Инструкци я по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови
|
|
Скачать 95.07 Kb.
|
И Н С Т Р У К Ц И Я по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови и общей железосвязывающей способности сыворотки крови ^ . РУ № ФСР 2007/01440 НАЗНАЧЕНИЕ Набор предназначен для количественного определения железа в сыворотке крови колориметрическим методом (без депротеинизации) и железосвязывающей способности сыворотки крови (ОЖСС) в клинико-диагностических и биохимических лабораториях и научно-исследовательской практике. Набор рассчитан на проведение 70 определений концентрации железа или ОЖСС при расходе 1,0 мл рабочего реагента на один анализ. ^ Связанное с трансферрином железо отщепляется в кислой среде в виде трёхвалентного железа и затем восстанавливается до двухвалентного в присутствии аскорбиновой кислоты. Двухвалентное железо образует с ференом окрашенный комплекс синего цвета, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна концентрации железа в пробе и измеряется фотометрически при длине волны 600 (580 – 600) нм. Для определения общей железосвязывающей способности сыворотки крови, сыворотку насыщают ионами трехвалентного железа, избыток которого адсорбируется на карбонате магния и удаляется центрифугированием. Общую концентрацию железа, связанного сывороткой, определяют в надосадочной жидкости вышеописанным методом. ^ Реагент 1: буферный раствор, рН 4,5, содержащий ацетат натрия, 1,25 моль/л; тиомочевину, 150 ммоль/л – 3 флакона (по 20 мл). Реагент 2: аскорбиновая кислота, 1,2 моль/л, ферен 15 ммоль/л, тиомочевина 600 ммоль/л – 1 флакон (15 мл). Реагент 3: насыщающий раствор, содержащий хлорид трехвалентного железа, 90 мкмоль/л – 1 флакон (100 мл). Реагент 4: карбонат магния – 1 флакон (15 г). Реагент 5: калибратор (калибровочный раствор двухвалентного железа, 17,9 мкмоль/л, в растворе азида натрия, 0,095%) – 1 флакон (3,0 мл). ^ Набор обеспечивает: линейную область определения концентрации железа в диапазоне от 3,0 до 179 мкмоль/л, отклонение от линейности не превышает 5%. Чувствительность – не более 2,0 мкмоль/л, коэффициент вариации результатов определений – не более 5%. Линейная область определения общей железосвязывающей способности сыворотки крови – от 10 до 150 мкмоль/л, отклонение от линейности не превышает 5%. Чувствительность – не более 8,0 мкмоль/л, коэффициент вариации результатов определений – не более 5%. Качество набора можно оценивать по отечественным или зарубежным контрольным сывороткам, аттестованным данными методами. Нормальные величины концентрации железа в сыворотке крови человека составляют 8,9 – 31,2 мкмоль/л. Нормальные величины общей железосвязывающей способности сыворотки крови человека составляют 45–72 мкмоль/л. Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон значений нормальных величин для обследуемого контингента людей. ^ Негемолизированная сыворотка крови. Сыворотку крови следует отделить от форменных элементов крови не позднее, чем через 1 час после забора крови. ^ Калибратор содержит токсичный компонент – азид натрия. При работе с ним следует соблюдать осторожность и не допускать попадания на кожу и слизистые; при попадании немедленно промыть пораженное место большим количеством проточной воды. При проглатывании следует выпить 0,5 л теплой воды и вызвать рвоту. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т.к. образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции. ^ – Спектрофотометр или фотоэлектроколориметр, длина волны 600 (580 – 600) нм, кювета с длиной оптического пути 10 мм; – настольная центрифуга; – пробирки центрифужные вместимостью 3,0-5,0 мл; – секундомер; – цилиндры стеклянные мерные вместимостью 50 и 100 мл; – пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 100, 250, 500 и 1000 мкл; – пробирки стеклянные вместимостью 3,0-5,0 мл; – колба коническая вместимостью 100 мл; – вода деионизованная; – 0,9% раствор NaCl (физиологический раствор); – перчатки резиновые одноразовые. ^ Реагенты готовы к использованию для определения железа в сыворотке крови или в супернатанте сыворотки крови при запуске реакции субстратом. Приготовление рабочего реагента для определения железа в сыворотке крови или в супернатанте сыворотки крови при запуске реакции образцом: смешать в колбе конической вместимостью 100 мл 60 мл реагента 1 и 15 мл реагента 2. При необходимости приготовления рабочего реагента в меньшем объеме следует смешать нужные объемы реагентов 1 и 2 в соотношении 4:1. Тщательно закрыть флаконы с реагентами 1 и 2 непосредственно после каждого использования. Рабочий реагент можно хранить в темном месте при температуре + 2 – 8°С не более одного месяца или при комнатной температуре (+ 18 – 25°С) – не более одной недели. Реагенты 3, 4 и 5 готовы к использованию. ^ Получение супернатанта для определения общей железосвязывающей способности сыворотки крови. В центрифужную пробирку внести 500 мкл сыворотки крови, добавить 1000 мкл реагента 3. Пробу перемешать и выдержать 10 минут при комнатной температуре (+18–25оС), затем добавить 0,15 г реагента 4, несколько раз тщательно встряхнуть, выдержать не менее 30 минут при комнатной температуре, тщательно встряхивая каждые 5 минут, затем центрифугировать при 3000 об./мин в течение 10 минут. Прозрачный супернатант использовать для определения общей железосвязывающей способности сыворотки крови. Компоненты реакционной смеси отбирать в количествах, указанных в таблице. ^ Запуск реакции субстратом Таблица 1.
Еоп. или Екал. = (Е2 – 0,82Е1) опытной или калибровочной пробы, где: 0,82 – коэффициент для компенсации уменьшения величины оптической плотности Е2 по сравнению с Е1 вследствие разбавления реакционной смеси после добавления реагента 2. Коэффициент рассчитывают: (Объем образца + Объем Реагента 1)/Общий объем. Запуск реакции образцом Таблица 2.
Пробы перемешать и инкубировать при температуре + 37оС или при комнатной температуре (+18–25оС) в течение 10 минут. Измерить оптическую плотность опытной и калибровочной проб против контрольной (холостой) пробы при длине волны 600 (580 –600) нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм. Окраска растворов стабильна в течение 30 минут. ^  где: С — концентрация железа в анализируемой пробе, мкмоль/л; Еоп. — оптическая плотность анализируемой пробы, ед. опт. пл.; Екал. — оптическая плотность калибратора, ед. опт. пл.; 17,9 — содержание железа в калибраторе, мкмоль/л. ^  где: С — общая железосвязывающая способность сыворотки крови, мкмоль/л; Еоп. — оптическая плотность пробы, ед. опт. пл.; Екал. — оптическая плотность калибратора, ед. опт. пл.; 17,9 — концентрация железа в калибраторе, мкмоль/л; 3,0 — коэффициент разведения сыворотки. ^ Хранение наборов должно производиться при температуре + 2–8оС в упаковке предприятия-изготовителя в течение всего срока годности. Допускается хранение реагентов 1, 2 и калибратора при температуре до + 25оС не более 30 суток. Реагенты 3, 4 могут храниться при температуре +2-25 оС в течение всего срока годности. Замораживание компонентов набора не допускается. Срок годности набора – 12 месяцев. Реагенты 1 и 2 после вскрытия флаконов могут храниться при температуре + 2–8оС, а реагенты 3 и 4 после вскрытия флаконов могут храниться при температуре + 2–25оС, в течение всего срока годности набора при условии достаточной герметичности флаконов. Рабочий реагент можно хранить в темном месте при температуре + 2 – 8°С не более одного месяца или при комнатной температуре (+ 18 – 25°С) – не более одной недели. Калибратор после вскрытия флакона можно хранить при температуре + 2–8оС не более 3 месяцев при условии достаточной герметичности флакона. При содержании железа в сыворотке крови выше 179 мкмоль/л или общей железосвязывающей способности сыворотки крови выше 160 мкмоль/л анализируемую пробу следует развести физиологическим раствором, приготовленном на деионизованной воде, и полученный результат умножить на разведение. Причиной грубых ошибок может быть недостаточно чистая посуда. Посуду следует мыть хромовой смесью или раствором 4 М соляной кислоты в деионизованной воде, затем тщательно ополоснуть деионизованной водой. Для получения надежных результатов необходимо строго соблюдать инструкцию по применению набора. По вопросам, касающимся качества набора ЖЕЛЕЗО и ОЖСС ФС, следует обращаться в ЗАО “ДИАКОН-ДС” по адресу: 142290, г. Пущино, Московской обл., ул. Грузовая 1а; тел. (495) 980-63-38, 980-63-39; т/факс (495) 980-66-79. Директор производства ЗАО “ДИАКОН-ДС” В.И. Сысоева “СОГЛАСОВАНО” Зав. кафедрой клинической лабораторной диагностики ГОУ ДПО “РМАПО Росздрава” д.м.н., профессор В.В. Долгов 01.03. 2010 г. |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям