Морфофункциональные особенности пульпы и дентиногенеза в условиях травматического периодонтита 03. 03. 04 Клеточная биология, цитология, гистология 14. 01. 14 Стоматология
|
|
Скачать 359.9 Kb.
|
|
На правах рукописи БЕЗНОСИК ВАЛЕНТИНА НИКОЛАЕВНА МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ПУЛЬПЫ И ДЕНТИНОГЕНЕЗА В УСЛОВИЯХ ТРАВМАТИЧЕСКОГО ПЕРИОДОНТИТА 03.03.04 – Клеточная биология, цитология, гистология 14.01.14 – Стоматология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Оренбург– 2010 Работа выполнена в ГОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» ^ Заслуженный деятель науки РФ, доктор биологических наук, профессор Стадников Александр Абрамович Заслуженный врач РФ, доктор медицинских наук, профессор ^ Официальные оппоненты: Доктор медицинских наук, профессор Брюхин Геннадий Васильевич Заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор ^ Ведущая организация: ГОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» Защита состоится « __ » марта 2010 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 208.066.04 при ГОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу: 460000, Россия, Оренбург, ул. Советская, д. 6, зал заседаний диссертационного совета. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «ОрГМА Росздрава» Автореферат разослан « __ » февраля 2010 г. Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук, профессор Н.Н. Шевлюк ВВЕДЕНИЕ ^ Актуальность данной темы обусловлена ростом стоматологической заболеваемости населения России, особенно в условиях, когда происходят изменения экологической среды, возрастание антропогенной нагрузки, особенности питания, водоснабжения, профессиональных факторов, образа жизни человека (Леонтьев В.К. с соавт., 2006; Киселёва E.A. с соавт., 2009). В терапевтической стоматологии проблема успешного лечения пульпита и периодонтита все еще остается важной и до конца нерешенной. Статистические анализы и отчеты показывают, что посещаемость пациентов по поводу пульпита и периодонтита составляла 35% от всех посещений. (Боровский Е.В., 1998; Максимовский Ю.М., 2001). По данным ВОЗ периодонтит является самой частой причиной потери зубов. Результаты исследований в странах СНГ (Россия, Украина, Белоруссия, Казахстан) показали, что болезни периодонта охватывают 99,8— 100% взрослого населения и имеют устойчивую тенденцию возрастного увеличения. Значительная распространенность периодонтита, большой процент неудач и осложнений при его лечении, сложность и трудоемкость врачебных манипуляций, а также частое отсутствие стабильности результатов, полученных при использовании традиционных методов лечения, объясняет несомненную актуальность проблемы лечения данного заболевания и постоянного поиска новых медикаментозных средств и методов лечения. Следует отметить, что зубы с признаками поражения пульпы зуба и периодонта очень часто являются причиной одонтогенных воспалительных процессов (Шаргородский А.Г., 1990; Пак А.Н., 1991; Боровский Е.В. с соавт., 1998; Гречишников В.В., 2000; Соловьева А.М.,2000; Максимовский Ю.М., 2001; Артюшкевич А.С. с соавт., 2006; Ашмарин А.Н, 2007). На современном этапе предложено большое количество вариантов консервативной терапии, в том числе и при повторном лечении хронических форм периодонтита (Шухорова Ю.А., 2008), однако высокий процент рецидивов и осложнений требует дальнейшего изучения, разработки и совершенствования методов лечения этой патологии (Иорданишвили А.К., 2008; Kvist T., 2004). Остается открытым вопрос о применении антибактериальных препаратов различных групп для лечения периодонтита. Эмпирическое и безосновательное назначение антибиотиков больным нередко бывает не эффективно и способствует развитию резистентности к ним микроорганизмов. (Барер Г.М. с соавт., 1996; Купреева И.В., 1993; Dorfer C.E. et al.,2001). Возможность сохранения зуба (корня зуба) и, естественно, функционального единства всего зубного ряда является одной из важных проблем стоматологии. В связи с этим вызывает интерес работы по применению гипоталамического нонапептида (окситоцина) для оптимизации репаративных гистогенезов различных тканей. К настоящему времени достаточно аргументированно сформулирована концепция о существенной роли гипоталамических нонапептидов в регуляции процессов пролиферации, роста, дифференцировки и функциональной специализации тканей различного генеза (Поленов А.Л., 1994; Курлаев П.П., 1985; Стадников А.А., 1999, 2001, 2005; Курлаев П.П. с соавт., 2000; Барков В.Н., 2004; Стадников Б.А., 1999, 2005; Stadnikov А. et al, 1997). Вместе с тем влияние окситоцина на репаративные процессы мягких и твердых тканей зуба и окружающих его тканей с параллельной оценкой морфофункционального состояния нонапептидэргической нейросекреторной системы гипоталамуса практически не исследованы. Все вышеизложенное определило цель и задачи настоящего исследования. ^ Цель работы – установить морфофункциональные особенности пульпы и дентиногенеза в условиях травматического периодонтита и экспериментально - гистологически обосновать целесообразность применения окситоцина в лечении периодонтита. Для достижения поставленной цели решены следующие задачи: 1. Выявить морфофункциональные изменения в тканях пульпы зубов, а также состояние периодонта и гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системы (ГГНС) при заживлении раневого дефекта в условиях экспериментальной модели травматического периодонтита без инфицирования и при дополнительном инфицировании S. аureus. 2. Экспериментально — гистологически оценить влияние окситоцина на процессы регенерации тканей периодонта и пульпы зубов в эксперименте. 3. В сравнительном аспекте проанализировать влияние антибиотика (линкомицина), а также данного антибиотика в сочетании с окситоцином на воспалительный процесс в периодонте в условиях экспериментального травматического периодонтита, в том числе и при дополнительном инфицировании S. аureus. ^ 1. Впервые с использованием методов световой и электронной микроскопии, гистохимии и морфометрии с последующим статистическим анализом количественных данных выявлены морфофункциональные особенности пульпы, дентиногенеза и периодонта в условиях травматического периодонтита. 2. Получены новые факты, свидетельствующие о том, что разбалансировка секреторного процесса нонапептидергических нейросекреторных центров гипоталамуса существенно лимитирует репаративный гистогенез пульпы, дентина и тканей периодонта. 3. Экспериментально -гистологически доказана адаптогенная и оптимизирующая роль окситоцина в реализации структурами периодонта, пульпы и дентина своих репаративных возможностей. 4. Экспериментально подтверждено, что окситоцин обладает антибиотическим действием и способностью оказывать выраженное синергидное действие на антибиотики (в частности линкомицин), проявляющие свое негативное воздействие на S.аureus, а также активизирующее влияние на фагоцитарную активность макрофагов. ВНЕДРЕНИЕ Результаты диссертационной работы внедрены в учебный процесс на кафедрах гистологии, цитологии и эмбриологии; стоматологии и челюстно — лицевой хирургии Оренбургской государственной медицинской академии, а также используются в НИР ПНИЛ «Нейросекреторная регуляция взаимодействия про- и эукариот» Оренбургского филиала ЮУНЦ РАМН. ^ Экспериментально - гистологически обоснована целесообразность использования окситоцина, в том числе в сочетании с антибиотиком для лечения пульпита, периодонтита и их гнойных осложнений. Окситоцин коррегирует и оптимизирует репаративные процессы в твердых и мягких тканях зуба, что открывает новые перспективы в изучении роли нейроэндокринной регуляции взаимодействий про- и эукариот в условиях инфицирования тканей челюстно-лицевой области. ^ 1. Усугубляющими факторами в развитии посттравматического пульпита и периодонтита (по критериям светооптического и ультраструктурного анализа пульпы, дентина, тканей периодонта) являются: разбалансировка секреторного процесса крупноклеточных ядер гипоталамуса, блокировка высвобождения нейросекрета, высокий персистентный потенциал бактериальных патогенов. 2. Применение окситоцина включает механизм эффективного антибактериального воздействия антибиотика. 3. Местное введение окситоцина, в том числе и в сочетании с антибиотиком, коррегирует нарушенный клеточный гомеостаз в очагах периодонтита, стимулирует остео- и дентиногенез, что создает условия для отграничения некротических структур в инфицированных условиях. ^ Результаты диссертационной работы доложены и обсуждены на: Научной конференции, посвященной 75 – летию со дня основания кафедры стоматологии Ленинградского института усовершенствования врачей (Санкт-Петербург, 2004); 7–й Всероссийской научной конференции «Нейроэндокринологии – 2005» (Санкт-Петербург, 2005); Научно – практической конференции хирургов, посвященной 100-летию со дня рождения профессора С.П. Вилесова (Оренбург, 2005); Научно – практической конференции врачей Приволжско-Уральского военного округа (Оренбург, 2006, 2007); Научном совещании ВМА «Актуальные проблемы учения о тканях» (Санкт-Петербург, 2006); 8-м Конгресе Международной ассоциации морфологов (Орел, 2006); Научной конференции, посвященной 70-летию Тверской государственной медицинской академии (Тверь, 2006); 12-й и 13-й Международной конференции челюстно-лицевых хирургов (Санкт-Петербург, 2007, 2008); Всероссийской научной конференции, посвященной памяти члена-корреспондента АМН СССР, профессора Ф.М. Лазаренко (Оренбург, 2008); X Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы военной и практической медицины» (Оренбург, 2009). По теме диссертации опубликовано 15 научных работ, из которых четыре в изданиях рекомендованных ВАК РФ. ^ Диссертация изложена на 147 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, главы результатов собственных исследований, их обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа содержит 6 таблиц и 33 рисунка. Список литературы содержит 309 источников, включающего 219 отечественных и 90 иностранных работ. ^ Экспериментальные исследования проведены на 96 половозрелых белых беспородных крысах - самцах массой 220-250 г. Все животные содержались в стандартных условиях вивария на полноценной диете и были одного возраста. Под эфирным рауш-наркозом с соблюдением правил асептики и антисептики всем животным создавали модель травматического периодонтита моляров нижней челюсти. Для этого с помощью бормашины шаровидным бором диаметром 2 мм в альвеолярном отростке нижней челюсти в проекции верхушек корней зубов высверливали отверстия с повреждением периодонта и цемента зубов. Было проведено восемь серий опытов (каждая по 12 животных). В первой серии (контрольная) проводилось наблюдение животных с экспериментальной моделью травматического периодонтита без дополнительного инфицирования и введения в область травмы антибиотика и окситоцина. Во второй серии опытов при создании модели травматического периодонтита в область раны вводился антибиотик линкомицин (ОАО «Дальхимфарм») 30% по 0,2 мл, а также в той же дозе через 1,3,5 и 7 суток после операции. В третьей серии опытов в область раны вводили окситоцин (Гедеон Рихтер А.О., Венгрия) тонкой иглой с помощью инъекционного шприца в разовой дозе 1 МЕ во время операции и через 1, 3, 5, 7 суток после операции. В четвертой серии опытов при создании модели травматического периодонтита в область раны вводили окситоцин в разовой дозе 1 МЕ и линкомицин 30% по 0,2 мл во время операции и в 1, 3, 5, 7 сутки после операции в вышеуказанных дозах. В пятой серии опытов в область раны капельно вводили взвесь S.aureus (штамм 209Р) в дозе 3×109 микробных тел в 1 мл изотонического раствора хлорида натрия с помощью шприца с тупой иглой (Левенец А.А., Шувалов С.М., Поляков А.В., 1989). В шестой серии опытов в дополнительно инфицированную стафилококком S.aureus область модели травматического периодонтита вводили линкомицин 30% по 0,2 мл и в той же дозе на 1,3,5 и 7 сутки после операции. В седьмой серии опытов в область создаваемого дефекта, дополнительно инфицированного золотистым стафилококком в вышеуказанной дозе, инъекционно вводили окситоцин в дозе 1 МЕ во время операции и через 1, 3, 5, 7 суток после неё. В восьмой серии опытов при создании модели травматического периодонтита область раны дополнительно инфицировали стафилококком S.аureus и вводили окситоцин в дозе 1 МЕ и линкомицин (30% по 0,2мл). В дальнейшем подводился окситоцин в сочетании с антибиотиком в вышеуказанных дозах на 1,3,5 и 7 сутки после операции. Животные выводились из опыта путем ингаляции летальной дозы эфира на 3, 5, 10, 30 сутки (по 3 особи в каждой серии). При проведении экспериментов соблюдался Федеральный закон принятый Государственной Думой 1 декабря 1999 г. «О защите животных от жестокого обращения», а также «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных» согласно приказу МЗ СССР №755 от 12.08.1987г. С использованием методов световой и электронной микроскопии, иммуноцитохимии и морфометрии исследовали ткани зуба, прилежащую область периодонта, паравентрикулярные и супраоптические ядра гипоталамуса, нейрогипофиз. Для светооптических исследований материал фиксировали в 10% водном растворе нейтрального формалина, спирт-формоле, жидкости Буэна, обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации и заливали целлоидин-парафином. Приготовление серийных срезов толщиной 5-6 мкм осуществляли на ротационном микротоме МПС-2. Депарафинированные срезы окрашивали гематоксилином Майера и эозином. Идентифицировали гликозаминогликаны – толуидиновым синим при значении рН 2,7-3,0, рибонуклеопротеиды – метиленовым зеленым и пиронином «G» по Браше. Гликоген и нейтральные мукополисахариды (гликопротеиды) определяли с помощью перйодат-Шифф реакции по Мак-Манусу. Гистохимические реакции сопровождались соответствующими ферментативными контролями (Э. Пирс, 1962). Для электронномикроскопических исследований материал фиксировали при +4˚С в 2,5%-м растворе глютарового альдегида на S-коллединовом буфере (рН 7,2-7,4). Постфиксацию проводили в четырехокиси осмия по прописи G. Millonig (1961). Материал обезвоживали при комнатной температуре в ацетоне возрастающей концентрации и помещали в смолу ЭПОН-812. Полимеризацию объектов проводили при +60º С в течение 2 суток. С каждого блока на ультратоме LKB-5 (Sweden-Bromma) получали полутонкие (1мкм) и ультратонкие (40-60 нм) срезы. Полутонкие срезы окрашивали метиленовым синим и основным фуксином по прописи Sato М. et Shamoto Е. (1973). Полутонкие срезы использовали при подготовке блоков к заточке перед изготовлением ультратонких срезов, а также для анализа тканей и клеточной организации на световом уровне. Ультратонкие срезы подвергали двойному контрастированию насыщенным спиртовым раствором уранилацетата при температуре +37˚С в течение 20 минут и цитрате свинца по Reynolds (1963). Срезы изучали на электронном микроскопе ЭМВ 100АК, фотографирование структур проводили при увеличении от ×5400 до ×40000. Морфометрическое исследование выполняли на препаратах с использованием стандартной окулярной сетки Автандилова Г.Г. (1990), а также винтового окуляр-микрометра МОВ-1-15xУ4,2. Для идентификации клеток с признаками апоптоза применяли иммуноцитохимические реакции с моноклональными антителами: на определение экспрессии проапоптотического белка р 53, антиапоптотического белка bcl-2 и на выявление интрануклеосомной фрагментации ДНК (Apoptaq). Исследование проводили на серийных парафиновых срезах, используя наборы реактивов фирм “Dако” (Дания) и “Intergen” (Канада). Докрашивание ядер проводили 0,5% раствором метиленового зеленого на 0,1 М ацетоновом буфере. Полученные количественные результаты исследования статистически оценивали по t-критерию Стьюдента, используя коммерческую программу Microsoft Excel 5.0. Данные представлены в виде среднего арифметического по результатам каждого раздела работы ± стандартные отклонения. Достоверными считались отличия при р ≤ 0,05 (95%). ^ ОБСУЖДЕНИЕ Несмотря на значительное число работ, посвященных вопросам этиологии, патогенеза, методам лечебной коррекции раневых инфицированных процессов, остается много невыясненного во взаимоотношениях в системе микроб – макроорганизм. Инфекционно-септические осложнения, вызываемые различными патогенами, в том числе и условно-патогенными микроорганизмами, до сих пор остаются основной и нерешенной проблемой клиники (Стадников А.А., 2001). Учитывая вышесказанное, мы осуществили моделирование травматического периодонтита у экспериментальных животных. При этом экспериментальная модель в области моляров нижней челюсти крысы, фенотипически соответствовала морфологической структуре реального травматического периодонтита, что доказано нами на светооптическом и ультраструктурном уровнях. Выбирая штаммы микроорганизмов для инфицирования травмы, мы учитывали, что стафилококки принадлежат к наиболее ”популярным” объектам медицинской практики, которые являются симбионтами человека и животных (Бухарин О.В. 1999; Маянский А.Н., 1999). Почти все медицинские проблемы связаны с золотистым стафилококком (S.aureus), который наделен многими атрибутами патогенности. Мы полагали, что S.aureus является наиболее вероятным источником инфицирования создаваемой нами травмы в зубочелюстной области, что и привело к гнойно-некротическому процессу в периодонте и пульпе. Таким образом, по состоянию реактивности периодонта, пульпы и дентиногенеза мы могли судить о течении воспалительного процесса в зубочелюстном аппарате. Экспериментально сформированная нами модель периодонтита обеспечила изучение состояния микроциркуляции и транскапиллярного обмена, гисто - и органотипических изменений, происходящих в зоне дефекта, а также в окружающих тканях. Кроме того, это позволило исследовать влияние воспалительного процесса в периодонте на пульпу и дентиногенез в молярах находящихся в зоне периодонтита. В своей совокупности обнаруженные нами процессы характеризовались как деструктивно-воспалительные с глубокими деструктивными изменениями тканей зуба и периодонта. В контрольной серии животных воспалительный процесс в пульпе зуба и периодонте протекал типично так, как это описано в литературе (Иванов B.C. с соавт., 2003; Лукиных Л.М. с соавт., 2004). По периферии раны в зоне действия травматического фактора развивалась первичная альтерация, которая характеризовалась повреждением клеточных элементов тканей. Отмечено повышенное содержание нейтрофильных лейкоцитов, моноцитов, макрофагов, лимфоцитов, фибробластов, а также экссудативной жидкости, проникшей через сосуды периодонта. В начальной стадии воспалительной реакции, вследствие вовлечения в процесс клеток крови и соединительной ткани, вокруг зоны деструкции наблюдался, так называемый, лейкоцитарный вал, наибольшую квоту в котором составляли полиморфноядерные лейкоциты (ПЯЛ), особенно нейтрофилы. Гранулоциты (эозинофилы, базофилы, нейтрофилы) играют наиболее решающую роль, разрушают и удаляют патогенные агенты и поврежденные ткани (процесс фагоцитоза). На стадии 3 суток в результате вторичной альтерации воспалительный процесс распространился по периодонту и затронул альвеолярную кость, цемент и пульпу зуба. В зоне деструкции находились сгустки крови, в которых обнаруживались частицы разрушенных колагеновых волокон, цемента, альвеолярной кости и дентина, а также отмечалось развитие малодифференцированной соединительной ткани в виде отдельных мелких очагов. В зоне вторичной альтерации присутствовало умеренное число лейкоцитов (гранулоцитов и лимфоцитов). На стадии 10 суток в зоне воспаления в периодонте и альвеолярной кости образовались фиброзные тканевые структуры. Количество макрофагов существенно снизилось. В пульпе моляров, в области экспериментальной деструкции периодонта и цемента не инфицированных животных, развивался пульпит. Венулы и капилляры расширились. Кровоток усилен, наблюдалось сгущение крови, повысилась ее свертываемость и тромбообразование. При этом четко прослеживались три основных компонента воспаления: альтерация, экссудация, пролиферация. Отмечено повреждение субклеточных структур преодонтобластов, одонтобластов, фибробластов, в частности митохондрий в них. Повреждение митохондрий вызвало понижение окислительно – восстановительных процессов в клетках, а повреждение лизосомальных мембран и цитоплазмы вызвало выброс гидролитических ферментов, ферментов гликолиза, липолиза. В тканях пульпы появился серозный экссудат, что свидетельствовало о развитии выраженного экссудативного компонента воспаления. Наблюдались нарушения в системе микроциркуляции, мелкие кровоизлияния. Произошла дезорганизация одонтобластов, их вакуолизация и кариопикноз. В зоне воспаления находилось значительное количество полиморфноядерных лейкоцитов, лимфоцитов, моноцитарных макрофагов, реактивно измененных фибробластов. Одонтобласты продуцировали иррегулярный дентин в незначительном количестве, отложившийся на внутренней поверхности стенки корня зуба. Такая реакция со стороны одонтобластов, по-видимому, началась в начальной стадии деструкции, по типу кариозной (Дмитриева Л.А., 1993; Болоткин В.П.с совт., 2000; Лукиных Л.М. с соавт., 2002; Иванов В.С. с соавт.,2003). Заместительный дентин (необызвестленный предентин) отличался от нормального дентина своей структурой, канальцы которого располагались менее правильно или вообще отсутствовали. Следует особо подчеркнуть, что на стадии 5 суток в пульпе в зоне воспаления образуются фиброзные тканевые структуры, что свидетельствовало о переходе воспалительного процесса в хроническую фазу. Воспалительный процесс развивался и в альвеолярной части десны. В соединительной ткани произошли явления мукоидного и фибринозного набухания, возникли васкулиты. В костной ткани пародонта обнаружились признаки резорбции (пазушный и лакунарный) за счет активизации остеокластов. Этот процесс начинался в области гребня зубных лунок, что к 10 суткам развития пародонтита привело к его горизонтальному и вертикальному разрушению. Отмечена и резорбция цемента с формированием цементных и цементодентинных ниш. Гистологический анализ исследованных тканей периодонта и пульпы у животных (дополнительно неинфицированных) показал, что в целом морфологические изменения полностью укладывались в картину традиционного течения пульпита и периодонтита (альтерация тканей, экссудация, пролиферация). При детальном светооптическом и ультраструктурном исследовании идентифицированы пять различных типов гисто - и цитограмм воспалительного процесса: некротический, дегенеративно-воспалительный, воспалительный, воспалительно-регенераторный и регенераторный. Наиболее выраженными были два первых типа (табл. 1). Таблица 1 - Гистологическая и цитологическая характеристика реактивных изменений пульпы зуба у экспериментальных животных (без дополнительного инфицирования)
