В технологию продуктов питания” и спецкурсам для студентов всех форм обучения специальностей 070100, 270500, 171200, 170600, 061600 Бийск 2005
|
|
Скачать 0.56 Mb.
|
|
Качественные реакции на витамины группы D ^ Пипетки с одной меткой на 1 мл (4 шт.); штатив лабораторный с пробирками; баня водяная; рыбий жир; анилин; раствор брома в хлороформе (1:60); соляная кислота (концентрированная).
В сухую пробирку наливают 1 мл рыбьего жира и 1 мл смеси анилина с концентрированной соляной кислотой (15:1), перемешивают, осторожно нагревают при постоянном помешивании до кипения и кипятят 0,5 мин. При наличии витамина D желтая окраска эмульсии переходит сначала в зеленую, а затем в красную. Через 12 мин эмульсия делится на два слоя, из которых нижний окрашен в интенсивный красный цвет.
В сухую пробирку наливают 1 мл рыбьего жира и 1 мл раствора брома в хлороформе (1:60). В присутствии витамина D возникает зеленовато-голубое окрашивание при нагревании на водяной бане в течение 12 мин.
Оборудование и реактивы Фотоэлектроколориметр; баня водяная; воронка делительная на 300 мл (2 шт.); коническая колба с притертой пробкой на 200 мл; набор пипеток, градуированных на 1, 5 и 10 мл; молочный жир; этиловый спирт (96%-ный); гидроксид калия (50%-ный); диэтиловый эфир; сульфат натрия свежепрокаленный; хлороформ (промытый водой, высушенный над безводным сульфатом натрия и перегнанный); хлорид сурьмы (III) (2123%-ный) в хлороформе (безводный; рекомендуется хранить в темной склянке в эксикаторе над серной кислотой); ацетилхлорид; основной раствор кальциферола (в 100 мл этилового спирта растворяют 10 мг кальциферола, что соответствует 400 000 и.е. витамина D2; раствор устойчив в течение года при хранении в холодильнике). ^ В коническую колбу с воздушным обратным холодильником длиной 80 см вносят 10 г молочного жира, 40 мл 96%-ного этилового спирта и 8 мл 50%-ного раствора гидроксида калия. Колбу помещают в водяную баню, нагретую до температуры 8590 С, на 4050 минут. По окончании омыления содержимое колбы количественно переносят в делительную воронку и трижды экстрагируют диэтиловым эфиром (порциями 50; 25 и 25 мл). Эфирный слой переносят в другую делительную воронку, где промывают его многократно водой до полного удаления щелочи (проба на фенолфталеин). К полученному эфирному экстракту добавляют 7 г свежепрокаленного сульфата натрия и высушивают его до полной прозрачности (1520 мин), после чего фильтруют через бумажный фильтр. Эфир отгоняют на предварительно нагретой водяной бане до получения сухого остатка, который растворяют в 5 мл хлороформа. Из полученного раствора отбирают 1 мл, добавляют 3 капли ацетилхлорида и 6 мл раствора хлорида сурьмы (III). Через 4 минуты интенсивность окраски измеряют в фотоэлектроколориметре при длине волны 500 нм. Фотометрирование ведут против смеси из 1 мл хлороформа, 6 мл раствора хлорида сурьмы (III) и трех капель ацетилхлорида. Содержание витамина D рассчитывают по калибровоч-ному графику. Для получения калибровочного графика готовят серию растворов кальциферола в хлороформе, содержащих в 1 мл от 200 до 1000 и.е. витамина D, используя для этого основной раствор кальциферола и проводя цветную реакцию, как указано выше. Расчет ведут по формуле:  , (9)где ^ найденное по калибровочному графику количество витамина D в 1 мл раствора, и.е.; V масса жира, г; плотность жира, г/см3.
Витамин Е, называемый -токоферол, был открыт как антистерильный фактор. Отсутствие витамина Е нарушает нормальное развитие плода у беременных женского рода и сперматогенез у мужского организма. В 1936 г. Г. Эванс впервые выделил этот витамин в чистом виде из зародышей пшеницы. В 1937 г. было установлено его строение. В 1938 г. П. Каррер описал первый синтез витамина Е. Известно еще несколько витаминов Е (токоферолов или метилтоколов) с меньшим числом метильных групп в ароматическом ядре и их аналогов токотриенолов с ненасыщенной боковой цепью. Все они проявляют значительно меньшую активность, чем -токоферол.  витамин Е (-токоферол)Токоферолы синтезируются только в растениях. Они содержатся главным образом в семенах (зернах пшеницы и риса) и маслах (подсолнечном, кукурузном, хлопковом, соевом, рисовом, конопляном, пальмовом и др.), а также в зеленых частях растений (салат, шпинат). У животных недостаток токоферола приводит не только к бесплодию, но и к поражению миокарда и других мышечных тканей, сосудистой и нервной систем. Механизм его действия связывают с антиоксидантным действием, направленным на предотвращение окисления остатков ненасыщенных жирных кислот в липидах мембран, и с влиянием на биосинтез ферментов, особенно тех, которые участвуют в построении гема. У людей гиповитаминоз Е проявляется редко. Суточная потребность взрослого человека составляет 1025 мг, особенно для беременных и кормящих матерей, а для детей 5 мг. Такая потребность легко удовлетворяется при нормальном питании.
Оборудование и реактивы Штатив лабораторный с пробирками; -токоферол (0,1%-ный) в спирте (96%-ном); азотная кислота (концентрированная); хлорид железа (III).
В сухую пробирку помещают четыре-пять капель 0,1%-ного спиртового раствора -токоферола, прибавляют десять капель концентрированной азотной кислоты и содержимое пробирки встряхивают. Пробирку помещают в водяную баню, нагретую до температуры 70 С. Образуется эмульсия, которая постепенно расслаивается: верхний маслянистый слой приобретает красную окраску. Окрашивание обусловлено окислением -токоферола до -токоферилхинона, окрашенного в красный или желтовато-красный цвет.
В сухую пробирку помещают четыре-пять капель 0,1%-ного спиртового раствора -токоферола, прибавляют 0,5 мл хлорида железа (III) и тщательно перемешивают содержимое пробирки. Раствор окрашивается при нагревании в красный цвет в результате окисления токоферола хлоридом железа (III) в токоферилхинон:  где R радикал изогексадекана.
Оборудование и реактивы Фотоэлектроколориметр; водяная баня; воронка делительная на 200 мл; колбы круглодонные на 100 и 250 мл с обратным воздушным холодильником; колбы мерные на 25 мл (2 шт.); цилиндры измерительные с носиком на 25 мл (4 шт.); набор пипеток с одной меткой на 1, 2 и 5 мл; молоко; гидроксид калия (60%-ный); этиловый спирт (96%-ный); диэтиловый эфир; сульфат натрия (прокаленный); этиловый спирт (абсолютный); азотная кислота (=1,4 г/см3); серия стандартных спиртовых растворов -токоферола с возрастающей концентрацией от 100 до 400 мкг в 1 мл. ^ В колбу, снабженную воздушным обратным холодильником, вносят 100 мл молока, 25 мл 60%-ного раствора гидроксида калия и 20 мл 96%-ного этилового спирта. Колбу в течение 2 ч нагревают на кипящей водяной бане. Полученный гидролизат охлаждают, разбавляют 20 мл воды и количественно переносят в делительную воронку. Извлечение -токоферола ведут диэтиловым эфиром, который вносят в длительную воронку в три приема: первая экстракция 50 мл, две последующих по 25 мл эфира. Соединенные вместе эфирные вытяжки промывают три-четыре раза дистиллированной водой в делительной воронке до полного удаления щелочи (по фенолфталеину) и высушивают прокаленным сульфатом натрия (57 г) до прозрачной жидкости. Экстракт фильтруют в колбу на 100 мл, а осадок на фильтре промывают небольшим количеством эфира, который присоединяют к основному экстракту. Эфир испаряют на водяной бане, а полученный сухой остаток растворяют в 5 мл абсолютного спирта и приливают 1 мл концентрированной азотной кислоты. Присоединяют к колбе обратный холодильник и нагревают ее для окисления -токоферола три минуты. В качестве контроля используют абсолютный этиловый спирт, 5 мл которого нагревают так же, как и исследуемый раствор, с 1 мл концентрированной азотной кислоты в течение трех минут на кипящей водяной бане. Обе колбы охлаждают и оставляют на 15 минут в темноте для развития окраски. Затем опытную и контрольную реакционные смеси переносят количественно в мерные колбы на 25 мл и доводят абсолютным спиртом до метки. Оптическую плотность окрашенного раствора находят на фотоэлектроколориметре с синим светофильтром (470 нм) против контроля и по величине ее определяют содержание витамина Е в исходном растворе по калибровочной кривой. Для построения калибровочной кривой 5 мл каждого из серии стандартных спиртовых растворов -токоферола с определенной его концентрацией окисляют 1 мл концентрированной азотной кислоты на кипящей водяной бане в течение 3 минут. Дальнейшие операции идентичны с таковыми, описанными для контрольной и опытной проб. Полученные величины экстинкций окрашенных стандартных растворов откладывают по оси ординат, а соответствующие им количества -токоферола по оси абсцисс. Расчет ведут по формуле:  , (10)где ^ найденное по калибровочной кривой количество витамина Е в 1 мл раствора, мкг; V общий объем исследованного раствора с учетом всех разведений, мл; плотность исследованного раствора молока, г/см3; а масса молока, г; 1000 коэффициент для перевода микрограммов в миллиграммы. ^ Витамины К это большая группа витаминов коагуляции антигеморрагических витаминов (филлохинон и менахиноны). Витамин К открыт в 1929 г. Г. Дамом как антигеморрагический фактор у цыплят. Геморрагия связана с нарушением целостности стенок кровеносных сосудов, подкожными и внутримышечными кровотечениями, обусловленными низкой скоростью свертывания крови. В 1939 г. в лаборатории Каррера из люцерны впервые был выделен витамин К, позднее названный витамином К1 (филлохинон). В том же году Л. Физер и Е. Дойси установили его строение. Из рыбной муки была выделена и охарактеризована группа витаминов К2 (менахиноны). Они отличаются величиной боковой цепи и обозначаются либо по числу входящих в нее изопреноидных звеньев (менахинон-4, -6, -7, -8, -9), либо по количеству С-атомов цепи (витамины К2(20), К2(30), К2(35), К2(40), К2(45)).  витамин К1 (филохинон)  витамин К2 витамин К2(20) n=4 витамин К2(30) n=6 витамин К2(35) n=7 витамин К2(40) n=8 витамин К2(45) n=9 Витамины К1 и К2 необходимы человеку прежде всего для нормализации или ускорения процесса свертывания крови. Они участвуют не в самом акте свертывания и образования тромба, а в построении протромбина и других сложных факторов единой сложной системы. Кроме того, менахиноны участвуют в биохимических окислительно-восстановительных реакциях в процессах фотосинтеза и окислительного фосфорилирования.  витамин К3 Синтетические аналоги К4-К7 обладают более высокой биологической активностью.  R1 R2 витамин К4 ОН ОН витамин К5 NH2 OH витамин К6 ОН NH2 витамин К7 NH2 NH2  викасол Витамином К богаты зеленые части растений, овощи (белокочанная и цветная капуста, шпинат, тыква, томаты, свекла, картофель, морковь), злаковые (овес, пшеница), бобовые (горох). Этот витамин термостабилен. Кроме того, витамины вырабатываются в достаточных количествах нормальной микрофлорой кишечника. Поэтому недостаток витаминов К наблюдается только у новорожденных с пониженным содержанием в кишечнике ацидофильной палочки. У взрослых людей гиповитаминоз К может быть вызван либо подавлением кишечной микрофлоры во время лечения сульфаниламидными препаратами и антибиотиками, либо плохим всасыванием витамина при недостатке его эмульгатора желчи. Суточная потребность взрослого человека в витамине К составляет 0,20,3 мг. Показателем обеспеченности организма витамином К служат тесты, отражающие состояние свертываемости крови. Протромбиновый индекс должен в норме составлять 80100%. При некоторых заболеваниях (инфаркт миокарда, тромбофлебит), связанных с повышением свертываемости крови и образованием тромбов в сосудах, возникает необходимость в применении антивитаминов К (антикоагулянтов). К ним относятся фенилин, дикумарол (дикумарин), его аналоги и производные (салициловая кислота).  дикумарол  фенилин  салициловая кислота
Оборудование и реактивы Пипетки градуированные на 1, 2 мл; штатив лабораторный с пробирками; викасол (0,1%-ный спиртовой) или метинон (0,2%-ный спиртовой); синтетические аналоги витамина К; цистеин (0,025%-ный); гидроксид натрия (10%-ный); диэтилмалоновый эфир (1%-ный); гидроксид калия (1%-ный); анилин (свежеперегнанный).
В пробирку наливают 1 мл 0,1%-ного спиртового раствора викасола (или 0,2%-ного спиртового раствора метинона). Затем прибавляют две капли 0,025%-ного раствора цистеина и две капли 10%-ного раствора гидроксида натрия. Появляется желтое окрашивание. 11.1.2 Реакция с диэтилмалоновым эфиром К 2 мл 0,1%-ного спиртового раствора диэтилмалонового эфира и 0,1 мл 1%-ного раствора гидроксида калия. Возникает фиолетово-красное окрашивание. ^ К 2 мл 0,2%-ного раствора метинона в этиловом спирте добавляют 1 мл анилина, перемешивают. Смесь окрашивается в красный цвет:  метинон анилин (2-метил-1,4-нафтохинон)  2-метил-3-фенил- 2-метил-1,4-диокси- амино-1,4-нафтохинон нафталин (красного цвета)
Метод основан на способности витамина К в щелочной среде давать с диэтилмалоновым эфиром окрашенное соединение, интенсивность окраски которого определяют колориметрически. ^ Фотоэлектроколориметр; баня водяная; воронка Бюхнера с наружным диаметром 110 мм; колба для фильтрования под вакуумом (Бунзена); ступка фарфоровая с наружным диаметром 110 мм; морковь; кварцевый песок; диэтиловый эфир; хлороформ (освобожденный от влаги и свежеперегнанный); карбонат натрия безводный; сульфат натрия безводный; диэтилмалоновый эфир (1%-ный спиртовой); гидроксид калия (1%-ный); стандартный раствор витамина К (0,04 мкг в 1 мл). ^ 1015 г измельченной на терке моркови тщательно растирают в ступке с кварцевым песком и небольшим количеством карбоната натрия. Гомогенат переносят на воронку Бюхнера, дважды ополаскивая ступку небольшими порциями эфира. Фильтруют и трижды промывают осадок на фильтре тем же экстрагентом. Эфирные вытяжки соединяют и сушат безводным сульфатом натрия, после чего эфир выпаривают на теплой водяной бане, а остаток растворяют в 5 мл хлороформа. К полученному раствору прибавляют 1 мл 1%-ного спиртового раствора диэтилмалонового эфира и 0,2 мл 1%-ного спиртового раствора гидроксида калия. Общий объем доводят водой в мерной колбе до 10 мл. Одновременно ставят определение со стандартным раствором витамина К. Окрашенный раствор колориметрируют. Рассчитывают содержание витамина К:  , (11)где ^ масса вещества, г; Е2 экстинкция стандартного раствора; Е1 экстинкция испытуемого раствора.
К веществам Р-витаминного действия относится ряд соединений фенольной природы, уменьшающих проницаемость и повышающих прочность стенок кровеносных сосудов. Они угнетают активность холинэстеразы, сукцинатдегидрогеназы и некоторых других ферментов, а также задерживают окисление адреналина. В основе строения веществ Р-витаминного действия лежит ядро флавона. К ним относятся: рутин, эриодиктин, геспередин, кверцетин и другие. Одним из наиболее активных соединений является рутин гликозид флавонола кверцетина и дисахарида рутинозы.  кверцетин (3,5,7,3,4, - пентаоксифлавон)  катехин  кутин К группе веществ Р-витаминного действия относятся также антоцианидины, например, цианидин агликон цианина, пигмента, широко распространенного в цветах и плодах некоторых высших растений. Витамин группы Р, выделенный из лимонов в кристаллическом виде, назван цитрином. Физиологически активными являются также катехины, содержащиеся в листьях чая.
Оборудование и реактивы Пипетки с одной меткой на 1 и 2 мл (5 шт.); штатив лабораторный с пробирками; рутин (порошок и насыщенный водный раствор); кверцетин (насыщенный раствор в этиловом спирте); хлорид железа (III) (1%-ный ); серная кислота (концентрированная, =1,84 г/см3); магний металлический (лента или порошок); соляная кислота (=1,19 г/см3); растворы для приготовления Фелинговой жидкости; соляная кислота (0,5%-ная); гидроксид натрия (10%-ный). ^ Для приготовления Фелинговой жидкости готовят два раствора: А 34,6 г CuSO4* 5H2O в 500 мл раствора; В 173 г сегнетовой соли и 70 г гидроксида натрия в 500 мл раствора. Растворы хранят раздельно. Перед употреблением смешивают равные объемы первого и второго раствора. ^ Хлорид железа (III) образует с рутином комплексное соединение, окрашенное в изумрудно-зеленый цвет. Координационные связи возникают между ионом железа и атомами кислорода фенольных гидроксильных групп молекулы рутина. К 12 мл насыщенного водного раствора хлорида железа (III) добавили пробу, содержащую рутин, возникает зеленое окрашивание. ^ Концентрированная серная кислота образует с флавонами и флавонолами оксониевые (флавилиевые) соли, растворы которых характеризуются ярко-желтой окраской. К 12 мл насыщенного водного раствора рутина осторожно по стенке пробирки добавляют 1 мл концентрированной серной кислоты. На границе двух жидкостей возникает окрашенное в желтый цвет кольцо. ^ Кверцетин легко восстанавливается, образуя цианидин с красно-розовой или фиолетого-красной окраской (в зависимости от концентрации).  кверцетин цианидинК 1 мл насыщенного спиртового раствора кверцетина добавляют кусочек магниевой ленты или немного (на кончике скальпеля) порошка металлического магния и три-четыре капли концентрированной соляной кислоты. Жидкость вначале окрашивается в розовый цвет, но со временем интенсивность окраски усиливается до малиновой или фиолетово-красной. ^ При кислотном гидролизе рутина вначале отщепляется молекула рутинозы, которая далее распадается на глюкозу и рамнозу, обладающие восстанавливающими свойствами. К 0,5 г рутина добавляют 5 мл 0,5%-ного раствора соляной кислоты. Смесь доводят до кипения, кипятят в течение 1 минуты, затем фильтруют. К 5 мл полученного фильтрата приливают 3 мл 10%-ного раствора гидроксида Na и 3 мл Фелинговой жидкости (готовится непосредственно перед употреблением) и снова нагревают до кипения. Выпадает красный осадок оксида меди (I). ^ Витамин РР, называемый также витамином В5 или ниацином, химически представляет собой два вещества, обладающие одинаковой витаминной активностью; никотиновую (3-пиридинкарбоновую) кислоту (ниацин) и никотинамид (ниацинамид).  никотиновая кислота  никотинамид Никотиновая кислота и ее амид стали известны еще в прошлом веке в связи с исследованиями никотина и других пиридиновых алкалоидов. Из природных источников (дрожжей и рисовых отрубей) она была выделена в 1911-1912 гг. К. Функом. Позднее установили связь тяжелого заболевания пеллагры с недостатком в диете каких-то витаминов. Пеллагра поражает желудочно-кишечный тракт, кожу и центральную нервную систему. Идентификация витамина РР с никотиновой кислотой осуществлена в 1937 г. К. Элвехьемом. Никотинамид был выделен в 1934-1935 гг. из мышц Р. Куном и из коферментных форм витамина О.Г. Варбургом и Г. фон Эйлером. В 1935-1936 гг. эти ученые установили биохимическую роль витамина В5. Он является коферментом никотинамидадениндинуклеотидом (NAD+) и никотинамиддинуклеотидфосфатом (NADP+) при ферментах группы оксидоредуктаз (дегидрогеназ). Ферменты этой группы катализируют 150 различных биохимических реакций дегидрирования, окисления, N-алкилирования, изомеризации, восстановления нитрата до нитрита и далее до аммиака, фотосинтеза, дыхания, энергетического обмена, анаэробного расщепления углеводов и т.д. В ходе окислительно-восстановительных реакций NAD+ и NADP+ реагируют в составе ферментов с различными органическими субстратами стереоспецифически, отнимая от них гидрид-ион и образуя NADH и NADPH, обратная реакция протекает также стереоспецифически. Здоровые люди не очень чувствительны к недостатку или даже отсутствию никотиновой кислоты или никотинамида в продуктах питания. Это связано с тем, что провитамином ниацина (В5) является триптофан. Недостаток именно этой незаменимой аминокислоты в кукурузе и сорго являлся причиной заболевания пеллагрой там, где они становились основными продуктами питания. В организме человека триптофан превращается прямо в NAD+ через кинуренин, 3-гидроксикинуренин и 1-амино-4-формилбутадиен-1,2-дикарбоновую кислоту. Эффективность этого процесса невысока: 1 мг ниацина получается из 60 мг триптофана. Такое их количество принято считать ниациновым эквивалентом. Суточная потребность взрослого человека в ниацине составляет 6,6 ниацинового эквивалента/1000 ккал. Показателем обеспеченности организма ниацином служит содержание в моче одного из основных продуктов его метаболизма – N-метил-никотинамида, в норме 712 мг/сутки. Наиболее высоко содержание ниациновых эквивалентов в мясе, молоке, яйцах, наиболее низко в кукурузной крупе. В кукурузе ниацин содержится в связанной малоусвояемой форме в виде ниацитина сложного эфира ниацина, а в белке кукурузы мало триптофана. Недостаток NAD+ и NADP+ может также восполняться за счет ферментативного синтеза ее из никотиновой кислоты, но не из никотинамида. Поэтому истинным витамином считают никотиновую кислоту. ^ Оборудование и реактивы Баня водяная; пипетки с одной меткой на 1,2 и 5 мл; колба коническая на 25 мл; чашка выпаривательная вместимостью 25 мл; никотиновая кислота 0,1%-ная или ее амид; 2,4-динитрохлорбензол (1%-ный спиртовой); роданбромидный раствор; спиртовой раствор анилина (свежеперегнанный анилин растворяют в 96%-ном этиловом спирте в соотношении 1:6 и хранят в темной склянке); этиловый спирт 96%-ный; гидроксид натрия 10%-ный спиртовой; спиртовая фосфатная буферная смесь со значением рН=5,29 (1:1). ^ Для приготовления роданбромидного раствора в колбу на 25 мл вносят 10 мл 0,1N раствора роданида калия или роданида аммония, 1 г кристаллического бромида калия и 1 мл 17%-ного раствора соляной кислоты. Осторожно под тягой по каплям прибавляют 2 мл брома. Раствор используют немедленно после приготовления. Для приготовления фосфатной буферной смеси соединяют два раствора: 1/15М гидрофосфата натрия (11,876 г Na2HPO4*2H2O) и 1/15М дигидрофосфата калия, содержащего в 1 л раствора 9,078 г КН2РО4. Смешиванием различных объемов того и другого раствора получают растворы с различным значением рН. Для получения раствора с величиной рН=5,29 смешивают 0,25 мл Na2 HPO4 и 9,75 мл КН2РО4. ^ В выпаривательную чашку отмеряют 12 мл 0,1%-ного раствора никотиновой кислоты (или ее амида) и раствор упаривают досуха на водяной бане. К сухому остатку добавляют 12 мл спиртового раствора 2,4-динитрохлорбензола и тщательно перемешивают стеклянной палочкой. Полученный раствор вновь упаривают на водяной бане досуха. Вследствие токсичности паров 2,4-динитрохлорбензола упаривание проводить под тягой! После этого нагревание продолжают еще в течение 1015 минут. Выпаривательную чашку охлаждают до комнатной температуры и к осадку добавляют 510 мл спиртового раствора гидроксида натрия. Появляется красновато-фиолетовая окраска. При стоянии окраска бледнеет и постепенно исчезает. ^ В коническую колбу на 25 мл вносят 5 мл раствора никотиновой кислоты, нагревают до температуры 70 С, после чего прибавляют 1 мл роданбромидного раствора и 2 мл спиртового раствора анилина. Содержимое колбы перемешивают и добавляют 10 мл спиртового раствора буфера. Через некоторое время раствор окрашивается в желтый цвет. ^ Оборудование и реактивы Фотоэлектроколориметр; центрифуга; колба круглодонная на 250 мл с обратным воздушным холодильником; баня водяная; воронка Бюхнера с наружным диаметром 130 мм; колбы Бунзена (2 шт.); колбы мерные на 10, 25 и 100 мл; пипетки с одной меткой на 1 и 2 мл; асканит (отбеливающая глина); соляная кислота (1 N раствор); гидроксид натрия (1 N и 40%-ный ); безводный фосфат калия; ацетат свинца; этиловый спирт 96%-ный; спиртовой фосфатный буфер с величиной рН=5,29 (1:1); роданбромидный реактив; спиртовой раствор анилина; стандартный водно-спиртовой (1:1) раствор никотиновой кислоты (10 мг в 1 мл). ^ 50 г тонко размолотого сухого растительного материала заливают в круглодонной колбе на 250 мл с обратным воздушным холодильником 100 мл 1 N раствора соляной кислоты и нагревают на кипящей водяной бане в течение 1 часа. После охлаждения прибавляют 40%-ный раствор щелочи до величины рН=6,5. К полученной смеси приливают 100 мл этилового спирта и выпавший осадок отделяют фильтрованием. В фильтрат вносят 2 г асканита и после интенсивного встряхивания в течение 5 минут отфильтровывают его на воронке Бюхнера. Осадок на фильтре заливают 20 мл 1 N раствора гидроксида натрия для элюации никотиновой кислоты. Элюат переносят в центрифужную пробирку, в которую предварительно насыпают 1 г ацетата свинца, и в присутствии фенолфталеина нейтрализуют его прибавлением кристалликов фосфата калия, соляной кислотой (1:1) доводят значение рН раствора до 6,0. Смесь центрифугируют при 3000 об/мин. Прозрачный супернатант переносят в мерную колбу на 25 мл и доводят объем водой до метки. Вытяжку в количестве 5 мл, приготовленную описанным выше способом, нагревают до температуры 70 С, прибавляют 1 мл свежеприготовленного роданбромидного реактива и 2 мл спиртового раствора анилина, перемешивают и количественно переносят в мерную колбу на 10 мл, доводя объем жидкости до метки спиртовым раствором буфера. Оставляют при комнатной температуре на 1,5 часа, после чего фильтруют и желтый фильтрат колориметрируют при 440 нм. Содержание витамина РР рассчитывают по калибровочной кривой, которую строят по результатам колориметрирования серии стандартных растворов, приготовленных из исходного стандартного раствора с содержанием 10 мг никотиновой кислоты в 1 мл. К 5 мл соответствующего стандартного раствора добавляют все указанные выше для испытуемого раствора реактивы в той же последовательности и по истечении 1,5 часов измеряют интенсивность окраски на фотоэлектроколориметре. ЛИТЕРАТУРА 1. Справочник по диетологии / под ред. А.А. Покровского, М.А. Самсонова. М.: Медицина, 1981. 704 с. 2. Филиппович, Ю.Б. Практикум по общей биохимии / Ю.Б. Филиппович, Т.А. Бюрова, Г.А. Севастьянова. М.: Изд-во МГУ, 1982. 78 с. 3. Овчинников, Ю.А. Биоорганическая химия / Ю.А. Овчинников. М.: Просвещение, 1987. 815 с. 4. Практикум по биохимии / под. ред. С.Е. Северина, Г.А. Соловьевой. M.: Изд-во МГУ, 1989. 509 с. ^ ЛАМБЕРОВА МАРИНА ЭДУАРДОВНА ВИТАМИНЫ Практикум по курсам “Органическая химия и химия биологически активных веществ”, “Биохимия”, “Микробиология”, “Химия пищи”, “Пищевая химия”, “Основы химии и технологии пищевых производств”, “Введение в технологию продуктов питания”, “Общие и специальные технологии пищевых производств” и спецкурсам для студентов всех форм обучения специальностей 070100, 270500, 171200, 170600, 061600. Редактор Идт Л.И. Технический редактор Трутнева Л.И. Подписано в печать 27.04.2005. Формат 6084 1/16 Усл. п. л. 3,49. Уч.-изд. л. 3,75. Печать ризография, множительно-копировальный аппарат «RISO TR-1510» Тираж 100 экз. Заказ 2005-31 Издательство Алтайского государственного технического университета 656038, г. Барнаул, пр. Ленина, 46 Оригинал-макет подготовлен ВЦ БТИ АлтГТУ Отпечатано в ВЦ БТИ АлтГТУ 659305, г. Бийск, ул. Трофимова, 29 |
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям