Инструкци я по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови
|
|
Скачать 74.74 Kb.
|
И Н С Т Р У К Ц И Я по применению набора реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови (ЖЕЛЕЗО ФС) . РУ № ФСР 2008/02953 НАЗНАЧЕНИЕ Набор предназначен для количественного определения железа в сыворотке крови колориметрическим методом (без депротеинизации) в клинико-диагностических и биохимических лабораториях и научно-исследовательской практике. Набор выпускается в двух видах фасовки и рассчитан, соответственно, на проведение 100 или 500 определений концентрации железа при расходе 1,0 мл реагента 1 или рабочего реагента на один анализ. ^ Связанное с трансферрином железо отщепляется в кислой среде в виде трёхвалентного железа и затем восстанавливается до двухвалентного в присутствии аскорбиновой кислоты. Двухвалентное железо образует с ференом окрашенный комплекс синего цвета, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна концентрации железа в пробе и измеряется фотометрически при длине волны 600 (580 – 600) нм. ^ Реагент 1: буферный раствор, рН 4,5, содержащий ацетат натрия, 1,25 моль/л; тиомочевину, 150 ммоль/л – 4 флакона (по 20 мл), или 5 флаконов (по 80 мл). Реагент 2: аскорбиновая кислота, 1,2 моль/л, ферен 15 ммоль/л, тиомочевина 600 ммоль/л – 1 флакон (20 мл), или 1 флакон (100 мл). Калибратор: калибровочный раствор двухвалентного железа, 17,9 мкмоль/л, в растворе азида натрия, 0,095% – 1 флакон (3,0 мл) или 2 флакона (по 3,0 мл). ^ Набор обеспечивает: линейную область определения концентрации железа в диапазоне от 3,0 до 179 мкмоль/л, отклонение от линейности не превышает 5%. Чувствительность – не более 2,0 мкмоль/л, коэффициент вариации результатов определений – не более 5%. Качество набора можно оценивать по отечественным или зарубежным контрольным сывороткам, аттестованным данными методами. Нормальные величины концентрации железа в сыворотке крови человека составляют 8,9 – 31,2 мкмоль/л. Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон значений нормальных величин для обследуемого контингента людей. ^ Негемолизированная сыворотка крови. Сыворотку крови следует отделить от форменных элементов крови не позднее, чем через 1 час после забора крови. ^ Калибратор содержит токсичный компонент азид натрия. При работе с ним следует соблюдать осторожность и не допускать попадания на кожу и слизистые; при попадании немедленно промыть пораженное место большим количеством проточной воды. При проглатывании следует выпить 0,5 л теплой воды и вызвать рвоту. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т.к. образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции. ^ – Спектрофотометр или фотоэлектроколориметр, длина волны 600 (580 – 600) нм, кювета с длиной оптического пути 10 мм; – секундомер; – пробирки стеклянные вместимостью 3,0-5,0 мл; – колба коническая вместимостью 200 мл; – цилиндры стеклянные мерные вместимостью 50 и 100 мл; – пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 50, 500 и 1000 мкл; – вода деионизованная; – 0,9% раствор NaCl (физиологический раствор); – перчатки резиновые одноразовые. ^ Реагенты готовы к использованию для определения железа в сыворотке крови при запуске реакции субстратом. Приготовление рабочего реагента для определения железа в сыворотке крови при запуске реакции образцом: смешать в колбе конической вместимостью 200 мл реагент 1 (80 мл) и реагент 2 (20 мл). При необходимости приготовления рабочего реагента в меньшем объеме следует смешать нужные объемы реагентов 1 и 2 в соотношении 4:1. Тщательно закрыть флаконы с реагентами 1 и 2 непосредственно после каждого использования. Рабочий реагент можно хранить в темном месте при температуре + 2 – 8°С не более одного месяца или при комнатной температуре (+ 18 – 25°С) – не более одной недели. Калибратор готов к использованию. ^ Запуск реакции субстратом Таблица.
Еоп. или Екал. = (E2 - 0,82E1) опытной или калибровочной пробы, где: 0,82 – коэффициент для компенсации уменьшения величины оптической плотности E2 по сравнению с E1 вследствие разбавления реакционной смеси после добавления реагента 2. Коэффициент рассчитывают: (Объем образца + Объем Реагента 1)/Общий объем. Запуск реакции образцом Таблица.
Пробы перемешать и инкубировать при температуре + 37оС или при комнатной температуре (+18–25оС) в течение 10 минут. Измерить оптическую плотность опытной и калибровочной проб против контрольной (холостой) пробы при длине волны 600 (580 –600) нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм. Окраска растворов стабильна в течение 30 минут. РАСЧЕТЫ Содержание железа в сыворотке крови (в мкмоль/л)определить по формуле:  где: ^ оп. — оптическая плотность анализируемой пробы, ед. опт. пл.; Екал. — оптическая плотность калибратора, ед. опт. пл.; 17,9 — содержание железа в калибраторе, мкмоль/л. ^ Хранение наборов должно производиться при температуре + 2–8оС в упаковке предприятия-изготовителя в течение всего срока годности. Допускается хранение наборов при температуре до + 25оС не более 5 суток. Замораживание компонентов набора не допускается. Срок годности набора – 12 месяцев. Рабочий реагент можно хранить в темном месте при температуре + 2 – 8оС не более одного месяца или при комнатной температуре (+ 18 – 25°С) – не более одной недели. Калибратор после вскрытия флакона можно хранить при температуре + 2–8оС не более 3 месяцев при условии достаточной герметичности флакона. При содержании железа в сыворотке крови выше 179 мкмоль/л анализируемую пробу следует развести физиологическим раствором, приготовленном на деионизованной воде, и полученный результат умножить на разведение. Причиной грубых ошибок может быть недостаточно чистая посуда. Посуду следует мыть хромовой смесью или раствором соляной кислоты, 4,0 моль/л, в деионизованной воде, затем тщательно ополоснуть деионизованной водой. Для получения надежных результатов необходимо строго соблюдать инструкцию по применению набора. По вопросам, касающимся качества набора ЖЕЛЕЗО ФС, следует обращаться в ЗАО “ДИАКОН-ДС” по адресу: 142290, г. Пущино, Московской обл., ул. Грузовая 1а; тел. (495) 980-63-38, 980-63-39; т/факс (495) 980-66-79. Директор производства ЗАО “ДИАКОН-ДС” В.И. Сысоева “СОГЛАСОВАНО” Зав. кафедрой клинической лабораторной диагностики ГОУ ДПО “РМАПО Росздрава” д.м.н., профессор В.В. Долгов 01.03. 2010 г. |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям