Фундаментальна медицина практиці охорони здоров’я влияние на иммунный статус больных гепатитом мнфк «гринизация»
|
|
Скачать 156.55 Kb.
|
|
___________________________________________________ФУНДАМЕНТАЛЬНА МЕДИЦИНА ПРАКТИЦІ ОХОРОНИ ЗДОРОВ’Я ВЛИЯНИЕ НА ИММУННЫЙ СТАТУС БОЛЬНЫХ ГЕПАТИТОМ МНФК «ГРИНИЗАЦИЯ» Лисяный Н.И., Печенка А.М., Потапова А.И. Институт нейрохирургии АМН Украины Резюме. У больных с гепатитом В отмечается в процессе применения мультинутриентных функционально-пептидных комплексов (МНФК) нормализация функциональной активности лимфоцитов, снижение гиперпродукции Т-лимфоцитов и увеличение цитотоксической и фагоцитарной активности иммунокомпетентных клеток. Особенно заметно изменилась апоптическая готовность лимфоцитов, что проявлялось в 30-50% сниженных в крови лимфоцитов, экспрессирующих Fas-рецептор апоптоза в процессе лечения. В процессе лечения различных форм гепатита отмечены различные влияния препаратов Гринизации на иммунную систему, так у больных с гепатитом С отмечено больше стимулирующее действие препарата, тогда как у больных с аутоиммунным и гепатитом В больше проявлялось противовоспалительное иммуносупрессивное действие. Применение МНФК у больных с гепатитом различной этиологии показано и приводит к направленному воздействию на иммунную систему больных. Ключевые слова: гепатит, лимфоциты, апоптоз. ВВЕДЕНИЕ Вопросы лечения больных с хроническими гепатитами остается сложной задачей, так как частота развития побочных эффектов зачастую превышает процент эффективности терапии.(ИвашинВ.Т. и др.2000,Ferrari G. et al 2002). Доказано, что эффективность использования ИФН- альфа в лечении больных с вирусным гепатитом С – не более 25%. Четверть больных вынуждены прекратить лечение из-за развития побочных эффектов. Комбинированная терапия – ИФН-альфа + аналоги нуклеозидов, улучшают эффективность терапии на 35-40%, однако при этом увеличивается число побочных эффектов и существенно возрастает и так высокая стоимость лечения.(Уразова Д.И. идр. 2007.Koziel M. J. 1999) В то же время полная элиминация вируса из организма наступает в небольшом проценте случаев, и через некоторое время опять возникает активизация процесса, еще более трудно поддающаяся лечению. Кроме того, даже при полном выведении вируса из организма продолжают сохраняться процессы фиброзирования ткани печени, дистрофические изменения ее клеток, приводящие к нарушению метаболизма.(Ура зова Д.И. и др.2007, Ивашин В .Т. и др.2000) Одной из наиболее серьезных и часто встречающихся проявлений нарушения метаболизма печени является белково-энергетическая недостаточность, коррекция которой является важной проблемой при лечении больных с хроническими заболеваниями печени. При решении этих проблем с помощью стандартных диетологических мероприятий возникает целый ряд трудностей обусловленых, с одной стороны, гиперкатаболизмом и глубокими нарушениями белково-энергетического обмена, требующими адекватной компенсации, а с другой стороны – относительной непереносимостью белков, жиров, углеводов, развивающейся в следствии гиперазотемии, кетоацидоза и т.д. Это обуславливает необходимость поиска новых, комплексных подходов к лечению и реабилитации этой категории больных, с использованием средств, в том числе нутрицевтиков, направленных на восстановление деятельности метаболизма печени, но не несущих дополнительную белковую, энергетическую и, что особенно важно, антигенную нагрузку на организм больного. Целью настоящей работы послужило изучение влияния мультинутриентной функциональной композиции (МНФК) «Grinization», разработанной фирмой «World Grinization System» на иммунологическую реактивность больных с различными видами хронического гепатита и разработка оптимальной схемы ее применения на основе иммунологических показателей. ^ Иммунологическое обследование включало в себя количественную оценку различных субпопуляций лимфоцитов непрямым иммунофлюоресцентным методом при помощи моноклональных антител производства ЗАО «Сорбент-сервис» (Москва), определение функциональной активности лимфоцитов, фагоцитарной способности, а также определение аутоантител к антигенам мозга. Определения фенотипа лимфоидных клеток непрямым иммунофлюоресцентным методом на проточном цитофлюориметре Becton Diskinson. Кровь брали с вены натошак в пробирку с 0,3 мл гепарина (25 единиц в 1 мл физиологического раствора) в количестве 3,5-5 мл, разводили забуференным фосфатами физиологическим раствором (0,85% раствор NaCl, pH-7,6) в 2 раза и наслаивали на градиент плотности фиколл-верографин (d=1,077 г/см3), центрифугировали на протяжении 30 минут при 400g в холодовой центрифуге РС-6. Виделенную суспензию лимфоцитов дважды отмывали в холодном забуференном фосфатами физиологическом растворе (рН=7,6) и подсчитывали количество клеток в камере Горяева. Лимфоциты ресуспендировали в физиологическом растворе так, чтобы концентрация клеток была не меньше 2,5х106/мл. Моноклональные антитела (ЗАО “Сорбент-сервис” Москва, Россия) вносили в пластиковые пробирки “Becton Dickinson” (США) в объеме 10 мкл. Потом в пробирки вносили 2,5х105 лимфоцитов в объеме 100 мкл, перемешивали и инкубировали 30 минут при t=40С. Потом клетки отмывали холодным забуференным фосфатами физиологическим раствором от излишек антител. Объем пробы после отмывания становил 100 мкл. В каждую пробу вносили по 5 мкл F(ab)-фрагментов, меченных ФІТЦ (кроличьи, антимишиные) (ЗАО “Сорбент-сервис”, Москва, Россия), перемешивали, инкубировали 30 минут при t 40С. После окончания срока инкубации клетки отмывали холодным забуференным фосфатами физиологическим раствором от излишек меченных ФИТЦ кроличьих антител, конечный объем пробы доводили до 100 мкл. Для фиксации клеток использовали 2% параформ, добавляя в каждую пробу по 100 мкл 2% параформу, пробирки перезакрывали пробками та сохраняли в холодильнике. Учет реакции проводили на проточном цитофлюоритметре “Becton Dickinson” США (Parks D.R.,Lanier L.L.,Herrenberg L.A.,1986). При помощи данного метода определяли следующие субпопуляции лимфоцитов – CD3+лимфоциты (Т-клетки); CD4+лимфоциты (Т-хелперы); CD8+лимфоциты (Т-цитотоксические лимфоциты/супрессоры); CD16+лимфоциты (NK-клетки), CD19+ лимфоциты (В-клетки); CD25+лимфоциты (активированные клетки, что экспрессируют -звено рецептора ИЛ-2); HLA-DR+лимфоциты (активированные клетки); CD95+лимфоциты (клетки, что экспрессируют FASR). Функциональную активность Т- и В-лимфоцитов оценивали в тесте бласттрансформации лимфоцитов на Т- и В-митогены. Реакцию бласттрансформации ставили по методу Григорьевой М.П., Копелян И.И. (1972) используя среду Игла и 10% эмбриональную сыворотку фирмы Панеко (Россия) и митоген – ФГА (фирмы “Difco”) в дозе 5 мкг/мл и декстран-сульфат в дозе 100 мкг/мл, как стимулятор В-лимфоцитов (Фримель Г.,1987). Фагоцитарную активность исследовали в тесте НСТ по степени восстановления лейкоцитами НСТ реактива (Гордиенко С.А, 1983). Уровень иммунных комплексов в крови определяли за методикой (Гашкова В, Мате И. и соавт.,1978) при помощи 3,75% полиэтиленгликоля з м.м.6000. Дополнительно оценивали функциональное состояние В-лимфоцитов, определяя уровень основных классов сивороточных иммуноглобулинов методом простой радиальной иммунодифузии в геле, по Манчини в прописи Чернушенко Е.Ф., Когосовой Л.С. (1978). Для постановки реакции использвали кроличьи моноспецифические антисыворотки и стандарты иммуноглобулинов из коммерческого набора фирмы «ИмБио», г. Нижний Новгород, Россия. Спонтанную цитотоксичность спленоцитов крови определяли в 18-часовом тесте в отношении эритроцитов кур (Мельников О.В.,1999). Статистическая обработка Статистическую обработку полученных результатов исследований проводили при помощи стандартных компьютерных пакетов программы Quattro Pro для Windows, версія 5.00, 1993г. и пакета «Анализ данных» Microsoft Excel для Windows 1995, версия 7.0а, 1996г., при помощи критерия Стьюдента обсчитано значение среднего математического (М), среднего квадратического отклонения (), погрешности определения среднего квадратического (m), уровень вероятности различий (р). ^ Содержания отдельных субпопуляций лимфоцитов в крови больных с гепатитом показано в таблице, из которой видно, что применение МНФК (мультинутриентный функциональный комплекс) оказывает иммуномодулирующий эффект на уровень лимфоцитов. Так, если до лечения в больных с гепатитом С отмечено повышение содержания СД-4 лимфоцитов и снижение СД-8 лимфоцитов, то через 1,0-2,0 месяца после проведения курса реабилитации видна положительная динамика. Происходило снижение процентного содержания СД-4 лимфоцитов с 41,3% до 33,0% и повышение уровня СД-8 цитотоксических лимфоцитов с 22,1% до 28,4%, что можно связывать с увеличением генерации цитотоксических лимфоцитов, играющих решающую роль в противовирусном иммунитете. Содержание В-лимфоцитов в крови больных с гепатитом С оставалось практически без изменения и составляло 8,0-8,5%. Субпопуляция лимфоцитов, относящаяся к естественным киллерам, которая до лечения в этой группе равнялась 16,0% несколько снизилась до 12,2%. Особо необходимо отметить динамику изменений лимфоцитов, экспрессирующих рецептор апоптоза (СД-95), так если до лечения этот рецептор выявлялся на 12,8% клеток, то после лечения на 9,1% клеток, т.е. практически на 30% снизилось количество лимфоцитов, способных к апоптозу. Изменилась под влиянием МНФК и функциональная активность клеток, так если до лечения бласттрансформирующая способность лимфоцитов составляла 55,5%, то после лечения она увеличивалась до 57,5%. Наряду с увеличением функциональной активности Т-лимфоцитов увеличивалась и активность моноцитарных клеток, что выявлялось в тесте РБТЛ(реакция бласттрансформации лимфоцитов) с индометацином, где отмечалась стимуляция с 60,0% до 76%. В то же время функциональная активность В-лимфоцитов в тесте РБТЛ несколько снизилась, что проявлялось снижением процента бласттрансформации на 3-5%. Стимулирующее влияние МНФК оказывал на усиление цитотоксической активности лимфоцитов, увеличивал спонтанную антителозависимую цитотоксичность на 10-15%, хотя фагоцитарная активность лейкоцитов, выявлялась в тесте НСТ, не изменялась. Показательным есть изменение уровня иммунных комплексов, количество которых в 3-4 раза увеличено по сравнению с нормой у больных с гепатитом С, после лечения отмечается снижение уровня иммунных комплексов на 30-40%, хотя полного возвращения к норме через 1 месяц не отмечено, но отмечается дальнейшее снижение при следующем контроле.
Уменьшение содержания уровня иммуноглобулинов класса M,A,G не происходило в процессе лечения. Следовательно, можно отметить, что применение МНФК приводит к активации противовирусного иммунитета за счет увеличения уровня СД-8 цитотоксических и интерферонпродуцирующих клеток, увеличение цитотоксической активности клеток и увеличение функциональной активности Т-лимфоцитов и моноцитов. Система В-лимфоцитов у больных с гепатитом С в процессе лечения практически не изменялся. К положительному эффекту применения МНФК можно отнести также снижение уровня иммунных комплексов в крови, что можно связать как с активацией системы тканевых лимфоцитов, так и с увеличением детоксицирующей функции клеток печени, в т.ч. печеночных клеток РЭС.(ретикулоэндотелиальной системы) У больных с гепатитом В также отмечалось направленное иммуномодулирующее действие МНФК, что проявлялось в снижении уровня Т-лимфоцитов (СД-3) в крови с 57,2% до 45,2% через 1,5 месяца от начала курса и снижение СД-8 лимфоцитов с 29,0% до 19,5%. В то же время увеличивалось содержание В-лимфоцитов с 8,4% до 10,3%. Важно отметить, что содержание СД-95+ лимфоцитов снижалось с 18,4% до 13,3% в крови, что отмечено в группе больных с гепатитом С. Функциональная активность лимфоцитов в тесте РБТЛ, которая была выше нормы до лечения и в процессе лечения нормализовалась. Стимулирующее действие МНФК оказывал на цитотоксическую активность лимфоцитов, которая увеличивалась после лечения. Также увеличивалась и фагоцитарная активность нейтрофилов в тесте с НСТ. Не выявлено существенного влияния МНФК на уровень иммуноглобулинов, но нужно отметить, что уровень иммуноглобулина А увеличивался, а иммуноглобулина М снижался в процессе лечения. Следовательно, у больных с гепатитом В отмечается в процессе применения МНФК нормализация функциональной активности лимфоцитов, снижение гиперпродукции Т-лимфоцитов и увеличение цитотоксической и фагоцитарной активности иммунокомпетентных клеток. У больных с аутоиммунным гепатитом также в процессе применения МНФК происходило снижение повышенных показателей иммунной системы, в частности снижалось содержание СД-4 лимфоцитов с 42,0% до 26,2% в крови, в то же время увеличивалось содержание СД-8 лимфоцитов с 21,3% до 27,3%. Отмечается также снижение уровня СД-95+ лимфоцитов, которые играют подготовительную роль к апоптозу. Число таких клеток снизилось с 25,2% до 17,5%. После применения МНФК также в предыдущей группе снизилась пролиферативная активность лимфоцитов, в то же время увеличилась цитотоксическая, противовирусная активность. Уровень иммуноглобулинов и фагоцитарная активность практически не изменялась, хотя имеется тенденция к стимуляции синтеза иммуноглобулина А и снижение уровня иммуноглобулина М. Уровень иммунных комплексов снизился в этой группе больных на 50% в процессе лечения. Суммируя полученные практические результаты, можно сделать заключение, что МНФК является активным иммунотропным средством, способным оказывать направленное действие на иммунную систему у больных с различными формами гепатитов. Установлено, что МНФК способен как стимулировать, та и угнетать продукцию отдельных субпопуляций Т-клеток, в частности на СД-4+ субпопуляцию Т-хелперов. МНФК оказывает угнетающее действие если уровень этих клеток свыше 40% и не влияет при сравнительно низком содержании. В то же время на субпопуляцию СД-8 лимфоцитов Т-супрессоров, чаще повышает их содержание. МНФК в большинстве случаев стимулировал цитотоксическую активность лимфоцитов и в то же время вызывал снижение пролиферативной активности Т-лимфоцитов на стандартный ФГА(фитогенаглютинирующий антиген)-митоген. Особенно заметно изменилась апоптическая готовность лимфоцитов, что проявлялось в 30-50% сниженных в крови лимфоцитов, экспрессирующих Fas-рецептор апоптоза в процессе лечения. ВЫВОДЫ ● Прием МНФК в течение 2,0 месяцев приводил к снижению уровня иммунных комплексов в крови у большинства больных. Отмечено, что он также оказывал различное действие на показатели иммунной системы у больных с различными формами гепатита. Так, у больных с гепатитом С отмечено больше стимулирующее действие препарата, тогда как у больных с аутоиммунным и гепатитом В больше проявлялось противовоспалительное иммуносупрессивное действие, что диктует необходимость исследования вместе данного препарата на отдельные формы гепатита, что связано, возможно, с особенностями патогенеза этих форм гепатитов. ● Применение МНФК у больных с гепатитом различной этиологии показано и приводит к направленному воздействию на иммунную систему больных. Литература 1. Гашкова В., Мате И, Кашлик И. и соавт. Циркулирующие иммунные комплексы антиген-антитело у больных с иммунокомплексными заболеваниями и при трансплантации почек //Чехословацкая медицина.-1978,№2.-С.117-122.
^ МНФК «ГРІНІЗАЦІЯ» Лисяний М.І., Печінка А.М., Потапова А.І. Резюме. У хворих з гепатитом В відмічається при застосуванні мультинутрієнтної функціонально-пептидної композиції (МНФК) Грінізації нормалізація функціональної активності лімфоцитів, зниження гіперпродукції Т-лімфоцитів і збільшення цитотоксичної та фагоцитарної активності імунокомпетентних клітин. Особливо помітно змінилася апоптична готовність лімфоцитів, що проявлялось в зниженні на 30-50% в крові лімфоцитів, що експресують Fas-рецептор апоптоза в процесі лікування. В процесі лікування різних форм гепатиту відмічені різні впливи препаратів Грінізації на імунну систему, так у хворих з гепатитом С відмічена більше стимулююча дія препарату, тоді як у хворих з аутоімуним і гепатитом В більше виявлялася протизапальна імуносупресивна дія. Застосування МНФК Грінізація у хворих з гепатитом різної етіології показано і приводить до направленої дії на імунну систему хворих. Ключові слова: гепатит, лімфоцити, апоптоз. ^ MNFK «GRINIZATION» Lisanyi N.I., Pechinka A.М., Potapova А.I. Summary. At patients with hepatitis In normalization of functional activity of limfotsitov, decline of hyperproducts of T-limfotsitov and multiplying tsitotoksicheskoy and fagotsitarnoy activity of immunokompetentnykh cages, is marked in the process of application of multinutrient functional peptide complexes (MNFK). Apopticheskaya readiness of limfotsitov changed especially notedly, that showed up in 30-50% limfotsitov ekspressiruyuschikh Fas-receptor of apoptoza reduced in blood in the process of treatment. In the process of treatment of different forms of hepatitis different influences of preparations of Grinizatsii are marked on the immune system, so at patients with hepatitis With the anymore stimulant action of preparation is marked, while at patients with autoimmunnym and by hepatitis in a protivovospalitel'noe immunosupressivnoe action showed up anymore. Application of MNFK Grinization at patients with hepatitis of different etiology are shown and results in the directed affecting immune system sick Key words: hepatitis, limfotsititis, apoptoz. |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям