Комбинированная фармакологическая коррекция метаболического пути l-аргинина/no при моделировании дефицита оксида азота 14. 00. 25 фармакология, клиническая фармакология
|
|
Скачать 0.53 Mb.
|
|
На правах рукописи Покровская Татьяна Григорьевна КОМБИНИРОВАННАЯ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ КОРРЕКЦИЯ МЕТАБОЛИЧЕСКОГО ПУТИ L-АРГИНИНА/NO ПРИ МОДЕЛИРОВАНИИ ДЕФИЦИТА ОКСИДА АЗОТА 14.00.25 – фармакология, клиническая фармакология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени доктора медицинских наук Курск - 2009 Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» ^ доктор медицинских наук, профессор Филиппенко Николай Григорьевич Официальные оппоненты: член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор ^ доктор медицинских наук, профессор Стародубцев Алексей Константинович заслуженный деятель науки, доктор медицинских наук профессор ^ Ведущая организация: ОАО «Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ» Защита состоится «____» _________________2009 г. в ________часов на заседании диссертационного совета Д 208.039.03 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (305041, г. Курск, ул. К. Маркса,3). С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО КГМУ Росздрава. Автореферат разослан «____» ______________2009 г. Учёный секретарь диссертационного совета Пашин Е.Н. ^ Актуальность проблемы. В настоящее время стало очевидным, что эндотелий сосудов – это активная метаболическая система, которая функционирует как рецепторно-эффекторный орган, реагирующий на любой физический или химический стимул/раздражитель с выделением/секрецией соответствующего вещества, с помощью которого он может поддерживать вазомоторный баланс и сосудисто-тканевый гомеостаз (Гомазков О. А., 2000; Рacher P., 2007, Esper R. J., 2006, Luscher T. F., 1997). Эндотелий играет ключевую роль в модуляции сосудистого тонуса, продуцируя различные вазоактивные вещества, наиболее важным из которых является оксид азота (NO) - лабильная субстанция, высвобождаемая эндотелиальными клетками во время катаболизма L-аргинина при активном участии NO-синтазы, являющаяся наиболее мощным из известных в настоящее время вазодилататоров (Граник В. Г., 2004; Покровский В. И., 2005; Forstermann U. T., 2006; Rabelink T. J., 2006). Широкий спектр биорегуляторных эффектов сосудистого NO указывает на то, что снижение его уровня в ЭК под влиянием тех или иных факторов должно вызывать существенные изменения их функций и системы кровообращения в целом. Эти нарушения включают: снижение эффектов эндотелийзависимых вазодилататоров и повышение вазоконстрикторных влияний, рост АД, нарушения системной и региональной гемодинамики, функций сердца, увеличение экспрессии адгезивных молекул эндотелия, агрегации тромбоцитов, прилипание их и лейкоцитов к сосудистой стенке, пролиферацию и миграцию гладкомышечных клеток с образованием неоинтимы, синтез внеклеточного матрикса и др. (Shiffrin E. L., 2001; Egashira K., 2002; Feletou M., 2006; Сooke J. P., 2003, Endemann D. H., 2004, Зотова И. В., 2000; Марков Х. М., 2005) Исследования последних лег убедительно показали, что в различных комбинациях отмеченные нарушения, составляющие дисфункцию эндотелия в целом, имеют место при многих сердечно-сосудистых заболеваниях (артериальная гипертония, атеросклероз, ИБС, сердечная недостаточность, нарушения кровообращения в почках, легких, головном мозге, конечностях, кишечнике (Белоусов Ю. Б., 2000; Маколкин В. И., 2004; Сооke J. P., 2003; Landmesser U., 2004), а также их факторах риска (гиперхолестеринемия, курение табака, сахарный диабет, резистентность к инсулину, ожирение, гипокинезия, старение организма, наследственная отягощенность) (Шестакова М. В., 2001; Бувальцев В. И., 2002; Петрищев Н. Н., 2003; Мазуров В. И., 2006; Bonetti P. O., 2003; Barbato J.E., 2004; Spieker L. E., 2006;Giannotti G., 2007) Эндотелиальные клетки могут предстать и в роли первоочередного этиологического фактора и органа-мишени при развитии сердечно-сосудистых изменений, связанных со снижением уровня эстрогенов (Кrug E., 2002; Modena M. G. 2002; Таddei S., 2006). Патогенетические механизмы постменопаузального повышения АД являются достаточно запутанными и многофакторными – они гораздо более сложные, чем просто влияние сниженного уровня эстрадиола в крови. Но очевидно, что один из них связан с нарушением эндотелийзависимой вазодилатации, вызванной снижением биодоступности NO (Карпов Ю. А., 2001; Hinojosa-Laborde C., 2004; Zanchetti A., 2005; Rosano G. M., 2007; Сoylewright M., 2008). Это может быть обусловлено повышением активности ренина плазмы, стимуляцией окислительного стресса, увеличением соль-чувствительности, ожирением, повышением симпатического тонуса (Majmudar N. G., 2000; Simon T., 2000; Dubey R. K., 2002; Scuteri A., 2003; Teerlink T., 2003; Thompson L. P., 2005; Miller V. M., 2007). Поэтому коррекция эндотелиальной дисфункции в постменопаузальном периоде считается одним из важных аспектов терапии для восстановления баланса регуляции сосудистого тонуса, гемостаза, иммунного ответа, предупреждения миграции клеток крови в сосудистую стенку, уменьшения синтез факторов воспаления, укрепления барьерные функции эндотелия (Сметник В. П., 2001;Ольбинская Л. И.,2001; Herrington D.M., 1999; Diamanti-Kadarakis E., 2001; Harman S. M., 2005; Minkin M. J., 2007). В плазме крови уровень L-аргинина оказывается сниженным при многих болезнях сердечно-сосудистой системы и их факторах риска. Показано, что пероральное и парентеральное введение L-аргинина в организм больных с этими заболеваниями восстанавливает сниженный у них уровень L-аргинина, NO и функции эндотелия, давая соответствующий терапевтический эффект (Степанов Ю. С., 2005; .Mарков Х. М., 2005, Piatti P., 2003; Piatti P., 2000; Hambrecht R., 2000; Lin K. Y., 2002; Tousoulis D. 2007; Bode-Böger S.M., 2003). Это позволяет считать, что дефицит NO и дисфункция сосудистого эндотелия у таких больных могут быть обусловлены в той или иной степени недостатком L-аргинина в качестве субстрата для eNOS (Schlaich M. P., 2004; Nakamura K., 2003; Kawano H., 2002; Breeders M.A., 2002; Pernow J., 2003; Gornik H.L., 2004). В последнее время в исследованиях причин развития и прогрессирования сердечно-сосудитых заболеваний обращено внимние к асимметричному диметиларгинину (АДМА), названного новым маркером и фактором риска развития и прогрессирования эндотелиальной дисфункции и атеросклероза (Boger R.H., 1998, 2004; Zoccali C., 2001; Achan V., 2003; Kielstein J., 2003) Данные клинических и экспериментальных исследований подтверждают предположение, что ферментная активность синтазы окиси азота регулируется соотношением между концентрацией L-аргинина (эндогенный субстрат) и концентрацией ассиметричного диметиларгинина (эндогенный ингибитор). Физиологическая регуляция осуществляется таким образом, что при наличии обычных уровней L-аргинина любое повышение уровней ADMA может стать причиной относительного дефицита L-аргинина в отношении оптимальной активности синтазы окиси азота. Так как ADMA является конкурентным ингибитором синтазы окиси азота, его ингибирующее действие может быть преодолено повышением концентрации ферментного субстрата (L-аргинина) (Lu, T. M., 2003; Böger R.H., 2005; 2004, 2007). Поэтому дополнительное введение L-аргинина может помочь в восстановлении физиологического состояния синтеза оксида азота путём нормализации соотношения «L-аргинин/ADMA». Кроме этого, эстрогены регулируют метаболизм и освобождение асимметричного диметиларгинина (ADMA) – эндогенного ингибитора NO-синтазы (Teerlink T., 2003; Post M.S., 2003). Исследования Holden D. P. et al. (2003) продемонстрировали снижение уровня циркулирующего ADMA после эстрогензаместительной терапии у постменопазуальных женщин, кроме того эстрогены