Приказ Первого заместителя председателя Агентства Республики Казахстан по делам здравоохранения от 12 июня 2001 года №566 Омерах по улучшению эпидемиологического надзора, профилактики и диагностики менингококковой инфекции
|
|
Скачать 0.58 Mb.
|
|
10. Приготовление красок, питательных сред, описание методов Приготовление агаровых питательных сред сывороточного, кровяного, шоколадного, полужидкого агара, «обогащения» ликвора (см. НД «Об унификации микробиологических методов исследования в КДЛ ЛПУ, № 10.05.031.97г.). 1) Сывороточный агар. В качестве основы используют 1,2 -1,5% агар /рН=7,4/, приготовленный на бульоне из рыбного гидролизата, бульоне из перевара Хоттингера (аминный азот в бульоне 150-180 мг/мл или на сухом питательном агаре специального назначения. К 80 мл расплавленного и остуженного до температуры 50°С агара добавляют 20 мл инактивированной при температуре 56°С в течение 30 минут сыворотки, консервированной хлороформом, или без консерванта (при инактивировании сыворотки консервант улетучивается). После перемешивания среду разливают в чашки. Среда годна к употреблению только в течение 48 часов при хранении ее в холодильнике. Перед посевом чашки, хранившиеся в холодильнике, должны быть подсушены и подогреты до температуры 37°С. 2) Сывороточный агар с ристомицином. К 80 мл расплавленного и остуженного агара (такого же, как и для приготовления сывороточного агара) добавляют 20 мл сыворотки и 0,1 мл. раствора ристомицина, содержащего 20.000 ед/мл (конечная концентрация антибиотиков 20 ед/мл питательной среды). Можно применять простой метод, позволяющий экономно расходовать антибиотик. Препарат разводят стерильным физиологическим раствором до рабочей концентрации и затем разливают по стерильным пенициллиновым флаконам или центрифужным пробиркам под ватными или резиновыми пробками и замораживают в морозильной камере. Количество рабочего раствора во флаконах или пробирках зависит от потребности лаборатории. Рабочий раствор сохраняют в морозильной камере до момента использования. В случае необходимости раствор оттаивают и добавляют в среду. Например, во флакон, содержащий 100 мг (100 000 ед.) ристомицина, вносят 5 мл стерильного физиологического раствора. Полученное разведение препарата является рабочим. Его удобно разлить по 0,5 мл и заморозить. В таком состоянии препарат может храниться несколько месяцев. 3) Сывороточный агар с линкомицином. К 80 мл расплавленного и остуженного агара добавляют 20 мл сыворотки и 0,5 мл раствора линкомицина в концентрации 1000 мкг/мл. Конечная концентрация антибиотика в среде -5 мкг/мл питательной среды. Раствор линкомицина можно хранить при температуре +4°С в течение 6 месяцев. 4) Желчно-сывороточный агар. 5,0 мл сухой бычьей желчи ( Желчь сухая, выпускается Московским мясокомбинатом и п.Оболенск Серпуховского района Московской области) растворяют в 100,0 мл дистиллированной воды, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, доводят рН до 7,2-7,4, стерилизуют текучим паром 3 дня подряд. К 80 мл расплавленного и охлажденного до 50°С питательного агара добавляют 4,0 мл стерильного раствора желчи, перемешивают, затем добавляют 20,0 мл сыворотки животных, снова хорошо перемешивают и разливают по чашкам Петри. Конечная концентрация желчи в среде - 0,2%. Посев испытуемых культур нейссерий производят штрихами на сектора чашки. 5) Плотные среды с углеводами. Готовят на той же питательной основе, что и предыдущие. К 75 мл агровой основы добавляют 0,9г одного из углеводов (глюкоза, мальтоза, сахароза, лактоза, фруктоза) и 3,9 мл раствора индикатора фенолового красного. Агар стерилизуют текучим паром 3 дня по 30 минут или однократно в течение 30 минут при 0,5 атм. Перед употреблением среду растапливают в водяной бане, охлаждают до температуры 48-50°, добавляют 20 мл инактивированной нормальной сыворотки и разливают в чашки. На 1 чашку можно посеять не более 6 культур. Сектор с посевом должен быть узким, у основания не более 1 см, а расстояние между ними не менее 2-3 см. Таким образом, каждую культуру засевают на 1/4 - 1/8 пяти чашек с различными углеводами. Учет результатов производят через 24 часа инкубации в термостате. При разложении какого-либо углевода с образованием кислоты красный цвет среды в секторе посева меняется на ярко-желтый. Приготовление раствора индикатора фенолового красного (фенол-рот). Смешивают 0,4 г порошка фенол-рот 6 16 мл 0,1 N NaOH и выдерживают в термостате до полного растворения при частом встряхивании. Затем раствор доводят до объема 200 мл дистиллированной водой, разливают во флаконы и стерилизуют при 1 атм. в течение 20 минут. 6) Транспортные среды для выделения менингококков из носоглоточной слизи. - Бульон для приготовления смоченных тампонов. Бульон готовят на любой питательной основе с добавлением 20% сыворотки животных и ристомицина из расчета 20 ед/мл среды. Используют ватные тампоны на алюминиевых стержнях, вмонтированные в пробирку (п.6.6.). Перед выездом за материалом тампоны пропитывают бульоном из расчета 10-12 тампонов в 5 мл бульона, соблюдая стерильность. Тампоны к месту взятия материала и обратно в лабораторию доставляют, предохраняя их от холода. Длительность транспортировки материала с момента взятия до посева в питательную среду не должна превышать 3-х часов. - Приготовление жидких транспортных сред с линкомицином. Используют любой питательный бульон или 2% пептонную воду, рН = 7,2-7,6. К 100 мл стерильного бульона добавляют 0,5 мл пинкомицина в концентрации 1000 мкг/мл. Конечная концентрация линкомицина - 5 мкг/мл. Среда сохраняется в холодильнике не более 2-х суток. Непосредственно перед взятием носоглоточной слизи (можно в помещении, где находятся обследуемые лица) среда без огня разливается по 1,0 мл в стерильные пробирки. Перед погружением тампона пробку извлекают, тампон вставляют в пробирку так, чтобы материал был погружен в среду, пробирку со вставленным тампоном снова закрывают. Пробирки транспортируют в вертикальном положении при температуре не ниже 22ºС. По доставке в лабораторию тампоны отжимают о стенки пробирки и производят посев на сывороточный агар без антибиотиков в чашки Петри. На одной чашке можно разместить 2 посева. Транспортные среды с линкомицином применяют при необходимости транспортировки материала в течение более 3-х часов. - Приготовление полужидкой среды обогащения для носоглоточной слизи. К 80 мл полужидкого питательного агара добавляют 20 мл любой сыворотки и 0,1 мл раствора ристомицина, содержащего 20 000 ед/мл (конечная концентрация 20 ед/мл питательной среды ). Среду разливают в пробирки по 3 мл, выдерживают 2 суток в термостате для контроля и затем хранят в холодильнике. 7) «Двухфазная» питательная среда. Питательная среда содержит не только х, у факторы, необходимые для роста H.influenzae, но и витамины, что способствует росту других микроорганизмов, в том числе менингококков и пневмококков. В этой связи среда может быть использована только для посева «стерильного» материала, взятого из закрытых полостей (СМЖ, кровь, эксудат и т.п.) со всеми предосторожностями от возможного загрязнения. В основу двухфазной среды взята питательная среда «шоколадный» агар на триптическом переваре (Хоттингера, триптикоза - соевый и др.). При добавлении крови животного среда прогревается в течение 10 мин. при 65-80°С двукратно, употребление крови человека требует прогревания среды в течение 15 мин. при температуре 100°С (что разрушает анти-Y фактор в этой крови). Среда разливается в пробирки по 5,0 мл или флаконы по 50,0 мл и скашивается. После затвердения «косяков» в пробирки добавляют по 3,0 - 5,0 мл, а во флаконы по 50,0 мл бульона на переваре «Хоттингера», к которому добавляется гретая кровь и экстракт пекарских дрожжей. Среда для употребления хранится в холодильнике, перед внесением в нее патологического материала согревается в термостате. Засеянные у постели больного пробирки тотчас доставляются в лабораторию. При невозможности осуществить доставку немедленно они помещаются в термостат с последующей передачей в лабораторию. В лаборатории из «двухфазной» среды делают посев на чашки с агаром. Уже через 3-4 часа жидкая часть среды мутнеет от роста в ней культуры, из которой молено сделать мазок для микроскопирования. ^ 1) Реакция агглютинация на стекле (см. Инструкцию по применению сывороток). 2) Реакция агглютинации в полистироловых пластинах При постановке реакции агглютинации (РА) используют полистироловые пластины или большие стекла. Для каждой испытуемой культуры менингококков используют один ряд лунок пластины. Число горизонтальных лунок соответствует числу агглютинирующих группоспецифических сывороток. Жидкую сыворотку каждой серогруппы в лунке разводят вдвое (1 капля сыворотки плюс 1 капля взвеси культуры). В отдельной лунке каждого ряда готовят взвесь испытуемых культур. Для этого запаянной изогнутой пастеровской пипеткой бактериальную массу снимают с чашки Петри и тщательно эмульгируют в физиологическом растворе. Для получения оптимальной рабочей густоты к взвеси добавляют по 1,0 мл физиологического раствора. Взвесь разносят по 1 капле в горизонтальные лунки. Пластины встряхивают в течение 1 мин. руками или шуттеле-аппарате. Учитывают реакцию в течение первых 3-х мин. Контролем служит лунка, в которой готовят исходную взвесь бактерий в физиологическом растворе. 3) Реакция преципитации для определения серогруппы менингококков и метод встречного иммуноэлектрофореза (ВИЭФ) для определения специфического антигена в СМЖ (экспресс-диагностика). Используют только те коммерческие сыворотки, в «Наставлении» к которым сказано, что они пригодны для постановки реакции преципитации. ^ Из дальневосточных сортов агар-агара готовят 2% взвесь на дистиллированной воде. В случае непрозрачного раствора агара, в него добавляют 10% раствор СаСI2; из расчета 50мл на 1л. раствора агара. Профильтрованный растопленный агар разливают в ванночки слоем в 1 см, в застывшем состоянии нарезают квадраты размером 1 х 1 см и завязывают в марлю. Сначала его промывают проточной водопроводной водой в течение 24-48 часов, затем сутки - дистиллированной, которую заменяют 3-4 раза. Отмытый агар отжимают от воды, помещают в колбу и разогревают на кипящей водяной бане, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и добавляют дистиллированную воду до первоначального объема, т.е. до концентрации, равной 2%. К горячему 2% агару добавляют равный объем «камерного» веронал-мединалового буфера, разведенного в 2 раза дистиллированной водой, и кипятят в водяной бане до полной гомогенизации смеси. К остывшему до 60° агару добавляют тимол или крезол из расчета 1:10000. Полученный 1% раствор агара на веронал-мединаловом буфере используют для постановки реакции ВИ-ЭФ. Для реакции микропреципитации используют 1% агар, приготовленный на физиологическом растворе. 4) Реакция микропреципитации для определения серогруппы менингококков. В чашку Петри или стеклянную пластинку размером 9 х 12 см наливают 20 мл, а на предметное стекло - 5 мл расплавленного 1% агара на физиологическом растворе. В застывшем агаре с помощью металлических трубок просекают отверстия (лунки) диаметром 3 мм, из которых агаровые пробки удаляют путем отсоса этой же трубкой или острием иглы. Расстояние между центрами лунок 0,5 см. Лунки в агаре располагают следующим образом: в центральную лунку пастеровской пипеткой наливают сыворотку, в периферические - прогретые при температуре 100°С в течение 15 минут взвеси испытуемых культур. Микробную кипяченую взвесь можно хранить в холодильнике в течение 2-х недель. Для реакции микропреципитации используют не разведенные сыворотки. Концентрация испытуемой суточной культуры менингококка, выученной на 20% сывороточном агаре, должна составлять 30-60 единиц, быть в 3-6 раз гуще оптического стандарта мутности в 10 единиц. Чашки Петри или стеклянные пластины с лунками, заполненными сывороткой и антигенами, помещают во влажную камеру (эксикатор с водой) на 24 - 48 часов при температуре 20-22°С. По окончании срока учитывают реакцию. Реакция проявляется только со штаммами менингококков гомологичной серогруппы в виде линии преципитации. ^ У больного гнойным менингитом, желательно до применения химиотерапии; берут СМЖ, которую исследуют на присутствие специфического полисахэридного антигена. Для этого используют аппарат для иммуноэлектрофореза ПЭФ-3 или другой любой марки. В аппарат заливают «камерный» вероналмединаловый буфер, содержащий в 1 л дистиллированной воды 21,9 г мединала и 3,45 веронала (веронал надо греть на водяной бане до полного его растворения) рН-8,6. Приготовленный 1% агар (п.п.3.1), растопленный и остуженный до 60°С, наносят в количестве 20 мл на поверхность стеклянной пластинки, размером 9 х 12 см; помещенную на горизонтальный столик. После застывания агара пробойником или металлической трубкой, диаметр которой равен 3 мм, высекают 2 параллельных ряда отверстий на расстоянии 3 мм друг от друга, по числу групповых сывороток. Ряды располагают перпендикулярно к направлению силы тока. Антисыворотки вносят в лунки, расположенные со стороны анода (+), а спинномозговую жидкость в лунки со стороны катода (-). Сыворотку вносят в отдельную лунку. В отдельную лунку помещают заведомо положительный контроль, который позволяет оценить правильность постановки теста. В качестве контроля используют менингококковую вакцину серогруппы А или С с гомологичной сывороткой, в концентрации 10-20 мкг/мл. Приготовленную пластинку помещают в аппарат для иммуноэлектрофореза на 20-30 мин. при силе тока 12-15 МА на I стекле. Аппарат работает при комнатной температуре. При положительной реакции через 10 мин. после выключения тока, между лунками (с одной из сывороток и ликвором) появляются линии преципитации, которые хорошо видны в проходящем свете. В случае, когда антигена мало, линии преципитации проявляются на следующие сутки (пластинка находится во влажной камере). Для ускорения этого процесса в тот же день, можно 2-3 раза пропускать ток через пластину в течение 5-10 минут, т.е. время анализа увеличивается до 60 мин. Формулировку ответа на ВИЭФ см. п.9.1. ^ Для взятия носоглоточной слизи используют ватные тампоны, укрепленные на металлической проволоке. Лучше всего применять проволоку из малоокисляемого металла (алюминия) диаметром 2-3 мм. Проволоку изгибают под углом 135° на расстоянии 1-2 см от конца, на которой накручивают ватный тампон; 5-10 таких проволок завертывают в бумагу и стерилизуют сухим жаром или в автоклаве. Можно использовать также стерильные ватные тампоны на проволоках, вмонтированных в пробирку. ^ (рекомендуется при первичном выделении менингококков из ликвора, крови и получении биомассы). Для создания повышенной концентрации С02 можно использовать любой сосуд с притертой крышкой, например, эксикатор. Засеянные чашки помещают внутрь сосуда вверх дном, там же укрепляют зажженную свечу высотой 2-3 см и закрывают крышкой, которой может служить и простое большое стекло. К моменту затухания свечи в сосуде создается повышенная концентрация С02 (7-10%). После этого сосуд с посевами помещают в термостат. ^ по использованию реакции непрямой гемагглютинации для выявления антител при менингококковой инфекции. 1) Показания к проведению серологических исследований. Реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА) с менингококковыми эритроцитарными диагностикумами (Характеристика эритроцитарных менингококковых диагностикумов, выпускаемых производственным предприятием МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Минздрава РФ условия их хранения и техника постановки реакции непрямой (пассивной) гемагглютинации подробно изложены в наставлении по применению диагностикумов, которое вложено в упаковку препаратов) серогрупп А. В и С проводят в следующих случаях: а) как дополнительный метод диагностики, менингококковой инфекции. Обязательным требованием является исследование сывороток крови от больных, взятых в разные сроки от начала заболевания, т.е. в динамике (в начале заболевания, на 7 и 15 день болезни); б) для ретроспективного выявления локализованных форм менингококковой инфекции в очагах заболевания; в) при проведении иммуноэпидемиологических исследований среди населения с целью определения соотношения серонегативных и серопозитивных контингентов; г) при оценке иммунологической эффективности противоменингококковой вакцинации. Методика постановки реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с эритроцитарными менингококковыми диагностикумами. Реакцию непрямой гемагглютинации можно ставить как макро-, так и микрометодом, причем, в последнем случае используют только микротитраторы системы «Такачи». Различия между этими методами заключаются лишь в объемах используемых ингредиентов и сроках учета результатов реакции. При макрометоде реагирующая смесь в каждой лунке состоит из 0,5 мл соответствующего разведения сыворотки крови и 0,25 мл диагностикума. В микрометоде объемы соответственно уменьшаются: 0,05мл сыворотки и 0,025 мл диагностикума. Учет результатов исследования в микротитраторе проводят спустя 2 часа инкубации в термостате; при макрометоде иногда требуется дополнительная экспозиция в течение 1-2 часов при комнатной температуре. При постановке РНГА можно использовать многоканальные пипетки с указанными объемами ингредиентов. 2) Необходимые реагенты и приборы: - эритроцитарные менингококковые серогруппы А, В и С диагностикумы; - сыворотки диагностические менингококковые группоспецифические А, В и С (Входят в набор эритроцитарных менингококковых диагностикумов); - нормальная кроличья сыворотка (Нормальную кроличью сыворотку получают от здоровых кроликов), сухая кроличья плазма или бычий сывороточный альбумин ( Кроличья плазма и бычий сывороточный альбумин - коммерческие препараты); - исследуемый материал (сыворотка крови человека); - полистироловые пластины с лунками, серологические пробирки или микротитраторы с V-образными лунками (системы «Такачи»); - термостат для поддержания температуры 37°С; - водяная баня для поддержания температуры 56°С; - потенциометр для измерения рН растворов; - пипетки стеклянные мерные; - дозаторы пипеточные П1 на 0,5; 0,05; хлорид натрия ( NaCI);- натрий фосфорно-кислый двузамещенный (Na2HPO4x12H2O); - калий фосфорно-кислый однозамещенный (КН2Р04); - дистиллированная вода. 3) Подготовка ингредиентов. - Приготовление исходного эабуференного физиологического раствора рН 7,2 (ЗФР). В 0,5 л дистиллированной воды растворяют: хлорида натрия (NaCI) - 8,65 г натрия фосфорно-кислого двузамещенного (Na2HP04 • 12Н20) - 1,92 г калия фосфорно-кислого однозамещенного (КН2Р04) - 0,44 г Объем раствора доводят до 1 л дистиллированной водой. После растворения солей проверяют рН раствора, который должен быть равен 7.2. Раствор фильтруют через бумажный фильтр, разливают во флаконы и стерилизуют при 0,5 атм. 30 минут. ЗФР необходим для приготовления стабилизирующего буфера, в котором проводят титрование исследуемых сывороток крови. 4) Стабилизирующий буфер. В качестве стабилизатора можно применять нормальную кроличью сыворотку (НКС), сухую кроличью плазму или бычий сывороточный альбумин (БСА). Используемая ИКС не должна давать неспецифической (спонтанной) реакции гемагглютинации с эритроцитарными диагностикумами. Инактивированную при +56°С в течение 30 минут НКС или плазму добавляют к ЗФР из расчета 1,0 мл на 100,0 мл (получают 1% раствор), БСА не инактивируют. Концентрация БСА в ЗФР - 0,5%. 5) Взятие крови. Для проведения серологических исследований кровь от больных ГФМИ или с подозрением на эту инфекцию забирают из локтевой вены с соблюдением обычных правил асептики; при массовых серологических исследованиях кровь берут из пальца. После образования сгустка, полученную сыворотку отсасывают стерильной пипеткой в стерильную посуду (пробирки, ампулы). Хранят сыворотку крови в холодильнике при +4°С. В реакции исследуют сыворотки крови без признаков пророста. Перед постановкой РНГА сыворотки разводят 1:5 исходным буфером (ЗФР). Титрование сывороток проводят в стабилизирующем буфере. 6) Учет реакции Реакцию оценивают по общепринятой 4-х плюсовой системе (см. Наставление по применению эритроцитарных менингококковых диагностикумов). За титр противоменингококковых антител принимают максимальное разведение сыворотки крови, в котором наблюдают четко выраженную агглютинацию эритроцитов с интенсивностью не менее чем на 2+, при условии, что в предыдущих лунках реакция шла на 4+ или 3+. Сыворотки крови с разведения 1:5 и выше с четко выраженной агглютинацией эритроцитов, оценивают как положительные. 7) Рекомендуемые сроки, кратность обследования и трактовка серологических результатов При выборе оптимальных сроков и кратности обследования больных ГФМИ и для правильной трактовки серологических результатов необходимо принимать во внимание ряд факторов, влияющих на уровень антител: возраст больного, преморбидный фон, клиническую форму, тяжесть и период болезни: сопутствующие заболевания, серологические особенности возбудителя. При менингококков ой инфекции, так же как и при других инфекционных заболеваниях, правильная оценка результатов серологических исследований может быть дана только при их сопоставлении с эпидемиологическими и клиническими данными. Оптимальные сроки взятия крови у больного ГФМИ - первые дни болезни (1-3 день), вторая третья и последующие недели болезни. Первую сыворотку крови необходимо брать сразу же при поступлении больного в стационар, последующие через 7-10 дней. 8) РНГА при генерализованных формах менингококковой инфекции. - РНГА с диагносттаумами А и С. Антитела к группоспецифическим полисахаридам менингококков серогрупп А и С при ГФМИ можно выявить уже в первые дни болезни.Число серопозитивных лиц среди взрослых больных составляет в эти сроки около 40%. Максимальный уровень антител отмечается на 2-3 –ей неделях болезни, с 4-5 недели уровень антител постепенно снижается. За условно-диагностический титр антител к полисахаридам менингококков серогрупп А и С у детей старше 3-х лет и взрослых принимают положительную реакцию в разведении сыворотки крови 1 : 40 - 1 :80, т.к. у лиц, не инфицированных менингококками в момент обследования, антитела в таких титрах встречаются сравнительно редко (9-11%). У детей в возрасте до 1 года продукция антител выражена слабо, в связи с чем положительные реакции наблюдают обычно в более поздние сроки (со 2 недели болезни). У детей моложе 3-х лет за условно-диагностический титр антител к полисахаридам А и С принимают положительную реакцию в разведении 1:20 и выше, т.к. при отсутствии менингококковой инфекции у детей этого возраста антитела или не обнаруживаются, или встречаются в единичных случаях в титрах не выше чем 1:5-1:10. Интенсивность антителообразования не одинакова при различных клинических формах менингококковой инфекции. При менингококцемии и сочетанных формах (менингококцемия + менингит) уровень антител обычно выше, чем при других формах болезни. При тяжелом течении ГФМИ и особенно при инфекционно-токсическом шоке противоменингококковые антитела обнаруживаются в низких титрах, а в отдельных случаях не выявляются вообще. При очень тяжелом течении болезни особенно при наличии тяжелых осложнений (отек и набухание мозга) антителообразование выражено слабо: в остром периоде болезни обнаруживают около 10% серопозитивных проб с низкими титрами (1:5-1:10). В дальнейшем, при улучшении состояния больных титры антител и число серо-позитивных проб может возрастать. Обнаружение уже на 1 неделе болезни антител к полисахаридам менингококков серогрупп А и С в титре 1:160 и выше подтверждает менингококковую этиологию заболевания. В некоторых случаях такие титры антител, обнаруженные на 1 неделе болезни, могут сохраняться и в более поздние сроки заболевания. Хотя у данных больных не наблюдается сероконверсии, высокие показатели РНГА могут служить достаточным основанием для серологического подтверждения диагноза ГФМИ. Диагноз ГФМИ определяется как этиологически подтвержденный при наличия динамики (четырехкратного и более) нарастания уровня антител. При двукратном нарастании титра антител - диагноз оценивается как подтвержденный лишь при выраженной клинической картине. Число этиологически подтвержденных случаев ГФМИ методом РНГА может достигать: у взрослых 80%, у детей, в среднем 70% (в возрастной группе детей до 3-х лет - 60%, в старших возрастных группах -80%). - РНГА с диагностикумом серогруппы В. При интерпретации серологических данных, полученных при работе с эритроцитарным диагностикумом на основе полисахарида менингококков серогруппы В, необходимо учитывать следующие моменты. Изучение иммуноструктуры населения с помощью РНГА с диагностикумом серогруппы В представляет определенные сложности из-за сходства химической структуры В-полисахарида менингококка и капсульного полисахарида Е.соli K1. Существует возможность наличия перекрестных реакций, что усложняет интерпретацию результатов относительно менингококка серогруппы В. Диагностикум может быть использован для подтверждения диагноза ГФМИ при исследовании сывороток крови в динамике, взятых в начале заболевания и через 2, 3 недели. Генерализованные формы менингококковой инфекции, обусловленные менингококками серогруппы В, наиболее часто (до 60%) диагностируются у детей первых трех лет жизни, у которых антитело образование выражено слабо. При ГФМИ у взрослых, в большинстве случаев, в первые дни болезни уровень антител к менингококкам серогруппы В составляет 1:20-1:40, с последующей сероконверсией на 2-3 неделях. В отдельных случаях (14%) содержание антител на 2-3 неделях болезни может достигать титров 1:640 -1:1280 и выше. - Групповая специфичность РНГА. При постановке РНГА с набором эритроцитарных диагностикумов может выявляться одновременное присутствие антител к нескольким полисахаридам. В таких случаях серо-группу менингококков, вызвавших заболевание у данного больного, определяют по динамике нарастания уровня антител к одному из полисахаридов. При этом разница показателей парных сывороток должна быть не меньше чем на два разведения. При получении одинаковых титров антител к двум полисахаридам в условно-диагностических титрах, диагностируется ГФМИ без установления серогруппы возбудителя. - РПГА при локализованных формах менингококковой инфекции (назофарингит и бактерионосительство). При локализованных формах менингококковой инфекции серологические исследования не следует рассматривать как метод диагностики, поскольку вопрос о носительстве или менингококковом назофарингите решается на основании бактериологического обследования. Но в ряде случаев при проведении исследований в очагах ГФМИ серологические данные могут послужить дополнительным тестом, ретроспективно подтверждающим клинико-эпидемиологический диагноз менингококковой инфекции. При этом следует проводить обязательное исследование парных образцов сывороток крови, полученных с 10-14 дневным интервалом. При назофарингите антителообразование более выражено, чем при бактерионосительстве. У больных назофарингитом менингококковой этиологии в 90% случаев выявляются противоменингококковые антитела, причем в 50% случаев с титрами от 1:40 и выше. Среди бактерионосителей независимо от серогруппы выделенного возбудителя специфические антитела определяют в 65% случаев, а с титрами от 1:40 и выше у 30% носителей. В сыворотках крови, полученных от носителей, так же как и от больных (см. п.4.1.3.), могут выявляться антитела к нескольким полисахаридам менингококков. Нарастание антител к гомологичной серогруппе чаще отмечают при носительстве менингококков серогруппы А. В отдельных случаях динамика антител (сероконверсия) не позволяет серологически установить доминирующую серогруппу менингококков. В этом случае определяют носительство без установления серогруппы. - РНГА при иммуно-эпидемиологических исследованиях. Целью иммуно-эпидемиологических исследований является определение числа лиц вероятно восприимчивых к менингококковой инфекции и групп риска. Анализ проводят по числу серопозитивных и серонегативных лиц с учетом существующей эпидемической ситуации. Например, в период эпидемического неблагополучия увеличивается число серопозитивных лиц и соответственно уменьшается число серонегативных к эпидемической серогруппе менингококков. В период спорадической заболеваемости, наоборот, растет число серонегативных лиц. При проведении иммуно-эпидемиологических исследований среди населения объем репрезентативных выборок устанавливается эпидемиологом в соответствии с численностью и возрастным составом коллектива, района, населенного пункта. Определяемый фоновый уровень противоменингококковых антител связан с заболеваемостью менингококковой инфекцией на данной территории и уровнем носительства. Наиболее высокий уровень антител в разные эпидемические периоды определяют к менингококкам серогруппы В, что, возможно, отражает их серологическое родство с E.coli K1, моракселлой, непатогенными нейссериями. При этом число серопозитивных проб с титрами антител 1:20 и выше может достигать 90%. К менингококкам серогруппы С уровень антител наименьший, число серо-позитивных сывороток с титром антител 1:20 и выше составляет 8%. Уровень антител к менингококкам серогруппы А дает достаточно четкую характеристику эпидемиологической ситуации и отражает широту циркуляции возбудителя. Анализ серологических результатов эпидемиологических исследований проводят на основании расчета следующих показателей: а) процента серонегативных проб, полученных с каждым из эритроцитарных диагностикумов (А, В и С), который может отражать число вероятно восприимчивых лиц к менингококковой инфекции; б) процента серопозитивных проб (все серопозитивные сыворотки крови, начиная с разведения 1:5 и выше), из числа которых выделяют пробы с титрами антител: - в возрастной группе до 3-х лет с 1:10 и выше к полисахаридам А и С, с 1:20 и выше к полисахариду В; - в старших возрастных группах детей и у взрослых с 1:20 и выше к полисахаридам А и С, с 1:80 и выше к полисахариду В. Процент сывороток крови с указанными выше уровнями антител отражает доминирующие на данной территории серогруппы менингококков. - Применение РНГА для оценки эффективности вакцинопрофилактики менингококковой инфекции. Формирование поствакцинального иммунитета носит группоспецифический характер. В связи с этим, в зависимости от используемой профилактики менингококковой вакцины, серологические исследования для оценки эффективности вакцинации проводят с применением РНГА с гомологичным эритроцитарным диагностикумом. При вакцинации взрослых специфические противоменингококковые антитела к полисахариду А выявляют в высоких титрах (1:40 - 1:640 и выше) не менее чем у 80% привитых уже на 3-4 неделе после вакцинации. На протяжении последующих 6-8 месяцев у привитых титры антител несколько снижаются, но сохраняются на повышенном уровне не более двух лет. |
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям