|
|
Скачать 0.73 Mb.
|


|
^
1. Лактонная проба (предложена Г.А.Кузнецовой). Параллельно проводят контрольный опыт. Методика: 1 мл извлечения, содержащего кумарины, наливают в две пробирки. В одну добавляют 0,5 мл 10%-ного раствора натрия гидроксида. Обе пробирки нагревают на водяной бане, затем в обе прибавляют 4 мл дистиллированной воды и хорошо перемешивают. Если в пробирке, куда добавляли щелочь, раствор остался желтым и прозрачным, значит, реакция положительная, так как образуется желтая растворимая в воде соль кумаровой кислоты. В контрольной пробирке при добавлении воды раствор мутнеет, кумарины не растворяются в воде и выпадают в осадок. ^ щелочного раствора лактонное кольцо замыкается и кумарины выпадают в осадок. ![]() ![]() 2. Реакция образования азокрасителя. Реакция проводится с продуктами, полученными после реакции разрыва лактонного кольца. Методика: В пробирку добавляют 1 мл свежеприготовленного диазореактива. Чаще всего, в качестве диазореактива используют диазосульфаниловую кислоту. Образуется азокраситель от желтого до вишнево-красного цвета.
- н-бутанол-уксусная кислота-вода БУВ (4:1:5) - н-гексан-бензол-метанол (5:4:1); - петролейный эфир-бензол-метанол (5:4:1); Идентифицируют кумарины по характерной флюоресценции в УФ свете или проявляют хромогенными реактивами. В качестве проявляющих реактивов служат 1%-ный спиртовый раствор алюминия хлорида, 10%-ный раствор щелочи или пары аммиака. Широкие возможности для обнаружения в растениях и сырье кумаринов, не только их суммы, но и отдельных соединений, открылись после внедрения хроматографического анализа. При этом указанные реактивы используют и для обработки хроматограмм. 4. Хроматографические методы удобны для выделения индивидуальных кумаринов. ^ Для количественного определения кумаринов в лекарственном РС используют гравиметрические, титриметрические и физико- химические методы анализа. По существующей нормативной документации для количественного определения кумаринов в лекарственном растительного сырье используют физико-химические методы анализа. 1. Полярографический метод. Определение кумаринов в плодах пастернака. Основан на восстановлении кумаринов на ртутно-капельном электроде в альфа-пироновом кольце по месту двойной связи в положении 3,4. Присоединяют галоген - йод, в качестве реактива используют тетраэтиламмоний йодид. Содержание комариное в пересчете на ксантотоксин не менее 1%.
для определения содержания простых кумаринов в траве донника лекарственного (не менее 0.4%) и пиранокумаринов в корневищах и корнях вздутоплодника сибирского (не менее 3 %). Получают хлороформное извлечение из сырья и измеряют у него оптическую плотность с помощью спектрофотометра. 3. Хроматоспектрофотометрический метод. Применяют для определения содержания фуранокумаринов в плодах амми большой, псоралеи костянковой, листьях инжира. Стадии определения: 1. Получение хлороформного извлечения из сырья. 2. Разделение суммы кумаринов методом хроматографии на бумаге в системе растворителей, указанной в нормативной документации. 3. Идентификация кумаринов в УФ-свете по характерному свечению. 4. Элюирование веществ с бумаги. Каждое вещество отдельно элюируют 95 %-ным этанолом. 5. Измерение оптической плотности растворов с помощью спектрофотометра при длине волны, указанной в нормативной документации. 6. Расчет содержание каждого соединения с учетом удельного показателя поглощения. Плоды амми большой: бергаптена и изопимпинеллина не менее 0,6 %. Плоды псоралеи костянковой: псоралена и изопсоралена не менее 0,9 %. Листья инжира: псоралена и бергаптена не менее 0,7%, отдельно псоралена менее 0,42 %. 4. ^ Основан на избирательной растворимости отдельных кумаринов в различных растворителях и способности лактонного кольца кумарина к раскрытию и обратному замыканию в зависимости от рН среды. Используется редко только для определения суммы кумаринов. ^ Основан на измерении оптической плотности окрашенного раствора, полученного по реакции азосочетания с солями диазония при определенной длине волны. Содержание суммы кумаринов рассчитывают по калибровочному графику, построенному по известному веществу. ^ общие качественные реакции, с помощью которых доказывается присутствие алкалоидов в сырье или в извлечении из сырья, и частные качественные реакции, с помощью которых доказывают или индивидуальный алкалоид или определенную группу алкалоидов. Общие реакции – это либо реакции осаждения, либо реакции окрашивания. Реакции осаждения основаны на способности алкалоидов к комплексообразованию. Образующиеся комплексы нерастворимы или мало растворимы в воде. Общеалкалоидные осадочные реактивы можно разделить на несколько групп: 1 группа. Йод и его растворы. Образуют с алкалоидами перйодиды, плохо растворимые в воде: 1) пары йода используют для открытия алкалоидов на хроматограммах; 2) раствор йода в KJ (реактив Вагнера, реактив Бушарда). С алкалоидами образуют бурые, трудно растворимые в воде осадки. ^
Реакцию с реактивом Драгендорфа, согласно действующей НД, используют для обнаружения (проявления) алкалоидов крестовника плосколистного на хроматограмме. ^
2) реактив Шейблера - раствор фосфорно-вольфрамовой кислоты (НзРО4 .12 WО3 . 2Н2О) - образует белые аморфные осадки; 3) реактив Зоненштейна - раствор фосфорно-молибденовой кислоты (НзРО4 • 12МоОз 2Н2О) - образует желтоватые аморфные осадки. Все эти реактивы высокочувствительны и часто используются в исследовательских работах. 4 группа. Органические вещества кислотного характера: 1) раствор пикриновой кислоты - дает осадки желтого цвета. Реакцию используют для осаждения алкалоида скополамина при его гравиметрическом определении в семенах дурмана индейского; 2) раствор танина - образует беловатые или бурые осадки. Танин используют в качестве противоядия при отравлении алкалоидами. Танин блокирует поступление и всасывание алкалоидов. Реакции окрашивания (частные реакции) основаны на окислении, конденсации, дегидратации алкалоидов концентрированными кислотами и другими окислителями. Используют:
и на наличие алкалоидов в очищенном извлечении (сухой остаток) из корневищ с корнями чемерицы – образуется бурое окрашивание; 2) конц.HNO3 - качественная реакция на корень барбариса (берберин) - красно-бурое окрашивание; 3) раствор H2O2 - качественная реакция на корень барбариса (берберин) - фиолетовое окрашивание; 4) раствор K2Cr2O7 и конц.H2SO4 - качественная реакция на стрихнин - красно-фиолетовое окрашивание; 5) раствор K2Cr2O7 и конц.НNO3 - качественная реакция на бруцин - оранжево-красное окрашивание. Две последние реакции на наличие алкалоидов в очищенном извлечении из семян чилибухи. ^
Например, пахикарпин из суммы алкалоидов травы софоры толстоплодной отделяют путем отгонки его с водяным паром;
Например, колхамин из суммы алкалоидов клубнелуковиц безвременника отделяют, используя его плохую растворимость в ацетоне;
Для разделения используют также различные виды хроматографии. ^ Алкалоиды переводят в весовую форму, осадок отделяют, высушивают, взвешивают. Этим методом определяют алкалоиды-основания клубнелуковиц безвременника. плауна-баранца; алкалоиды-соли травы крестовника плосколистного, семян дурмана индейского, листьев барбариса; 2) титриметрические методы: а) ацидиметрического прямого титрования (алкалоиды побегов анабазиса, травы софоры толстоплодной, семян чилибухи); Ь) ацидиметрического обратного титрования (алкалоиды листьев и корней красавки, листьев белены, листьев дурмана обыкновенного, травы термопсиса ланцетного, корневищ с корнями чемерицы), с) для определения алкалоидов чая используют йодометрический метод обратного титрования; d) титрование в неводных средах: - точку эквивалентности определяют, используя индикатор на алкалоиды (корневища кубышки, травы барвинка малого, клубней с корнями стефании гладкой); - точку эквивалентности определяют потенциометрически (алкалоиды травы чистотела) 3) физико-химические (инструментальные) методы: а) фотоэлектроколориметрический метод (алкалоиды коробочек мака снотворного, рожков спорыньи, травы мачка желтого, листьев катарантуса розового, листьев унгернии Виктора, травы крестовника плосколистного, травы софоры толстоплодной, травы паслена дольчатого, клубней с корнями стефании гладкой); Ь) спектрофотометрический метод (алкалоиды корней барбариса, семян и травы термопсиса очередноцветкового, травы маклейи, плодов стручкового перца); с) полярографический метод (алкалоиды семян термопсиса ланцетного, корневищ кубышки желтой). прозрачка Так, например, количественное определение алкалоидов группы тропана в листьях красавки, белены, дурмана Государственная Фармакопея XI (вып.2, ст. 13, 17, 24) предлагает проводить ацидиметрическим методом (вариант обратного титрования). Метод основан на способности тропановых алкалоидов-оснований образовывать соли под действием кислоты хлористоводородной, т.е. на слабых основных свойствах алкалоидов; избыток кислоты хлористоводородной титруют раствором натрия гидроксида. При этом, предварительно алкалоиды переводят в форму оснований, извлекают их из сырья эфиром, проводят очистку методом двукратной смены растворителей, удаляют экстрагент и растворяют сухой остаток суммы оснований алкалоидов в кислоте хлористоводородной (НС1), избыток которой оттитровывают щелочью. Содержание суммы алкалоидов вычисляют в процентах в пересчете на гиосциамин в абсолютно сухом сырье. Этапы определения:
Подобное определение рекомендовано и для травы термопсиса ланцетного (ГФ-Х1, вып. 2, ст. 59). Оценку количественного содержания алкалоидов в семенах чилибухи (ГФ Х, ст.606) проводят ацидиметрическим методом (прямое титрование). При этом, предварительно алкалоиды переводят в форму оснований, извлекают из сырья эфиром, проводят экстракционную очистку, удаляют экстрагент, растворяют сухой остаток суммы оснований алкалоидов в этаноле и титруют хлористоводородной кислотой (НС1). Количественное определение алкалоидов в сырье спорыньи проводят элетроколориметрическим методом (ГФ-Х, ст. 599). ^ проводят с очищенным спиртовым извлечением из растительного сырья. Все реакции на СГ можно разделить на 3 группы: - реакции на углеводную часть молекулы (2-дезоксисахара) (реакция Келлер-Килиани); - на стероидную структуру (реакция Либермана-Бухарда); - на лактонное ненасыщенное кольцо. ^ Основаны на способности стероидного ядра СГ подвергаться дегидратации под действием кислотных реагентов (уксусный ангидрид, конц. серная кислота, трихлоруксусная кислота) с образованием окрашенных комплексных соединений. Образующиеся в результате реакций окрашивания меняются во времени, поэтому необходимо наблюдать их в момент соприкосновения реактивов, а затем отмечать изменение окраски в течение 10-15 минут. Для СГ обычно проводят реакции: 1. Реакция Либермана-Бурхарда. При взаимодействии СГ со смесью уксусного ангидрида и конц. серной кислотой появляется розовое окрашивание, переходящее в зеленое. 2. Реакция Розенгейма. При взаимодействии СГ с 90% водным раствором трихлоруксусной кислоты появляется розовое окрашивание, переходящее в лиловое и затем в синее. 3. Реакция с хлоридом сурьмы (III). СГ при взаимодействии с хлоридом сурьмы в среде уксусного ангидрида образуют лиловое окрашивание ^ Основаны на способности ненасыщенного лактонного кольца легко окисляться в щелочной среде с образованием окрашенных продуктов реакции. Для СГ обычно проводят реакции: 1. Реакция Балье. При взаимодействии с пикриновой кислотой в щелочной среде СГ образуют комплексы, окрашенные в оранжевый цвет. 2. Реакция Кедде. При взаимодействии с 3,5-динитробензойной кислотой СГ образуют комплексы, окрашенные в красный цвет, 3. Реакция Легаля. При взаимодействии с нитропруссидом натрия в щелочной среде СГ образуют комплексы, окрашенные в красный цвет. 4. Реакция Раймонда. При взаимодействии с мета-динитробензолом СГ образуют комплексы, окрашенные в красно-фиолетовый цвет. ^ Основаны на способности моносахаридов углеводной цепи образовывать окрашенные комплексы с различными реактивами. 1. Моносахара, входящие в состав СГ, после предварительного гидролиза вступают во все цветные реакции, свойственные углеводам (Феллинга, серебряного зеркала).
Дезоксисахара в присутствии сульфата железа (III), ледяной уксусной кислоты и конц. серной образуют комплексы, окрашенные в синий или сине-зеленый цвет. Необходимым условием для проведения этой реакции является отсутствие на конце углеводной цепи обычных сахаров (глюкозы). Достоверное заключение о присутствии в лекарственном растительном сырье СГ можно сделать только при положительном результате всех трех групп качественных реакций на различные части молекулы. В ГФ-Х1 на сырье наперстянок пурпурной и крупноцветковой, ландыша майского и горицвета весеннего качественных реакций не предусмотрено. Кроме того, СГ образуют нерастворимые комплексы с растворами дубильных веществ, что используется при отравлениях СГ. ^ СГ проводят методом биологической стандартизации (ГФ-Х1, вып.2, с. 163-175). Метод основан на способности СГ вызывать в токсических дозах остановку сердца животных в стадию систолы. В качестве подопытных животных используют лягушек, голубей или кошек. Чувствительность животных к сердечным гликозидам определяют в сравнении со стандартными индивидуальными веществами или экстрактами, которые вырабатывают в специальных научно-исследовательских институтах. Активность выражают в единицах действия (ЕД), которые, в зависимости от вида животных обозначают: ЛЕД - «лягушачьи» ЕД, КЕД - «кошачьи» ЕД или ГЕД «голубиные» ЕД. ЛЕД соответствует наименьшей дозе стандартного препарата, вызывающей остановку сердца стандартной лягушки (самец травяной лягушки массой 28-33 г). В нормативной документации на лекарственное сырье и препараты, содержащих СГ, обязательно указывается ВАЛОР (количество ЕД в 1 г сырья). Недостатками метода биологической стандартизации являются его трудоемкость, высокая стоимость, большая ошибка опыта (до 25%). Поэтому нормативная документация на некоторые виды сырья и препараты требует определять их количественное содержание физико-химическими методами (хроматофотоэлектроколориметрическим или хроматоспектрофотометрическим) методами. Они основаны на предварительном хроматографическом разделении СГ с последующим фотоэлектроколориметрическим или спектрофотометрическим определением. ^ Согласно существующей нормативной документации подтверждают присутствие витаминов только в листьях крапивы. Определяют наличие витамина К1. Метод определения хроматографический. Определение основано на способности витамина К1 флюоресцировать в УФ-свете. Экстрагируют из растительного сырья витамин К1 гексаном. Хроматографическое разделение проводят восходящим способом на пластинке «Силуфол» при температуре 40-70 0С. Система растворителей: бензол - петролейный эфир (1:1). Готовую хроматограмму выдерживают в УФ-свете при длине волны 360 нм (2 минуты). На пластинке— должно появиться пятно с желто-зеленой флюоресценцией. Количественное определение витаминов проводят в плодах шиповника (витамин С) и облепихи (каротиноиды в пересчете на β-каротин). Плоды шиповника - ГФ XI изд., стр.274 - витамина С должно быть не менее 0,2%. Метод определения - титриметрический. Метод основан на способности аскорбиновой кислоты восстанавливать 2,6-дихлорфенолиндофенолят натрия. |
![]() |
Семинара: основные принципы воздействия лазерного излучения на мягкие ткани свойства лазеров. Физические |
![]() |
Тема: Введение в предмет. Физико-химические свойства белков |
![]() |
Общий план строения интерфазного ядра. Нуклеоплазма. Физико-химические свойства. Значение |
![]() |
Плеоморфные саркомы: морфология, молекулярно-биологические и клинические свойства (14. 01. 12 онкология) |
![]() |
Задачи (для теоретической части) : Изучить биологические свойства стафилококка |
![]() |
Задачи (для теоретической части) : Изучить биологические свойства стафилококка |
![]() |
Тема: «Физические и биологические основы лучевой терапии. Основы дозиметрии. Физико-технические основы |
![]() |
1 Общие сведения 2 История 3 Физико-химические свойства 4 Биосинтез убихинона 5 Биохимическая роль |
![]() |
1. потребительские свойства товаров К ним относятся пищевая, биологическая, энергетическая, физиологическая ценность пищевых продуктов,... |
![]() |
Значительную роль в возникновении При кариесе отсутствуют самопроизвольные боли, а зуб реагирует на физические (холод, тепло), химические... |