Прокопенко валентина михайловна про
|
|
Скачать 473.72 Kb.
|
|
На правах рукописи ПРОКОПЕНКО ВАЛЕНТИНА МИХАЙЛОВНА ПРО- И АНТИОКСИДАНТНАЯ СИСТЕМЫ ПРИ ДИСФУНКЦИИ ПЛАЦЕНТЫ 03. 01. 04 – биохимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Санкт-Петербург 2010 Работа выполнена в Научно- исследовательском институте акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта Северо-Западного отделения Российской академии медицинских наук Научные консультанты: доктор биологических наук, профессор Арутюнян А.В. доктор медицинских наук, профессор ^ Официальные оппоненты: Доктор биологических наук, профессор Ещенко Наталья Дмитриевна Доктор биологических наук, профессор Зыбина Наталья Николаевна Доктор медицинских наук, профессор Галебская Людвига Вячеславовна ^ Российский университет дружбы народов Защита диссертации состоится «____ » ___________2011 в___часов на заседании Диссертационного совета Д 001. 022. 03 при НИИ экспериментальной медицины РАМН по адресу: 197376, Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, д. 12 С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН Автореферат разослан «_____»_____________2011 г. Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук, профессор Пучкова Л. В. ^ Актуальность проблемы. Плацента представляет собой орган, который играет динамичную роль в процессах взаимодействия двух организмов – матери и плода. Высокий темп развития плаценты, растущие потребности плода сопровождаются особыми требованиями к метаболическим процессам, лежащим в основе функциональной деятельности плаценты. Исследование особенностей метаболических процессов в развивающейся при физиологической беременности плаценте дает представление о путях их координации в функциональной системе мать-плацента-плод. Один из таких фундаментальных механизмов биохимической адаптации, наблюдаемым в физиологических условиях и при акушерской патологии, обеспечивающим регуляцию метаболических процессов в плаценте, связан с системами генерации активных форм кислорода и функциональным состоянием многокомпонентной антиоксидантной защиты (М.В Федорова, 1986; R. F.Del Maestro, 1980; C.V. Smith1, 1992; A. Van der Vliet, A. Bast, 1992). Физиологическая беременность характеризуется развитием окислительного стресса, являющегося одним из центральных механизмов общей системы адаптации к новым условиям организма женщины, при котором наблюдается сбалансированное состояние на более высоком уровне прооксидантной и антиоксидантной систем. При физиологически протекающей беременности состояние окислительного стресса возникает в период формирования артериальной циркуляции и увеличения напряжения кислорода в плаценте. Окислительный стресс выполняет в этой ситуации важные физиологические функции, участвуя в запуске механизмов дифференцировки клеток (Ю.Э. Доброхотова и соавт., 2008). В кратковременный период относительного дисбаланса между генерацией и элиминированием активных форм кислорода (АФК) происходит адаптация механизмов системы антиоксидантной защиты к нарушению физиологического равновесия. Неспособность системы антиоксидантной защиты (АОЗ) противостоять усилению процессов свободнорадикального окисления приводит к значительному ослаблению метаболической и детоксицирующей функций плаценты. В последнее время постоянно растет количество работ, посвященных роли систем генерации активных форм кислорода и антиоксидантной системы в формировании метаболических и детоксицирующих функций плаценты (Т.Н. Погорелова и соавт.,1998, 1999; И.И. Крукиер, 2003; А.В. Шестопалов, 2002; А.В. Арутюнян и соавт., 2010). Наиболее полно представлены в литературе данные о соотношении антиоксидантной и прооксидантной систем в плаценте женщин, беременность которых осложнена гестозом (A.C. Staff et al.,1999; R. Madazli et al., 2002; K.A. Boggess et al., 2003; M.T. Raijmakers et al., 2004). Тем не менее, многие вопросы, связанные с развитием дисфункции плаценты в условиях окислительного стресса на протяжении беременности, еще весьма далеки от разрешения. В литературе практически отсутствуют сведения о соотношении систем образования АФК и их элиминации на этапах беременности в разных участках плаценты (центральный и периферический) при акушерских и экстрагенитальных заболеваниях беременных. Центральная зона плаценты, по данным J.Hempstock et al. (2003), лучше оксигенирована, чем периферия, благодаря направлению потока материнской крови. Однако, по мнению авторов, центральные ворсины по сравнению с периферическими характеризуются большей морфологической незрелостью, что может свидетельствовать о функциональных особенностях и значимости центрального и периферического участков плаценты при ее дисфункции. Антиоксидантную систему организма рассматривают как многокомпонентную систему, проявляющую специфическую и неспецифическую активность (Н.К.Зенков, 2001), а также как единую, интегрируемую и регулируемую структуру, находящуюся под генетическим контролем (В.В. Соколовский, 1988; Е.Е. Дубинина, 2006; E.M Berry, R. Kohen, 1999; X.L. Wang et al., 2001). Наиболее важным и эффективным звеном антиоксидантной защиты является система антиоксидантных ферментов: супероксиддисмутаза, каталаза, глутатионпероксидаза, глутатионредуктаза, глутатион-S-трансфераза. Глутатионзависимое звено антиоксидантной системы осуществляет разрушение перекиси водорода, восстановление нестойких органических гидропероксидов в стабильные соединения – окси-кислоты, а также защищает клетки от продуктов перекисного окисления липидов посредством их восстановления. К этому звену относят глутатионпероксидазу (КФ 1.11.1.12), глутатионредуктазу (КФ 1.6.4.2), глутатион-S-трансферазу (КФ 2.5.1.18) и систему глутатиона. Глутатионзависимое звено антиоксидантной системы является частью системы ферментов детоксикации ксенобиотиков. Гены суперсемейства глутатион-S-трансфераз (М1, Т1 и Р1) контролируют синтез ферментов второй фазы детоксикации и характеризуются значительным популяционным полиморфизмом. Сведений об активности глутатионзависимой антиоксидантной системы и вкладе генетической составляющей в изменение буферной емкости глутатионзависимого звена антиоксидантной системы в плаценте при невынашивании беременности малочисленны и неоднозначны. Оценок генетической вариабельности полиморфных локусов генов, вовлеченных в формирование глутатионзависимого звена АОС при самопроизвольном прерывании беременности, явно недостаточно (О.Н.Беспалова, 2001, 2009; А. Hirvonen et al., 1996). Каскад нарушений метаболизма в плаценте при самопроизвольном преждевременном прерывании беременности может служить моделью для изучения универсальных механизмов, представляющих собой срыв адаптационно-гомеостатических реакций поддержания адекватного обмена между организмами матери и плода (Т.И. Погорелова и соавт., 1997; В.Е. Радзинский, П.Я.Смалько, 2001). ^ явилась комплексная оценка состояния про- и антиоксидантной систем плаценты при физиологической беременности и акушерской патологии, сопровождающейся дисфункцией плаценты, приводящей к невынашиванию беременности, для выявления значения генерации активных кислородных метаболитов и ферментативного звена антиоксидантной защиты в развитии плацентарной недостаточности. Задачи исследования: 1. Провести сравнительную оценку интенсивности свободнорадикального окисления и ферментативного звена антиоксидантной защиты в митохондриях плаценты при физиологически протекающей беременности и невынашивании беременности. 2. Исследовать механизм генерации активных форм кислорода в постмитохондриальной фракции плаценты. 3. Провести сравнительную оценку интенсивности хемилюминесценции, содержания продуктов перекисного окисления липидов и окислительной модификации белков в постмитохондриальной фракции плаценты при физиологической беременности и невынашивании. 4. Исследовать активность NO-cинтазы и миелопероксидазы в центральной и периферической областях плаценты на протяжении физиологической беременности и при невынашивании. 5. Сопоставить величины общей антиокислительной активности, активности ферментативного звена антиоксидантной системы в центральной и периферической областях плаценты при физиологическом течении беременности и невынашивании. 6. Исследовать состояние глутатионзависимой антиоксидантной системы в центральной и периферической областях плаценты на протяжении физиологической беременности и при невынашивании. 7. Выявить частоту встречаемости функционально ослабленных сочетаний генов семейства GST (GST P1, GST M, GST T) в плаценте женщин при невынашивании и выяснить зависимость между вариантами генотипа GST P1 и уровнем активности ферментов глутатионзависимой антиоксидантной системы. 8. Выявить значение системных нарушений глутатионзависимого звена антиоксидантной защиты плаценты в патогенезе невынашивания беременности. 9. Оценить вклад прооксидантной и антиоксидантной систем плаценты в механизм патогенеза ее дисфункции, приводящего к акушерской патологии (невынашиванию беременности). Научная новизна. Установлены системные нарушения в функционировании антиоксидантной и прооксидантной систем плаценты при ее дисфункции. Впервые проведено комплексное исследование состояния прооксидантной и антиоксидантной систем плаценты у женщин при физиологическом течении беременности и при невынашивании. Показано, что спонтанное преждевременное прерывание беременности происходит в условиях развития окислительного стресса в митохондриях и постмитохондриальной фракции периферийного участка плаценты, где на фоне повышения уровня интенсивности процессов пероксидации наблюдается недостаточное увеличение общей емкости антиоксидантной защиты и ослабление вне зависимости от локализации ее глутатионзависимого звена. Впервые установлено, что возникновение люминолзависимой хемилюминесценции в плацентах женщин связано с участием одновременно двух механизмов: СОД-зависимого (присутствие О2· и ОН· радикалов) и СОД-независимого (наличие гипохлоритного анион радикала). При самопроизвольном прерывании беременности отмечается существенное уменьшение реакций, протекающих по СОД-независимому механизму, связанное с ограничением вовлеченности гипохлоритного анионрадикала в процессы свободнорадикального окисления в плаценте. Впервые выявлено изменение содержания миелопероксидазы, катализирующей реакцию образования гипохлорита, в плацентах при физиологически протекающей беременности и при невынашивании, возникшем на разных сроках беременности. Показано, что снижение активности NO-синтазы в периферической части плацент женщин определяет снижение уровня защитно-приспособительных реакций, обеспечивающих течение беременности. Проведено комплексное исследование глутатионзависиной антиоксидантной системы при физиологическом течении беременности и при невынашивании. Впервые на основании определения активности ферментов глутатионзависимого звена антиоксидантной защиты в плацентах и хорионах установлен индекс преждевременного прерывания беременности, абсолютное значение которого обратно пропорционально риску развития прерывания беременности. Изучена встречаемость различных вариантов аллелей генов GST, кодирующих синтез глутатионзависимых ферментов в плацентах беременных женщин с самопроизвольным преждевременным прерыванием беременности, и впервые обнаружено, что невынашивание беременности связано с высокой частотой встречаемости функционально ослабленных сочетаний аллелей этих генов. Впервые показано, что на уровень активности глутатионпероксидазы в плаценте оказывает влияние наличие аллеля В в гене GST Р1, а активность глутатион-S-трансферазы плаценты имеет прямую зависимость с наличием аллеля А и отсутствием аллеля С в гене GST Р1. Научно-теоретическая и практическая значимость Работа вносит существенный вклад в понимание патогенетических механизмов развития дисфункции плаценты и дает углубленное представление о роли про - и антиоксидантных систем в особенностях ее формирования при невынашивании беременности. Проведенные исследования позволяют оценить роль индивидуальных звеньев исследуемых систем в развитии дисфункции плаценты, сопровождающейся усилением окислительного стресса и спонтанным преждевременным прерыванием беременности разных сроков. Представленная модель спонтанного преждевременного прерывания беременности позволяет оценить возможность исхода беременности от активности ферментов глутатионзависимого звена антиоксидантной защиты в центральной части плаценты: глутатионпероксидазы и глутатион-S-трансферазы. Полученные данные о снижении емкости глутатионзависимого звена антиоксидантной защиты при невынашивании беременности являются основанием для научно обоснованной коррекции метаболических и функциональных нарушений плаценты, что позволит целенаправленно осуществлять профилактику осложнений у беременных. Выявленные зависимости активности глутатионзависимых ферментов от вариантов генотипа по гену GST Р1 предполагают дифференцированный подход при назначении лечебных препаратов антиоксидантной терапии у женщин с угрозой прерывания беременности. Впервые предложено использование быстрого, методически несложного метода хемилюминометрического анализа сыворотки крови для оценки эффективности лечения при угрозе прерывания беременности. Показана диагностическая возможность использования показателей хемилюминометрии в качестве дополнительных критериев для экспресс-диагностики дисфункции плаценты и контроля за эффективностью проводимого лечения при угрозе прерывания беременности. Основные положения, выносимые на защиту
Апробация работы и личный вклад автора. Основные положения работы доложены и обсуждены на следующих научных форумах:
Клинические наблюдения проводились в отделении патологии беременности НИИАГ им. Д.О. Отта СЗО РАМН (руководитель – проф., д.м.н. О.Н. Аржанова). Генетические исследования проводили в лаборатории пренатальной диагностики наследственных болезней НИИАГ им. Д.О. Отта СЗО РАМН с участием автора (руководитель – член-кор. РАМН, проф. д.м.н. В.С. Баранов). Биохимические исследования были выполнены автором лично в лаборатории биохимии с клинико-диагностическим отделением НИИАГ им. Д.О. Отта СЗО РАМН (руководитель – проф., д.б.н. А.В. Арутюнян). Определение миелопероксидазы проводилось самостоятельно на базе лаборатории общей патологии НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН (руководитель – проф., д.б.н. В.Н. Кокряков). Обработка, анализ и интерпретация полученных данных выполнены автором лично. Публикации. По теме диссертации опубликовано 40 работ, в том числе 15 статей - в изданиях, включенных в перечень ВАК Минобрнауки РФ. Объем и структура диссертации. Текст диссертации изложен на 229 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов и их обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, включающего 422 источника, в том числе 134 отечественных и 288 зарубежных. Работа иллюстрирована 24 таблицами и 30 рисунками. ^ Материалы и методы исследования В проспективное исследование были включены 192 беременные женщины. Группу сравнения составили 97 относительно здоровых женщин, имевших физиологическую беременность. У 10-ти из них беременность была прервана в I триместре беременности (до 13 недель) путем искусственного аборта по желанию женщины (I-я подгруппа), у 15 женщин – во II-ом триместре (до 28-ой недели) по социальным показаниям методом интраамниального введения энзапроста (PG E2) (II -я подгруппа) и у 72 женщин беременность закончилась срочными родами в 37-40 недель ( III-я подгруппа). Основную группу составили 95 женщин, беременность которых прервалась самопроизвольно и преждевременно в сопоставимые сроки: 12 женщин - I-я подгруппа; 14 женщин - II -я подгруппа и 69 женщин - III-я подгрупп (28 – 36 недель). Средний возраст женщин основной группы составил 29,2±0,8 лет, группы сравнения - 26,9±1,2 лет. Все пациентки с урогенитальными инфекциями до наступления беременности получали специфическую антибактериальную терапию. С угрозой прерывания беременности поздних сроков обследовано 95 пациенток в возрасте от 18 до 40 лет со сроком беременности от 24 до 36 недель и 12 небеременных женщин, которые составили 1-ую группу. Во 2-ю группу вошли 25 женщин с неосложненным течением беременности, 3-ью группу составили 20 женщин с угрозой прерывания беременности, получавших инфузии бриканила, 4-ую группу – 23 женщины, прошедшие курс лечения магне-В6 и 5-ую группу – 27 женщин, которым проводилось лечение электросном. Материалом для комплекса биохимических исследований служили гомогенаты хорионов (на ранних сроках беременности) и центрального и периферического участков плацент женщин выше представленных групп. В исследованиях оценки степени риска невынашивания при угрозе прерывания беременности поздних сроков использовали сыворотку крови. Митохондриальная фракция плаценты была получена методом дифференциального центрифугирования. Гомогенат ткани центрифугировали 15 минут при 750 g при 40С. Для осаждения митохондрий надосадочную жидкость центрифугировали при 10800 g в условиях соблюдения холодового режима. В качестве среды выделения использовали 0.25 М раствор сахарозы, содержащий 1 мМ ЭДТА (рН 7,4) (Johnson D., Lardy H, 1967). Содержащая микросомы цитозольная фракция плаценты (постмитохондриальная фракция) была получена после последовательного центрифугирования гомогенезированной в ледяном буфере, содержащем 60мМ КН2РО и 105 мМ КСl (рН 7,4), ткани при 750 g и полученного супернатанта при 10800 g в условиях соблюдения холодового режима. ^ оценивали по количеству ТБК-активных продуктов (малонового диальдегида - МДА), диеновых конъюгатов (ДК) и по показателям Н2О2 – индуцируемой люминолзависимой хемилюминесценции (Л-ХЛ), измеряемой на хемилюминометре Emilitte-1105 (Россия). В хемилюминометрических исследованиях регистрировали светосумму (СС) и высоту вспышки ХЛ (МВ), величины которых характеризуют интенсивность свободнорадикальных реакций и расходования свободных радикалов при их взаимодействии с эндогенными антиоксидантами биосубстрата (Арутюнян А.В. и соавт., 2000). МДА определяли спектрофотометрически по интенсивности окраски комплекса, образующегося в результате взаимодействия малонового диацетальдегида с двумя молекулами тиобарбитуровой кислоты с максимум поглощения при 535 нм (Андреева Л.И. и соавт.,1988). Концентрацию ДК определяли в экстракте гептановой фазы спектрофотометрически при длине волны 232 нм (Путилина Ф.Е. и др., 2006). ^ оценивали по содержанию карбонильных производных аминокислот в белках. Метод основан на реакции взаимодействия окисленных аминокислотных остатков белков со специфическим реагентом на карбонильные группы – 2,4-динитрофенилгидразином - с образованием 2,4-динитрофенилгидразонов, которые регистрировали спектрофотометрически при длине волны 363 нм. Интенсивность окислительной модификации белков рассчитывали, используя коэффициент молярной экстинции 22 х 103 х М-1см -1(Levine R.L. et al., 1994, Дубинина Е.Е. и соавт., 1995). Активность NO-синтазы (КФ 1.14.13.39) определяли по количеству нитрита с помощью классической реакции Грисса (Schmidt H.W., Kelm M., 1996). В качестве стандарта для калибровочной кривой использовался NaNO3 . Содержание миелопероксидазы (МПО) определяли с помощью твердофазного иммуноферментного анализа. Калибровочная кривая строилась с использованием стандартного раствора МПО (Арутюнян А.В. и др., 2000; Mullane K.M. et al., 1985). ^ основано на измерении Н2О2 – зависимого окисления тетраметилбензидина. За единицу ферментативной активности (Е) принимали количество фермента, которое изменяет величину экстинции на 1.0 в мин. (Кокряков В.Н. и соавт., 1982). ^ оценивали, определяя уровень антиоксидантной активности (АОА), содержание небелковых тиоловых групп и антиоксидантных ферментов супероксиддисмутазы (СОД), каталазы, глутатионпероксидазы (ГП), глутатионредуктазы (ГР) и глутатион-S-трансферазы (Г Т). Для определения АОА использовали хемилюминесцентную реакцию рибофлавина в присутствии перекиси водорода и ионов двухвалентного железа. Измерение свечения осуществляли при 37о С в течение 2 мин. АОА выражали в относительных единицах (1 отн.ед. соответствует 1 мV) и рассчитывали по формуле АОА=1-S1/S2 , где S – средняя величина светосуммы опытного (S1) или контрольного (S2) образцов в относительных единицах (Путилина Ф.Е. и соавт, 2006). Определение небелковых тиоловых групп осуществляли с помощью реактива Эллмана (Sedlak J., Lindsay R.H.,1968). Активность Cu,Zn-супероксиддисмутазы определяли с использованием системы, обеспечивающей восстановление нитросинего тетразолия (Чевари С. с соавт, 1985). Активность каталазы определяли по методу, основанному на способности перекиси водорода образовывать с солями молибдена окрашенный комплекс (Королюк М.А. и соавт.,1988). Активность глутатионпероксидазы определяли по методу Моина В.М. (1986), основанному на определении скорости окисления глутатиона в присутствии гидроперекиси третичного бутила, активность глутатионредуктазы определяли по убыли НАДФН в реакции с экзогенным окисленным глутатионом (Horn H.D., 1965). Определение активности глутатион-S-трансферазы основано на оценке скорости ферментативного образования GS-2,4-динитробензола в реакции восстановленного глутатиона с 1-хлор-2,4-динитробензолом (Арутюнян А.В. и соавт., 2000). ^ в плаценте оценивали по методу Малаховой М.Я. (1995), определяя уровень веществ средней молекулярной массы (СММ) и содержание олигопептидов (ОП). Числовую величину веществ СММ представлял интегральный показатель оптической плотности, который рассчитывался как сумма экстинций на измеряемом отрезке длин волн и равен площади под спектрограммой. Олигопептиды определяли в разбавленном центрифугате плаценты, используя метод Lowry et al., 1951. Индекс интоксикации плаценты рассчитывали как произведение концентраций веществ СММ и ОП и выражали в относительных единицах. ^ выделение ДНК проводили по стандартной методике Sambrook J. et al. (1989). Определение аллельных вариантов генов GSTT1 и GSTM1 проводили методом ПЦР. Определение аллельных вариантов генов GSTP1 проводили методом ПЦР с последующим рестрикционным анализом, используя специфические эндонуклеазы Bso MA1 (праймеры GST p 1F и GST p 2R) и BstFN1 (праймеры GST p 3F и праймеры GST p 4R) согласно рекомендациям фирмы изготовителя эндонуклеаз («Сибэнзим», г.Новосибирск, «Ферментас», Латвия). Продукты реакции после амплификации и рестрикции разделяли в 7% полиакриламидном геле с последующей окраской этидиумбромидом и анализировали в проходящем УФ свете на трансиллюминаторе «Macrovue» (фирма «Pharmacia LKB») с фиксацией посредством видео системы гель документации «Gel Imager 2». ^ результатов исследования выполнялась с использованием стандартных пакетов программ прикладного статистического анализа (Statistica v.6.0, Microsoft Excel-2002). Для оценки статистической значимости различий между исследуемыми группами использовали критерий Стьюдента (t-критерий) после проверки характера распределения с помощью теста Фишера, U-критерия Вилкоксона-Манна-Уитни и Н-критерия Крускала-Уоллиса. Результаты оценивали как статистически значимые при р<0,05. Корреляционный анализ выполнен методом Спирмэна с расчетом коэффициента ранговой корреляции. Использовались также методы факторного дисперсионного анализа (ANOVA) и множественного регрессионного анализа. ^ Уровень процессов свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты в митохондриях плацент женщин при физиологической беременности и преждевременных родах В последние десятилетия одним из подходов для изучения изменений в процессах свободнорадикального окисления (СРО) биологических объектов, в частности митохондрий, является измерение уровня интенсивности хемилюминесценции . Кинетика люминолзависимой ХЛ отражает кинетику образования и расходования АФК. Изменение интенсивности люминолзависимой ХЛ в митохондриях плаценты мы оценивали по интегральному показателю – светосумме вспышки. Результаты собственных исследований показали, что в митохондриях, выделенных из плацент женщин при поздних сроках невынашивания (преждевременные роды), уровень интенсивности процессов свободнорадикального окисления в периферической части плаценты был выше на 24% (р<0,05), чем в митохондриях плацент женщин при физиологическом течении беременности, завершившейся родами в срок. Величина общей антиоксидантной активности (ОАА) в митохондриях плацент центрального и периферического участков женщин при преждевременных родах превышала таковую в митохондриях плацент женщин с физиологически протекающей беременностью в 1,5 и 1,8 раз соответственно (табл. 1). Вместе с тем, нами установлено, что уровень активности ГП в митохондриях плацент женщин при преждевременных родах был ниже, чем таковой у пациенток с неосложненным течением беременности, завершившейся родами в срок (Рис. 1) Не выявлено изменений в уровнях активности СОД в митохондриях плацент у женщин обследованных групп. Таблица 1 Интенсивность хемилюминесценции и общей антиоксидантной активности в митохондриях плацент женщин при физиологической беременности, завершившейся родами в срок, и при преждевременных родах
Примечание: * р<0,05 по отношению к периферическому участку плацент женщин с физиологической беременностью, завершившейся родами в срок; ^^р<0,01 по отношению к периферическому участку плацент женщин с преждевременными родами; * р<0,05 по отношению к группе женщин с физиологической беременностью; ^ р<0.05 - по отношению к центральной части плаценты  Рис.1. Активность глутатионпероксидазы в митохондриях плацент женщин с физиологической беременностью, завершившейся родами в срок, и при преждевременных родах Примечание: *р<0,05 дано по отношению к плаценте женщин с физиологическим течением беременности Полученные данные свидетельствуют о том, что в митохондриях плаценты при преждевременных родах наблюдается развитие окислительного стресса, протекающее на фоне подъема активности прооксидантной системы митохондрий, выделенных из периферической части плаценты, и ослабления функционирования в них глутатионзависимого звена антиоксидантной защиты. ^ Механизмы появления АФК в клетке связаны не только с нарушениями функционирования электронно-транспортных цепей в митохондриях. Генерация АФК происходит при окислительно-восстановительных реакциях, протекающих с участием кислорода в различных субклеточных структурах клетки (Меньщикова Е.Б. и соавт., 2006; Октябрьский О.Н., 2007). В микросомах наблюдается генерация АФК как результат функционирования гидроксилазной ферментативной системы с участием цитохрома Р-450 ( Арчаков А.И., 1975, 1998). Наши исследования показали, что величина Л-ХЛ в постмитохондриальной фракции периферической части плацент у женщин с самопроизвольным преждевременным прерыванием беременности на 42% превышает интенсивность Л-ХЛ в плацентах женщин с неосложненным течением беременности, завершившейся родами в срок. В центральной части плацент женщин обследованных подгрупп различий в интенсивности Л-ХЛ не наблюдалось (табл.2). Таблица 2. Интенсивность люминолзависимой хемилюминесценции в постмитохондриальной фракции плацент женщин с физиологическим течением беременности и преждевременными родами
Примечание: *р<0,05 по отношению к периферической части плаценты; ** р<0,01 по сравнению с физиологической беременностью *** р<0,001 по отношению к периферической части плаценты СС – светосумма, МВ – максимальная вспышка. Интенсивность ХЛ, по данным ряда исследователей (Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П., 1989; Федорова Т.Н и соавт., 1991; Болдырев А.А., 2001), тесно связана с процессами развития перекисного окисления липидов (ПОЛ) и окислительной модификацией белков (ОМБ). Как показали наши исследования при преждевременных родах в периферической области плацент отмечалось увеличение на 62% (р<0.05) ТБК-активных компонентов (малонового диальдегида – МДА), представляющих промежуточные продукты процесса пероксидации липидов, по сравнению с таковыми в периферической области плацент женщин с неосложненной беременностью. Интенсивность окислительной модификации плацентарных белков в постмитохондриальной фракции, определенная нами по уровню содержания карбонильных производных, не отличалась как по периферии, так и по центру в плацентах женщин обследованных групп (табл.3). |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям