В технологию продуктов питания” и спецкурсам для студентов всех форм обучения специальностей 070100, 270500, 171200, 170600, 061600 Бийск 2005
|
|
Скачать 0.56 Mb.
|
|
4.1 Качественные реакции на витамин В2 ^ � Оборудование и реактивы Штатив лабораторный с пробирками; рибофлавин (в таблетках); соляная кислота (концентрированная); цинк гранулированный. Качественная реакция на витамин В2 основана на способности его легко восстанавливаться. Желтый раствор витамина В2 при восстановлении водородом, полученным при добавлении металлического цинка к концентрированной соляной кислоте, сначала приобретает розовый цвет при образовании промежуточных соединений, а затем обесцвечивается, переходя в восстановленную форму по реакции:  бесцветная восстановленная форма = лейкофлавин ^ 1/10 часть таблетки рибофлавина растворяют в 0,5 мл воды. При этом наблюдают окрашивание и флюоресценцию раствора. В пробирку с 10 каплями раствора рибофлавина добавляют пять капель концентрированной соляной кислоты и небольшой кусочек металлического цинка. Выделяющийся водород реагирует с рибофлавином, и раствор меняет желтую окраску на розовую, а затем обесцвечивается. Реакция обусловлена восстановлением рибофлавина сначала в родофлавин красного цвета, а затем в бесцветный лейкофлавин. При взбалтывании обесцвеченный раствор снова окисляется кислородом воздуха в рибофлавин желтого цвета. ^ Оборудование и реактивы Флюорометр марки ЭФ-3М; встряхиватель; ступка фарфоровая; воронка делительная на 50 мл; набор пипеток, градуированных на 1, 2 и 10 мл; пробирки, калиброванные на 10 мл (2 шт.); профильтрованная вытяжка из растительного материала после инкубации с препаратом фосфатазы; 4%-ный раствор перманганата калия; 3%-ный раствор перекиси водорода; Na2S2O4*2H2O; 2%-ный раствор гидрокарбоната натрия; стандартный раствор рибофлавина (10 мл рибофлавина растворяют в 250 мл воды, насыщенной толуолом и содержащей несколько капель уксусной кислоты; из него готовят стандартный рабочий раствор разведением в 100 раз; в 1 мл этого раствора содержится 0,4 мкг рибофлавина). ^ В одну из калиброванных пробирок наливают 8 мл профильтрованной вытяжки, в другую 1 мл стандартного рабочего раствора рибофлавина и 7 мл воды. Далее по каплям в обе пробирки приливают равные объемы 4%-ного раствора перманганата калия до возникновения слабо-розовой окраски (обычно не более 1 мл). Через 10 минут в обе пробирки прибавляют также по каплям 3%-ный раствор перекиси водорода для разрушения избытка перманганата (25 капель). Объемы полученных растворов доводят до 10 мл дистиллированной водой и измеряют флюоресценцию. По окончании флюорометрирования в обе пробирки добавляют по 0,2 мл рабочего раствора SnCl2 и 0,1 мл Na2S2O4 для тушения флюоресценции В2 и измеряют флюоресценцию примесей. Вычисление содержания витамина В2 ведут по формуле:  , (4)где ^ показания флюорометра для опытного раствора после тушения флюоресценции рибофлавина; А1 показания флюорометра для стандартного раствора рибофлавина; В1 показания флюорометра для стандартного раствора рибофлавина после тушения флюоресценции; 0,4 содержание витамина в 1 мл стандартного раствора, мкг; ^ 1 объем всей вытяжки 100 мл; V2 объем вытяжки, взятой для анализа 8 мл; a масса взятого для приготовления вытяжки растительного материала, г. ^ Активностью витамина В6 обладает группа веществ, производных пиридина и носящих общее название пиридоксин. К ним относятся пиридоксол, пиридоксаль и пиридоксамин, различающиеся лишь характером замещения радикала в четвертом положении:  пиридоксол пиридоксаль пиридоксамин Каждое из этих соединений может превратиться в фосфопиридоксаль, который является составной частью ферментов, катализирующих реакции белкового обмена реакции переаминирования и декарбоксилирования аминокислот:  фосфопиридоксаль Отсутствие в пище витамина В6 сопровождается резким нарушением обмена белков. Основным симптомом В6-авитаминоза является нарушение кроветворения и развитие различного рода дерматитов (отсюда название витамина В6-антидерматитный). В последнее время обнаружено, что недостаток витамина В6 ведет к нарушению липидного обмена, вследствие чего развивается атеросклероз. Суточная норма витамина В6 для взрослого человека составляет 2,02,5 мг. Особенно богаты этим витамином рисовые отруби, ростки пшеницы, бобы, дрожжи, зеленые части растений, а из животных продуктов почки, печень, мышцы. ^ Оборудование и реактивы Флюорометр; баня водяная; пробирка микрохимическая; 1%-ный раствор хлорного железа; моча; 10%-ный раствор соляной кислоты; 10%-ный раствор гидроксида натрия; 1%-ный раствор тетрабората натрия. ^ К пяти каплям 1%-ного раствора витамин В6 приливают такое же количество 1%-ного раствора хлорного железа и перемешивают. Смесь окрашивается в красный цвет. ^ Витамин В6 выделяется из организма в виде пиридоксиловой кислоты. Ее лактон интенсивно флюоресцирует синим светом при освещении раствора ультрафиолетовыми лучами. В микрохимическую пробирку вносят три капли мочи и столько же 10%-ного раствора соляной кислоты. Пробирку помещают в кипящую водяную баню на 20 минут для получения лактона пиридоксиловой кислоты. Далее пробирку охлаждают, добавляют в нее три капли 10%-ного раствора гидроксида натрия (рН 9,0) и 1%-ный раствор тетрабората натрия до половины объема пробирки. В полученном растворе наблюдают синее свечение.  4-пиридоксиловая лактон 4-пиридоксиловойкислота кислоты ^ Оборудование и реактивы Флюорометр; водяная баня; пробирки с притертыми пробками, калиброванные на 5 и 10 мл (4 шт.); пипетки с одной меткой на 2 мл (5 шт.); чашки выпаривательные на 5 мл (2 шт.); универсальный индикатор; моча, подкисленная 50%-ным раствором уксусной кислоты и профильтрованная; тетраборат натрия; 0,1 N раствор соляной кислоты; соляная кислота (плотностью 1,19), разведенная в 10 раз; стандартный раствор лактона 4-пиридоксиловой кислоты (10 мг лактона пиридоксиловой кислоты растворяют в 25 мл 0,1 N раствора соляной кислоты. Из этого раствора разведением в 10 раз 0,1 N соляной кислотой готовят разбавленный рабочий раствор, в 1 мл которого содержится 40 мкг лактона). ^ В две пробирки на 10 мл с притертыми пробками наливают до 1 мл отфильтрованной мочи и доводят объем до 10 мл разведенной соляной кислотой (1:10). Затем одну из пробирок (опыт) закрывают пробкой и ставят в кипящую водяную баню на 15 минут (для образования лактона), а другую (контроль) оставляют без нагревания. Через 15 минут опытную пробирку охлаждают. Из каждой пробирки берут пробы по 0,5 мл и помещают их в две другие чистые пробирки, градуированные на 5 и 10 мл, добавляют в них 0,5 г тетрабората натрия и объем доводят до 10 мл дистиллированной водой. После растворения тетрабората натрия проверяют рН раствора (с помощью универсального индикатора); при величине рН 9,0 появляется зеленая окраска со слабым синим оттенком. На флюорометре сравнивают интенсивность флюоресценции опытной и контрольной проб со стандартным раствором лактона при 450 нм. В последнем случае к 0,1 мл стандартного раствора лактона добавляют 9,9 мл 0,1 N раствора соляной кислоты (в 1 мл полученного раствора содержится 0,4 мкг лактона). Из этого разбавленного раствора берут 1 мл, добавляют к нему 9 мл дистиллированной воды и подщелачивают, прибавляя к содержимому пробирки 0,5 г тетрабората натрия (значение рН проверяют по универсальному индикатору). Полученный таким образом стандартный раствор, содержащий 0,04 мкг лактона в 1 мл, флюорометрируют. Расчет содержания 4-пиридоксиловой кислоты проводят по формуле:  , (5)где ^ интенсивность флюоресценции опытного образца; В интенсивность флюоресценции контрольного образца; V общий объем мочи; 0,04 содержание лактона пиридоксиловой кислоты, мкг в 1 мл; 200 разведение мочи; b показания флюорометра для стандартного раствора лактона 4-пиридоксиловой кислоты; 1000 коэффициент для перевода данных, мкг в мг; 1,109 коэффициент пересчета для перехода от лактона 4-пиридоксиловой кислоты к 4-пиридоксиловой кислоте.
Общее название этой группы витаминов фолацин. Основными представителями этой группы витаминов являются фолиевая (птероилглутаминовая) кислота и ее активная форма тетрагидрофолиевая кислота. Фолиевая кислота представляет собой продукт взаимодействия птеридина, парааминобензойной и L-глутаминовой кислот.  n=1 витамин B9 (фолиевая кислота); n=37 его конъюгаты. Этот витамин содержится в значительном количестве в листьях, поэтому он известен под названием фолиевой кислоты (фолиум лист). В природе в пищевых продуктах распространены производные фолиевой кислоты фолаты, в которых птероевая кислота связана с несколькими остатками глутаминовой кислоты (от 3 до 7). Фолиевая кислота выполняет важнейшие функции в обмене веществ. Она переносит одноуглеродные фрагменты в процессах биосинтеза многих соединений, в числе которых аминокислоты, пуриновые основания и другие жизненно важные соединения. Недостаток фолацина приводит к развитию анемии с нарушениями баланса эритроцитов и лейкоцитов в крови. Кроме того, поражаются органы пищеварения, появляется стоматит, гастрит, энтерит. У беременных нарушается развитие плода. Суточная потребность взрослых в фолацине составляет 200 мкг, беременных 400 мкг. Показателями обеспеченности организма фолацином служат содержание фолиевой кислоты в сыворотке крови (620 нг/мл) и в эритроцитах (150170 нг/мл). Содержание фолиевой кислоты высоко в муке грубого помола и хлебобулочных изделиях из этой муки, в гречневой и овсяной крупах, пшене, сое, фасоли, цветной капусте, зеленом луке, грибах. Из продуктов животного происхождения высоким уровнем фолиевой кислоты отличаются печень, молоко, творог, сыр, икра. Тепловая обработка в виде жарения и отваривания, особенно с предварительным измельчением, ведет к значительным потерям фолацина (до 8090% от исходного уровня в продукте). ^ Для количественного определения фолиевой кислоты ее адсорбируют из молока активированным углем; затем окисляют перманганатом калия. В результате от нее отщепляются парааминобензойная кислота, глутаминовая кислота и птеридин-6-карбоновая кислота (или альдегид), дающая интенсивно-голубую флюоресценцию с максимумом свечения при 470 нм. ^ Флюорометр; термостат на 40 С; баня водяная; круглодонная колба Вюрца; мерная колба на 25 мл; воронка фильтрующая N 2; колбы мерные на 100 мл (2 шт.); пипетки с одной меткой на 1 мл (2 шт.); цилиндры измерительные с носиком на 25 и 100 мл (4 шт.); свежее молоко; толуол; уголь активированный; пенициллиновая пленка источник протеолитических ферментов (глубинный мицелий Penicillium высушивается ацетоном и хранится в склянке с притертой пробкой); серная кислота (2%-ная и 15%-ная); гидроксид натрия (15%-ный); аммиак (3%-ный) в этиловом спирте (70%-ном); перманганат калия (4%-ный); пероксид водорода (3%-ный); исходный стандартный раствор фолиевой кислоты (20 мг перекристаллизованной фолиевой кислоты растворяют в 100 мл дистиллированной воды, подщелоченной тремя каплями 10%-ного раствора гидроксида натрия; раствор хранят в темной склянке под толуолом в холодильнике; перед анализом готовят рабочий стандартный раствор фолиевой кислоты, разводя исходный стандартный раствор в 100 раз; в 1 мл рабочего стандартного раствора содержится 2 мкг фолиевой кислоты). ^ В колбу наливают 35 мл молока, 45 мл воды и добавляют несколько капель 15%-ного раствора серной кислоты до величины рН 3,54,0. Содержимое колбы перемешивают, устанавливают обратный воздушный холодильник и нагревают на кипящей водяной бане в течение 45 минут. Затем жидкость в колбе охлаждают до температуры 32 С и доводят величину рН до 4,55,0 15%-ным раствором гидроксида натрия. Далее в колбу вносят 200 мг пенициллиновой пленки, растворенной в 10 мл воды, три капли толуола, хорошо перемешивают содержимое и ферментируют 1618 часов при температуре 3840 С. Через указанный промежуток времени колбу охлаждают до комнатной температуры, содержимое фильтруют через складчатый фильтр. Осадок на фильтре дважды промывают небольшими порциями воды. Объем полученного фильтрата доводят водой до 100 мл. В коническую колбу вносят 50 мл фильтрата, подкисляют его 15%-ным раствором серной кислоты до величины рН=3 и всыпают 100 мг активированного угля. Смесь кипятят 5 минут под тягой при помешивании, затем фильтруют через пористый стеклянный фильтр под вакуумом. Колбу Бунзена заменяют и через тот же фильтр пять раз пропускают нагретый до кипения 3%-ный раствор аммиака в 70%-ном этиловом спирте для снятия фолиевой кислоты с угля (всего для элюации берут 70 мл жидкости; первый раз 20 мл, второй и третий по 15 мл; четвертый и пятый по 10 мл). Объединенные элюаты перегоняют в колбе Вюрца до объема 1015 мл. Остаток переносят в мерную колбу на 25 мл и подкисляют 2%-ным раствором серной кислоты до величины рН=3. После этого по каплям добавляют 4%-ный раствор перманганата калия до появления розовой окраски, не исчезающей в течение 10 минут. Далее для удаления избытка перманганата калия добавляют по каплям 3%-ный раствор пероксида водорода и доводят величину рН до 4,04,5 15%-ным раствором гидроксида натрия. Общий объем доводят водой до 25 мл. Жидкость фильтруют и измеряют интенсивность флюоресценции при 470 нм на флюорометре. Параллельно измеряют интенсивность флюоресценции стандартного раствора фолиевой кислоты, который обрабатывают тем же способом, что и испытуемый раствор (контрольный опыт), и стандартного раствора без обработки. Содержание фолиевой кислоты рассчитывают по формуле:  , (6)где ^ показания флюорометра для испытуемого раствора; А1 показания флюорометра для контрольного раствора; А2 показания флюорометра для стандартного раствора фолиевой кислоты; b содержание фолиевой кислоты в 1 мл стандартного раствора; а масса молока, г; V количество фильтрата, взятого для адсорбции, мл; V1 конечный объем раствора, взятого для определения, мл; V0 объем гидролизата после разбавления водой, мл. 7 Витамин В12 (цианкобаламин) Основными представителями кобаламинов являются оксокобаламин и цианкобаламин (см. формулу ниже). Биологически активными формами витамина В12, в виде которых он выполняет свои специфические функции, служат метилкобаламин и 5-дезоксиаденозилкобаламин. Витамин В12 играет важнейшую роль в процессах кроветворения. Для всасывания витамина В12 необходим особый белковый фактор, синтезирующийся в слизистой оболочке желудка и образующий с ним прочный комплекс. Авитаминоз В12 характеризуется нарушением развития красных кровяных телец, приводящим к анемии, поражением нервной системы и органов пищеварения. Отмечаются раздражительность, утомляемость, нарушение функций спинного мозга вплоть до паралича. Со стороны органов пищеварения наблюдается потеря аппетита, нарушение моторики кишечника и др. Причины развития авитаминоза также разносторонни. Особенно актуальна эта проблема для вегетарианцев.  витамин B12 (кобаламин) при R=OH оксокобаламин; R=CN цианкобаламин. Суточная потребность взрослых в витамине В12 составляет 2 мкг, беременных 3 мкг. Показателем обеспеченности организма витамином В12 служат уровень выделения его с мочой в виде метиламина и содержание в сыворотке крови. Источником витамина В12 служат продукты животного происхождения: печень, мясо, некоторые сорта рыбы, творог, сыр и др. В растительных продуктах этот витамин практически отсутствует. Содержание витамина В12 в молоке невысоко. В отличие от других витаминов группы В, цианкобаламин практически отсутствует в пекарских и пивных дрожжах. ^ При сплавлении цианкобаламина с гидросульфитом калия под действием сильного окислителя происходит его разрушение, и освободившийся кобальт может быть обнаружен -нитрозо- и -нафтолом или 1-нитрозо-2-нафтол-3,6-дисульфонатом натрия (нитрозо--солью), с которыми он образует растворимую комплексную соль оранжево-красного цвета (выпадающую при высокой концентрации ее в виде пурпурного осадка). Состав этого соединения отвечает формуле (С10H6O2N)3Co. Образование внутрикомплексных связей зависит от расположенных рядом группировок NOH и O:  ^ Тигель фарфоровый; красная лакмусовая бумага; препарат витамина В12 (ампула обычно содержит 15 мкг витамина в 1 мл); азотная кислота (концентрированная); соляная кислота (концентрированная); -нитрозо--нафтол (1%-ный раствор в ацетоне); гидрофосфат натрия (10%-ный). ^ 1/3 содержимого ампулы переносят в фарфоровый тигель, упаривают в ацетоне досуха и прокаливают на маленьком пламени горелки. После охлаждения добавляют 1 мл концентрированной азотной кислоты и 3 мл концентрированной соляной кислоты и кипятят под тягой до полного испарения жидкости. После остывания растворяют остаток в одной капле воды, прибавляют одну каплю 1 %-ного раствора -нитрозо--нафтола в ацетоне и по каплям 10%-ный раствор гидрофосфата натрия до слабощелочной реакции (по лакмусу). В присутствии иона Со3+ развивается буро-красное окрашивание. В отсутствие Со3+ окраска желто-зеленая. ^ Витамин С является лактоном L-дикетогулоновой кислоты. Наличие в ее молекуле двойной связи делает подвижными протоны гидроксильных групп у второго и третьего атомов углерода, что обусловливает кислый характер соединения с резко выраженной восстанавливающей способностью. Аскорбиновая кислота легко отдает и принимает два атома водорода, переходя соответственно в дегидроаскорбиновую кислоту, и наоборот:  L-аскорбиновая кислота L-дегидроаскорбиновая кислота (восстановленная форма) (окисленная форма) Это важнейшее свойство лежит в основе механизма действия аскорбиновой кислоты в организме: она является участником окислительно-восстановительных процессов. При недостаточном поступлении витамина С с пищей у человека развивается специфическое заболевание цинга. Клинические симптомы: быстрая утомляемость, анемия, головокружение, снижение сопротивляемости организма инфекциям, кровоточивость десен, кровоизлияния в подкожную клетчатку, признаки нарушения сердечной деятельности. В основе этих явлений лежат нарушения синтеза склеивающего межклеточного белка коллагена, что и вызывает патологические изменения сосудистых стенок и опорных тканей. Большинство животных, за исключением морских свинок и обезьян, не нуждаются в получении витамина С извне, так как он синтезируется у них в печени из сахаров. Человек не обладает способностью к синтезу витамина С и должен обязательно получать его с пищей. Потребность взрослого человека в витамине С составляет 50100 г аскорбиновой кислоты в день. В организме не образуется резервов витамина С, поэтому человек ежедневно должен получать его с пищей. Основным источником витамина С являются растения. Особенно много аскорбиновой кислоты содержат плоды шиповника, ягоды черной смородины, капуста, картофель, рябина, перец, хвоя, лимоны, мандарины, яблоки. ^ Качественные реакции на витамин С основаны на его способности легко вступать в окислительно-восстановительные реакции и восстанавливать такие соединения, как метиленовая синь, 2,6-дихлорфенолиндофенол, гексациано-(III)-феррата калия, нитрат серебра и другие. ^ Термостат на 40 С; пипетки с одной меткой на 1мл (5 шт.); штатив лабораторный с пробирками; сок капусты, картофеля или 0,002%-ный раствор аскорбиновой кислоты; гидроксид калия (5%-ный); соляная кислота (10%-ная); хлорид железа (1%-ный); уксусная кислота (10%-ная); 2,6-дихлорфенолиндофенол (0,02%-ный свежеприготовленный). ^ К 1 мл сока капусты или картофеля в пробирке прибавляют 1 мл 0,01%-ного раствора метиленовой сини, перемешивают и закрывают пробкой для предохранения от соприкосновения с кислородом воздуха. Пробирку помещают в термостат при температуре 3740 С. Через некоторое время жидкость в пробирке обесцвечивается за счет восстановления метиленовой сини в бесцветную лейкоформулу и образования дегидроаскорбиновой кислоты (см. уравнение). Если затем бесцветный раствор метиленовой сини энергично встряхнуть, не препятствуя поступлению воздуха в пробирку, то раствор вновь приобретает синий цвет.
аскорбиновой кислотой Аскорбиновая кислота, окисляясь, восстанавливает гексациано-(III)-феррат калия К3[Fe(CN)6] до гексациано-(II)-феррата калия К4[Fe(CN)6], который с ионом железа в степени окисления (+3) образует в кислой среде гексациано-(II)-феррат железа берлинскую лазурь, Fe4[Fe(CN)6]:  берлинская лазурь (синий осадок) К 1 мл сока капусты прибавляют две капли раствора гидроксида калия, две капли раствора гексациано-(III)-феррата калия и энергично встряхивают содержимое пробирки. Затем в пробирку добавляют от шести до восьми капель 10%-ного раствора соляной кислоты и одну-две капли раствора хлорида железа (III). В результате выпадает синий или зеленовато-синий осадок берлинской лазури.
К 1 мл сока капусты или картофеля прибавить 1 мл 0,02%-ного раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола, содержимое перемешать. Раствор обесцвечивается за счет образования лейкоформы индикатора. При дальнейшем прибавлении индикатора раствор окрашивается в розовый цвет, так как вся аскорбиновая кислота в пробе уже окислена и 2,6-дихлорфенолиндофенол больше не восстанавливается. L-аскорбиновая 2,6-дихлорфенолиндофенол кислота (окрашенная, окисленная форма)  L-дегидроаскорбиновая 2,6-дихлорфенолиндофенол кислота (бесцветная, восстановленная форма)
Количественное определение витамина С в исследуемом материале осуществляют с помощью 2,6-дихлорфенолиндофенола, используя его титрованный раствор. По количеству реактива, израсходованного на окисление витамина С, определяют содержание последнего в анализируемом материале. ^ Бюретки прямые с краном на 5 мл (2 шт.); пипетки с одной меткой на 2, 5 и 20 мл; колбы конические на 50 и 100 мл (2 шт.); цилиндр измерительный с носиком на 250 мл; ступка фарфоровая с наружным диаметром 110 мм; стекло часовое; песок кварцевый; картофель; морковь; томатный сок; шиповник; соляная кислота (5%-ная); 2,6-дихлорфенолиндофенол (0,001 N); метафосфорная кислота (2%-ная и 4%-ная); аскорбиновая кислота (0,1%-ная); иодат калия (0,001 N); иодид калия; крахмал (1%-ный); иодид калия (5%-ный); пероксид водорода (3%-ный). ^ 1) Приготовление 0,001 N раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола Взвешивают в бюксе 130 мг реактива и с помощью воронки переносят в мерную колбу на 500 мл, смывая остатки на воронке и в бюксе дистиллированной водой. Добавив десять капель 0,01N раствора гидроксида натрия и воду до половины колбы, раствор сильно перемешивают до растворения 2,6-дихлориндофенола. Объем раствора в колбе доводят до метки водой. Перемешав несколько раз, раствор отфильтровывают в сухую склянку из темного стекла. Реактив устойчив в течение трех суток. ^ На аналитических весах взвешивают в бюксе 0,3568 г иодата калия и растворяют в мерной колбе на 1 л. Полученный раствор по мере надобности разбавляют дистиллированной водой в 10 раз. ^ Установку титра приблизительно 0,001 N раствора 2,6-дихлор-фенолиндофенола проводят по аскорбиновой кислоте в день работы. Берут 2 мл 0,1%-ного раствора аскорбиновой кислоты и растворяют в 50 мл 2%-ного раствора метафосфорной или серной кислоты. 5 мл этого раствора титруют 2,6-дихлорфенолиндофенолом до появления розового окрашивания. Отмечают затраченный на титрование объем реагента. Сразу же после этого такой же объем аскорбиновой кислоты титруют из другой микробюретки титрованным 0,001 N раствором иодата калия. К раствору аскорбиновой кислоты перед титрованием добавляют несколько кристаллов (не более 0,1 г) иодида калия и пять капель 1%-ного раствора крахмала. Титрование ведут осторожно до появления едва заметного синего окрашивания и отмечают затраченный на титрование объем иодата калия. Так как в первом и во втором случаях были оттитрованы одинаковые объемы аскорбиновой кислоты, то, следовательно, количества затраченных иодата калия и реагента эквивалентны друг другу. Так как 1 мл 0,001 N раствора иодата калия эквивалентен 0,088 мг аскорбиновой кислоты, то титр раствора 2,6-дихлор-фенолиндофенола (в миллиграммах аскорбиновой кислоты) равен:  , (7)где V1 объем раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола, мл; V2 объем иодата калия, затраченный на титрование равных объемов раствора аскорбиновой кислоты, мл.
Нарезают исследуемый материал (картофель, морковь) мелкими кусочками. 10 г материала переносят в ступку и тщательно растирают с небольшим количеством кварцевого песка, добавляя маленькими порциями 4%-ный раствор метафосфорной кислоты до получения жидкой кашицы. Смесь количественно переносят в мерную колбу на 100 мл. Ступку и пестик тщательно обмывают 4%-ным раствором метафосфорной кислоты, которую сливают в ту же мерную колбу, следя за тем, чтобы были затрачены все 50 мл метафосфорной кислоты. Конечная концентрация ее должна составлять 2%. В случае отсутствия метафосфорной кислоты ее заменяют 5%-ным раствором соляной кислоты с конечной концентрацией 25%. После этого содержимое мерной колбы доводят до метки дистиллированной водой, хорошо перемешивают и фильтруют через складчатый фильтр или центрифугируют. Полученный экстракт должен быть совершенно прозрачным. ^ В две конические колбочки на 50 мл помещают пипеткой по 10 мл полученного экстракта растительного материала. В одной из проб разрушают витамин С кипячением в присутствии нескольких капель пероксида водорода. Содержимое колб титруют раствором 2,6-ди-хлорфенолиндофенола. При наличии в экстракте витамина С раствор обесцвечивается, а при дальнейшем прибавлении индикатора окрашивается в розовый цвет, так как вся аскорбиновая кислота в пробе уже окислена и окраска больше не восстанавливается. В пробе, где витамин С разрушен, от прибавления нескольких капель индикатора появляется розовое окрашивание. Результаты титрования записывают и повторяют работу с новой порцией того же экстракта. На основании средней величины титрования, полученной из двух-трех определений, вычисляют количество витамина С по формуле:  , (8)где ^ титр 2,6-дихлорфенолиндофенола в миллиграммах аскорбиновой кислоты; V объем экстракта, мл; а масса исследуемого материала, г; V1 затраченный объем реагента при титровании, мл; V2 объем титруемого раствора, мл. В результате находят количество витамина С в миллиграммах на 100 г исследуемого продукта. По данному методу определяют только восстановленную форму аскорбиновой кислоты.
В 1930-1932 гг. Ф. Аскью и А. Виндаусу получили в своих лабораториях сначала неочищенный витамин D1, а затем индивидуальный витамин D2 (эргокальциферол) из облученного провитамина эргостерина. В 1936 г. Г. Брокман выделил более универсальный природный витамин D3 (холекальциферол) из жира печени тунца. В том же году А. Виндаус получил его фотоизомеризацией провитамина 7-дегидрохолестерина. В 1936-1937 гг. строение витаминов D2 и D3 было установлено А. Виндаусом и Дж. Хейлброном и подтверждено в 1957 г. Д. Ходжкином методом рентгеноструктурного анализа. В настоящее время известно еще четыре витамина группы D D4-D7, но их активность значительно ниже.  эргостерин витамин D2Под действием ферментов витамин D2 превращается в 25-гидроксикальциферол:  25-гидроксикальциферол  7-дегидрохолестерин  витамин D3 Также витамин D3 под действием соответствующих ферментов может превращаться в различные свои формы:  X Y Z 1-гидроксихолекальциферол ОН Н Н 1,25-дигидроксихолекальциферол ОН Н ОН 1,24,25-тригидроксихолекальциферол ОН ОН ОН Провитамин D3 7-дегидрохолестерин присутствует в кожных покровах людей, и для его превращения в холекальциферол достаточно солнечного облучения, так что суточная потребность взрослого человека (712 мкг) легко удовлетворяется. У детей суточная доза витамина D3 составляет 1225 мкг. При гиповитаминозе или авитаминозе развивается рахит, поэтому необходимо поступление этого витамина со сливочным маслом, молоком, яйцами, жиром печени рыб, где его содержание наиболее велико. В лечебных целях возможно также использование витамина D2, синтезированного из эргостерина, получаемого из дрожжей, либо как побочный продукт производства антибиотиков. Витамины D широко применяются в животноводстве, но для некоторых животных и птиц витамин D2 малоактивен и непригоден как пищевая добавка. В организме человека витамины D вместе с ферментами, гормонами, АТФ, Na+ и другими веществами регулируют всасывание Ca2+ в кишечнике, содержание Ca2+ в крови, метаболизм Сa2+ и фосфатов, приводящий к построению нормальной костной и мышечной тканей. Большинство функций витамины D выполняют не сами, а их окисленные метаболиты: 25-гидроксикальциферол, 1-гидроксихолекальцифе-рол, 1,25-дигидроксихолекальциферол. Эти метаболиты, открытые Г. де Лука в 1969-1971 гг., обладают значительно более высокой биологической активностью, чем исходные витамины. Они проявляют все свойства истинных стероидных гормонов. |
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям