Привычное невынашивание беременности: патоморфологический анализ эндометрия, клинические особенности и обоснование стратегии терапии 14. 00. 15 патологическая анатомия 14. 00. 01 акушерство и гинекология
|
|
Скачать 0.76 Mb.
|
|
На правах рукописи Илизарова Наталья Александровна ПРИВЫЧНОЕ НЕВЫНАШИВАНИЕ БЕРЕМЕННОСТИ: ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ЭНДОМЕТРИЯ, КЛИНИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ И ОБОСНОВАНИЕ СТРАТЕГИИ ТЕРАПИИ 14.00.15 – патологическая анатомия 14.00.01 – акушерство и гинекология Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Новосибирск – 2009 Работа выполнена в ГОУ ВПО Новосибирском государственном медицинском университете Росздрава и Научно-исследовательском институте региональной патологии и патоморфологии Сибирского отделения РАМН (Новосибирск) ^ доктор медицинских наук, профессор Маринкин Игорь Олегович доктор медицинских наук, профессор Непомнящих Давид Львович Официальные оппоненты: Академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор ^ доктор медицинских наук, профессор Лапий Галина Анатольевна доктор медицинских наук, профессор Евтушенко Ирина Дмитриевна ^ ФГУ Новосибирский Научно-исследовательский институт патологии кровообращения имени академика Е.Н.Мешалкина Росмедтехнологий Защита диссертации состоится "_____" __________ 2009 г. в ____ часов на заседании диссертационного совета Д 001.037.01 в НИИ региональной патологии и патоморфологии СО РАМН (630117, Новосибирск, ул. Тимакова, 2). С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ региональной патологии и патоморфологии СО РАМН (630117, Новосибирск, ул. Тимакова, 2). Автореферат диссертации разослан "____" ___________ 2009 г. Ученый секретарь диссертационного совета Д 001.037.01 доктор биологических наук Молодых Ольга Павловна ^ Актуальность проблемы. Привычное невынашивание беременности (ПНБ) является одной из наиболее сложных медико-социальных проблем. Согласно определению ВОЗ, ПНБ принято считать наличие в анамнезе женщин трех и более самопроизвольных прерываний беременности в сроке до 22 нед (Кулаков В.И. и др., 2001; Сидельникова В.М., 2002). ПНБ – мультифакторное, нередко генетически детерминированное заболевание, среди его причин – эндокринные нарушения (наиболее часто - недостаточность лютеиновой фазы и гиперандрогения), инфекционные заболевания (в основном хронические персистирующие инфекции), иммунологические и тромбофилические нарушения, пороки развития матки. В большинстве случаев причиной прерывания беременности в I-м триместре является эндокринная патология, прежде всего – неполноценная лютеиновая фаза, возникающая в связи с гиперсекрецией ЛГ, гипосекрецией ФСГ, гипоэстрогенией, гиперандрогенией, поражением рецепторов эндометрия (например, при хроническом эндометрите с высоким уровнем цитотоксичных клеток CD56+, CD16+ и вырабатываемых ими провоспалительных цитокинов, как правило, сохраняется нормальный уровень гормонов) (Сидельникова В.М., 2004; Scarpellini F., Sbracia M., 2009). Важно отметить взаимозависимость перечисленных причин ПНБ, например, уровень прогестерона оказывает непосредственное влияние на систему цитокинов. При низком содержании прогестерона или поражении рецепторов выявлен низкий уровень прогестерониндуцированного блокирующего фактора. В этих условиях иммунный ответ матери на трофобласт реализуется с пребладанием Тh 1 типа, продуцирующих в основном провоспалительные цитокины TNF-α, IFN-γ, ИЛ-1 и ИЛ-6, обладающие прямым эмбриотоксическим эффектом и способствующие прерыванию беременности в I-м триместре (Тихомиров А.Л., Лубнин Д.М., 2004; Сидельникова В.М., 2005; Balkwill F., 2001). При физиологической беременности в крови преобладают цитокины Тh 2 типа, в том числе ИЛ-4, блокирующие реакции клеточного иммунитета и способствующие инвазии трофобласта (Сухих Г.Т., Ванько Л.В., 2003; Makhseed M. et al., 2001; Das C. et al., 2002; Soriano D. et al., 2003). В связи с этим большую роль в генезе ПНБ придают хроническому эндометриту, имеющему для имплантации и последующего отторжения плодного яйца не менее важное значение, чем дефицит прогестерона. Избыточное количество провоспалительных цитокинов ведет к активации протромбиназы, что обусловливает тромбозы, инфаркты трофобласта и его отслойку, и в конечном итоге – прерывание беременности в I триместре. При сохранении беременности в дальнейшем формируется первичная плацентарная недостаточность (Радзинский В.Е., 2004; Makhseed M. et al., 2001; Miyaura H., Iwata M., 2002). Важную роль в патогенезе ПНБ придают окислительному стрессу – универсальному патологическому процессу (Mandang S. Et al., 2007). Продукты перекисного окисления липидов участвуют в каскаде деструктивных изменений клеточных мембран и в условиях неадекватности антиоксидантной системы модулируют иммунный ответ и другие адаптивные реакции организма (Сафронов И.Д., 1999; Абрамченко В.В., 2001; Якорева И.Г., 2003; Little R.E., Gladen B.C., 2000; Bendich A., 2001; Scarpellini F. et al., 2006). Кроме того, при исключении всех указанных причин ПНБ остаются идиопатические выкидыши (примерно 15%), патогенез которых неясен (Кулаков В.И., 2001, 2005; Сидельникова В.М., 2005; Ahmed M., Badawy A.M. et al., 2003). Эпителий и строма эндометрия являются быстро обновляющимися тканями, одними из самых чувствительных мишеней гормональных воздействий, и под влиянием половых гормонов очень быстро подвергаются ремоделированию. Наличие эстрогеновых рецепторов в клетках эндометрия является ведущим фактором, обеспечивающим воплощение гормональных импульсов в структурные изменения (Хмельницкий О.К., 1994; Аничков Н.М., 2001). Эстрогены обеспечивают процессы пролиферации эндометрия, одновременно индуцируя синтез рецепторов прогестерона (Herve M. et al., 2006). Недостаточная экспрессия рецепторов прогестерона, как следствие неадекватного содержания эстрогенов, лежит в основе недостаточности лютеиновой фазы. Однако даже при достаточной продукции прогестерона может наблюдаться «морфологическая незрелость» эндометрия. В связи с этим важен не только уровень стероидов в организме, но и сохранение всех путей реализации гормонального эффекта (Побединский Н.М. и др., 2000; Сидельникова В.М., 2002; Mertens H.J. et al., 2000). При этом серия исследований по тестированию уровня прогестерона при ПНБ показала, что диагностика недостаточности лютеиновой фазы по уровню прогестерона в сыворотке крови менее информативна, чем при морфологическом исследовании эндометрия (Сидельникова В.М., 2005, 2007; Homback-Kionisch S. et al., 2005). Тем не менее, даже если механизм формирования недостаточности лютеиновой фазы не связан с уровнем прогестерона, механизм прерывания беременности ассоциирован с изменениями, происходящими в эндометрии в результате нарушения секреторной трансформации, обусловленной недостаточностью продукции или неадекватностью реакции органа-мишени на прогестерон (Побединский Н.М. и др., 2000; Mertens H.J. et al., 2000). Генез данного репродуктивного нарушения обусловлен «неподготовленностью» эндометрия к полноценной инвазии бластоцисты и дальнейшего ее развития (Rosario G.X. et al., 2005). В большинстве биоптатов эндометрия, выполненных во время овулярной стимуляции, нередко возникает несоответствие между стромальными изменениями и состоянием желез; к признакам ранней секреции относят гландулярные субнуклеарные вакуоли, морфогенез и роль которых остаются предметом дискуссий (Топчиева О.И. и др., 1978; Хмельницкий О.К., 1994; Аничков Н.М., 2001; Кулаков В.И., 2005; Сухих Г.Т. и др., 2006). Учитывая медицинскую и социальную значимость проблемы невынашивания беременности, нахождение путей ее коррекции является весьма важной задачей. Внедрение новых технологий и методов лечения привело к снижению уровня репродуктивных потерь, но не изменило частоты угрозы невынашивания, которая по-прежнему составляет 15 – 20%. Если терапия преждевременных родов и поздних самопроизвольных выкидышей достаточно изучена, то вопрос лечения невынашивания на ранних сроках беременности не нашел однозначного ответа. Отсутствие четких представлений о механизме прерывания беременности препятствует проведению эффективной патогенетической терапии (Радзинский В.Е., 2004; Серов В.Н., 2005; Сидельникова В.М., 2005; Тихомиров А.Л., 2007, 2008). Основой подготовки беременности пациенток с ПНБ должна быть стимуляция рецепторного аппарата эндометрия. Современный подход к лечению эндокринных форм ПНБ состоит в сочетании гормональной терапии с использованием средств, обладающих прямым или опосредованным действием на метаболизм стероидов (Vigano P. et al., 2006). Однако недостаточная эффективность восстановления фертильности при ПНБ эндокринного генеза требует разработки новых подходов к терапии и совершенствования схем предгравидарной подготовки. Цель исследования – изучить патоморфогенез и обосновать стратегию терапии привычного невынашивания беременности на основе комплексного клинического и структурно-функционального изучения репродуктивной системы. ^ :
^
^ Впервые сформулирована концепция патоморфогенеза привычного невынашивания беременности, который включает в себя комплекс взаимосвязанных патологических феноменов – эндокринные нарушения, антифосфолипидный синдром, тромбофилии, дисбаланс иммунных реакций, оксидативный стресс, а также метаболическая дисфункция как отражение синдрома регенераторно-пластической недостаточности, проявляющегося снижением регенераторных реакций клеточных популяций эндометрия. Основными ультраструктурными маркерами синдрома регенераторно-пластической недостаточности являются уменьшение числа белоксинтезирующих цитоплазматических органелл и отсутствие внутриядерных канальцев в эпителиоцитах со снижением их секреторной активности и экспрессии рецепторов к эстрогенам и прогестерону. Основу стратегии терапии привычного невынашивания беременности составила индукция регенераторных реакций в эпителиальных и эндотелиальных клеточных популяциях эндометрия, что способствовало усилению биосинтетических реакций, активации рецепторной чувствительности и воплощению гормональных импульсов в структурные изменения при сниженной дозировке 17β-эстрадиола. Четко сформулированы структурно-функциональные изменения эндометрия при привычном невынашивании беременности в условиях различных вариантов предгравидарной подготовки. Метаболическая терапия способствовала повышению секреторной функции эпителия при сохранении низкого уровня экспрессии рецепторов. Сочетание метаболической терапии и дидрогестерона стимулировало более значительную, но неоднородную секреторную реакцию, ассоциированную с увеличением иммунопозитивных паренхиматозных и стромальных клеточных элементов в эндометрии. Сочетание метаболической и циклической гормональной терапии индуцировало полноценную секреторную активность эндометрия с высоким уровнем экспрессии рецепторов к эстрогенам и прогестерону. Впервые выделены ультраструктурные маркеры восстановления секреторной фазы менструального цикла в результате предгравидарной подготовки с метаболической и циклической гормональной терапией – система многочисленных внутриядерных канальцев, большое число белоксинтезирующих органелл и формирование мегамитохондрий. Впервые показано, что при привычном невынашивании беременности в использованном варианте предгравидарной подготовки воздействие гормональной терапии на иммунные реакции способствует усилению активности Тh 2 типа, продуцирующих интерлейкин-4, и снижению интерлейкина-1β в сыворотке крови. Антиоксидантная терапия обеспечивает направленную регуляцию активности реакций перекисного окисления липидов и снижает риск развития окислительного стресса во время беременности. Включение в схему терапии антиоксидантов (токоферол- и ретинол-ацетата) способствует снижению активности реакций перекисного окисления липидов и способствует сохранению беременности. Показан достаточно высокий уровень наследственно обусловленных гемостазиологических синдромов (гипергомоцистеинемия 23%, тромбофилии 22% и проявления антифосфолипидного синдрома у 20% пациенток). В биоптатах эндометрия обнаружены более выраженные нарушения микроциркуляции и дегенеративно-дистрофические изменения эндотелия. ^ Применение циклической гормональной терапии в условиях привычного невынашивания беременности способствовало коррекции гормонального статуса женщин с патологией беременности, восстановлению циклических изменений в эндометрии, соответствию структурных преобразований в матке секреторной фазе менструального цикла. Включение в предгравидарную подготовку натурального аналога прогестерона – дидрогестерона (дюфастона) – представляется патогенетически обоснованным не только для восстановления уровня прогестерона, но и для снижения продукции цитокинов, обладающих провоспалительным потенциалом и способных нарушать развитие беременности. Циклическая гормональная терапия, обеспечивающая адекватное поступление половых стероидных гормонов, индуцирует внутриклеточную регенерацию клеточных элементов эндометрия с полноценной секреторной трансформацией и восстановленной экспрессией рецепторного аппарата. Использование в предгравидарной подготовке дидрогестерона и циклической гормональной терапии способствует повышению частоты наступления беременности. Полученные данные позволяют расширить существующие представления о патогенетической роли и значимости участия реакций перекисного окисления липидов и иммунитета в механизмах нарушения гестации. При привычном невынашивании беременности в первом триместре обосновано включение в комплексную терапию гормональных (дидрогестерон) и антиоксидантных (ретинол, токоферол) препаратов при ведении беременности. Предложено внутриматочное введение гелевой формы иммобилизованного протеолитического фермента «имозимаза» для профилактики воспалительных осложнений в послеабортном периоде у пациенток с неразвивающейся беременностью в первом триместре. Ферментативная санация первичного очага инфекции при неразвивающейся беременности ускоряет репаративные процессы в эндометрии, способствует восстановлению баланса про- и противовоспалительных цитокинов и маркеров про- и антиоксидантной активности, обеспечивая восстановление полноценного менструального цикла. ^ Результаты исследования внедрены в преподавательскую и научно-исследовательскую работу кафедр акушерства и гинекологии лечебного и педиатрического факультетов, общей патологии, патологической физиологии Новосибирского государственного медицинского университета, а также в лечебную работу Муниципального центра планирования семьи и репродукции (Новосибирск). ^ Основные положения диссертации доложены на Международном конгрессе «Эндоскопия в диагностике, лечении и мониторинге женских болезней» (М., 2000); научно-практической конференции, посвященной 20 летию Новосибирского городского перинатального центра «Современные медицинские технологии в перинатологии, акушерстве и гинекологии» (Новосибирск, 2001); научно-практической конференции врачей «Актуальные вопросы современной медицины» (Новосибирск, 2002 – 2004); V Российском форуме «Мать и дитя» (Москва, 2003); научно-практической конференции, посвященной 65-летию кафедры акушерства и гинекологии лечебного факультета НГМА (Новосибирск, 2003); ХI научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы акушерства и гинекологии» (Кемерово, 2007); III Всероссийской научно-практической конференции «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов» (Новосибирск, 2007); Российской научно-практической конференции «Новые технологии в репродуктивной медицине» (Новосибирск, 2007); областных школах акушеров-гинекологов (Новосибирск, 2006 - 2008); Международной научно–практической конференции «Иммунологические аспекты репродукции человека» (Новосибирск, 2008); III Международном конгрессе по репродуктивной медицине (Москва, 2009); Межрегиональной научно-практической конференции «Новые технологии в акушерстве, гинекологии и педиатрии» (Новосибирск, 2009); межлабораторной и межкафедральной научной конференции НИИ региональной патологии и патоморфологии СО РАМН и Новосибирского государственного медицинского университета (Новосибирск, 2009). Публикации. Опубликованы 42 работы, из них 9 в рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК для опубликования материалов докторских диссертаций. ^ . Диссертация изложена на 250 страницах компьютерного текста и содержит введение, обзор литературы (1 глава), характеристику клинических наблюдений и методы исследования (1 глава), результаты собственных исследований (5 глав), обсуждение полученных результатов (1 глава), выводы, практические рекомендации, список литературы. Текст иллюстрирован 25 таблицами и 56 рисунками (диаграммы, микрофото- и электронограммы). ^ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Проведено комплексное обследование 335 женщин репродуктивного возраста, в том числе 183 – с привычным невынашиванием беременности на трех стадиях. Первый блок – изучены клиническая картина и биоптаты эндометрия 80 женщин c ПНБ (1, 2 и 3 группы) с тремя схемами предгравидарной подготовки в течение 3-х менструальных циклов и 20 биоптатов женщин с наличием в анамнезе беременностей с благоприятным исходом (контроль, 4-я группа). Средний возраст женщин по группам не имел значимых различий (табл. 1). Первая группа: 20 женщин - циклическая метаболическая терапия 3 раза в сут: с 5-го по 15-й дни менструального цикла – витамин Е 100 мг, пантотенат кальция 0,1 г и липоевая кислота 0,012 г; с 16-го по 25-й день – витамин Е 100 мг, фолиевая кислота 1 мг и оротат калия 0,5 г. Вторая группа: 30 женщин – сочетание циклической метаболической терапии и натурального аналога прогестерона – дидрогестерона (дюфастона) по 20 мг в сут с 16-го по 25-й день. Третья группа: 30 женщин – сочетание циклической метаболической и гормональной терапии, включающей фемостон (1 мг 17β-эстрадиола и 10 мг дидрогестерона) с 1-го по 28-й день цикла с дополнительным приемом дюфастона (дидрогестерона) по 10 мг в сут с 16-го по 25-й день. Важно отметить, что доза эстрогенов снижена в 2 раза для профилактики гиперпластических реакций эндометрия. ^ – 82 пациентки с ПНБ в анамнезе и наличием угрозы прерывания беременности в I-м триместре (от 5 до 14 нед). Основную группу составили 50 пациенток: из них 20 – проводили симптоматическую терапию, 30 – сочетание симптоматической терапии и дидрогестерона (дюфастона) в дозе до 40 мг/сут, в том числе 17 женщин принимали токоферол- и ретинол-ацетат per os. Группу сравнения составили 32 женщины (см. табл. 1). ^ – исследование неразвивающейся беременности при ПНБ в I-м триместре – 153 женщины, из них 113 пациенток с инструментальным опорожнением стенок полости матки. В зависимости от метода реабилитационной терапии изучены 2 группы: 53 женщины – сочетание традиционного ведения с ферментативной санацией полости матки с помощью гелевой формы имозимазы; 60 пациенток – традиционное ведение, включающее антибактериальную, утеротоническую и противовоспалительную терапию. Имозимаза – ферментный препарат, получаемый в результате иммобилизации бактериальных протеаз (утвержден Фармкомитетом Минздрава РФ 23 мая 1994 г, регистрационный номер 94/128/5).
Первую группу контроля составили 20 пациенток детородного возраста после медицинского аборта и вторую группу контроля – 20 здоровых женщин, которым с диагностической целью на 23-й день менструального цикла забирали цуг эндометрия перед планируемой процедурой ЭКО. Первая группа контроля была необходима для оценки течения раннего послеабортного периода у пациенток с неразвивающейся беременностью на фоне предложенных схем реабилитации. Вторая – для оценки структурных изменений эндометрия в зависимости от проведенной терапии через 3 мес после санации матки по поводу неразвивающейся беременности. Во всех случаях получено информированное согласие на проведение комплексного обследования и лечения. Среди критериев участия в исследовании (наряду с ПНБ) – отсутствие тяжелой экстрагенитальной патологии, онкологических заболеваний, туберкулеза и острых инфекционных заболеваний. ^ органов малого таза проводили в динамике лечения; у пациенток с неразвивающейся беременностью - после инструментального опорожнения стенок полости матки на 1, 3 и 5-е сут послеоперационного периода. Использовали аппараты «ALOKA-500» и «SHIMASONIC SDL 310». В качестве сравниваемых параметров анализировали длину тела матки, переднее-задний размер и ширину; высчитывали объем тела матки как один из наиболее точных неспецифических показателей ее инволюции по формуле для объема вытянутого эллипсоида: объем = 0,5233 х d1 х d2 х d3, где d1, d2, d3 – три максимальных диаметра. ^ Для бактериологического исследования забирали содержимое цервикального канала и элементы плодного яйца. На 3-и сут послеабортного периода исследовали метроаспираты с видовой и количественной оценкой аэробной и анаэробной микрофлоры. ^ Забранный двухпросветным катетером аспират наносили на стекло тонким слоем и фиксировали в смеси Никифорова, окрашивали по Романовскому-Гимзе. На основе подсчета 200 клеточных элементов составляли цитограммы 280 аспирационных биоптатов. ^ Исследовали 196 биоптатов (соскобов) эндометрия, взятых на 23-й день менструального цикла, 113 элементов плодного яйца и децидуальной ткани, а также 60 образцов плаценты. Материал фиксировали в 10% водном растворе формалина в течение 24 – 48 ч, парафиновые срезы окрашивали гематоксилином и эозином, по ван Гизону с докраской эластических волокон резорцин-фуксином Вейгерта, ставили ШИК-реакцию. Патоморфологическое исследование эндометрия выполняли в соответствии с рекомендациями О.К. Хмельницкого (1994) и Н.М. Аничкова (2001). ^ экспрессии рецепторов к эстрогенам и прогестерону в эпителии и строме эндометрия выполнено на парафиновых срезах с помощью двухшагового стрептавидин-биотинового метода. Первичными антителами служили моноклональные антитела: клон PjR 636 к прогестероновым рецепторам и клон 1Д5 к эстрогеновым рецепторам. Продукты реакции визуализировали с помощью 3,3-диаминобензидина тетрагидрохлорида, срезы докрашивали гематоксилином Майера, оценивали относительную плотность меченых клеток желез и стромы эндометрия. Использовали реактивы фирмы «Dako» (Дания). Для позитивного контроля использовали срезы опухоли молочной железы с известной экспрессией рецепторов, для отрицательного контроля первичные антитела исключали из протокола и заменяли неиммунной сывороткой. Светооптическое исследование образцов проводили с помощью универсального микроскопа Leica DM 4000B (Германия). Микрофотографии получали с использованием цифровой фотокамеры Leica DFC 320 (Германия) и компьютерной программы Leica QWin. ^ биоптатов эндометрия: использовали фиксацию в 4% растворе параформальдегида, после стандартной обработки ткань заливали в смесь эпона и аралдита. Полутонкие срезы окрашивали реактивом Шиффа и азуром II. Ультратонкие срезы получали на ультратоме LKB-8800, контрастировали насыщенным спиртовым раствором уранилацетата и цитратом свинца в парах щелочи натрия и изучали в электронном микроскопе JEМ 1010 при ускоряющем напряжении 80 кВ. ^ проводили с помощью закрытой тестовой системы 144 точек при конечном увеличении в 30000 раз: определяли объемную плотность митохондрий, гликогена, лизосом, численную плотность прикрепленных и свободных рибосом, поверхностную плотность наружной и внутренней мембран митохондрий. Плотность крист митохондрий оценивали как отношение поверхностной плотности внутренней мембраны к наружной. Объемную плотность ядрышка и внутриядерных канальцев определяли с помощью открытой тестовой системы (Автандилов Г.Г., 1984; Непомнящих Л.М. и др. 1986; Gundersen H. et al., 1988). ^ Содержание гормонов в сыворотке крови определяли с использованием тест-системы ИФА «Lipocheck» (Bio-Rad, США) – гонадотропинов (фолликулостимулирующего (ФСГ) и лютеинизирующего (ЛГ) гормонов), а также эстрадиола (на 3 – 5-й день цикла) и прогестерона (на 22 – 24-й день). ^ : протромбиновое время, плазминоген, антитромбин-3, показатели концентрации фибриногена, активированного частично тромбопластинового времени (АЧТВ) протромбинового индекса (ПТИ), растворимых комплексных мономеров фибрина (РФМК), наличие волчаночных антител и к кардиолипину (ВА). Выявляли генетические факторы тромбофилии (мутации С677Т в гене MTHFR, G1691A – мутация Лейдена в гене Y, G20210A в гене протромбина) методом аллель-специфической ПЦР со стандартными праймерами и последующим анализом на приборе для капиллярного электрофореза Мультиген. В качестве молекулярного фактора тромбофилии определяли уровень гомоцистеина (ГЦ) в плазме венозной крови с использованием поляризационного флюоресцентного иммунного анализа. ^ Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) определяли методом жидкостной преципитации 4% полиэтиленгликоля-600. Величину оптической плотности определяли по отношению к контролю при длине волны 450 нм на вертикальном спектрофотометре Multiscan MMC-340. Количество ЦИК выражали в условных единицах (у.е.): ЦИК = [оптическая плотность] х 1000. Концентрацию иммуноглобулина А в сыворотке крови определяли прямым сандвич-вариантом ИФА на том же спектрофотометре в двуволновом режиме 492/600 нм. Определение лактоферрина сыворотки крови выполняли на тест-системах Лактоферрин-стрип D-4106 (ЗАО «Вектор-БЕСТ»). Концентрацию цитокинов (интерлейкинов (ИЛ) и интерферона-γ (ИФН- γ) в сыворотке крови определяли с помощью тест-систем для ИФА (ООО «Цитокин»), результаты регистрировали на вертикальном спектрофотометре Multiskan MСС-340 при длине волны 450 нм. Строили калибровочные графики по средним значениям оптической плотности каждого стандартного раствора; выводили границы нормативных значений методом прибавления или вычитания сигмального отклонения из среднего значения показателя. ^ Вторичные стабильные продукты перекисного окисления липидов оценивали по уровню малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови. Проводили реакцию с тиобарбитуровой кислотой; результаты рассчитывали с учетом коэффициента миллимолярной экстинции – 155 ммоль/1 см-1. Содержание жирорастворимых витаминов А и Е (ретинола и токофеpола) в сыворотке крови определяли с помощью анализа на микpоколоночном хpоматогpафе «Милихpом» (Микичуp Н.И., Сафpонов И.Д., 1988). ^ полученных результатов проводили с помощью пакета стандартных программ Statistica for Windows (5.5). Сравнение средних значений показателей проводили по парному критерию Стьюдента в случае зависимых выборок и по t-критерию Стьюдента для независимых выборок. Различия считали значимыми, если вероятность ошибки р была меньше 0,05. |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям