Сравнительная характеристика ифа тест-систем для количественного определения IgE-антител в сыворотке крови
|
|
Скачать 170.25 Kb.
|
Сравнительная характеристика ИФА тест-систем для количественного определения IgE-антител в сыворотке кровиЗуева Е. В. Пугачева О. М.Компания Алкор Био, Санкт-Петербург, РоссияЗадачей исследования явилось сравнение четырех тест-систем второго поколения для количественного определения концентрации аллерген-специфического IgE в сыворотке крови человека по аналитическим характеристикам. Цель состояла в том, чтобы путем анализа данных по четырем рассмотренным методам, а так же по сопоставлению с результатами кожных тестов установить, позволяет ли «CARLA system» (Radim) давать результаты, дающие хорошее совпадение с клинической картиной заболевания. Как правило, специфическая диагностика аллергии проводится на основе сбора данных семейного и личного анамнеза, по результатам кожного тестирования и провокационных проб. Для подтверждения диагноза и выявления патогенетических механизмов заболевания ключевую роль играют лабораторные методы исследования. Первый in vitro-тест для определения специфичных к аллергенам иммуноглобулинов класса E (специфические IgE) был предложен в 1967 году Bennich H. и Johansson SGO.[1] как радиоаллергосорбентный тест (RAST). Некоторое время спустя появились аналоги RAST на основе иммуноферментного анализа. Однако чувствительность этих методов была ограничена низкой сорбционной способностью твердой фазы (использовались, как правило, простые целлюлозные диски). Процедура инкубации каждой стадии занимала от 3-х до 18 часов, автоматизация была маловероятна, применялся полуколичественный способ оценки результатов (в классах), да и утилизация радиоактивных отходов – проблематична [2]. В 90-е годы были разработаны тест-системы второго поколения, которые широко используются в практике до настоящего времени, для полуавтоматизированного количественного определения специфических IgE. В таких тест-системах применяются всевозможные технологии детекции, различные носители, экстракты аллергенов и типы антител. Использование наборов от разных фирм-производителей с различными характеристиками привели к получению противоречивых результатов анализов, что в свою очередь вызывало недоумение и недовольство клиницистов. Поэтому одной из основных методических проблем определения IgE-антител является вопрос соответствия результатов лабораторного тестирования с клинической симптоматикой и аллергологическим анамнезом. Тест-системы второго поколения по технологическим параметрам можно подразделить на те, в которых аллерген иммобилизован на твердой фазе, и системы в которых аллерген находится в жидкой фазе. При использовании твердофазных аллергенов сложность представляет тип твердой фазы, обеспечивающий максимальную сорбционную емкость и доступность аллергена для молекул IgE. С этой точки зрения системы с жидкими аллергенами имеют несомненное преимущество. Кроме того, такие системы с жидкофазными аллергенами удобны в использовании и легко адаптируются к постановке на автоматических анализаторах. К такому типу ИФА реагентики относится «CARLA system» итальянской фирмы Radim. В основе «CARLA system» лежит метод, описанный ранее Olivieri e.a. [3], а затем и Plebani e.a. [4]. Это так называемый «capture» анализ с использованием иммобилизованных на полистироловых лунках микропланшет мышиных моноклональных антител против человеческого IgE и жидких биотинилированных аллергенов. На первой стадии IgE-антитела сыворотки пациента связываются с твердой фазой за счёт захвата их (capture) Fc-фрагментами анти-IgE, а вносимые в лунки биотинилированные аллергены связываются с Fab-фрагментами специфических к данному аллергену IgE сыворотки. На второй стадии добавляется конъюгат стрептавидин-пероксидаза для определения количества биотина, оказавшегося на твердой фазе. В статье рассмотрены опубликованные в литературе данные сравнения клини-ческих характеристик «CARLA system»с характеристиками наборов для определения IgE-антител других мировых производителей, а также соответствие результатов, полученных с помощью наборов CARLA, с результатами кожного тестирования. ^ Материалы и методы
Анализ ROC-кривых проводили по вычислению значений площадей под кривыми — AUC (Area Under Curve) и по определению пороговых значений концентраций IgE-антител для каждого аллергена, при которых эффективность метода оказывалась наилуч-шей. Диагностическую достоверность определяли по различию между площадями под ROC-кривой с помощью среднего оценочного балла Z-score. Статистическую значимость различия в эффективности тест-систем оценивали по t-критерию Стьюдента. Результаты Для оценки диагностической эффективности 4-х тест-систем сравнивали значения AUC для каждого аллергена. Как видно из таблицы 1, существенные различия были обнаружены для систем CARLA и ENEA по аллергену d1 и для ENEA по аллергену g5 по сравнению с CAP-системой, используемой в качестве референсной. Остальные значения AUC не отличались от референсных, что свидетельствует о хорошей клинической согласованности исследуемых тест- систем. Также следует отметить, что диагностическая эффективность всех используемых тест-систем была достаточно высока, так как большая часть значений AUC превышала величину 0,8. Таблица 1. Сравнение значений AUC при использовании различных тест-систем. В качестве метода сравнения использован CAP.
Используя тот же анализ методом ROC, были выбраны пороговые значения, которые обеспечивали наибольшую клиническую эффективность для каждого аллергена и каждого метода. Пороговые значения и соответствующие им значения клинической эффективности, чувствительности, специфичности и 95% доверительные интервалы представлены в таблице 2. Статистически достоверные различия в эффективности были обнаружены только у ENEA по аллергенам d1 и g5, тогда как у остальных тест-систем значения этого показателя достоверно не отличались. В случае аллергена d1 расхождение можно объяснить значительно более низкой чувствительностью у метода ENEA (0,67 по сравнению с 0,97), а в случае аллергена g5 – значительно более низкой специфичностью само-го аллергена (0,87 по сравнению с 1,0). Таблица 2. Диагностическая характеристика различных тест-систем для определения специфических IgE.
* статистически значимые различия по сравнению с CAP Таким образом, с помощью приведенного выше метода обработки данных, где для каждой тест-системы подбираются индивидуальные пороговые значения измеряемой концентрации по индивидуальным аллергенам, при которых диагностическая эффективность наиболее высока, было показано, что все четыре тест-системы дают хорошо согласующиеся между собой клинические характеристики и имеют достаточно высокий уровень диагностической достоверности. ^ Материалы и методы
Результаты Проведено сравнение результатов определения специфических IgE с помощью тест-систем CARLA, CAP и IMMULITE с данными кожных тестов. Оказалось, что, несмотря на то, что в основе этих тест-систем лежит разная конструкция анализа, все они продемонстрировали хорошую согласованность с данными кожного тестирования (Табл. 3). Таблица 3. Сравнение результатов определения IgE-антител для различных тест систем с результатами кожного тестирования.
Более того, по таким важнейшим характеристикам как совпадение баллов оценки кожных тестов и классов IgE-антител, конкордантность положительных и отрицательных результатов, тест-система CARLA не имела значимых отличий от таких хорошо известных коммерческих тест-систем, как CAP и IMMULITE. ЗаключениеТаким образом, «CARLA system» представляет собой тест-систему второго поколения для определения аллерген-специфических IgE и обладает рядом характеристик:
«CARLA system» является эффективным и надежным способом определения концентрации специфического IgE в сыворотке крови человека и может быть рекомендован для адекватной (в соответствии с клиническими данными и кожным тестированием) диаг-ностики IgE -зависимых аллергических заболеваний. Литература
|
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям