Особенности распределения генов hla класса II у больных поллинозами 14. 01. 04 Внутренние болезни
|
|
Скачать 368.9 Kb.
|
На правах рукописиАНДРЕЕВА ЕЛЕНА ЕВГЕНЬЕВНА ОСОБЕННОСТИ РАСПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕНОВ HLA КЛАССА II У БОЛЬНЫХ ПОЛЛИНОЗАМИ 14.01.04 - Внутренние болезни АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Астрахань - 2011 Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Астраханская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации Научный руководитель: кандидат медицинских наук, доцент ^ Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Каменев Виктор Федорович доктор медицинских наук, профессор ^ Ведущая организация: ГОУ ВПО «Ставропольская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России Защита состоится « ___ » _________ 2011 года в ___часов на заседании диссертационного совета Д 208.005.01 при ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России по адресу: 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России Автореферат разослан « ____ » _________ 2011 года Ученый секретарь совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 208.005.01, кандидат медицинских наук, доцент Л.В. Заклякова ^ Актуальность проблемы На рубеже XXI века рост распространенности аллергии в мире стал глобальной медико-социальной проблемой. Сегодня аллергические заболевания занимают ведущее место среди других патологических состояний и оказывают существенное влияние на здоровье и качество жизни населения развивающихся и развитых стран [J. Daniels, 2002; Г.Б. Федосеев с соавт., 2003; M. Masoli et al., 2004; W.J. Fokkens and C.M. Van Drunen, 2006; P.W. Hellings et al., 2006; А.Г. Чучалин с соавт., 2007; А.А. Баранов с соавт., 2008; М.Ю. Гущин с соавт., 2010]. Мировая статистика свидетельствует, что от 10 до 25% городского и сельского населения, проживающего в странах с высокоразвитой экономикой, страдает аллергическими заболеваниями [A.B. Kay, 2001; D.L. Hamilos, 2010]. Согласно данным Европейской белой книги аллергии (European allergy white paper), сегодня каждый третий ребенок в странах Европы страдает аллергией, а каждый десятый - бронхиальной астмой (БА) [С.Ф. Гладков и Н.К. Перевощикова, 2010]. В различных регионах Российской Федерации распространенность аллергических заболеваний колеблется от 15 до 35% [Л.А. Горячкина, 2004; Н.И. Ильина, 2004; Д.А. Безрукова, 2007; М.Ф. Балдуева, 2007; И.В. Маругин с соавт., 2009]. Высокий уровень заболеваемости аллергической патологией во многих странах мира послужил поводом для включения руководством ВОЗ в 1999 году аллергии и БА в число приоритетных медицинских проблем человечества на ближайшие 10 лет. В настоящее время наследственный фактор рассматривается как основополагающий в формировании поллинозов, а поиск генов, маркирующих предрасположенность к развитию БА, Международный консенсус по бронхиальной астме определяет как одно из приоритетных направлений мировых научных исследований. Открытие одной из самых полиморфных генетических систем человеческого организма – системы HLA и последующие плодотворные исследования в этой области показали тесную взаимосвязь продуктов HLA с заболеваниями и возможность их использования в качестве генетических маркеров предрасположенности или резистентности к той или иной патологии [L.P. Alekseev, 1999; D.A. Brewerton, 2003; А.А. Баранов с соавт., 2003; Б.Н. Левитан и Е.А. Попов, 2004]. Однако в клинической аллергологии работ, направленных на поиск иммуногенетических маркеров предрасположенности и резистентности к развитию того или иного аллергического заболевания, крайне мало, данные их весьма противоречивы. Актуальным представляется не только выяснение механизма ассоциаций между поллинозами и генами HLA, но и разработка прогностического сценария для данной группы больных. До сих пор остается неизвестным, почему у одних пациентов проявления поллиноза ограничиваются клиникой аллергического ринита (АР), а у других больных развивается БА. ^ Усовершенствовать методы диагностики и прогнозирования поллинозов на основе изучения особенностей распределения генов HLA класса II у больных аллергическим ринитом и аллергической формой бронхиальной астмы. ^ 1. Исследовать аллельный полиморфизм генов HLA класса II локусов DR и DQ у больных поллинозами в популяции русских астраханской геногеографической зоны 2. Изучить возможную половую и возрастную рестрикцию аллельных вариантов генов DRB1 и DQB1 у больных поллинозами 3. Установить маркеры повышенного риска развития и предикторы аллергического ринита и аллергической формы бронхиальной астмы из числа аллельных вариантов генов HLA класса II локусов DR и DQ и их гаплотипов 4. Провести сравнительный анализ маркерных специфичностей HLA аллергического ринита и аллергической формы бронхиальной астмы из числа аллельных вариантов генов DRB1 и DQB1 5. Оценить возможности метода HLA-типирования у пациентов с аллергическим ринитом и аллергической формой бронхиальной астмы для разработки индивидуальных прогностических сценариев характера течения поллиноза ^ 1. При поллинозах имеются ассоциативные связи с генами HLA класса II, что является прямым доказательством непосредственного участия иммунной системы в формировании предрасположенности и резистентности к аллергическому риниту и аллергической форме бронхиальной астмы 2. Предрасположенность и резистентность к развитию поллинозов генетически детерминированы и маркируются определенным набором аллелей HLA класса II, а также их гаплотипическими сочетаниями 3. Маркерные специфичности поллинозов из числа генов HLA класса II локусов DR и DQ обладают половой и возрастной рестрикцией 4. Особенности HLA-фенотипа больных могут быть использованы в качестве дополнительного критерия для разработки долгосрочного индивидуального прогноза возможных сценариев клинического течения поллинозов 5. Метод молекулярного HLA-типирования может быть использован для оценки степени риска развития аллергической формы бронхиальной астмы у пациентов, страдающих аллергическим ринитом ^ Получены новые данные о характере ассоциативных связей генов HLA с риском развития поллинозов на примере русской популяции астраханской геногеографической зоны. Подтвержден факт существования прямого контроля со стороны иммунной системы за развитием и характером клинического течения поллинозов. Впервые установлено наличие половой и возрастной рестрикции иммуногенетических маркеров поллинозов из числа аллелей генов DRB1 и DQB1. Впервые в отечественной практике с помощью метода полимеразой цепной реакции установлены неизвестные ранее ассоциации аллельных вариантов генов HLA II класса DRB1 и DQB1 с предрасположенностью и резистентностью к развитию поллинозов. Впервые установлены маркеры повышенного риска развития и маркеры резистентности к развитию аллергического ринита и аллергической формы бронхиальной астмы из числа специфичностей HLA класса II локусов DR, DQ и их гаплотипов в популяции русских астраханской геногеографической зоны. Разработаны новые дополнительные иммуногенетические критерии для прогнозирования и оценки степени риска развития аллергической формы БА у пациентов, страдающих АР. ^ Результаты исследования расширяют возможности диагностики, дифференциальной диагностики и долгосрочного прогнозирования поллинозов в клинике внутренних болезней и аллергологии, в частности. Полученные данные могут быть использованы в профилактической медицине для формирования групп повышенного риска развития поллинозов среди здорового населения, а также групп высокого риска развития аллергической формы БА у больных АР. Метод молекулярного HLA-типирования целесообразно использовать для разработки сценариев долговременного индивидуального прогноза возможных вариантов течения поллинозов, в частности, для оценки степени риска развития БА у пациентов, страдающих АР. ^ Полученные при выполнении диссертационного исследования результаты внедрены в практику пульмонологического отделения и консультативной поликлиники ГУЗ «Александро-Мариинская областная клиническая больница» г. Астрахани. Основные положения работы используются в научно-педагогической деятельности кафедры факультетской терапии и профессиональных болезней с курсом последипломного образования и кафедры поликлинического дела и скорой медицинской помощи Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России. Выводы диссертации включены в лекционный материал по темам «Аллергические заболевания» и «Бронхиальная астма», в план семинарских занятий со студентами, интернами, клиническими ординаторами и курсантами на указанных кафедрах АГМА. Материалы работы включены в методические рекомендации и практические руководства для врачей терапевтического профиля. ^ Основные положения диссертации были представлены и обсуждены на XIV Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (17-20 октября 2009 г., Тель-Авив, Израиль), на Национальной конференции «Аллергология и клиническая иммунология - практическому здравоохранению» (25-26 февраля 2010 г., Москва), на итоговых научно-практических конференциях сотрудников Астраханской государственной медицинской академии (2008, 2009), научных конференциях молодых ученых Астраханской государственной медицинской академии (2007, 2009), на заседаниях Астраханского областного научного общества терапевтов (2008, 2009). Работа апробирована на межкафедральной конференции с участием кафедр АГМА и врачей АМОКБ г. Астрахани. По материалам диссертационного исследования опубликовано 9 печатных работ, в том числе 7 публикаций в изданиях, включенных в перечень ВАК РФ. ^ Диссертация изложена на 161 странице машинописного текста, состоит из введения, литературного обзора, 4 глав, содержащих результаты собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и библиографического указателя, содержащего 305 работ. Список литературы включает в себя 134 отечественных и 171 зарубежный первоисточник. Работа иллюстрирована 24 таблицами, 6 рисунками и 8 клиническими примерами. Диссертация выполнена в соответствии с планом научно-исследовательской работы Астраханской государственной медицинской академии. ^ Материалы и методы исследования Для решения вопроса о возможном влиянии генетических факторов, связанных с системой HLA, на восприимчивость или резистентность к развитию поллинозов за период с 2004 по 2009 г.г. нами проведено исследование иммуногенетического статуса у 61 человека в популяции русских астраханской геногеографической зоны, находившихся на обследовании и лечении в пульмонологическом отделении ГУЗ «Александро-Мариинская областная клиническая больница» с диагнозом АР или аллергической формы БА в сочетании с АР. При постановке заключительного клинического диагноза использованы общепринятые в настоящее время классификации аллергического ринита (ARIA, 2001) и бронхиальной астмы (GINA, 2006). В общую анализируемую выборку «поллинозы» вошли 23 мужчины (37,7%) и 38 женщин (62,3%). Соотношение лиц мужского и женского пола в исследуемой группе пациентов составило 1: 1,65. Возраст больных на момент включения в исследование колебался от 18 лет до 71 года: у мужчин - от 19 лет до 71 года, у женщин - от 18 до 65 лет. Средний возраст пациентов на момент включения в группу наблюдения составил 34,52 ± 0,72 года: у мужчин - 35,18 ± 1,43 года, у женщин - 33,43 ± 1,38 года и практически не имел гендерных отличий. Возраст пациентов на момент появления первых клинических признаков заболевания колебался от 1 года до 64 лет: у мужчин - от 5 лет до 64 лет, у женщин - от 1 года до 33 лет. Средний возраст пациентов в дебюте заболевания составил 17,36 ± 1,24 года: у мужчин - 18,04 ± 1,35 года, у женщин - 16,95 ± 1,19 года. Таким образом, сроки начала заболевания в выборке практически не зависели от пола пациентов. Все больные были разделены на две анализируемые выборки в зависимости от клинического варианта поллинозов. В 1-ую группу был включен 31 больной с диагнозом АР. Во 2-ую группу вошли 30 пациентов, у которых по результатам клинико-лабораторного обследования была диагностирована аллергическая форма БА в сочетании с АР. Дебют заболевания в возрасте до 18 лет зафиксирован у 34 больных: у 22 пациентов с диагнозом АР и у 12 - с аллергической формой БА. Дебют заболевания после 18 лет установлен у 27 больных: у 11 пациентов с диагнозом АР и у 16 - с аллергической формой БА. Для получения принципиально новых научных данных о существующих ассоциативных связях между продуктами HLA и поллинозами нами проведен поиск маркеров предрасположенности и резистентности к АР и аллергической форме БА из числа специфичностей HLA класса II локусов DR и DQ в изучаемой популяции. У 61 больного с поллинозами методом PCR mSSP (полимеразная цепная реакция с сиквенс-специфическими праймерами, модифицированная) проведено молекулярное типирование аллельных вариантов генов DRB1 и DQB1. Исследование проводилось на базе иммуногенетической лаборатории ЗАО «Межрегиональный Центр иммуногенетических и гистотипирующих реагентов «Гисанс» (г. Санкт-Петербург) с помощью коммерческих наборов «HLA - Biotest» (Германия). Для статистической обработки полученных результатов в качестве контрольной группы были использованы два популяционных контроля. Контрольную группу-1 составили 300 здоровых доноров крови - коренных жителей г. Москвы русской национальности. Контроль предоставлен отделом иммуногенетики ГНЦ «Институт иммунологии ФМБА России» (руководитель отдела - д.м.н., профессор Л.П. Алексеев). Контроль-2 составили 94 здоровых донора - коренных жителя астраханской геногеографической зоны русской национальности. Данные популяционного контроля опубликованы в 2005 году в журнале «Иммунология» совместной группой научных сотрудников ФГУ «Научно-исследовательский институт по изучению лепры Росздрава» (г. Астрахань) и ГНЦ «Институт иммунологии ФМБА России» (г. Москва). Анализ результатов HLA-типирования проводился по общепринятой методике и включал изучение частоты регистрации отдельных аллелей и их сочетаний (гаплотипов), определение показателей относительного риска – RR, этиологической фракции – EF (для RR>1), превентивной фракции – PF (для RR<1). Достоверность полученных результатов оценивалась с помощью критерия χ2 с поправкой Йейтса на непрерывность выборки и с использованием корригированного значения (рс) степени достоверности для малых выборок. Математическая обработка данных проводилась с использованием программы «Microsoft Excel» для «Windows XP» а также компьютерной программы для популяционной генетики «ARLEQUIN» (Версия 3.1). ^ Частота регистрации аллельных вариантов генов DRB1 и DQB1 у больных поллинозами и в контролях представлена в таблице 1. Для некоторых аллелей установлены значительные изменения их частоты, как в сторону увеличения, так и в сторону снижения. Так, у больных поллинозами зафиксировано значительное повышение уровня группы аллелей DRB1*15(02) до 41,0%, DRB1*17(03) до 18,0% и DRB1*08 до 18,0%, аллелей DQB1*0401/02 до 13,1% и DQB1*05 до 13,1%. Кроме того, в группе установлено значительное снижение частоты регистрации группы аллелей DRB1*13(06) до 19,7%, DRB1*07 до 21,3% и аллеля DQB1*0302 до 4,9% (таблица 1). Таблица 1 ^ у больных поллинозами и в контрольных группах
Последующий иммуногенетический анализ и статистическая обработка полученных результатов проводились отдельно в каждом локусе HLA. На первом этапе нами проанализирован характер изменений частотных характеристик групп аллелей гена DRB1 и их статистическая значимость в общей группе больных поллинозами (таблица 2). Таблица 2 ^ ассоциациях поллинозов и групп аллелей DRB1
Так, у больных поллинозами зарегистрировано достоверное повышение уровня группы аллелей HLA-DRB1*08 до 18,0% против 3,3% в контроле-1 (χ2=17,399; pс<0,025) и 4,3% в контроле-2 (χ2=6,535; p<0,05). Высокие цифры относительного риска (RR1=6,30 и RR2=4,58) и значимые показатели этиологической фракции (EF1=0,15 и EF2=0,14) указывают на первичный характер установленных ассоциаций. Кроме того, установлено достоверное увеличение частоты гена HLA-DRB1*15 до 41,0% против 25,0% в контроле-1 (χ2=5,693; p< 0,05) с умеренным показателем относительного риска (RR1=2,09), но с высоким показателем атрибутивного риска (EF1=0,21). Но, по сравнению с контролем-2, увеличение уровня типирования HLA-DRB1*15 было статистически недостоверным, хотя и приближалось к таковому (41,0% >28,7%; χ2=2,975; p>0,05), и сопровождалось низкими показателями силы и направленности этих изменений (RR2=1,72; EF2=0,11). Достоверно реже, по сравнению с контролем-2, у больных поллинозами типировалась группа аллелей HLA-DRB1*13(06) - в 19,7% случаев против 38,3% контроле-2 (χ2=6,906; p<0,05). Выявленные изменения характеризовались достаточно значимыми показателями относительного риска (RR2=0,41) и превентивной фракции (PF2=0,12). При сравнении с контролем-1 указанные изменения для специфичности DRB1*13(06) были статистически недостоверными (19,7%<25,7%; RR1=0,73; PF1=0,07; χ2=1,330; p>0,05) из-за более низкого ее уровня в московском контроле по сравнению с астраханским (25,7%<38,3%). На втором этапе изучался характер изменений частоты аллелей гена DQB1 и их статистическая значимость (таблица 3). Таблица 3 ^ ассоциациях поллинозов и аллелей DQB1
Анализ аллельного полморфизма гена DQB1 в группе больных поллинозами показал достоверное повышение частоты аллеля HLA-DQB1*0401/02 до 13,1% против 3,3% в контроле-1 (χ2=8,277; pс<0,05). Более чем четырехкратное повышение показателя относительного риска (RR1=4,40) и достаточно значимый уровень этиологической фракции (EF1=0,16) указывают на первичный характер установленных ассоциаций между наличием в HLA-фенотипе индивидуума аллеля DQB1*0401/02 и фактом наличия у него поллиноза. По сравнению с контрольной группой-2 повышение уровня DQB1*0401/02 также было статистически достоверным (13,1%>4,3%; χ2=3,919; p<0,05) и сопровождалось достаточно значимыми показателями силы и направленности установленных ассоциаций (RR2=3,20; EF2=0,14). Кроме того, в группе больных поллинозами нами зарегистрировано статистически значимое снижение уровня аллеля HLA-DQB1*0301 до 24,6% против 39,3% в контроле-1 (χ2=5,390; p<0,05) и 52,1% в контроле-2 (χ2=12,736; p<0,0025; pс<0,05). Достаточно низкие цифры относительного риска (RR1=0,51 и, особенно, RR2=0,31) и высокие показатели превентивной фракции (PF1=0,19 и, особенно, PF2=0,36) указывают на первичный характер установленных ассоциативных связей. Аналогичные изменения зафиксированы и для аллельного варианта HLA-DQB1*0302, который типировался достоверно реже как по сравнению с контролем-1 (4,9%<15,7%; χ2=5,850; p<0,05), так и по сравнению с контролем-2 (4,9%<12,8%; χ2=3,982; p<0,05). Значимые цифры отношения рисков (RR1=0,32 и RR2=0,40) сопровождались низкими показателями превентивной фракции (PF1=0,09 и PF2=0,08) за счет умеренной частоты регистрации данного гена среди здоровых лиц в московской и астраханской геногеографических зонах. Сравнительный анализ частоты гаплотипов между группой больных поллинозами и контролем-1 показал следующие различия. Так, у больных поллинозами зарегистрировано высокодостоверное (pс<0,05) повышение частоты следующих двулокусных гаплотипов HLA: - DRB1*08/DQB1*0401/02 (8,2%>1,67%; RR=8,27; EF=0,07; χ2=9,023); - DRB1*08/DQB1*05 (11,5%>2,33%; RR=7,39; EF=0,10; χ2=12,278); - DRB1*17/DQB1*0401/02 (6,6%>1,33%; RR=9,34; EF=0,06; χ2=7,460). Кроме того, нами зафиксировано достоверное (pс<0,05) снижение частоты регистрации следующих двулокусных гаплотипов HLA: - DRB1*07/DQB1*0301 (6,6%<26,0%; RR=0,22; PF=0,18; χ2=12,05); - DRB1*13/DQB1*0301 (4,9%<21,0%; RR=0,23; PF=0,15; χ2=9,885); - DRB1*13/DQB1*06 (9,8%<29,7%; RR=0,29; PF=0,20; χ2=11,329). Подводя итог поиску ассоциативных связей между определенным набором генов HLA II класса DRB1, DQB1 и поллинозами, можно констатировать следующие закономерности. Иммуногенетическими маркерами повышенного риска развития поллинозов в популяции русских астраханской геногеографической зоны являются группа аллелей HLA-DRB1*08 и аллельный вариант DQB1*0401/02, а также двулокусные гаплотипы DRB1*08/DQB1*0401/02, DRB1*08/DQB1*05 и DRB1*17/DQB1*0401/02. Резистентность к развитию поллинозов обусловлена наличием в фенотипе индивидуума группы аллелей HLA-DRB1*13(06), аллелей DQB1*0301, DQB1*0302 и гаплотипов HLA-DRB1*07/DQB1*0301, DRB1*13/DQB1*0301, DRB1*13/DQB1*06. С целью изучения возможной половой рестрикции маркеров поллинозов распределение генов HLA локусов DR и DQ изучалось в двух группах. Первую группу составили 23 мужчины, больных поллинозами, вторую - 38 женщин с диагнозом поллиноза (таблица 4). Таблица 4 ^ у больных поллинозами мужчин и женщин
Аллельные варианты генов DRB1 и DQB1, частота которых значительно отличалась от контрольных показателей, были включены в дальнейший статистический анализ. Было установлено, что в качестве маркеров повышенного риска развития поллинозов у мужчин можно постулировать группы аллелей HLA-DRB1*08 и DQB1*0401/02, а также двулокусные гаплотипы HLA-DRB1*08/DQB1*0401/02 и DRB1*08/DQB1*05. Резистентность к развитию поллинозов у мужчин маркируется наличием в фенотипе аллелей HLA-DRB1*13(06), специфичностей DQB1*0201, DQB1*0301, а также гаплотипов HLA-DRB1*13/DQB1*0301 и DRB1*13/DQB1*06. Маркерами повышенного риска развития поллинозов у женщин являются группа аллелей HLA-DRB1*08, а также гаплотипы DRB1*08/DQB1*0201 и DRB1*08/DQB1*05. Резистентность к развитию поллинозов у женщин маркируется группой аллелей HLA-DRB1*01, аллелями DQB1*0301, DQB1*0302, DQB1*0303 и гаплотипами DRB1*07/DQB1*0301, DRB1*11(05)/ DQB1*0302. Сравнительный анализ маркеров поллинозов из числа генов DRB1 у мужчин и женщин выявил достоверные различия в частоте регистрации групп аллелей DRB1*01 и DRB1*13(06) (рисунок 1).  ^ Таким образом, нами установлено, что маркеры резистентности к развитию поллинозов из числа групп аллелей гена DRB1 обладают феноменом «половой рестрикции». Так, в качестве гена-предиктора поллинозов у мужчин выступает группа аллелей HLA-DRB1*13(06), а специфичность HLA-DRB1*01 может постулироваться на роль гена-протектора риска развития поллинозов у женщин в популяции русских астраханской геногеографической зоны. Динамика частоты регистрации иммуногенетических маркеров поллинозов из числа аллельных вариантов гена DQB1 в зависимости от пола пациентов представлена на рисунке 2.  Рисунок 2. Частота маркерных специфичностей поллинозов из числа аллелей гена DQB1 в зависимости от пола больных Уровень типирования HLA-DQB1*0401/02 был повышен во всех 3-х выборках: достоверно в группе «поллинозы» (13,1%>4,3%; χ2=3,919; p<0,05) и у мужчин (17,4%>4,3%; χ2=4,156; p<0,05), а также незначительно и недостоверно у женщин (10,5%>4,3%; χ2=0,930; p> 0,05). Таким образом, феномен «накопления» аллеля DQB1*0401/02 в изучаемой группе больных поллинозами характеризуется наличием половой рестрикции и свойственен лишь мужской популяции. Частота аллельного варианта HLA-DQB1*0301 была достоверно понижена во всех 3-х выборках: в группе «поллинозы» (24,6%< 52,1%; χ2=12,736; pс<0,05), в группе мужчин (17,4%<52,1%; χ2=10,455; pс<0,05) и в группе женщин (28,9%<52,1%; χ2=6,837; p<0,05). Следовательно, аллель HLA-DQB1*0301 является «универсальным» предиктором поллинозов и не обладает гендерными свойствами. DQB1*0201 может быть постулирован в качестве предиктора поллинозов лишь у мужчин, а гены DQB1*0302 и DQB1*0303 - только у женщин. Суммируя результаты сравнительного анализа маркерных специфичностей поллинозов из числа аллельных вариантов генов HLA класса II с учетом гендерных особенностей изучаемой популяции, можно сделать вывод о том, что гены, ассоциированные с риском развития респираторной аллергии, и ее гены-предикторы обладают половой рестрикцией. Маркерные специфичности поллинозов с учетом пола больных представлены в таблице 5. Таблица 5 ^
Таким образом, «универсальными» маркерами повышенного риска развития поллинозов в популяции русских астраханской геногеографической зоны являются группа аллелей HLA-DRB1*08, а также гаплотипы HLA-DRB1*08/DQB1*05 и DRB1*17/DQB1*0401/02. Кроме того, дополнительными маркерами предрасположенности к развитию поллинозов у мужчин являются аллель HLA-DQB1*0401/02 и гаплотип HLA-DRB1*08/DQB1*0401/02, у женщин - двулокусный гаплотип HLA-DRB1*08/DQB1*0201. «Универсальным» маркером резистентности к развитию поллинозов в изучаемой популяции является аллель HLA-DQB1*0301. Дополнительными предикторами поллинозов у мужчин являются аллели HLA-DRB1*13(06), DQB1*0201 и гаплотипы DRB1*13/ DQB1*0301, DRB1*13/DQB1*06, у женщин - специфичности HLA-DRB1*01, DQB1*0302 , DQB1*0303 и гаплотипы HLA-DRB1*07/ DQB1*0301, DRB1*11(05)/DQB1*0302. С целью поиска ассоциации между особенностями HLA-фенотипа и возрастом пациентов в дебюте заболевания изучен характер распределения генов HLA у 34 больных, у которых поллиноз диагностирован в возрасте до 18 лет и у 27 больных - после 18 лет. Дальнейший сравнительный анализ показал, что ген DRB1*08 - маркер повышенного риска развития поллиноза, не имеет возрастной рестрикции, так как его частота была достоверно повышена как в 1-й выборке (дебют до 18 лет), так и во 2-й выборке (дебют старше 18 лет). Феноменом «возрастной рестрикции» обладает лишь предикторный ген поллиноза DRB1*13(06). Он маркирует резистентность к развитию заболевания лишь у лиц старше 18 лет, и не обладает протективными свойствами у лиц с дебютом поллиноза до 18 лет. А с учетом того факта, что ранее нами была установлена половая рестрикция для этой группы аллелей, можно сделать заключение, что группа аллелей DRB1*13(06) маркирует резистентность к развитию поллинозов, которые дебютируют в возрасте старше 18 лет у мужчин. Частота аллеля DQB1*0301, была достоверно снижена как в 1-ой, так и во 2-й группе больных по сравнению с контролем. Следовательно, ген DQB1*0301 является «универсальным» предиктором поллинозов вне зависимости от возраста пациентов в дебюте заболевания. В зависимости от клинических проявлений поллиноза выделяют риноконъюнктивальную и астматическую форму заболевания. В подавляющем большинстве случаев поллиноз протекает в виде аллергического ринита в сочетании с аллергическим конъюнктивитом и, как правило, предшествует появлению клиники атопической формы БА. На следующем этапе исследования нами был изучен характер распределения аллельных вариантов генов DRB1 и DQB1 в 1-й анализируемой выборке, которую составил 31 больной АР. Установлено, что повышенный риск развития АР в изучаемой популяции маркируется группами аллелей HLA-DRB1*15(02) и DRB1*08, а также двулокусными гаплотипами DRB1*15(02)/DQB1*0201, DRB1*08/DQB1*06 и, особенно, DRB1*15(02)/DQB1*06. Так, наличие в фенотипе индивидуума гаплотипа HLA-DRB1*15(02)/DQB1*06 увеличивает риск развития АР практически в 10 раз. Резистентность к развитию АР обусловлена наличием в фенотипе индивидуума групп аллелей HLA-DRB1*01 и DRB1*07, аллеля DQB1*0301 и гаплотипов DRB1*01/DQB1*0301, DRB1*01/DQB1*05. Вторую анализируемую выборку составили 30 пациентов, у которых была диагностирована аллергическая форма БА в сочетании с АР. Нами установлено, что повышенный риск развития БА маркируется группой аллелей HLA-DRB1*08, аллелем DQB1*05 и гаплотипами DRB1*11(05)/DQB1*05 и DRB1*16(02)/DQB1*05. Резистентность к развитию аллергической формы БА ассоциирована с наличием в фенотипе специфичностей HLA-DRB1*13(06), DQB1*0301, DQB1*0302, DQB1*06 и двулокусных гаплотипов DRB1*12(06)/DQB1*06, DRB1*13(06)/DQB1*06, DRB1*07/DQB1*0201. На последнем этапе нами проведен сравнительный анализ HLA-фенотипов больных АР и аллергической формой БА. Установлено, что частота регистрации 5-ти групп аллелей гена DRB1 и 5 аллелей гена DQB1 достоверно отличалась от контроля как в сторону увеличения, так и в сторону снижения хотя бы в одной из 2-х выборок (таблица 6). Таблица 6 ^ в зависимости от клинического варианта поллинозов
** p<0,05 – достоверно Сравнение частотных характеристик таких маркерных специфичностей поллинозов, как HLA-DRB1*01, DRB1*15(02), DRB1*13(06), DRB1*07 и DRB1*08 в зависимости от клинического варианта респираторной аллергии представлено на рисунке 3. Сравнительный анализ в локусе DR показал, что специфичность DRB1*01 с одной стороны маркирует резистентность к развитию АР, а с другой стороны - наличие ее в HLA-фенотипе больного ринитом является маркером высокого риска присоединения клиники БА.  ^ Группа аллелей DRB1*15(02) может рассматриваться в качестве маркера повышенного риска развития в популяции АР, как наиболее часто встречающегося клинического варианта поллиноза. Ген DRB1*07 является предиктором риска развития АР у здоровых лиц. Сравнение частотных характеристик таких маркерных специфичностей поллинозов, как DQB1*0301, DQB1*0302, DQB1*0401/02, DQB1*05 и DQB1*06 в зависимости от клинического варианта заболевания представлена на рисунке 4.  Рисунок 4. Частота маркеров HLA из числа аллелей гена DQB1 в зависимости от клинического варианта поллинозов Сравнительный анализ в локусе DQ позволяет постулировать аллель DQB1*0401/02 в качестве маркера повышенного риска развития поллиноза, а аллель DQB1*0301 - в качестве предиктора риска развития как, в целом поллинозов, так и их клинических вариантов. Наличие в фенотипе специфичности DQB1*0302 является фактором, маркирующим резистентность к развитию поллинозов и, особенно, к развитию БА, как наиболее тяжелого их клинического варианта. Аллель HLA-DQB1*05 выступает в качестве маркера повышенного риска развития аллергической формы БА не только у здоровых лиц, но и, что особенно значимо, служит прогностическим фактором высокого риска формирования астмы у пациентов с уже имеющимся АР. Наличие в фенотипе индивидуума гена DQB1*06, с одной стороны, маркирует резистентность к развитию аллергической формы БА в «здоровой» популяции, а с другой - «препятствует» дальнейшему прогрессированию АР с присоединением клиники астмы. Результаты поиска маркеров поллинозов и их клинических вариантов можно изложить в виде прогностической таблицы 7. Таблица 7 ^
ВЫВОДЫ 1. «Универсальными» маркерами повышенного риска развития поллинозов в популяции русских астраханской геногеографической зоны являются группа аллелей HLA-DRB1*08 и двулокусные гаплотипы HLA-DRB1*08/DQB1*05, DRB1*17/DQB1*0401/02. «Универсальным» маркером резистентности к развитию поллинозов является аллель HLA-DQB1*0301. 2. Дополнительными маркерами предрасположенности к развитию поллинозов у мужчин являются аллель HLA-DQB1*0401/02 и двулокусный гаплотип HLA-DRB1*08/DQB1*0401/02, у женщин - гаплотип HLA-DRB1*08/DQB1*0201. Дополнительными предикторами поллинозов у мужчин являются аллели HLA-DRB1*13(06), DQB1*0201 и гаплотипы HLA-DRB1*13/ DQB1*0301, DRB1*13/DQB1*06, у женщин - специфичности HLA-DRB1*01, DQB1*0302, DQB1*0303 и гаплотипы HLA-DRB1*07/ DQB1*0301, DRB1*11(05)/DQB1*0302. Предикторный ген поллинозов HLA-DRB1*13(06) обладает совокупной половой и возрастной рестрикцией, маркируя резистентность к развитию заболевания лишь у мужчин старше 18 лет. 3. Аллель HLA-DRB1*15(02) и гаплотипы HLA-DRB1*15/ DQB1*0201, DRB1*08/DQB1*06, DRB1*15/DQB1*06 маркируют предрасположенность к развитию аллергического ринита как клинического варианта поллиноза. Резистентность к развитию аллергического ринита обусловлена наличием в фенотипе индивидуума обладающих протективным эффектом групп аллелей HLA-DRB1*01, DRB1*07 и гаплотипов HLA-DRB1*01/DQB1*0301, DRB1*01/ DQB1*05. 4. Иммуногенетическими маркерами повышенного риска развития аллергической формы бронхиальной астмы являются специфичность HLA-DQB1*05 и гаплотипы HLA-DRB1*11/DQB1*05, DRB1*16/ DQB1*05. Аллель HLA-DQB1*05 служит прогностическим фактором высокого риска формирования бронхиальной астмы у пациентов с уже имеющимся аллергическим ринитом. Резистентность к развитию аллергической формы бронхиальной астмы ассоциирована с аллельными вариантами HLA-DQB1*0302, DQB1*06 и гаплотипами HLA-DRB1*12/DQB1*06, DRB1*13/DQB1*06, DRB1*07/DQB1*0201. 5. Специфичность HLA-DRB1*01, с одной стороны, маркирует резистентность к развитию аллергического ринита, а с другой стороны - наличие ее в HLA-фенотипе больного аллергическим ринитом является маркером высокого риска присоединения аллергической формы БА. Специфичность HLA-DQB1*06, с одной стороны, маркирует резистентность к развитию аллергической формы бронхиальной астмы в «здоровой» популяции, а с другой - «препятствует» развитию бронхиальной астмы у больных с аллергическим ринитом. 6. Особенности HLA-фенотипа пациентов могут быть использованы в качестве дополнительного критерия для разработки долговременного индивидуального прогноза характера течения поллинозов, в первую очередь, для оценки риска развития у больных аллергическим ринитом бронхиальной астмы. ^ 1. Включение в план лабораторного обследования больных поллинозами метода молекулярного HLA-типирования аллельных вариантов генов DRB1 и DQB1 позволяет значительно улучшить качество прогнозирования характера течения аллергического заболевания у данной группы больных. 2. Определение фенотипа HLA может быть использовано в качестве дополнительного критерия в профилактической медицине для формирования как групп высокого риска развития поллинозов среди здорового населения в популяции, так и групп высокого риска развития аллергической формы бронхиальной астмы у больных аллергическим ринитом. 3. Анализ особенностей HLA-фенотипа больных поллинозами на его ранних этапах предоставляет дополнительные возможности для определения вероятных вариантов прогрессирования заболевания с целью разработки индивидуального долговременного прогноза патологического процесса. 4. Наличие в HLA-фенотипе больного аллергическим ринитом маркеров высокого риска развития аллергической формы бронхиальной астмы - аллелей DRB1*01 и DQB1*05, является прямым показанием для регулярного врачебного контроля и проведения в полном объеме комплекса лечебно-профилактических мероприятий, направленных на устранение этиопатогенетических механизмов атопии, предупреждение развития клиники астмы и, в конечном итоге, кардинальное улучшения качества жизни пациентов. ^
^ АР – аллергический ринит АСИТ – аллерген-специфическая иммунотерапия БА – бронхиальная астма ПЦР – полимеразная цепная реакция EF – этиологическая фракция HLA – человеческий лейкоцитарный антиген MHC – главный комплекс гистосовместимости PF – превентивная фракция RR – относительный риск развития заболевания АНДРЕЕВА ЕЛЕНА ЕВГЕНЬЕВНА ОСОБЕННОСТИ РАСПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕНОВ HLA КЛАССА II У БОЛЬНЫХ ПОЛЛИНОЗАМИ 14.01.04 - внутренние болезни Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Подписано в печать ___ .04.2011. Тираж 100 экз. Заказ № _______ _____________________________________________________________ Издательство Астраханской государственной медицинской академии, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121 |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям