Инструкция по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови (железо и ожсс фс) icon

Инструкция по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови (железо и ожсс фс)





Скачать 95.19 Kb.
НазваниеИнструкция по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови (железо и ожсс фс)
Дата07.04.2013
Размер95.19 Kb.
ТипИнструкция

УТВЕРЖДЕНА


Приказом Росздравнадзора


от 20 июня 2012 г. № 2940-Пр/12



«УТВЕРЖДАЮ»

Генеральный директор

Закрытого акционерного общества

«ДИАКОН-ДС»

Шарышев А.А.

20 декабря 2011 г.

ИНСТРУКЦИЯ

по применению набора реагентов для определения содержания железа

в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови

^ (ЖЕЛЕЗО И ОЖСС ФС)

РУ № ФСР 2007/01440

НАЗНАЧЕНИЕ

Набор предназначен для количественного определения железа в сыворотке крови колориметрическим методом (без депротеинизации) и железосвязывающей способности сыворотки крови (ОЖСС) в клинико-диагностических и биохимических лабораториях и научно-исследовательской практике.

Набор рассчитан на проведение 70 определений концентрации железа или ОЖСС при расходе 1,0 мл рабочего реагента на один анализ.

^ ПРИНЦИП МЕТОДА

Связанное с трансферрином железо отщепляется в кислой среде в виде трёхвалентного железа и затем восстанавливается до двухвалентного в присутствии аскорбиновой кислоты. Двухвалентное железо образует с феррозином окрашенный комплекс фиолетового цвета, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна концентрации железа в пробе и измеряется фотометрически при длине волны 560 (540 – 600) нм.

Для определения общей железосвязывающей способности сыворотки крови, сыворотку насыщают ионами трехвалентного железа, избыток которого адсорбируется на карбонате магния и удаляется центрифугированием. Общую концентрацию железа, связанного сывороткой, определяют в надосадочной жидкости вышеописанным методом.

^ СОСТАВ НАБОРА

Реагент 1: буферный раствор, рН 4,5, содержащий ацетат натрия, 148 ммоль/л; тиомочевину, 100 ммоль/л; гуанидин гидрохлорид, 4,5 ммоль/л; азид натрия, 0,095% – 3 флакона (по 20 мл).

Реагент 2: аскорбиновая кислота, 120 ммоль/л; феррозин, 2,5 ммоль/л; тиомочевина, 100 ммоль/л –1 флакон (15 мл).

Реагент 3: насыщающий раствор, содержащий хлорид трехвалентного железа, 90 мкмоль/л – 1 флакон (100 мл).

Реагент 4: карбонат магния – 1 флакон (15 г).

Калибратор: калибровочный раствор двухвалентного железа, 17,9 мкмоль/л, в растворе азида натрия, 0,095% – 1 флакон (3,0 мл).

^ АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Набор обеспечивает: линейную область определения концентрации железа в диапазоне от 3,0 до 179 мкмоль/л, отклонение от линейности не превышает 5%. Чувствительность – не более 2,0 мкмоль/л, коэффициент вариации результатов определений – не более 5%. Линейная область определения общей железосвязывающей способности сыворотки крови – от 10,0 до 150 мкмоль/л, отклонение от линейности не превышает 5%. Чувствительность – не более 8,0 мкмоль/л, коэффициент вариации результатов определений – не более 5%.

Качество набора можно оценивать по контрольным сывороткам TruLabN и TruLabP производства фирмы DiaSys (ференовый метод), данные аттестации которых соответствуют феррозиновому методу, а также по другим отечественным и зарубежным контрольным сывороткам, аттестованным феррозиновым методом.

Нормальные величины концентрации железа в сыворотке крови человека составляют 8,9 – 31,2 мкмоль/л.

Нормальные величины общей железосвязывающей способности сыворотки крови человека составляют 45 – 72 мкмоль/л.

Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон значений нормальных величин для обследуемого контингента людей.

^ АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Негемолизированная сыворотка крови. Сыворотку крови следует отделить от форменных элементов крови не позднее, чем через 1 час после забора крови.

^ МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Калибратор содержит токсичный компонент азид натрия. При работе с ним следует соблюдать осторожность и не допускать попадания на кожу и слизистые; при попадании немедленно промыть пораженное место большим количеством проточной воды. При проглатывании следует выпить 0,5 л теплой воды и вызвать рвоту.

При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.

^ ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ:

– Спектрофотометр или фотоэлектроколориметр, длина волны 560

(540 – 600) нм, кювета с длиной оптического пути 10 мм;

- термостат, поддерживающий температуру 37±1°С;

– настольная центрифуга;

– пробирки центрифужные вместимостью 3,0-5,0 мл;

– секундомер;

– цилиндры стеклянные мерные вместимостью 50 и 100 мл;

– пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 100, 250, 500 и 1000 мкл;

– пробирки стеклянные вместимостью 3,0-5,0 мл;

– вода деионизованная;

– 0,9% раствор NaCl (физиологический раствор);

– перчатки резиновые одноразовые.

^ ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ

Реагенты 1 и 2 готовы к использованию для определения железа в сыворотке крови или в супернатанте сыворотки крови при запуске реакции субстратом.

При необходимости приготовления рабочего реагента следует смешать нужные объемы реагентов 1 и 2 в соотношении 4:1. Тщательно закрыть флаконы с реагентами 1 и 2 непосредственно после каждого использования.

Рабочий реагент должен храниться в защищенном от света месте при температуре + 2 – 8°С не более одного месяца или при комнатной температуре (+ 18 – 25°С) – не более одной недели.

Реагенты 3, 4 и Калибратор готовы к использованию.

^ ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

Данный набор может быть использован для автоматических и полуавтоматических анализаторов, а также при ручной постановке анализа. Адаптации для анализаторов высылают по запросу.


Получение супернатанта для определения общей железосвязывающей способности сыворотки крови

В центрифужную пробирку внести 500 мкл сыворотки крови, добавить 1000 мкл реагента 3. Пробу перемешать и выдержать 10 минут при комнатной температуре (+18–25оС), затем добавить 0,15 г реагента 4, несколько раз тщательно встряхнуть, выдержать не менее 30 минут при комнатной температуре, тщательно встряхивая каждые 5 минут, затем центрифугировать при 3000 об./мин в течение 10 минут.

Прозрачный супернатант использовать для определения общей железосвязывающей способности сыворотки крови.

Компоненты реакционной смеси отбирать в количествах, указанных в таблице.


Определение железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови:

Запуск реакции субстратом Таблица 1.

Отмерить, мкл

Опытная

проба

Калибровочная

проба

Контрольная

(холостая) проба

Реагент 1

1000

1000

1000

Вода деионизованная





200

Калибратор



200



Сыворотка крови

200





Пробы перемешать, через 1 минуту измерить оптическую плотность E1 опытной и калибровочной пробы против контрольной (холостой) пробы при длине волны 560 (540 –600) нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм при температуре + 37оС или при комнатной температуре (+18–25оС), затем добавить:

Реагент 2

250

250

250

Пробы перемешать, через 10 минут измерить оптическую плотность E2 опытной и калибровочной пробы против контрольной (холостой) пробы при длине волны 560 (540 –600) нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм при температуре + 37оС или при комнатной температуре (+18–25оС). Окраска растворов стабильна в течение 30 минут.


Еоп. или Екал. = (E2 - E1) опытной или калибровочной пробы

Запуск реакции образцом (Использовать только сывороточный калибратор, аттестованный феррозиновым методом. Рекомендуем TruCalU производства фирмы DiaSys (ференовый метод), данные аттестации которого соответствуют феррозиновому методу).

Таблица 2.

Отмерить, мкл

Опытная проба

Калибровочная

проба

Контрольная

(холостая) проба

Сыворотка крови или Супернатант

200





Вода деионизованная





200

Сывороточный калибратор



200



Рабочий реагент

1000

1000

1000

Пробы перемешать и инкубировать при температуре + 37оС или при комнатной температуре (+18–25оС) в течение 10 минут. Измерить оптическую плотность опытной (Еоп.) и калибровочной кал.) проб против контрольной (холостой) пробы при двух длинах волн; λ1= 578 нм и λ2= 630 нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм. Окраска растворов стабильна в течение 30 минут.


РАСЧЕТЫ


Содержание железа в сыворотке крови, мкмоль/л, определить по формуле:


где: С — концентрация железа в анализируемой пробе, мкмоль/л;

Еоп. — оптическая плотность анализируемой пробы, ед. опт. пл.;

Екал. — оптическая плотность калибратора, ед. опт. пл.;

Скал — содержание железа в калибраторе, мкмоль/л.

Общую железосвязывающую способность сыворотки крови, мкмоль/л, определить по формуле:


где: С — общая железосвязывающая способность сыворотки крови, мкмоль/л;

Еоп. — оптическая плотность пробы, ед. опт. пл.;

Екал. — оптическая плотность калибратора, ед. опт. пл.;

Скал — концентрация железа в калибраторе, мкмоль/л;

3,0 — коэффициент разведения сыворотки.




^ УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА

Хранение наборов должно производиться при температуре + 2–8оС в упаковке предприятия-изготовителя в течение всего срока годности. Допускается хранение реагентов 1, 2 и калибратора при температуре до + 25оС не более 5 суток. Реагенты 3, 4 могут храниться при температуре + 2-25 оС в течение всего срока годности. Замораживание компонентов набора не допускается.

Срок годности набора – 12 месяцев.

Реагенты 1 и 2 после вскрытия флаконов могут храниться при температуре + 2–8оС, а реагенты 3 и 4 после вскрытия флаконов могут храниться при температуре + 2-25 оС, в течение всего срока годности набора при условии достаточной герметичности флаконов.

Рабочий реагент должен храниться в защищенном от света месте при температуре + 2 – 8°С не более одного месяца или при комнатной температуре (+ 18 – 25°С) – не более одной недели.

Калибратор после вскрытия флакона можно хранить при температуре + 2–8оС не более 3 месяцев при условии достаточной герметичности флакона.

При содержании железа в сыворотке крови выше 179 мкмоль/л или общей железосвязывающей способности сыворотки крови выше 160 мкмоль/л анализируемую пробу следует развести физиологическим раствором, приготовленном на деионизованной воде, и полученный результат умножить на разведение.

Причиной грубых ошибок может быть недостаточно чистая посуда. Посуду следует мыть хромовой смесью или раствором 4 М соляной кислоты в деионизованной воде, затем тщательно ополоснуть деионизованной водой.

Для получения надежных результатов необходимо строго соблюдать инструкцию по применению набора.

По вопросам, касающимся качества набора (ЖЕЛЕЗО и ОЖСС ФС), следует обращаться в ЗАО «ДИАКОН-ДС» по адресу:

142290, г. Пущино, Московской обл., ул. Грузовая 1а; тел. (495) 980-63-38, 980-63-39; т/факс (495) 980-66-79.


Директор по производству

ЗАО «ДИАКОН-ДС» Сысоева В.И.

“СОГЛАСОВАНО”

Зав. кафедрой клинической

лабораторной диагностики ГОУ ДПО

“РМАПО Росздрава, д.м.н., профессор Долгов В.В.

06 марта 2012 г.

Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:

Похожие:

Инструкция по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови (железо и ожсс фс) iconИнструкция по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей

Инструкция по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови (железо и ожсс фс) iconИнструкци я по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и

Инструкция по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови (железо и ожсс фс) iconИнструкци я по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови

Инструкция по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови (железо и ожсс фс) iconИнструкция по применению набора реагентов для количественного определения содержания кальция в сыворотке

Инструкция по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови (железо и ожсс фс) iconИнструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного определения антител класса g I g
Инструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного определения антител класса g (IgG)...
Инструкция по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови (железо и ожсс фс) iconИнструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного определения антител класса g к вирусу

Инструкция по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови (железо и ожсс фс) iconМетодика определения содержания альфа-токоферола и ретинола в сыворотке (плазме) крови (инструкция

Инструкция по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови (железо и ожсс фс) iconВыдержки для учащихся спо из Приказа Минздрава РФ от 25 ноября 2002 г. №363 "Об утверждении Инструкции

Инструкция по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови (железо и ожсс фс) iconСравнительная характеристика ифа тест-систем для количественного определения IgE-антител в сыворотке

Инструкция по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови (железо и ожсс фс) iconХарактеристика товара требование к качеству, техническим характеристикам товара, требования к их
Набор реактивов для определения общей активности Альфа-амилазы кинетическим методом в сыворотке крови...
Разместите кнопку на своём сайте:
Медицина


База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2019
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
Документы