Ингибиторы протеиназ в регуляции плазменного и внутриклеточного протеолиза 14. 03. 03 патологическая физиология 03. 01. 04 биохимия
|
|
Скачать 0.61 Mb.
|
|
Личный вклад автора. Содержание работы Критерии исключения Экспериментальная часть Методы исследования Статистический анализ Результаты и обсуждение |
Публикации. По теме диссертации опубликована 61 работа, в том числе 1 монография и 22 статьи в журналах, рекомендованных ВАК для публикаций результатов исследований на соискание степени доктора медицинских наук.Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 235 страницах, содержит 82 таблицы, 29 рисунков, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследований, обсуждения и выводов. Список литературы включает 461 источников, из них 95 отечественных и 366 иностранных.^ Автором определены цель, задачи, объём исследований, выбраны объекты и методы исследования, проведен аналитический обзор литературы. Более 90% фактического материала получено непосредственно автором. Анализ и обобщение полученных данных, формирование выводов и положений полностью выполнено лично автором. ^ Характеристика обследованных групп Проведено одномоментное, проспективное, сравнительное исследование, включающее 1635 человек, обследованных в период с 1993-2009 год. Дизайн исследования представлен на рис.1.  Рис. 1. Дизайн исследования Критерии включения в исследование:
кишки установлен у 47 мальчиков и 41 девочек в возрасте от 8 до 15 лет (H. pylori-ассоциированная - у 80 детей) и 110 взрослых (H. pylori-ассоциированная – у 101 пациента), средний возраст которых составил 39,5±0,94 лет. Среди взрослых больных 17 человек имели гипер-, 38 - нормо- и 55 - астенический тип конституции. Язвенный колит легкой степени тяжести выявлен у 24 человек, средней степени - у 26, тяжелой степени - у 10 пациентов; болезнь Крона легкой степени тяжести - у 17 больных, средней -12, тяжелой - у 13 человек. В качестве группы сравнения обследовано 18 человек в возрасте 20-30 лет с синдромом раздраженного кишечника. Среди пациентов с фиброзом печени у 109 человек была I стадия заболевания, у 87 – II , у 33 - III, у 74 человек - IV стадия (цирроз).
^ :
Активность ингибиторов и протеиназ определяли в плазме крови, слюне, кожном экссудате, индуцированной мокроте, ткани печени и слизистой кишечника. Изучали показатели перекисного окислении липдиов, деградации коллагена, фиброгенеза, фосфорно-кальциевого, липидного обмена, маркеров состояния печени, почек, поджелудочной железы, показатели гемостаза при выполнении локальной гипоксии путем передавливания предплечья манжетой сфигмометра. Кожный экссудат получали путем экспозиции камеры с 0,9% раствором NaCl на коже предплечья. Индуцированную мокроту собирали после последовательно проводимых ингаляций раствора NaCL посредством ультразвукового небулайзера. Биоптаты ткани печени и слизистой оболочки кишечника были взяты с помощью чрескожной пункционной биопсии и колонофиброскопии, соответственно. ^ работы выполнена с использованием 66 мышей линии ВАLВ/c, самцов, весом 18-20 г. Клетки мастоцитомы Р-815 перевивали внутрибрюшинно мышам линии BALB/с. На 7 сутки роста опухоли мышам внутривенно вводили контрикал в дозе 750 Ед, и через 2, 4, 6 часов, 1 сутки, 3 и 7 суток изучали показатели протеолиза в плазме крови и тканях животных. Активность a1-ПИ и a2-МГ, катепсина D, эластазо- и трипсиноподобных протеиназ определяли через 2, 6, 24 и 72 часа инкубации культуры клеток мастоцитомы Р 815. Пролиферативную активность опухолевых клеток оценивали по интенсивности включения Н3-тимидина в ДНК клеток [Хоробрых В.В. и соавт., 1983]. ^ Активность 1-ПИ и 2-МГ определяли спектрофотометрическим методом Т.Ф. Нартиковой и Т.С. Пасхиной (1979) по торможению гидролиза трипсином синтетического субстрата N-бензоил-L-аргинин-этилового эфира (ICN, Biomedicals Inc, USA). Активность КСИ определяли после обработки плазмы 4,2% раствором HСlO4 Оглоблина О.Г. и соавт., 1984. Активность ингибиторов рассчитывали в условных ингибиторных единицах (ИЕ/мл). Фенотипирование α1-ПИ проводили методом изоэлектрического фокусирования [Король Л.Е. и соавт., 1986]. Активность эластазоподобных и трипсиноподобных протеиназ определяли по гидролизу синтетических субстратов: N-бутил-оксикарбонил-L-аланин-п-нитрофенилового эфира и N-бензоил-L-аргинин-этилового эфира (БАЭЭ, ICN, Biomedicals Inc, USA); активность коллагеназоподобных протеиназ измеряли по расщеплению коллагена I типа (Sigma, Germany) и выражали в мкмоль образующегося гидроксипролина [Шараев П.Н. и cоавт., 1987]; для катепсина D использовали в качестве субстрата гемоглобин [Комаров Ф.И. с соавт., 1976]. Активность кининогенеза оценивали методом Пасхиной Т.С., Кринской А.В. по скорости гидролиза БАЭЭ. Окислительную модификацию белков оценивали по содержанию карбонильных и битирозиновых производных Дубинина Е.Е., Морозова М.Г., 2000]. Перекисное окисление липидов изучали по содержанию ТБК-активных продуктов и диеновых конъюгатов Камышников В.С., 2001. Активность каталазы и супероксиддисмутазы определяли в соответствии с методами М.А. Королюк (1988) и О.С. Брусова с соавторами (1976). Содержание свободного, пептидно- и белковосвязанного гидроксипролина измеряли по цветной реакции с диметилбензальдегидом [Шараев П. Н., 1981]. Содержание кальция, фосфора, мочевины, активность кислой и щелочной фосфатаз, α-амилазы, аланин- и аспартат-аминотрансфераз определяли с помощью диагностических наборов Lachema (Чехия) и Вектор-Бест (Новосибирск). Гемостаз оценивали на анализаторе реологических свойств АРП-01 фирмы «Меднорд» (Томск). Содержание фракций липидов измеряли методом тонкослойной хроматографии на пластинке «Силуфол» (Чехия) [Камышников В.С., 2001]. ^ полученных данных проводили с использованием пакетов прикладных программ «Microsoft Excel» для OS «Windows XP», «Statistica 6.0», SPPSS 11,5. Использовали критерии согласия Колмогорова-Смирнова и Шапиро-Вилка, Стьюдента, Манна-Уитни, Вилкоксона, Краскала-Уоллиса и Ньюмена-Кейлса, корреляционные методы Пирсона и Спирмена. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез принимался равным 0,05. Многомерный статистический анализ проводили с помощью дискриминантного метода и бинарной логистической регрессии. ^ Регуляция протеолиза осуществляется за счет согласованного действия ингибиторов протеиназ, отличающихся по механизму связывания ферментов, обеспечивающих разную степень их активности в биологических жидкостях человека. Нарушение взаимодействия ингибиторов и протеиназ определяет течение патологического процесса и прогноз заболевания. Анализ активности ингибиторов и протеиназ в биологических жидкостях практически здоровых лиц показал, что в плазме крови наблюдается высокая активность a1-ПИ; активность a2-МГ и КСИ составляет, соответственно, 12,5% и 1% от значений a1-ПИ. В других биологических средах активность ингибиторов находится в пределах 0,4-11,2% от показателей плазмы крови (табл. 1). Таблица 1 Активность ингибиторов в биологических жидкостях, (X±m)
|
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям