они в болезненности кожи в месте инъекции. По продолжительности симптом болезненности наблюдали не более 48 часов.

Наряду с изучением общих и местных реакций определенный интерес для суждения о реактогенности представляла оценка состояния периферической крови и мочи привитых до и после вакцинации.

Результаты сравнительного анализа в динамике у лиц из 2-х групп привитых и из контрольной группы показали, что колебания показателей содержания форменных элементов периферической крови, а также показателей, характеризующих качественный состав мочи, в основном, были в пределах нормы.

Таким образом, результаты изучения общих и местных реакций, а также тестов, определяющих безвредность препаратов, у привитых и лиц из контрольной группы в возрасте 17-14 лет и 14-7 лет показали, что вакцина Гриппол обладает низкой реактогенностью и безвредна при вакцинации детей старшего и младшего школьного возраста.

^ Результаты оценки профилактической эффективности вакцины Гриппол у школьников

С целью формирования опытных и контрольных групп предварительно во всех школах города был проведен анализ заболеваемости гриппом и ОРЗ за 5 последних лет. Результаты этого анализа легли в основу выбора двух групп школ с относительно одинаковым уровнем заболеваемости, при этом эти группы были сопоставлены и по количеству учащихся в них. К основной группе были отнесены три школы с общим числом учащихся 2.836 человек, и в контрольную группу также были включены три школы с общим числом учащихся 2.391 человек.

Для проведения прививок в школах, отнесенных к основной группе, были созданы прививочные бригады, в которые были включены врачи педиатры и прививочные медсестры. Врачи педиатры осуществляли предварительный врачебный осмотр детей перед вакцинацией, а также решали вопрос об отсутствии или наличии медицинских отводов в каждом конкретном случае.

В результате проведенной работы в 36,9 % случаев у детей были установлены медицинские отводы, которые, в основном, носили временный характер и были связаны с недостаточным интервалом после последней прививки или с периодом выздоровления после острого заболевания. Отказы родителей от иммунизации детей против гриппа наблюдались очень редко - в 7,2% случаев и 3,8% детей по тем или иным причинам в момент проведения прививочной компании отсутствовали.

Таким образом, всего было привито вакциной “Гриппол” 1494 учащихся школ, отнесенных к основной группе, что составляет 52,7  от общего числа учеников в этой группе. В связи с этим можно предполагать, что по-видимому ежегодно в предэпидемический сезон заболеваемости гриппом (в октябре-ноябре), когда проводится прививочная кампания против гриппа, одномоментно в школах могут быть охвачены прививками только 50  учащихся.

В дальнейшем с декабря по апрель в основной группе (в школах, где проводили прививки против гриппа) и в контрольной группе (в школах, где иммунизация не планировалась и не проводилась) был организован учет и ежемесячный сбор и анализ данных заболеваемости гриппом и ОРЗ, а также другими соматическими и другими инфекционными заболеваниями.

Кроме того, с целью коррекции клинических диагнозов была проделана выборочная серологическая расшифровка заболеваний с диагнозом грипп и ОРЗ. При этом, у лиц, привитых против гриппа и непривитых (в каждую из двух групп вошли не менее 30 человек), были взяты парные сыворотки - первая в начале заболевания (на 1-3 день заболевания) и вторая через 14-21 день от начала заболевания. Эти сыворотки были исследованы в РТГА с диагностикумами, содержащими антигены штаммов вируса гриппа А/H₁N₁, A/H₃N_2, B.

Обращает внимание, что в ноябре, до и во время проведения иммунизации, уровень заболеваемости ОРЗ и ОРВИ во всех 3-х группах наблюдения (группа привитых и две контрольные группы) практически не различался (9,8 - 10,0 на 1 тыс.).

В период сезонного подъема заболеваемости гриппом и ОРВИ (с декабря по апрель) среди контингентов, входящих в группу наблюдения, было зарегистрировано 766 случаев заболевания этими инфекциями. Из материалов, характеризующих заболеваемость отдельно в каждой группе наблюдения следует, что статистически значимо (при р0,05) более высокий уровень заболеваемости (309,5 на 1 тыс.) имел место в контрольной группе №1 (коллективы, где прививки не проводили) по сравнению с группой привитых вакциной Гриппол (157,0 на 1 тыс.) и не привитых (контрольная группа №2, показатель заболеваемости 235,3 на 1 тыс.). Разница между показателями в двух последних группах также статистически достоверна (р0,05).

С целью серологической расшифровки этиологического диагноза «грипп» было исследовано 53 парных сыворотки от больных с клиническим диагнозом «грипп и ОРВИ». Частота серологического подтверждения диагноза «грипп» в разных группах наблюдения практически не различалась (р0,05) и для серологической коррекции за основу был взят средний показатель 60,4%. Уровень заболеваемости гриппом с учетом серологической коррекции, естественно, ниже уровня общей заболеваемости гриппом и ОРВИ, однако это не вносит существенных изменений в сравнительную характеристику заболеваемости по группам наблюдения (см. таб.5). Так, в контрольной группе №1 показатель заболеваемости гриппом (186,9) существенно выше по сравнению с группой привитых вакциной Гриппол (94,8) и группой непривитых (контрольная группа №2, пок. 142,1). Разница между показателями в двух последних группах статистически значима (р0,05).

Таким образом, при сопоставлении уровней заболеваемости гриппом в 2-х контрольных группах можно отметить, что наличие 50% иммунной прослойки в коллективе уменьшает вероятность заболевания непривитых (контрольная группа №2) по сравнению с непривитыми лицами из коллективов, где иммунизацию не проводили (контрольная группа №1).

Установленные по материалам эпидопыта показатели частоты заболеваемости гриппом в контрольной группе №1 (186,9) и в группе привитых (94,8) позволяют определить по соответствующим формулам показатели профилактической эффективности, а именно индекс эффективности и коэффициент эффективности, которые соответственно равны 1,97 и 49,3%. Определенный интерес представляют данные о тяжести клинического течения заболевания гриппом в группе привитых и не привитых.

Анализ материалов показывает, что у привитых практически во всех случаях заболевания протекали в легкой форме, в то время как в контрольной группе регистрировали тяжелые случаи и заболевания средней тяжести.

Изучение в течение 5 месяцев после вакцинации соматической и инфекционной заболеваемости (исключения грипп и ОРВИ) в группах привитых вакциной Гриппол и не привитых из этого же коллектива показало, что в группе привитых (р0,05) реже регистрировали заболевания верхних дыхательных путей, чем в группе не привитых (пок. 8,6 и 21,0 соответственно). В то же время в этих двух группах наблюдения (привитые и непривитые) другие соматические заболевания регистрировали практически с одинаковой частотой (р>0,05).

Снижение в 2,4 раза частоты заболеваний верхних дыхательных путей в группе привитых вакциной Гриппол, по-видимому, можно связать с тем фактом, что в состав вакцины входит иммуностимулятор Полиоксидоний, который, как известно из литературы, в определенной степени может стимулировать общую иммунную защиту человека.

Таким образом, в результате проведенных Государственных испытаний в условиях строго контролируемых эпидопытов установлено, что при вакцинации детей школьного возраста коммерческая вакцина Гриппол характеризуется слабой реактогенностью и достаточно высокими показателями профилактической эффективности, что позволяет ее рекомендовать для иммунизации детей школьного возраста.

^ Исследования безвредности и иммуногенности вакцины Гриппол при вакцинации детей дошкольного и младшего школьного возраста

Исследования по оценке реактогенности и безвредности вакцины Гриппол при введении ее детям дошкольного возраста от 3 лет проводили на базе детских дошкольных учреждений г.Обнинска. Исследования проводили в период предсезонного подъема заболеваемости гриппом и ОРВИ в условиях строго контролируемых эпидопытов. Для вакцинации и последующего наблюдения отбирали детей с согласия родителей.

Принципиально важным было определение дозы и схемы иммунизации. В мировой практике, как правило, используется схема двухкратной вакцинации с интервалом 4 недели при введении детской дозы, равной половине взрослой дозы. Подобная схема обусловлена непереносимостью детьми полной взрослой дозы из-за реактогенности большинства имеющихся вакцин. Схема двукратной вакцинации снижает процент прививаемости детей из-за того, что часть детей недополучает вторую прививку в силу разных причин. В наших исследованиях прививочная доза вакцины Гриппол для детей и взрослых была одинаковой стандартной при однократной схеме иммунизации и содержала по 5 мкг гамагглютинина каждого из трех актуальных штаммов вирусов гриппа типов А(H1N1), A(H3N2), B и 500 мкг Полиоксидония.

Итоги наблюдения за детьми в группе привитых вакциной Гриппол и в контрольной группе приведены на слайде. Результаты сравнительного анализа общих и местных реакций, а также тестов, определяющих безвредность вакцинации в обеих группах показали, что вакцина Гриппол абсолютно переносима детьми и безвредна для данного детского контингента, а применение однократной схемы вакцинации позволяет увеличить процент прививаемости детей и соответственно, повысить иммунную прослойку детей и эпидэффективность вакцины Гриппол.

Изучение реактогенности и иммуногенности вакцины Гриппол при вакцинации детей младшего школьного возраста проводилась под руководством профессора А.Н.Слепушкина и профессора В.Ф.Учайкина.

Вакцинация проводилась перед началом эпидемического подъема заболеваемости гриппом среди детей, проживающих в двух закрытых детских учреждениях. Прививки проводили в соответствии с требованиями Инструкций с обязательным осмотром врачей-педиатров и термометрией. Анализ историй развития детей, находившихся под наблюдением и вакцинированных показал, что среди них отмечен высокий процент хронических патологий, в том числе аллергических заболеваний.

При изучении реактогенности вакцины Гриппол по общепринятым тестам было установлено, что ни местных, ни общих реакций на вакцинацию у привитых детей не было.

При изучении иммуногенности вакцины Гриппол при однократной вакцинации стандартной дозой у детей 6-11 лет был установлен высокий выраженный иммунный ответ на вакцинацию - 80% и выше сероконверсий среди детей с исходными титрами 1:10 и ниже (использовался метод РТГА с 6 антигенами современных основных штаммов вирусов гриппа, 3 из них вакцинные). Иммуногенность вакцины была высокой и составила для вакцинного антигена гриппа А(Н1N1) 75% сероконверсий, А(Н3N2) – 90% и типа В –73%. Из приведенных на слайде данных видно, что большинство детей в результате вакцинопрофилактики стали иметь не только защитные, но и очень высокие (≥1:640) титры антител к основным современным штаммам вирусов гриппа .

Таким образом, было установлено, что вакцина Гриппол обладает выраженной иммуногенностью ко всем антигенам актуальных штаммов вируса гриппа, а наблюдаемая у детей хроническая патология не препятствует выработке у них гуморального иммунитета при профилактических прививках вакциной Гриппол.

^ Исследование реактогенности и выбор оптимальной дозы и схемы иммунизации вакциной Гриппол детей в возрасте от 6 месяцев до 3 лет

Согласно требованиям ВОЗ гриппозные инактивированные вакцины основных зарубежных производителей рекомендовано вводить детям в возрасте от 6 месяцев до 3 лет по 1/2 дозы (суммарно 22,5 мкг гемагглютинина) двукратно с интервалом 4 недели. Выбор оптимальной дозы и схемы иммунизации вакциной Гриппол детей указанного возраста был целью очередного этапа Гос.испытаний, проведенных в соответствии с Программой, утвержденной Комитетом МИБП от 24.06.99. Было проведено сравнительное изучение 2-х схем иммунизации по параметрам реактогенности и антигенной активности:

однократное введение полной прививочной дозы (15 мкг ГА);
двукратное введение по 1/2 дозы с интервалом от 3-4 недели.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что вакцина Гриппол, вводимая по обеим схемам, хорошо переносятся детьми указанного возраста. В процессе наблюдения за привитыми детьми не выявлено дополнительных и местных реакций, независимо от схемы введения препарата, по сравнению с контрольной группой, получившей плацебо.

Изучение иммуногенной активности вакцины Гриппол при двух сравниваемых схемах введения проводилось по оценке 4-кратных сероконверсий титров антител (определяются по реакции РТГА), что специалисты считают состоявшимся иммунным ответом на введение вакцины. Было установлено, что группа серонегативных детей (дети имеют исходные титры антител 1:20 и ниже), иммунизированных по схеме двухкратного введения половинной дозы, отвечает достоверно более высоким процентом 4-кратных сероконверсий к штаммам вируса гриппа А(H1N1) и A(H3N2) по сравнению с однократным введением препарата в полной дозе.

К штамму вируса гриппа В этот показатель в группах привитых по двум схемам практически не различался и был равен 62-81%. Что касается группы серопозитивных детей, то было установлено, что показатели частоты 4-кратных сероконверсий у привитых по двум схемам к 3 штамма вируса гриппа практически не различались. Полученные результаты позволяют предположить, что 2-кратное введение вакцины Гриппол серонегативным детям в полной дозе 15 мкг ГА может сопровождаться более высокими показателями иммуногенности по сравнению с 2-кратным введением половинной дозы.

После анализа и обсуждения полученных результатов было принято решение о проведении второго этапа Гос.испытаний, который предусматривал сравнительное изучение иммуногенности вакцины Гриппол при 2-кратном введении в полной дозе (15 мкг ГА) и в половинной дозе (7,5 мкг ГА) с интервалом 3-4 недели. В настоящее время в соответствии с утвержденной Ученым советом ГИСКа (15.09.00) Программой завершен второй этап Гос.испытаний и подготовлен Отчет о поведенных исследованиях.

В настоящее время разрабатывается и утверждается в установленном порядке новый вариант Инструкции по применению вакцины Гриппол, в которой будет введен возраст вакцинируемых, начания с 6 месяцев (согласно требованиям ВОЗ) и предложена схема иммунизации.

^

Изучение влияния вакцины Гриппол на иммунный статус

В ГНЦ Институте иммунологии под руководством профессора Б.В.Пинегина проведено изучение влияния вакцины Гриппол на следующие параметры иммунного статуса вакцинированных добровольцев в возрасте 18-21лет : общий уровень лимфоцитов, уровень Т-клеток, функциональная активность лимфоцитов, уровень циркулирующих иммунных комплексов и гуморальный иммунитет.

Влияние на общий уровень лимфоцитов.

В результате вакцинации происходит постепенное увеличение количества лимфоцитов в периферической крови. Если до вакцинации 40% людей имели сниженные уровни лимфоцитов (<18%), то через месяц после иммунизации было установлено, что сниженные уровни лимфоцитов были только у 15%.

2. Влияние на уровень Т-клеток.

После вакцинации возрастает общее количество Т-клеток (CD3+): до вакцинации процент Т-клеток был равен 67+1,9, после вакцинации при третьем определении - 77,5+1,96 при р<0,05. Возрастание Т-клеток осуществляется в основном за счет Т-хелперов – CD4+клеток. Это возрастание происходит в пределах нормальных значений и не носит патологического характера. Повышение уровня Т-хелперов после вакцинации до определенных пределов имеет положительное значение. Оно связано с тем, что вакцинация и, в частности иммуномодулятор полиоксидоний, входящий в состав вакцины, исправляет дефекты иммунитета, имеющиеся исходно у добровольцев (40% имели исходную лимфопению). Цитокины, продуцируемые Т-хелперами, играют ведущую роль в защите организма от инфекции.

3. Влияние на функциональную активность лимфоцитов.

Вакцинация вызывает повышение функциональной активности лимфоцитов, проявляющиеся в усилении спонтанной и ФГА-индуцированной бласттрансформации. Однако это повышение является кратковременным и является нормальной реакцией организма на введение чужеродного материала. При определении пролиферативной активности лимфоцитов через месяц после вакцинации было отмечено возвращение параметров спонтанной и индуцированной бласттрансформации к норме.

4. Влияние на уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК).

Вакцинация не вызывает повышения образования мелких, наиболее патогенных ЦИК, осаждаемых ПЭГ в концентрации 3%. Более того после вакцинации происходило уменьшение числа лиц, содержащих мелкие ЦИК. Перед вакцинацией 35% людей имели повышенное содержание мелких ЦИК, после вакцинации – только 18,7%. Сразу после вакцинации наблюдается увеличение крупных ЦИК, осаждаемых ПЭГ в концентрации 4%, что можно рассматривать также как реактивный ответ организма на введение чужеродного материала. Но к 3-му исследованию уровень крупных ЦИК возвращается к норме.

5.Влияние на гуморальный иммунитет.

Вакцинация вызывала некоторые колебания в пределах физиологической нормы уровней IgG, IgA, IgM. Имелась некоторая тенденция к нарастанию (>130 МЕ) после вакцинации уровня минорного класса иммуноглобулинов - IgE, участвующего в аллергизации организма. Так перед вакцинацией процент лиц, имеющих повышенный уровень IgE, был равен 15, при втором и третьем исследовании – 26,6 и 37,5 соответственно. Вероятно, является целесообразным исследовать этот параметр иммунитета повторно через 2 мес. после вакцинации, так как это небольшое повышение уровня IgE также может быть реакцией организма на вакцинацию и является нормальной составной частью вакцинального процесса.
^

Опыт применения вакцины Гриппол у пожилых лиц

В последние годы в нашей стране практика иммунопрофилактики гриппа переориентирована на мировой опыт приоритетной защиты людей из группы высокого риска, в частности, лиц пожилого и старческого возраста и людей с хроническими соматическими заболеваниями. Особую важность эта проблема приобретает в свете эволюционного изменения возрастного состава населения России. Пожилые люди - самая быстро растущая часть населения страны. По данным эпидемиологических исследований заболеваемость людей пожилого возраста больше, а тяжелое течение встречается в 1,8 раз чаще, чем у молодых. При инфицировании люди пожилого и старческого возраста чаще, чем общая популяция населения нуждаются в госпитализации. Особенно заметно повышение смертности.

В мировой практике накоплен многолетний опыт в области изучения эффективности гриппозных вакцин у пожилых лиц. Отечественные исследования в этом направлении редки и ограничены изучением живых и инактивированных вакцин. Опыт применения вакцины Гриппол у пожилых лиц, состояние которых отягощено различными хроническими соматическими заболеваниями, нам предстояло приобрести на этапе исследований

Для грамотной постановки исследования и дальнейшей интерпретации полученных результатов необходимо было не только изучить реактогенность, безвредность, иммуногенность и профилактическую эффективность вакцины Гриппол, а также оценить особенности иммунного ответа у привитых лиц пожилого и старческого возраста и оценить продолжительность поствакцинального иммунитета у данной группы лиц.

Вакцинопрофилактику гриппа проводили среди лиц пожилого, старческого возраста и долгожителей от 60 до 99 лет. Для вакцинации отбирали лиц, не имеющих противопоказаний к прививке при наличии их согласия в соответствии Государственной Программой испытаний. Для иммунизации использовали стандартные серии вакцины Гриппол производства ГУП "Иммунопрепарат". Методом случайно-выборочного распределения были сформированы равноценные группы наблюдения - основная и контрольная. Следует отметить, что из 99 человек, находившихся под наблюдением, 82% составляют хронические больные, в основном с сердечно-сосудистой и легочной патологией. За привитыми было установлено наблюдение с целью оценки местных и общих реакций организма, а также проведены дополнительные исследования: ЭКГ, измерение кровяного давления, клинический анализ крови и мочи в динамике до и после вакцинации и ряд других.

Полученные материалы свидетельствуют о практически полном отсутствии общих реакций и в единичных случаях слабо выраженных местных реакциях. Результаты дополнительных обследований, проведенных в динамике, показали, что некоторые отклонения от нормы у отдельных привитых связаны с индивидуальным состоянием этих лиц, и не связаны с вакцинальным процессом, т.к. имели место и до вакцинации.

Антигенную активность вакцины Гриппол при иммунизации данный группы оценивали в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) по общепринятой методике. В качестве антигенов использовали диагностикумы, созданные на основе штаммов вирусов гриппа типа А и В. Антигенная активность вакцины была охарактеризована по следующим показателям:

4-кратные сероконверсии по сравнению с фоновой сыворотокой;
уровень антигенного ответа до и через месяц после вакцинации, при этом определяли средние геометрические титры антител (СТГА), кратность нарастания титров по сравнению с фоновой сывороткой;
уровень серологической защиты путем определения процента лиц с защитным титром антител до и через месяц после вакцинации;

Собранные количественные показатели обрабатывали методами вариационной статистики. Достоверность различий определяли по Т-критерию Стьюдента, при этом достоверными считали раличия при р  0,05.

Из полученных материалов видно, что через месяц после вакцинации в группе привитых во всех случаях наблюдали статистически достоверное нарастание СГТА, при этом наиболее выраженное в лиц с низким исходным уровнем антител (20), при этом кратность нарастания титров антител в этой группе составила: к штамму А (H1N1), к штамму А (H3N2) - 21,3, к штамму В - 6.3. В группе с высоким исходным уровнем антител эти показатели были несколько ниже.

Частота 4-х кратного прироста антител через месяц после иммунизации была также выше у лиц с низким исходным уровнем антител.

В контрольной группе во всех случаях уровень антительного ответа до вакцинации статистически значимо не отличался от основной грппы и практически без изменения оставался через месяц.

Особый интерес представляло определить количество лиц с защитным титром больше 40, так называемую иммунную прослойку. Через месяц после вакцинации в основной группе процент лиц с защитным титром антител во всех случаях достоверно вырос и составил 76,9% к штамму вируса А(H1N1), 84,3% к штамму А (H3N2) и 100% к В. При этом в контрольной группе практически ничего не изменилось.

Таким образом, впервые на большом фактическом материале проведено изучение реактогенности, безвредности иммунизации вакциной Гриппол для профилактики гриппа у лиц 65 лет и старше. Частота, интенсивность и длительность проявления клинических реакций на введение Гриппола характеризуют вакцину как слабореактогенный препарат, соответствующий медико-биологическим требованиям.

Впервые показано, что у лиц пожилого и старческого возраста, а также долгожителей вакцинация Грипполом активно стимулировала выработку специфических антител к вакцинным штаммам вирусов гриппа. Показатель сероконверсии колебался от 54-74%, зарегистрирован достоверный прирост СГТ антител в 1,3-2,1 раз во всех группах лиц старше 65 лет.

Особый интерес представляло изучение длительности поствакцинального иммунитета у лиц старше 65 лет с различной соматической патологией после иммунизации вакциной Гриппол. В мировой практике имеются противоречивые данные о продолжительности поствакцинального иммунитета у пожилых после применения других гриппозных вакцин.

Для оценки показателей противогриппозного иммунитета к вацинным и эпидемическим штамма вирусов гриппа парные сыворотки, взятые через 1, 6 и 12 месяцев после прививики, исследовали в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) по стандартной методике с 6 антигенами вируса гриппа. Полученные результаты подвергали статистической обработке. Как видно из приведенных на слайде данных, проценты лиц с защитными уровнями антител за этот период снизились умеренно (разница статистически не достоверна). Незначительное снижение отмечено и при анализе СГТА, причем разница показателей уровней СГТА к вакцинным вирусам между группами привитых и контрольной группой остается статистически значимой.

Проведенные исследования дают основания утверждать, что после иммунизации вакциной Гриппол лиц старше 65 лет создается длительный и напряженный иммунитет ко всем трем антигенам вируса гриппа, который сохраняется не менее года. Динамика снижения СГТА постепенная и через12 месяцев после вакцинации у большинства привитых сохранялись защитные титры антител ко всем трем штаммам вируса гриппа, включенным в вакцину.

^

Изучение возможности применения вакцины Гриппол у лиц с аллергопатологией

Самым неохваченным вакцинацией грипозными вакцинами является контингент больных с различной аллергопатологией. Вместе с тем известно, что от 30% до 50% городского и сельского населения страдают различными формами аллергических заболеваний, которые по распространенности находятся среди 3-6 наиболее часто встречающихся заболеваний человека. Опыт вакцинации этой группы пациентов резко ограничен, как в нашей стране, так и за рубежом. В практике пациенты с аллергопатологией вообще не вакцинируются, поскольку их заболевания лечащие врачи относят к медицинским противопоказаниям из-за боязни тяжелых аллергических осложнений. Практика неоправданно широких медицинских отводов лиц с аллергопатологией вносит существенный вклад в критическое увеличение неиммунной прослойки среди населения.

Поэтому совершенно необходимым представлялось изучение возможности применения вакцины Гриппол у лиц с аллергопатологией. В ГНЦ Институте иммунологии было проведено изучение реактогенности, безвредности, иммуногенной активности вакцины Гриппол при вакцинации больных аллергическими заболеваниями и проведена оценка влияния вакцинации на течение аллергических заболеваний у больных с аллергопатологией. Работа выполнена под руководством проф.Л.В.Лусс.

Для изучения особенностей вакцинального процесса у больных аллергическими заболеваниями под наблюдением находилось 100 человек в возрасте от 6 до 70 лет. Вакцинопрофилактику гриппа проводили в двух группах: 1 группа включала в себя 50 больных с различной аллергопатологией, 2 группа (контрольная) включала 50 здоровых добровольцев.

Под наблюдением состояло 100 человек, из которых дети составили 15%, взрослые 68%, люди пожилого и старческого возраста 17%. Представленность всех возрастных групп дала возможность оценить реактогенность, безвредность и иммуногенность вакцины Гриппол не только у больных аллергозаболеваниями взрослого возраста, но и у детей и у лиц пожилого и старческого возраста.

Оценку реактогенных свойств вакцины проводили в течение 5 дней после введения препарата по наличию температурных реакций, местных и общих реакций. Дополнительно было проведено аллергологическое и иммунологическое обследование.

Аллергологическое обследование проводилось с использованием ряда методов, в том числе сбор аллергологического, фармакологического и пищевого анамнеза, кожные тесты с аллергенами с обязательным включением аллергенов куриного яйца и др.

Было проведено иммунологическое обследование среди 30 больных аллергозаболеваниями и 30 здоровых добровольцев до и через 1 и 6 месяцев после вакцинации по определение уровней сывороточных иммуноглобулинов класса А,М,G, клеточных показателей иммунитета, показателей фагоцитоза.

Иммуногенную активность вакцины оценивали по уровню антител к гемагглютинину в сыворотках крови у всех лиц по реакции торможения гемагглютинации (РТГА) по стандартной методике.

Больные, получавшие базисную терапию для лечения аллергозаболевания, например интал (2 человека), кетотифен (2 человека), ингаляционные стероидные препараты (3 человека) продолжали получать ее и в период вакцинации. У трех больных поллинозом вакцинация проведена во время специфической иммунотерапии аллергенами домашней пыли и пыльцой деревьев (на дозах

10^-5). Аллергены не вводились за три дня до и после вакцинации.

Анализ аллергопатологии вакцинированных лиц выявил высокий процент больных, страдающих бронхиальной астмой, поллинозом и аллергическим риноконъюнктивитом, при этом две и более нозологические единицы одновременно имели 37 больных (74%). Результаты аллергологического обследования представлены на слайде .

Итоги наблюдения за характером общих и местных реакций на введение вакцины Гриппол не выявили ни одного случая температурной реакции как в группе больных аллергозаболеваниями, так и в контрольной группе.

Отмеченные нарушения общего состояния регистрировали в обеих группах равномерно во все дни наблюдения, при этом их продолжительность, как правило, не превышала одного дня.

Местные реакции в группе больных аллергическими заболеваниями и в контрольной группе регистрировались с одинаковой частотой (в 8% случаев), однако выраженность местных реакций у больных с аллергопатологией была сильнее

В клинических и биохимических анализах крови, анализах мочи до и после вакцинации не выявлена отрицательная динамика.

Результаты исследований титров специфических противогриппозных антител в сыворотках больных аллергическими заболеваниями до вакцинации и через 1 месяц после вакцинации показали, что в результате вакцинации процент лиц, имеющих защитный титр антител к различным штаммам вирусов гриппа увеличился в обеих группах, в контрольной группе этот показатель стал достоверно выше для штаммов А(H1N1) и A(H3N2), чем в группе больных. Полученные результаты подтвердили стандартные уровни защищенности (>70%), установленные Европейской Фармакопеей (СЕФ) для данной возрастной группы.

Анализ полученных данных в целом по группе больных аллергическими заболеваниями показал, что вакцинация привела к возникновению сероконверсий у 58%-84% вакцинированных, при этом у лиц с исходно низкими титрами антител процент сероконверсий был выше, чем у лиц, изначально имеющие антитела в титре 1:40 и выше (р>0,05), что совпадает с полученными данными для других контингентов.

При учете сероконверсий в группе вакцинированных добровольцев процент сероконверсий был выше, чем в группе больных аллергическими заболеваниями и составил 76-92%, однако разница между показателями сероконверсий в этих группах статистически не достоверна.

Таким образом, частота, интенсивность и длительность проявления клинических реакций на введение вакцины, характеризуют ее как слабореактогенный препарат, безопасный для вакцинации больных аллергозаболеваниями.

Вакцина Гриппол обладает выраженной иммуногенной активностью, зарегистрирована достоверная кратность нарастания титров антител в зависимости от штамма вируса гриппа от 1,25 до 1,96 в группе привитых больных с аллергопатологией. В результате иммунизации вакциной Гриппол процент лиц с защитным титром антител (>40) достоверно увеличился и составил 88-98% у больных с аллергопатологией.

При изучении влияния вакцинации на иммунный статус больных аллергическими заболеваниями особое внимание было обращено на динамику иммуноглобулина Е (IgЕ) до и после вакцинации. Сыворотки 27 больных с аллергопатологией исследовались на содержание общего IgЕ и специфических IgЕ к 16 аллергенам разных классов (бытовые, эпидермальные, пищевые, пыльцевые, грибковые и бактериальные). Результаты определения общего иммуноглобулина Е показали, что после вакцинации уровень данного показателя снизился у 21 больного (77,7%), повысился у 5 человек (18,5%). В среднем содержание общего иммуноглобулина Е в сыворотках крови больных с аллергопатологией до вакцинации составило 233,5109.9 кЕ/л, через 1 месяц после вакцинации составило 174,891.4 кЕ/л.

Исследования показали, что процент больных, у которых выявлены специфические IgЕ антитела значительно выше данных, полученных при сборе анамнеза и постановке кожных проб. У большинства больных специфические антитела обнаружены в низкой концентрации (1-2 класс реакции), зарегистрировано только 15 случаев обнаружений специфических IgЕ в высоких концентрациях. У 40,7% больных до вакцинации выявлены специфические IgЕ к куриному яйцу (слабоположительная реакция), у 18,5% больных специфические IgЕ к куриному яйцу определялись умеренной реакцией. Однако не зарегистрирована корреляция между содержанием специфических IgЕ к куриному яйцу в крови больных аллергозаболеваниями и наличием местных и общих реакций на вакцинацию. В целом вакцинация не привела к достоверно значимому увеличению общего и специфических IgЕ в сыворотках больных аллергозаболеваниями. Наличие в крови пациентов специфических IgЕ на куриное яйцо не связано с возникновением общих и местных реакций.

Таким образом, полученнные результаты свидетельствуют об отсутствии влияния иммунизации вакциной Гриппол на течение аллергических заболеваний, на уровень общих и специфических иммуноглобулинов Е. Частота, интенсивность и длительность проявления клинических реакций на введение вакцины Гриппол, характеризуют ее как слабореактогенный препарат, безопасный для вакцинации больных аллергозаболеваниями.

зарегистрирована достоверная кратность нарастания титров антител в зависимости от штамма вируса гриппа от 1,2 до 2,1 раз у привитых больных с аллергопатологией. В результате иммунизации вакциной Гриппол процент лиц с защитным титром антител (>40) достоверно увеличился и составил 88-98% .

Установлено, что вакцинация вакциной Гриппол привела к сероконверсиям как к вакцинным, так и эпидемическим штаммам вирусов гриппа. В целом процент сероконверсий колебался от 58% до 84% в группе больных с аллергопатологией, в то время как среди непривитых случаи сероконверсий были единичными.

Таким образом, при изучении возможности применения вакцины Гриппол для иммунизации лиц с различными аллергозаболеваниями было установлено:

1.Частота, интенсивность и длительность проявления клинических реакций на введение вакцины Гриппол, характеризуют ее как слабореактогенный препарат, безопасный для вакцинации больных аллергозаболеваниями.

2.Показано, что вакцина Гриппол обладает выраженной иммуногенной активностью, зарегистрирована достоверная кратность нарастания титров антител в зависимости от штамма вируса гриппа от 1,2 до 2,1 раз у привитых больных с аллергопатологией. В результате иммунизации вакциной Гриппол процент лиц с защитным титром антител (>40) достоверно увеличился и составил 88-98% .

3. Установлено, что вакцинация вакциной Гриппол привела к сероконверсиям как к вакцинным, так и эпидемическим штаммам вирусов гриппа. В целом процент сероконверсий колебался от 58% до 84% в группе больных с аллергопатологией, в то время как среди непривитых случаи сероконверсии были единичны.

4.Показано отсутствие влияния иммунизации вакциной Гриппол на течение аллергических заболеваний, на уровень общих и специфических иммуноглобулинов Е.

Безусловно достоверные положительные результаты, полученные в ходе проведенных исследований, позволили нам существенно расширить показания к применению вакцины Гриппол и включить в Инструкцию по применению рекомендации для "групп высокого риска". Результаты Госиспытаний вакцины Гриппол при иммунизации взрослых без ограничения возраста, детей начиная с 3-летнего возраста и подростков школьного возраста, превосходящие известные показатели существующих гриппозных вакцин, позволили специалистам Минздрава РФ, Комитета по МИБП, Госсанэпиднадзора признать вакцину Гриппол состоявшейся и включить в Приказ и Перечень вакцин, рекомендуемых для вакцинации. Гриппозная полимер-субъединичная тривалентная вакцина Гриппол Приказом МЗМП РФ №309/123 от 31.07.96 разрешена к применению и промышленному выпуску, Регистрационный номер 96/309/123/4, Фармакопейная статья 42-3890-99. Вакцина Гриппол включена в Перечень вакцин для обязательной вакцинопрофилактики, Приказ Минздрава РФ №25 от 27.01.99, Постановление №20 от 31.12.99 "О мерах профилактики заболеваний гриппом", Приказ Правительства Москвы №420/137 от 13.09.99 «О проведении мероприятий по сезонной профилактике гриппа и острых респираторных вирусных инфекций в г.Москве в 1999-2000г.г.»

Вакцина Гриппол широко использовалась лечебно-профилактическими учреждениями Российской Федерации в эпидсезоны 1997-2001г.г. для профилактики гриппа у детей и взрослых. За эти годы было привито более 15 миллионов человек. Результаты вакцинации свидетельствуют о безвредности, хорошей переносимости и высокой профилактической эффективности вакцины Гриппол, превосходящей известные гриппозные вакцины.

С 1997 года промышленный выпуск вакцины Гриппол осуществляется на Уфимском ГУП «Иммунопрепарат». Освоение и внедрение технологии в производство, организация выпуска опытно-промышленных и производственных серий вакцины стали возможны благодаря финансовой помощи и поддержке Министерства науки и технологий. При разработке экспериментальной технологии получения вакцины Гриппол в части выделения высокоочищенных антигенов вируса гриппа гемагглютинина и нейраминидазы были использованы новейшие достижения мировой практики и собственные оригинальные идеи. После разработки Производственного регламента и освоения технологии производственная мощность цеха гриппозных вакцин достигла 20 млн.доз вакцины Гриппол в год. Для производства используются отечественные сырье и комплектующие. При производстве вакцины Гриппол используются только вакцинные штаммы, предложенные ВОЗ на текущий эпидсезон. В настоящее время разработан и осуществлен выпуск однодозовой упаковки вакцины Гриппол в комплекте со стерильным шприцем.

Вакцина Гриппол отмечена Дипломом Всероссийской Программы-конкурса “100 лучших товаров России “ и Золотой медалью ВВЦ 2000 г. Дипломом I степени и золотой медалью II Международной выставки "Инновации-99.Технологии живых систем" ВВЦ.

плохо

не очень плохо

средне

хорошо

отлично

Ваша оценка этого документа будет первой.

Ваша оценка:

	Исследование клинической эффективности вакцины «Гриппол» Абстракт: Проведено исследование клинической эффективности вакцины «Гриппол» у детей дошкольного...		Инактивированные вакцины представлены: цельновирионными вакцинами Живая вакцина это вакцина, которая содержит в своем составе живой вакцинный (т е специально созданный...
	Вакцины Вакцина туберкулезная живая сухая (бцж)		Многофункциональный физиотерапевтический аппарат нового поколения Ирга+
	Инструкция по применению вакцины ассоциированной инактивированной против колибактериоза, сальмонеллеза,		Временное руководство cdc по применению 23-валентной пневмококковой полисахаридной вакцины во время
	Экструдер позволяет получать уникальные корма нового поколения «экструдированные корма» это экологически		Отчет о заседании Рассеянный склероз и вакцины против гепатита В?
	«Инфанрикс» первая в России вакцина для профилактики коклюша, дифтерии и столбняка с бесклеточным		Иммунный подход к выявлению аномалий в работе вычислительных сетей В данной статье рассматривается применимость иммунного подхода к проблеме выявления аномалий в вычислительных...