снижают освобождение ADMA из эндотелиальных клеток и стимулируют активность фермента диметиларгининдиметиламиногидролазы, метаболизирующего ADMA в опытах in vivo. Следующим важным факторов, способствующим повышению ADMA у женщин в постменопаузе является повышение сольчувствительности и, как следствие артериального давления, что дополнительно усугубляет развитие эндотелиальной дисфункции, выражающееся в снижении эндотелийзависимой вазодилатации (Scuteri A., 2003). Исходя из вышеизложенного, существует необходимость исследования потенциальной роли и перспективности терапии L-аргинином как дополнение к существующим парадигмам коррекции дефицита оксида азота при сердечно-сосудистых заболеваниях и в этой связи фармакологическое изучение эндотелиотропных свойств L-аргинина в комбинации с кардиотропными препаратами с доказанной эндотелиотропной активностью является одной из актуальных задач современной экспериментальной кардифармакологии. Очевидно, что в настоящее время достаточно большое внимание уделяется изучению роли и места L-аргинина, как предшественника NO, в коррекции эндотелиальной дисфункции (Böger RH, Bode-Böger SM., 2001, 2003, 2005; Perticone F., 2005; Siasos G., 2007; Gokce N. L., 2004), а вот сравнительное изучение комбинации L-аргинина с представителями основных групп гипотензивных препаратов, обладающих эндотелиопротективными эффектами (ингибиторы АПФ, блокаторы АТ1-рецепторов, антагонисты кальция, β-блокаторы), при различном экспериментальном моделировании эндотелиальной дисфункции в литературе нами не обнаружено. Работа выполнена по инициативному плану, включена в программу «Разработка и совершенствование методов ранней диагностики, лечения и профилактики сердечно-сосудистых заболеваний с целью улучшения качества и увеличения продолжительности жизни больных» на 2007-2012 гг., номер госрегистрации 0120. 0 710379. Номер государственной регистрации диссертационной темы – 01.2.004 11184. Цель исследования: изучить и обосновать возможности фармакологической коррекции метаболического пути L-аргинин/NO дополнительным введением L-аргинина и его комбинаций с эналаприлом, лозартаном, амлодипином, индапамидом и небивололом при различных экспериментальных моделях дефицита оксида азота. Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи исследования:
^ В работе впервые предложен способ комбинированной фармакологической коррекции метаболического пути L-аргинина/NO при моделировании дефицита оксида азота с использованием L-аргинина и препаратов основных антигипертензивных групп с доказанной эндотелиотропной активностью. Используя впервые объединённый комплекс методов, продемонстрировано, что ADMA-подобная L-NAME-индуцированная и гипоэстроген-индуцированная NO-дефицитные эндотелиальные дисфункции характеризуются изменениями соотношений сосудистых реакций на ацетилхолин (эндотелийзависимая вазодилятация) и нитропруссид (эндотелийнезависимая вазодилятация) с увеличением коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД) в 5 и 2,1 раза соответственно, повышением адренореактивности и снижением исчерпания миокардиального резерва, резким снижением показателей биохимических маркеров (Тоtal NO, экспрессия NO- синтазы), а также отрицательной динамикой морфометрических показателей сердечно-сосудистой системы (диаметр миокардиоцитов). В работе впервые показано, что L-аргинин в дозе 200 мг/кг (однократно внутрибрюшинно в течение 7 суток) при сочетанном использовании с препаратами основных антигипертензивных групп с доказанной эндотелиотропной активностью, вводимых внутрижелудочно однократно в течение 7 суток - ингибитором АПФ эналаприлом (0,5 мг/кг), блокатором АТ1-рецепторов лозартаном (6 мг/кг), блокатором кальциевых каналов амлодипином (0,5 мг/кг), тиазидоподобным диуретиком индапамидом (2 мг/кг), бета-блокатором небивололом (0,5 мг/кг) оказывает аддитивное эндотелиопротективное действие при моделировании дефицита оксида азота. Таким образом, в работе впервые представлены убедительные доказательства необходимости дополнительной целенаравленной эндотелиотропной терапии к существующим препаратам основных антигипертензивных групп для коррекции нарушений метаболического пути L-аргинин/NO. Научная новизна подтверждается получением 11 патентов РФ. ^ В работе установлена и обоснована эффективность сочетанного применения L-аргинина с ингибитором АПФ эналаприлом, блокатором АТ1-рецепторов лозартаном калия, антагонистом кальция амлодипином, тиазидоподобным диуретиком индапамидом, β-блокатором небивололом для коррекции L-NAME- и гипоэстроген- индуцированного дефицита оксида азота в эксперименте. Показано, что их сочетанное использование позволяет улучшать изменение соотношения сосудистых реакций на ацетилхолин (эндотелийзависимая вазодилатация) и нитропруссид (эндотелийнезависимая вазодилатация) с уменьшением коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД), который в 5 раз увеличивается при L-NAME- и в 2,1 раза при гипоэстроген- индуцированной NO-дефицитной эндотелиальной дисфункции, предотвратить снижение показателей биохимических маркеров (Тоtal NO, экспрессию NO-синтетазы), а также добиться положительной динамики морфофукциональных показателей сердечно-сосудистой системы (диаметр миокардиоцитов и прирост давления при пробе на нагрузку сопротивлением, диаметр миокардиоцитов и адренореактивности, что подтверждается интегральным расчётным анализом площадей диаграмм данных показателей. Запланировано проведение целенаправленных клинических исследований L-аргинина при артериальной гипертензии («Протокол клинического испытания L-аргинина при артериальной гипертензии» ГНИЦ ПМ МЗ и СР РФ от 07.05.2004). ^ Материалы диссертационного исследования, касающиеся антигипертензивной и эндотелиопротективной активности лозартана калия «Блоктран», эналаприла малеата «Рениприл», индапамид «Индапамид» производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства», включены в состав документов, поданных на регистрацию в МЗ РФ (РУ № 000084/01-2000). Материалы диссертационного исследования, касающиеся изучения антигипертензивной и эндотелиопротективной активности L-аргинина включены в состав документов, поданных на регистрацию в МЗ РФ (Свидетельство о государственной регистрации № 77.99.23.3.У.2795.3.05). Результаты работы используются в работе кардиологического отделения МУЗ «Городская больница скорой медицинской помощи», кардиологического отделения МУЗ «Городская больница № 1» г. Курска и в лекционных курсах кафедры фармакологии, клинической фармакологии КГМУ, кафедры фармакологии Орловского государственного университета. ^ Материалы работы доложены на итоговых научных сессиях и международных конференциях молодых ученых КГМУ в 2004 - 2007 гг., XIII - ХV национальном конгрессе «Человек и лекарство», I национальном конгрессе терапевтов, VII съезде аллерголов и иммунологов СНГ, международной конференции с участием компании «Натурварен», Германия, посвященной открытию фармацевтического факультета в Белгородском государственном университете, VI международной конференции «Клинические исследования лекарственных средств». Апробация диссертации проведена на научно-практической конференции кафедр фармакологии, клинической фармакологии, патофизиологии, патологической анатомии, биохимии, анатомии, внутренних болезней № 1, 2, внутренних болезней ФПО, хирургических болезней ФПО, акушерства и гинекологии ФПО, травматологии, ортопедии и военно-полевой хирургии, спортивной медицины, биоорганической химии, фармацевтической и аналитической с курсом токсикологической химии, фармацевтической технологии, фармации ФПО, фармацевтической химии и фармакогнозии Белгородского государственного университета, НИИ экологической медицины КГМУ. По материалам диссертации опубликовано 42 печатных работ, в том числе 18 работ в журналах, рекомендуемых ВАК. ^ 1. L-NAME-индуцированный и гипоэстроген-индуцированный дефициты оксида азота, характеризующиеся изменениями соотношений сосудистых реакций на ацетилхолин (эндотелийзависимая вазодилатация) и нитропруссид (эндотелийнезависимая вазодилатация) с увеличением КЭД, снижением показателей биохимических маркеров (Тоtal NO, экспрессия NO-синтазы), а также динамикой морфофункциональных показателей сердечно-сосудистой системы (увеличение диаметра миокардиоцитов, повышение адренореактивности, снижением миокардиального резерва), являются адекватными и информативными моделями NO-дефицитной эндотелиальной дисфункции. 2. L-аргинин является дополнительной патогенетической опцией коррекции эндотелиальной дисфункции в сочетании с традиционными антигипертензивными средствами. 3. L-аргинин потенциирует эндотелиопротективную активность основных антигипертензивных средств с доказанными эндотелиотропными эффектами и по расчётному значению вероятностного коэффициента аддиции L-аргинина изученные комбинации располагаются в следующий ряд - при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота: L-аргинин + небиволол < L-аргинин + индапамид < L-аргинин + амлодипин < L-аргинин + лозартан < L-аргинин + эналаприл, а при гипоэстроген-индуцированной патологии соответственно: L-аргинин + небиволол < L-аргинин + эналаприл < L-аргинин + индапамид < L-аргинин + лозартан < L-аргинин + амлодипин. ^ Диссертация состоит из введения, обзора литературы, результатов исследования, обсуждения полученных результатов, выводов и списка используемой литературы, включающего 615 источников, из них 87 отечественных и 528 зарубежных авторов. Диссертация изложена на 407 страницах машинописного текста, содержит таблиц – 52, рисунков – 116, схем – 4. ^ Опыты проводились на белых крысах самцах линии Wistar и белых крысах самках массой 250-300 г. NG-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводился самцам ежедневно один раз в сутки, внутрибрюшинно, в дозе 25 мг/кг. Для моделирования эстрогендефицитного состояния крыс самок наркотизировали этаминалом натрия (50 мг/кг) и проводили билатеральную овариэктомию. На 8 день от начала эксперимента при моделировании L-NAME-индуцированного и на 43 день при моделировании гипоэстроген-индуцированного дефицита оксида азота под наркозом (этаминал-натрия 50 мг/кг) вводили катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей. Болюсное введение фармакологических агентов осуществляли в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряли непрерывно посредством датчика и компьютерной программы “Bioshell”. Функциональные пробы: внутривенное введение ацетилхолина (40 мкг/кг) (J. B. Laursen, 1997) и нитропруссида натрия (30 мкг/кг) (Галаган М.Е., 1991). ^ после моделирования патологии проводили у наркотизированных крыс, находящихся на управляемом дыхании. Полость левого желудочка зондировали иглой через верхушку сердца и посредством датчика Р23ID «Gould» (США), АЦП L-154 и компьютерной программы «Bioshell» регистрировали показатели кардиогемодинамики (левожелудочковое давление (ЛЖД), максимальную скорость сокращения (+dp/dt max), максимальную скорость расслабления (-dp/dt max), частоту сердечных сокращений (ЧСС). Для оценки функциональных возможностей миокарда у животных проводили нагрузочные пробы в представленной последовательности:
^ . Использована модификация метода определения стабильных метаболитов NO, позволяющая после депротеинизации сыворотки крови проводить одноэтапное количественное определение суммарных нитратов и нитритов (Метельская В.А., Гуманова Н.Г., 2005). Принцип метода заключается в одновременном восстановлении нитратов в нитриты в присутствии хлористого ваннадия и реакции диазотирования с последующим развитием окраски Уровень экспрессии эндотелиальной синтазы оксида азота (e-NOS) определяли в клеточном лизате по методу Хендриксона (Метельская В.А., Гуманова Н.Г., 2002). Детекцию полосы eNOS проводили методом усиленной хемолюминесценции (ECL). После отмывки в фосфатном буфере 7 раз по 10 мин мембрану обрабатывали соответствующим раствором (ECL, Amersham), как указано производителем, экспонировали на плёнку Hyperfilm-ECL (Amersham,UK) в течение 2 ч в темноте. Полоску, соответствующую eNOS, детектировали в соответствии с её молекулярной массой, устанавливаемой по сравнению с белками-метчиками. Плёнку высушивали на воздухе, полосы сканировали и рассчитывали площадь под кривой с использованием программы Total Lab. Для определения концентрации эндотелина проводится предварительная преципитация в ЭДТА-плазме. Данный тест основан на методе иммуноферментного анализа и разработан для определения эндотелина непосредственно в биологических жидкостях. На первом этапе анализа образец и детектирующие антитела одновременно вносятся в ячейки. Эндотелин, присутствующий в образце, связывается с захватывающими антителами в ячейках и образует сэндвич-комплекс с детектирующими антителами. После промывки ячеек и удаления неспецефически связанного материала в ячейки вносится комплекс пероксидазы с антителами, обнаруживающий связанные антитела. После удаления несвязавшегося конъюгата в ячейки вноситься ферментный субстрат ТМБ. Интенсивность развившецся окраски прямо пропорциональна содержанию эндотелина в плазме/образце/контроле (Метельская В.А., Гуманова Н.Г., 2005). Для морфологического подтверждения развития моделируемых патологических процессов и комплексной оценки эффективности препаратов проведено гистологическое исследование сердца (во всех сериях эксперимента), почек, надпочечников, участков брюшной и сонной артерий). Материал фиксирован в 10% формалине с последующей заливкой в парафин. Использованы окраски гематоксилином Рего и эозином. Морфометрия сердца проводилась с использованием окулярмикрометра.; определяли абсолютную и относительную массу надпочечников, в почках оценивался диаметр почечных телец и их клубочков; соотношение интима-медиа в участках сонной артерии и брюшной аорты. ^ . В работе целенаправленно и осознанно использованы минимальные из терапевтических доз основных антигипертензивных препаратов, пересчитанные с учётом соотношения поверхности тела биологического объекта к его массе по общепринятой формуле межвидового переноса доз с использованием коэффициентов пересчёта в зависимости от массы тела по Freireich at al. и Улановой И. П. и др. (см. рис. 1). Эналаприл  Лозартан  Амлодипин  Небиволол Индапамид  Рисунок 1. Рекомендуемые суточные дозы основных препаратов с доказанными эндотелиопротективными свойствами у больных с артериальной гипертензией. Ингибиторы АПФ эналаприла малеат («Рениприл», производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства», Курск) и лозартан калия («Блоктран», производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства», Курск), амлодипин («Амлодипин», производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства», Курск), индапамид («Индапамид», производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства», Курск), небиволол («Небилет», производства «Gideon Richter) использовали в дозах 0,5 мг/кг; 6 мг/кг; 0,5 мг/кг; 2 мг/кг; 0,5 мг/кг соответственно и вводили внутрижелудочно 1 раз в сутки, что подтверждается данными литературы и выявляет эффективное гипотензивное и кардиопротективное действие препаратов в экспериментах, ранее проведённых в нашей лаборатории. Согласно данным литературы, кардиотропные эффекты L-аргинина в экспериментах на крысах обнаруживаются в диапазоне доз от 10 до 600 мг/кг (Созыкин А.В., 2000). При этом различают малые дозы – 10-30 мг/кг, что соответствует суточной дозе L-аргинина в качестве биологически активной добавки (БАД). Большие дозы L-аргинина (200 мг/кг) используются в комплексной терапии АГ, ИБС, ХСН для коррекции эндотелиальной дисфункции и в качестве дополнительной терапии к донорам NO– нитратам. В хронических экспериментах при моделировании L-NAME-опосредованного дефицита оксида азота L-аргинин вводили в дозах 30 и 200 мг/кг один раз в сутки внутрибрюшинно в течение 7 дней через 30 минут после введения L-NAME. Принятая схема соответствует основной массе экспериментальных исследований на крысах (Deng L.Y., 1993). Комбинированное использование L-аргинина 200 мг/кг и вышеуказанных препаратов основных антигипертензивных групп с доказанной эндотелиотропной активностью проводилось по вышеописанному протоколу один раз в сутки в течение 7 дней на фоне введения L-NAME. При моделировании гипоэстрогениндуцированного дефицита оксида азота исследуемые препараты вводились одновременно в одно и то же время суток в течение 42 суток после овариэктомии Достоверность наблюдавшихся при действии исследованных препаратов изменений параметров как абсолютных, так и в приростах от исходного уровня определяли разностным методом описательной статистики с нахождением средних значений сдвигов (М), средней ошибки средней арифметической (m) и вероятности возможной ошибки (р), рассчитанной с использованием t-test для групп с различной дисперсией. Различия оценивали как достоверные, при р<0,05. ^ 1. Динамика функциональных, биохимических и морфологических показателей при моделировании L-NAME- и гипоэстроген-индуцированного дефицита NO. Показатели гемодинамики сосудистых функциональных проб на эндотелийзависимое и эндотелийнезависимое расслабление существенно отличаются в группах с моделированием дефицита оксида азота введением блокатора NO-синтазы - L-NAME и проведением билатеральной овариэктомии. На рисунке 2 (а, б, в, г) на примере L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота представлены сверху вниз на каждом фрагменте кривые АД систолического, диастолического и ЧСС. Треугольник над кривой восстановления артериального давления после окончания брадикардитического компонента на фоне введения ацетилхолина и после прохождения точки плато на фоне введения нитропруссида принимались нами как площади эндотелийзависимой (ЭЗВД) и эндотелийнезависимой вазодилатации (ЭНВД). Отношение площади ЭНВД к ЭЗВД по показателю среднего артериального давления математически представлено нами в виде коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД). В наших экспериментах КЭД в группе интактных животных составил 1,1±0,09, при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота – в 5 раз больше, его значение составило 5,4±0,08 (рис. 3КЭД) при гипоэстроген-индуцированном – 2,1±0,2 (рис 3.КЭД). Интактные L-NAME  а б   в г  Рисунок 2. Кривые САД, ДАД, ЧСС при проведении функциональной пробы на эндотелийзависимую (внутривенное введение ацетилхолина 40 мкг\кг)и эндотелийнезависимую вазодилятацию (внутривенное введение нитропруссида натрия 30 мкг/кг) у интактных животных (а,в) и животных с L-NAME-индуцированным дефицитом оксида азота (б, г) соответственно. Примечание. Здесь и везде далее САД - систолическое артериальное давление (мм рт.ст.); ДАД - диастолическое артериальное давление (мм рт.ст.); ЧСС - частота сердечных сокращений (уд. мин). При обеих моделях патологии зарегистрировано повышение цифр артериального давления, в случае введения L-NAME - до 190,3±6,7/145,0±3,9, при овариэктомии – 160,0±6,2/124,9±5,5 мм рт. ст. САД и ДАД соответственно (рис.АД). L-NAME-индуцированный дефицит оксида азота и эстрогендефицитное состояние привели к увеличению абсолютных значений ЛЖД в пробе на адренореактивность и снижению миокардиального резерва в пробе с нагрузкой сопротивлением (рис. 3АДр, рис. 4НС). У интактных самцов ЛЖД к 25 секунде пережатия аорты снижалось до 83,6±7,7%, самок – до 89.3±4,2 %, а у животных с L-NAME-индуцированной патологией и дефицитом эстрогенов значительно сильнее – до 66,0±5,5% и 67,9±2,1% соответственно.       |
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям