Инструкци я по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови icon

Инструкци я по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови





Скачать 95.07 Kb.
НазваниеИнструкци я по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови
Дата07.04.2013
Размер95.07 Kb.
ТипДокументы

УТВЕРЖДЕНА


Приказом Росздравнадзора


от 22 апреля 2010 г. № 3306-Пр/10

«УТВЕРЖДАЮ»

Генеральный директор

Закрытого акционерного общества

«ДИАКОН-ДС»

Шарышев А.А.

14 января 2010 г.



И Н С Т Р У К Ц И Я

по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови

и общей железосвязывающей способности сыворотки крови

^ (ЖЕЛЕЗО И ОЖСС ФС)

. РУ № ФСР 2007/01440

НАЗНАЧЕНИЕ

Набор предназначен для количественного определения железа в сыворотке крови колориметрическим методом (без депротеинизации) и железосвязывающей способности сыворотки крови (ОЖСС) в клинико-диагностических и биохимических лабораториях и научно-исследовательской практике.

Набор рассчитан на проведение 70 определений концентрации железа или ОЖСС при расходе 1,0 мл рабочего реагента на один анализ.

^ ПРИНЦИП МЕТОДА

Связанное с трансферрином железо отщепляется в кислой среде в виде трёхвалентного железа и затем восстанавливается до двухвалентного в присутствии аскорбиновой кислоты. Двухвалентное железо образует с ференом окрашенный комплекс синего цвета, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна концентрации железа в пробе и измеряется фотометрически при длине волны 600 (580 – 600) нм.

Для определения общей железосвязывающей способности сыворотки крови, сыворотку насыщают ионами трехвалентного железа, избыток которого адсорбируется на карбонате магния и удаляется центрифугированием. Общую концентрацию железа, связанного сывороткой, определяют в надосадочной жидкости вышеописанным методом.

^ СОСТАВ НАБОРА

Реагент 1: буферный раствор, рН 4,5, содержащий ацетат натрия, 1,25 моль/л; тиомочевину, 150 ммоль/л – 3 флакона (по 20 мл).

Реагент 2: аскорбиновая кислота, 1,2 моль/л, ферен 15 ммоль/л, тиомочевина 600 ммоль/л – 1 флакон (15 мл).

Реагент 3: насыщающий раствор, содержащий хлорид трехвалентного железа, 90 мкмоль/л – 1 флакон (100 мл).

Реагент 4: карбонат магния – 1 флакон (15 г).

Реагент 5: калибратор (калибровочный раствор двухвалентного железа, 17,9 мкмоль/л, в растворе азида натрия, 0,095%) – 1 флакон (3,0 мл).


^ АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Набор обеспечивает: линейную область определения концентрации железа в диапазоне от 3,0 до 179 мкмоль/л, отклонение от линейности не превышает 5%. Чувствительность – не более 2,0 мкмоль/л, коэффициент вариации результатов определений – не более 5%. Линейная область определения общей железосвязывающей способности сыворотки крови – от 10 до 150 мкмоль/л, отклонение от линейности не превышает 5%.

Чувствительность – не более 8,0 мкмоль/л, коэффициент вариации результатов определений – не более 5%.

Качество набора можно оценивать по отечественным или зарубежным контрольным сывороткам, аттестованным данными методами.

Нормальные величины концентрации железа в сыворотке крови человека составляют 8,9 – 31,2 мкмоль/л.

Нормальные величины общей железосвязывающей способности сыворотки крови человека составляют 45–72 мкмоль/л.

Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон значений нормальных величин для обследуемого контингента людей.


^ АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Негемолизированная сыворотка крови. Сыворотку крови следует отделить от форменных элементов крови не позднее, чем через 1 час после забора крови.


^ МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Калибратор содержит токсичный компонент – азид натрия. При работе с ним следует соблюдать осторожность и не допускать попадания на кожу и слизистые; при попадании немедленно промыть пораженное место большим количеством проточной воды. При проглатывании следует выпить 0,5 л теплой воды и вызвать рвоту.

При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т.к. образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.

^ ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ:

– Спектрофотометр или фотоэлектроколориметр, длина волны 600 (580 – 600) нм, кювета с длиной оптического пути 10 мм;

– настольная центрифуга;

– пробирки центрифужные вместимостью 3,0-5,0 мл;

– секундомер;

– цилиндры стеклянные мерные вместимостью 50 и 100 мл;

– пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 100, 250, 500 и 1000 мкл;

– пробирки стеклянные вместимостью 3,0-5,0 мл;

– колба коническая вместимостью 100 мл;

– вода деионизованная;

– 0,9% раствор NaCl (физиологический раствор);

– перчатки резиновые одноразовые.

^ ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ

Реагенты готовы к использованию для определения железа в сыворотке крови или в супернатанте сыворотки крови при запуске реакции субстратом.

Приготовление рабочего реагента для определения железа в сыворотке крови или в супернатанте сыворотки крови при запуске реакции образцом: смешать в колбе конической вместимостью 100 мл 60 мл реагента 1 и 15 мл реагента 2.

При необходимости приготовления рабочего реагента в меньшем объеме следует смешать нужные объемы реагентов 1 и 2 в соотношении 4:1. Тщательно закрыть флаконы с реагентами 1 и 2 непосредственно после каждого использования.

Рабочий реагент можно хранить в темном месте при температуре + 2 – 8°С не более одного месяца или при комнатной температуре (+ 18 – 25°С) – не более одной недели.

Реагенты 3, 4 и 5 готовы к использованию.

^ ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

Получение супернатанта для определения общей железосвязывающей способности сыворотки крови.

В центрифужную пробирку внести 500 мкл сыворотки крови, добавить 1000 мкл реагента 3. Пробу перемешать и выдержать 10 минут при комнатной температуре (+18–25оС), затем добавить 0,15 г реагента 4, несколько раз тщательно встряхнуть, выдержать не менее 30 минут при комнатной температуре, тщательно встряхивая каждые 5 минут, затем центрифугировать при 3000 об./мин в течение 10 минут.

Прозрачный супернатант использовать для определения общей железосвязывающей способности сыворотки крови.


Компоненты реакционной смеси отбирать в количествах, указанных в таблице.

^ Определение железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови.

Запуск реакции субстратом Таблица 1.

Отмерить, мкл

Опытная

проба

Калибровочная

проба

Контрольная

(холостая) проба

Реагент 1

1000

1000

1000

Вода деионизованная





100

Калибратор



100



Сыворотка крови или Супернатант



100





Пробы перемешать, через 1 минуту измерить оптическую плотность Е1 опытной и калибровочной пробы против контрольной (холостой) пробы при длине волны 600 (580 –600) нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм, затем добавить:

Реагент 2

250

250

250

Пробы перемешать, через 10 минут измерить оптическую плотность Е2 опытной и калибровочной пробы против контрольной (холостой) пробы при длине волны 600 (580 –600) нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм. Окраска растворов стабильна в течение 30 минут.

Еоп. или Екал. = (Е2 – 0,82Е1) опытной или калибровочной пробы,

где: 0,82 – коэффициент для компенсации уменьшения величины оптической плотности Е2 по сравнению с Е1 вследствие разбавления реакционной смеси после добавления реагента 2.

Коэффициент рассчитывают: (Объем образца + Объем Реагента 1)/Общий объем.


Запуск реакции образцом Таблица 2.

Отмерить, мкл

Опытная проба

Калибровочная

проба

Контрольная

(холостая) проба

Сыворотка крови или Супернатант

100





Вода деионизованная





100

Калибратор



100



Рабочий реагент

1000

1000

1000

Пробы перемешать и инкубировать при температуре + 37оС или при комнатной температуре (+18–25оС) в течение 10 минут. Измерить оптическую плотность опытной и калибровочной проб против контрольной (холостой) пробы при длине волны 600 (580 –600) нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм. Окраска растворов стабильна в течение 30 минут.


^ РАСЧЕТЫ

Содержание железа в сыворотке крови, мкмоль/л, определить по формуле:




где: С — концентрация железа в анализируемой пробе, мкмоль/л;

Еоп. — оптическая плотность анализируемой пробы, ед. опт. пл.;

Екал. — оптическая плотность калибратора, ед. опт. пл.;

17,9 — содержание железа в калибраторе, мкмоль/л.


^ Общую железосвязывающую способность сыворотки крови, мкмоль/л,




где: С — общая железосвязывающая способность сыворотки крови, мкмоль/л;

Еоп. — оптическая плотность пробы, ед. опт. пл.;

Екал. — оптическая плотность калибратора, ед. опт. пл.;

17,9 — концентрация железа в калибраторе, мкмоль/л;

3,0 — коэффициент разведения сыворотки.


^ УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА

Хранение наборов должно производиться при температуре + 2–8оС в упаковке предприятия-изготовителя в течение всего срока годности. Допускается хранение реагентов 1, 2 и калибратора при температуре до + 25оС не более 30 суток. Реагенты 3, 4 могут храниться при температуре +2-25 оС в течение всего срока годности. Замораживание компонентов набора не допускается.

Срок годности набора – 12 месяцев.

Реагенты 1 и 2 после вскрытия флаконов могут храниться при температуре + 2–8оС, а реагенты 3 и 4 после вскрытия флаконов могут храниться при температуре + 2–25оС, в течение всего срока годности набора при условии достаточной герметичности флаконов.

Рабочий реагент можно хранить в темном месте при температуре + 2 – 8°С не более одного месяца или при комнатной температуре (+ 18 – 25°С) – не более одной недели.

Калибратор после вскрытия флакона можно хранить при температуре + 2–8оС не более 3 месяцев при условии достаточной герметичности флакона.

При содержании железа в сыворотке крови выше 179 мкмоль/л или общей железосвязывающей способности сыворотки крови выше 160 мкмоль/л анализируемую пробу следует развести физиологическим раствором, приготовленном на деионизованной воде, и полученный результат умножить на разведение.

Причиной грубых ошибок может быть недостаточно чистая посуда. Посуду следует мыть хромовой смесью или раствором 4 М соляной кислоты в деионизованной воде, затем тщательно ополоснуть деионизованной водой.

Для получения надежных результатов необходимо строго соблюдать инструкцию по применению набора.

По вопросам, касающимся качества набора ЖЕЛЕЗО и ОЖСС ФС, следует обращаться в ЗАО “ДИАКОН-ДС” по адресу:

142290, г. Пущино, Московской обл., ул. Грузовая 1а; тел. (495) 980-63-38, 980-63-39; т/факс (495) 980-66-79.


Директор производства

ЗАО “ДИАКОН-ДС” В.И. Сысоева

“СОГЛАСОВАНО”

Зав. кафедрой клинической

лабораторной диагностики ГОУ ДПО

“РМАПО Росздрава” д.м.н., профессор В.В. Долгов

01.03. 2010 г.


Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:

Похожие:

Инструкци я по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови iconИнструкция по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей

Инструкци я по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови iconИнструкция по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей

Инструкци я по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови iconИнструкци я по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови

Инструкци я по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови iconИнструкция по применению набора реагентов для количественного определения содержания кальция в сыворотке

Инструкци я по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови iconИнструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного определения антител класса g I g
Инструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного определения антител класса g (IgG)...
Инструкци я по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови iconИнструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного определения антител класса g к вирусу

Инструкци я по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови iconМетодика определения содержания альфа-токоферола и ретинола в сыворотке (плазме) крови (инструкция

Инструкци я по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови iconСравнительная характеристика ифа тест-систем для количественного определения IgE-антител в сыворотке

Инструкци я по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови iconХарактеристика товара требование к качеству, техническим характеристикам товара, требования к их
Набор реактивов для определения общей активности Альфа-амилазы кинетическим методом в сыворотке крови...
Инструкци я по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови iconХарактеристика товара требование к качеству, техническим характеристикам товара, требования к их
Набор реактивов для определения общей активности Альфа-амилазы кинетическим методом в сыворотке крови...
Разместите кнопку на своём сайте:
Медицина


База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2019
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
Документы