Примечание: Число экспериментальных животных – 3 в каждом опыте *Окулярная вставка 25 мм,2 об. 90, ок. 10 В общем плане процесс в области деструкции периодонта развертывался преимущественно по некротическому и дегенеративно-воспалительному типам, что подтверждается обнаружением в препаратах значительных участков некротизированных тканей, большого числа нейтрофилов, находящихся в состоянии дегенерации и деструкции (кариопикноза, кариолизиса) и цитолиза. Признаки фагоцитарной активности сохраненных нейтрофилов носили преимущественно незавершенный характер. Экссудативный компонент воспаления на стадии 3 суток наблюдения не сопровождался адекватной мобилизацией к репродуктивной активности периодонтальных структур. Тем не менее, мы констатируем, что в данные ранние сроки наблюдения регенера торные потенции тканевых структур лимитированы в своем проявлении. В пятой серии опытов (дополнительно инфицированные животные без введения окситоцина и антибиотика) через 3, 5 суток эксперимента отмечались обширные участки деполимеризованного основного вещества с изменением его структуры (пустоты чередуются с плотными участками), появился серозный экссудат. В системе микроциркуляции имелись кровоизлияния. Увеличена проницаемость посткапиллярных венул, в расширенных сосудах с набухшим эндотелием имелось краевое стояние лейкоцитов и тромбоцитов, в некоторых местах развивался некроз. Возросло содержание гранулоцитов, лимфоцитов, макрофагов и плазматических клеток. В пульпе наблюдалась дезорганизация слоя одонтобластов и их частичная гибель. Ядра одонтобластов смещены в сторону отростков, отмечены набухания митохондрий, просветление их матрикса, дезорганизация юрист. К 10 -30 суткам наблюдения отмечена гибель пульпы и периодонта. Как в пульпе, так и в периодонте в большом количестве встречались лимфоциты, макрофаги, некротизированные эпителиоциты, фибробласты, гландулоциты. Указанные клеточные элементы подвергались активному цитолизу, обусловленному воздействием на ткани протеолитических ферментов, выделяющихся из нейтрофилов, а также из лизосом разрушающихся клеток. Кроме того в периодонте отмечена деструкция коллагеновых волокон. Периодонтальная щель значительно расширилась. Воспалительный процесс развивался и в альвеолярной части десны. В соединительной ткани произошли явления мукоидного и фибринозного набухания, возникли васкулиты. В итоге зубо – десневые соединения, а затем и циркулярная связка зуба разрушились с формированием выраженного зубодесневого кармана. Гистологический анализ исследованных тканей пульпы и периодонта дополнительно инфицированных животных показал усугубляющие особенности течения воспаления в этих условиях (табл. 2). Таблица 2 - Гистологическая и цитологическая характеристика реактивных изменений пульпы зуба у экспериментальных животных (в условиях дополнительного инфицирования)
Примечание: Число экспериментальных животных – 3 в каждом опыте *Окулярная вставка 25 мм,2 об. 90, ок. 10 Обобщая наблюдения в серии с дополнительным инфицированием, но без лечебного воздействия, можно констатировать, что инфекционный процесс в зоне деструкции периодонта (вследствие мощного воздействия антигенов – 3×109 микробных тел в 1 мл изотонического раствора хлорида натрия) нарушил равновесие между микробами и защитными силами как региональными, так и макроорганизма в пользу микроорганизмов, что по своей сути определило уклонения в гомеостазе про- и эукариот. Создаются условия развития инфекционного процесса, приведшего к выраженному распространению микробных агентов вглубь жизнеспособных тканей периодонта, пульпы и альвеолярной кости. При исследовании пульпита и травматического периодонтита при неосложненной и дополнительно неинфицированной ситуации, в варианте лечебной коррекции (рана+антибиотик - линкомицин) отмечено, что характер морфологических изменений в моделируемых условиях был таким же, как и в рассмотренной серии без лечебной коррекции, однако менее интенсивный (табл.1, 2). Использование нами в качестве лечебного средства линкомицина создало некоторые условия для адекватной (однако еще лимитированной) реализации биологических свойств нейтрофилами, клетками фибробластического дифферона и важнейшими элементами, организующими поле воспаления - макрофагами. Следует отметить, что введение антибиотика в область деструкции периодонта не приводило, в сравнении с контрольной серией, к достоверной активизации репродукции исследованных клеток. В процессе эксперимента мы детально исследовали нейросекреторные клетки супраоптических и паравентрикулярных ядер гипоталамуса. Была достоверно выявлена реакция гипоталамуса на происшедшие деструктивные изменения в зубочелюстном аппарате. Наши исследования обнаружили стадийный характер структурно – функциональных изменений нейросекреторных клеток супраоптических и паравентрикулярных ядер гипоталамуса крыс. В ранние сроки опыта (3 сутки) объем ядер «светлых» (функциональноактивных клеток) супраоптических и паравентрикулярных ядер гипоталамуса, а также объем их ядрышек снижался. Через 5 - 10 суток объем ядер и ядрышек возрос. К 30-м суткам наметилась тенденция к возврату данных показателей к таковым, наблюдаемым у контрольной серии крыс. В большей степени это наблюдалось в супраоптических ядрах и у неинфицированных животных. Это обстоятельство можно расценить, как показатель рассинхронизации фаз секретороного цикла нейросекреторных клеток. Ультраструктурный анализ нейросекреторных клеток исследованных гипоталамических ядер у неинфицированных крыс показал их состояние умеренной активности (табл. 3). В условиях дополнительно инфицированного периодонтита большинство нейросекреторных клеток гипоталамуса пребывают в состоянии длительной гиперсекреции и истощения (особенно на 10 – 30 сутки эксперимента) (табл. 4). Обобщая полученные данные наших исследований нейросекреторных клеток крупных ядер гипоталамуса, мы полагаем, что реализация тканями пульпы и периодонта их потенций в значительной мере обусловлена изменениями гипоталамической нейросекреции. Известно, что диапазон гисто- и органобластических потенций, развитие манифестных признаков компенсаторных и приспособительных возможностей тканей строго коррелируются с высокой функциональной активностью нонапептидергических нейросекреторных центров гипоталамуса и зависят от нее (Стадников А.А., 1999, 2001; Барков В.Н., 2004; Стадников Б.А., 2005). Предпринятое нами экзогенное введение окситоцина приводило к уменьшению выраженности воспалительно-некротических изменений всего комплекса поврежденных тканей. При этом площадь повреждения исследуемых гистологических структур зуба и периодонтальных тканей уменьшилась на 56,7% – 68,9% (соответственно на 3, 5, 10, 30 сутки). Таблица 3 - Морфометрические показатели нейросекреторных клеток (”светлых”) супраоптических ядер гипоталамуса крысы, (мкм3) Интактные животные: Объем ядра 288,6 ± 6,3 Объем ядрышка 22,1±1,1
Примечание: окулярная вставка 25 мм,2 об. 90, ок. 10 Таблица 4 - Морфометрические показатели нейросекреторных клеток (”светлых”) паравентрикулярных ядер гипоталамуса крысы, (мкм3) Интактные животные: Объем ядра 301,1 ± 8,1 Объем ядрышка 25,1 ± 2,2
Примечание: окулярная вставка 25 мм,2 об. 90, ок. 10 Окситоцин обладает антибиотическим действием и способностью оказывать выраженное синергидное действие на антибиотики (в частности линкомицин), проявляющие свое губительное воздействие на S.aureus, а также существенно влияние на фагоцитарную активность моноцитов. Это в условиях in vitro доказано О.В. Бухариным с соавт. (1981) в отношении грамположительных микроорганизмов и в меньшей степени - грамотрицательных бактерий. Исследуя биопрепараты тканей пульпы и периодонта, где применялся окситоцин, мы получили существенные морфологические отличия в характере протекания воспалительного процесса. При этом уменьшалась выраженность некробиотических и некротических изменений в тканях. В 1,5—2 раза уменьшалось количество сладжированных гемокапилляров, а также артериол и венул с признаками микротромбозов. Одновременно усиливались регенераторные потенции одонтобластов, фибробластов, цементобластов и остеокластов. Указанный эффект был более заметен при введении окситоцина в дополнительно инфицированную область периодонта. Известно, что апоптоз является активным, генетически запрограммированным отмиранием клеток, на который могут влиять внешние повреждающие факторы. Гиперэкспрессия «апоптозных» генов усиливает гибель клеток, тогда как блокада апоптозной программы стимулирует рост и их размножение. Нами в экспериментальных условиях был определен уровень экспрессии протеинов Р53 и белков семейства bcl - 2 (табл. 5). Данные иммуноцитохимических реакций с применением моноклональных антител показали, что в условиях инфицирования S.aureus (без лечебной коррекции окситоцином) показатели экспрессии антиапоптического протеина bcl-2 у исследованных клеток пульпы (фибробласты, макрофаги, одонтобласты субодонтобластические клетки) были достоверно ниже в 1,6 – 2,2 раза, тогда как число экспрессии проапоптического гена р53 позитивных клеток существенно возросло. Экзогенное введение окситоцина (особенно в сочетании с антибиотиком) оптимизировало соотношение проапоптических клеток и клеток, готовых к пролиферации, меняя их соотношение в сторону репаративных процессов. Окситоцин повысил клеточную репродукцию эндотелиальных элементов сосудов пульпы и периодонта. Полученные нами результаты свидетельствовали, что через 5, и особенно 10 суток имел место достоверный рост митотической активности у данных клеток кровеносных сосудов. Таблица 5а - Уровень экспрессии синтеза протеинов р53 в экспериментальных условиях (в %). Стадия: 10 суток. Подсчет позитивных клеток в условных полях зрения микроскопа МБИ-15; окулярная вставка 25 мм2, об. 90, ок. 10
Таблица 5б - Уровень экспрессии синтеза протеинов bcl - 2 в экспериментальных условиях (в %). Стадия: 10 суток. Подсчет позитивных клеток в условных полях зрения микроскопа МБИ-15; окулярная вставка 25 мм2, об. 90, ок. 10
Примечание: А - антибиотик (линкомицин), О - окситоцин. Это привело к усилению васкулогенеза, особенно в зоне вторичной альтерации, где интенсивно развивалась малодифференцированная соединительная ткань с формированием новых петель гемокапилляров, ориентированных в различных плоскостях гистологического среза. Одновременно возрастала репродуктивная деятельность клеток фибробластического дифферона и адвентициальных клеток. Следует особо отметить, что при введении окситоцина существенно уменьшилась зона некротических изменений тканей, а также понизилась численность деструктивно измененных полиморфноядерных лейкоцитов ПЯЛ (во всех сериях). На смену им приходили гистиоцитарные и моноцитарные макрофаги, активно лизирующие бактерии и фрагменты поврежденных тканей, численность которых возрастала. Подобных изменений макрофагических клеток не отмечено в других сериях экспериментов. Полученные нами гистологические сведения могут свидетельствовать о том, что применение окситоцина в значительной мере усиливает процессы васкулогенеза, пролиферации эндотелиоцитов, гистиоцитов и моноцитарных макрофагов. Это, в свою очередь, привело к эффективному очищению поля воспаления в пульпе и периодонте и формированию полноценной органотипичной ткани. Улучшение трофических условий создало благоприятные условия и для репаративной регенерации тканей зубочелюстного аппарата. В сериях дополнительного инфицирования травматического периодонтита при использовании окситоцина формирование “мостиков“ дентиногенеза происходило в 41,6 ± 2,1% случаев, а при сочетании с антибиотиком в 90,6 ± 4,1% случаев (без сквозных дефектов). При экзогенном введении окситоцина на стадии 3, 5 суток наблюдалась незначительная резорбция альвеолярной кости, разрастание в зоне повреждения грануляционной соединительной ткани, активная пролиферация клеток микрососудов и усиленная миграция малодифференцированных фибробластов в эту область. На 30-е сутки вся зона повреждения альвеолярной кости заполнилась новообразованной ретикулофиброзной костной тканью с признаками начинающейся трансформации костного регенерата, выражающейся в появлении пластинчатых остеоструктур. При использовании окситоцина васкулогенез и образование грануляционной ткани происходили синхронно с репаративными процессами эпителиальных и костной тканей, что способствовало ограничению деструктивных процессов в пародонте и адекватному восстановлению его структур. Синхронизация репаративных процессов препятствовала чрезмерному разрастанию эпителия и фиброзных структур. В этих условиях отмечены признаки репарации органотипического характера. Наши экспериментально-гистологические исследования достоверно подтвердили факт эффективности применения окситоцина в лечении травматического периодонтита и зубочелюстного аппарата, которые опираются на данные, приведенные в работах Гавриленка В.Г. (2000), Дальской А.И. с соавт. (2001), Стадникова А.А. (1999, 2000, 2001), Баркова В.Н. (2004), Стадникова Б.А. (2005). Таким образом, использование окситоцина в схеме лечения травматического периодонта крыс, позволяет утверждать, что он оказывает существенное стимулирующее влияние на репаративную регенерацию пораженных тканей и существенно сокращает (почти в 2 раза) длительность лечения. Особенно наглядно демонстрируется следствие применения окситоцина в восьмой серии опытов. Результаты этих экспериментальных исследований показали правомочность подобного заключения относительно тех морфологических эффектов, которые имели место в области инфицированного травматического периодонтита крыс. Именно в серии опытов с использованием окситоцина совместно с линкомицином были получены факты, свидетельствующие об ускоряющем заживлении периодонтальных тканей, тканей пульпы и альвеолярного отростка. Воспалительный процесс в данной серии на стадии 3 – 5 суток был менее выражен, чем в сериях дополнительно неинфицированных животных. В целом данные нашего морфологического исследования, проведенного в эксперименте на крысах, получавших лечебную коррекцию окситоцином, обосновывают целесообразность включения в комплексное лечение периодонтитов окситоцина. ВЫВОДЫ 1. Проведенные экспериментально – гистологические исследования особенностей реактивности и пластичности пульпы и дентиногенеза служат объяснением возможностей моделирования травматического периодонтита, который фенотипически соответствует морфологической структуре травматического периодонтита. 2. Подтверждены предположения, что травматический периодонтит может предопределить возникновение воспалительного процесса в пульпе. 3. Установлено, что морфофункциональное состояние пульпы в контрольной серии опытов характеризовалось изменениями, характерными для картины пульпита с лимитироваными процессами дентиногенеза, а в периодонте прослеживались признаки периапикального периодонтита. 4. В серии опытов с дополнительным инфицированием S.aureus, но без введения окситоцина и линкомицина воспалительные процессы в пульпе и периодонте носили обширный угрожающий характер, что привело к гибели пульпы и периодонтальной связки. 5. Экспериментально обновлено положение о том, что окситоцин обладает антибиотическим действием и способностью оказывать выраженное синергидное действие на антибиотики (в частности линкомицин), проявляющее свое губительное воздействие на S.aureus, а также существенно влияет на фагоцитарную активность макрофагов. 6. Выявлено, что экзогенное введение окситоцина в зону деструкции (и особенно в сочетании с антибиотиком) лимитировало тяжесть и осложнения воспали тельного процесса и в условиях дополнительного инфицирования S.aureus. В связи с этим воспалительный процесс в пульпе не носил усугубляющего характера. 7. Окситоцин обеспечил адекватные условия для развития репаративных потенций клеточных элементов, стимулировал дентиногенез, оптимизировал и коррегировал процессы репаративной регенерации в тканях периодонта, альвеолярной кости и цементе зуба. 8. Получены новые сведения, касающиеся оптимизирующей роли гипоталамических нонапептидов в реализации тканями зуба и периодонта своих регенераторных возможностей, что приводит к более раннему заживлению дефектов, уменьшению воспалительно - деструктивных явлений. Это подтверждено результатами применения методов световой и электронной микроскопии, иммуноцитохимии и морфометрии. 9. Доказано, что окситоцин, как один из гипоталамических нейропептидов может рассматриваться как позитивный фактор регуляции репаративных гистогенезов при повреждениях тканей зубочелюстного аппарата. ^ Результаты проведенного исследования, углубляющие представления о позитивной роли гипоталамического нонапептида окситоцина в регуляции регенеративных гистогенезов тканей пульпы и периодонта, могут быть использованы в качестве фундаментальной основы при разработке эффективного метода лечения периодонтита в клинической стоматологии. ^ ДИССЕРТАЦИИ 1. О влиянии окситоцина на процессы регенерации твёрдых и мягких тканей зубов при экспериментальном периодонтите // Материалы конференции, посвященной 75-летию со дня основания кафедры челюстно-лицевой хирургии и стоматологии ЛИУВ – СПб., 2004. – С.19 – 20 (соавт. Стадников А.А., Барков В.Н., Матчин А.А) 2. Экспериментально – морфологическое обоснование оптимизации репаративных процессов при повреждениях тканей челюстно – лицевой области // Материалы VII Всероссийская конференция «Нейроэндокринология - 2005». Посвящается 80 – летию А.Л. Поленова (1925 – 1996). – СПб., 2005. – С.22 – 23 (соавт. Барков В.Н., Гречихина С.В., Кочкина Н.Н., Северинова С.Б.). 3. О влиянии окситоцина на ткани пери- и пародонта при одонтогенных воспалительных процессах // Материалы конференции хирургов, посвящённой 100-летию со дня рождения профессора С.П. Вилесова. - Оренбург,2005. - С.16 – 18 (соавт. Барков, В.Н., Матчин А.А. Стадников А.А.,. Гречихина С. В). 4. Структурные изменения тканей периодонта при формировании сквозного дефекта нижней челюсти в эксперименте // Сборник материалов VII Всероссийской научно – практической конференции врачей. - Оренбург, 2006. - Т.2. - С. 226 – 227 (соавт. Барков В.Н., Матчин А.А., Стадников А.А., Гречихина С.В.). 5. Реактивность и пластичность тканей пери- и пародонта в условиях острой травмы нижней челюсти (нейробиологические аспекты) // Материалы научного совещания 14 апреля 2006 года. – СПб., 2006. - С. 61 – 62 (соавт. Барков В.Н., Матчин А.А., Гречихина С.В, Северинова С.Б., Солнышков А.Н.). 6. Гипоталамические нейропептиды и посттравматический репаративный гистогенез в челюстно-лицевой области в эксперименте // Морфология. – СПб., 2006. - Т.129, №4. - С. 18 (соавт. Барков В.Н., Гречихина С.В, Кочкина Н.Н., Северинова С.Б., Матчин А.А.). 7. Регенераторные процессы в тканях зубов при верхушечном периодонтите в эксперименте под влиянием гипоталамических нонапептидов // Морфология – СПб., 2006. - Т.130, №5. - С. 29 – 30 (соавт. Стадников А.А., Барков В.Н., Матчин А А.). ^ исследование) // Морфология – СПб., 2007. - Т.131, №3. - С. 58 (соавт. Гречихина С.В., Барков В.Н., Матчин А.А.). 9. О влиянии окситоцина на течение деструктивных процесссов твердых тканей зубочелюстной системы крысы в эксперименте // Информационный архив. – Оренбург, 2007. - Том 1, №1. - С.79 - 80 (соавт.Гречихина С. В. Стадников А.А, Барков В.Н., Матчин А.А.). 10. Экспериментально – гистологическое исследование влияния окситоцина на течение репаративных и воспалительных процессов в тканях челюстно – лицевой области // Материалы Всероссийской научной конференции. - СПб., 2007. – С.19 – 20 (соавт. Барков В.Н., Гречихина С.В., Матчин А.А.). 11. Ультраструктурные и молекулярно – генетические изменения клеток периодонта при моделировании сквозного травматического дефекта нижней челюсти у крыс и экзогенного введения окситоцина // Морфология. – СПб., 2008. - Т.133, №3. - С. 23 – 24 (соавт. Гречихина С.В. Барков В.Н., Матчин А.А.). 12. Экспериментальное обоснование применения нейропептидов при моделировании травматического дефекта челюстно-лицевой области для направленной регенерации тканей // Нижегородский медицинский журнал.– Н.Новгород, 2008. - №2, Вып.2. - С. 210 – 211 (соавт. Барков В.Н., Гречихина С.В., Кочкина Н.Н., Северинова, С.Б. Стадников А.А.,. Матчин А.А). 13. Корригирующее влияние факторов нейроэндокринной регуляции на процессы в тканях челюстно-лицевой области при механическом повреждении // Материалы XIII Международной конференции челюстно-лицевых хирургов и стоматологов. – СПб., 2008. – С.34 (соавт. Барков В.Н., Стадников А.А., Гречихина С.В., Кочкина Н.Н., Северинова, С.Б., Матчин А.А). 14. О возможности прогнозирования течения репаративных процессов при травме челюстно – лицевой области в эксперименте // Информационный архив. – Оренбург, 2008. - Том 2, №4. С.162 – 163 (соавт. Барков В.Н., Гречихина С.В., Кочкина Н.Н., Северинова). 15. Изучение в эксперименте новых возможностей лечения воспалительных процессов тканей челюстно - лицевой области с использованием механизмов центральной регуляции репаративных гистогенезов // Информационный архив. – Оренбург, 2009. - Том 3, №3. - С.87 - 88. (соавт. Кочкина Н.Н., Барков В.Н., Стадников А.А., Матчин А.А.). |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям