С. П. Рыбалкин Ю. В. Иванова Е. В. Ковалева
|
|
Скачать 0.54 Mb.
|
1 2
|
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ НАУКИ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ЦЕНТР ТОКСИКОЛОГИИ И ГИГИЕНИЧЕСКОЙ РЕГЛАМЕНТАЦИИ БИОПРЕПАРАТОВ ФЕДЕРАЛЬНОЕ МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКОЕ АГЕНТСТВО РОССИИ (ФГУН НИЦ ТБП ФМБА) УТВЕРЖДАЮ: Заместитель директора НИЦ ТБП по нахвной>-раб|эте, д.м.н., профессор  Р.Дядищев ОТЧЕТ Экспериментальное изучение репродуктивной токсичности препарата киллевнр  Руководитель исследований, начальник отдела, к.б.н. ч-—-р" \ *■ ~^1 С.П.Рыбалкин Серпухов 2005 ^  Начальник отдела патоморфологии и репродуктивной токсикологии, к.б.н. Научный сотрудник Научный сотрудник Лаборант-исследователь Лаборант-исследователь Лаборант-исследователь С.П.Рыбалкин Ю.В.Иванова Е.В.Ковалева '{' /.."У Л.Г.Игнатьева Н.Н.Хамьянова Ю.В.Багрянцева СОДЕРЖАНИЕ ^ № стр. ВВЕДЕНИЕ 5 ^ 1.1.Методы изучения эмбриотоксического действия киллевира, регистрируемого в антенатальном периоде 6 1.2 Методы изучения токсического действия киллевира на гонады самцов и самок 7 ^
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 21 ^ Ключевые слова: киллевир, фуллеренполиаминокапроновая кислота, репродуктивная токсичность, эмбриотоксическое действие, тератогенное действие, антенатальный период развития, гонадотоксическое действие Целью проведенных исследований явилась экспериментальная оценка репродуктивной токсичности нового фармакологического препарата киллевир. Соединение представляет собой производное фуллерена и аминокапроновой кислоты - фуллеренполиаминокапроновая кислота. Исследуемое соединение планируется использовать в качестве лекарственного средства с противогерпесной активностью. Для применения предложены две лекарственные формы киллевира: суппозитории и инъекционная форма. Экспериментальные исследования проведены на аутбредных белых крысах в дозах до 10-кратной эквитерапевтической. Так как исследуемый препарат в своей основе содержит диметилсульфоксид (ДМСО), то в качестве контрольных групп были набраны животные, которым вводили ректально суппозиторную основу с ДМСО, либо внутривенно водный раствор ДМСО и воду для инъекций (контроль). При экспериментальном изучении репродуктивной токсичности препарата киллевир в форме суппозиториев для ректального введения, не установлено значимых признаков повреждающего действия. Однако заслуживает внимания отмечавшееся увеличение кровенаполнения печени плода при применении 3-х и 10-кратной эквитерапевтических доз. При изучении инъекционной формы киллевира установленно нарушение общего развития плода, выразившееся в уменьшении массы и размеров, в том числе при воздействии эквитерапевтической дозы препарата. Имеются все основания, чтобы предполагать, что выявленные эмбриотоксические эффекты вызваны ДМСО. Вместе с тем, учитывая, что ДМСО является неотъемлемой частью (растворителем субстанции) лекарственных форм киллевира, применение препарата связано с риском для плода. ВВЕДЕНИЕ В отчете представлены результаты экспериментальных исследований репродуктивной токсичности нового оригинального препарата киллевир, обладающего противовирусной активностью. Авторы препарата рекомендуют его в качестве противогерпетического средства. Субстанция киллевира представляет собой производное фуллерена и аминокапроновой кислоты - фуллеренполиаминокапроновую кислоту. Субстанция не растворима в воде, поэтому для ее растворения используют диметилсульфоксид (ДМСО). Для применения предложены две лекарственные формы киллевира: суппозитории и инъекционная форма. Основные сведения о составе и условиях применения лекарственных форм: ^ : фуллеренполиаминокапроновая кислота — 10 мг, ДМСО — 150 мг, Персиковое масло – 40 мг, витепсол — до 2000 мг. Суппозитории предназначены для ежедневного однократного, в дозе 1 суппозиторий, ректального применения, курсом не менее ЗгХ месяцев. ^ фуллеренполиаминокапроновая кислота — 50 мг, ДМСО — 0,5 мл, вода для инъекций — 2 мл. Перед инъекцией концентрат разводят в 30 мл воды для инъекций. Препарат применяют однократно путем внутривенного введения. ^ Исследования проведены в соответствии с «Методическими указаниями по изучению репродуктивной токсичности фармакологических веществ». /Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. — 2-изд., перераб. и доп. — М:, ОАО "Издательство "Медицина", 2005, С. 87-100. В работе использованы аутбредные белые крысы, приобретенные в Центральном питомнике лабораторных животных РАМН, отделение "Крюково". Изучение эмбриотоксического и тератогенного действия киллевира проводили в антенатальном периоде. Изучение гонадотоксического действия киллевира проводили на самцах, в течение 6 30 дней и самках - в течение 15 дней. Всего в опытах по эмбриотоксичности и гонадотоксичности использовано 223 крысы. Для изучения эмбриотоксического и тератогенного действия, суппозиторную массу киллевира вводили самкам крыс ректально в дозах - 28,6 (эквитерапевтическая), 85,8 и 286,0 мг/кг массы тела с 1 по 20 день беременности. Внутривенно киллевир беременным самкам вводили в дозах 0,5 (эквитерапевтическая); 1,5 и 5,0 мл/кг по следующей схеме: для изучения влияния на предимплантационный период: в 1 и 3 день беременности; для изучения влияния на ранний период органогенеза: в 7 и 9 день беременности; для изучения влияния на поздний период органогенеза: в 11 и 13 день беременности; для изучения влияния на развитие костной системы: в 16 и 18 дни беременности. Так как киллевир имеет в своем составе ДМСО, обладающий эмбриотоксичностью, отдельным группам животных на всех этапах исследования вводили суппозиторную основу с ДМСО или водный раствор ДМСО в количестве и концентрациях, соответствующих его содержанию в соответствующих лекарственных формах. Кроме того, отдельным группам животных вводили воду для инъекций (контроль). Во время введения препарата регистрировали поведение самок, клинические признаки и динамику массы тела. На 20-й день беременности животных умерщвляли и проводили анализ состояния плодов. Для изучения токсического действия на гонады самцов, киллевир вводили ректально в дозах 28,6 и 286,0 мг/кг и суппозиторную основу с ДМСО в дозе 286,0 мг/кг ежедневно на протяжении 30 суток и внутривенно, в дозах 0,5 и 5,0 мл/кг и водный раствор ДМСО в дозе 5,0 мл/кг один раз в первый день эксперимента. Контрольным животным вводили воду для инъекций. Для изучения токсического действия на гонады самок, киллевир вводили ректально в дозе 286,0 мг/кг ежедневно на протяжении 15 суток. Контролю вводили суппозиторную основу с ДМСО в дозе 286,0 мг/кг. Статистическую оценку результатов проводили с использованием t-критерия Стьюдента. ^ Для получения крыс с известным сроком беременности, с вечера самцов подсаживали к самкам в соотношении 1:2. Наутро приготавливали нативные мазки вагинального содержимого, которые анализировали под микроскопом. Показателем оплодотворения самок служило наличие в мазках сперматозоидов. На 20 сутки после оплодотворения, животных умерщвляли для изучения токсического действия препарата в антенатальный период развития и проводили их вскрытие. У беременных самйк подсчитывали количество желтых тел в яичниках, число мест имплантации в матке, количество живых и резорбированных плодов. На основании этих данных определяли уровень пред- и постимплантационной смертности зародышей. Плоды каждого помета тщательно осматривали с целью выявления внешних аномалий развития. Затем плоды взвешивали и определяли их краниокаудальный размер, по этим показателям делался вывод о степени доношенности плодов. После этого, половину всех плодов из потомства каждой крысы оставляли на исследование состояния скелета плодов по методу Доусона в модификации отдела эмбриологии НИИЭМ АМН СССР, у второй половины исследовали внутренние органы по методике Вильсона в модификации отдела эмбриологии НИИРМ АМН СССР. ^ Для изучения токсического действия на гонады самцов, киллевир и суппозиторную основу с ДМСО вводили ректально ежедневно на протяжении 30 суток и внутривенно -киллевир и водный раствор ДМСО, один раз в первый день эксперимента. Животных ежедневно осматривали и еженедельно взвешивали, после чего проводилось их умерщвление и вскрытие. Для определения массовых коэффициентов у животных взвешивали семенники, придатки и предстательную железу. Придаток семенника использовали для получения суспензии и приготовления мазка для подсчета относительного количества патологических форм сперматозоидов. Второй семенник фиксировали в 10% формалине и приготавливали гистологические срезы для анализа сперматогенного эпителия, который оценивали по следующим количественным показателям: индекс сперматогенеза; количество нормальных сперматогоний. Для изучения токсического действия на гонады самок, киллевир и водный раствор ДМСО вводили в 1, 4 и 10 дни эксперимента. На протяжении 15 дней животных осматривали и проводили еженедельное взвешивание, после чего проводилось их умерщвление и вскрытие. У самок были взяты яичники, которые фиксировали в 10% формалине с последующим приготовлением гистологических срезов через весь орган, толщиной б микрометров и окрашиванием гематоксилином и эозином и последующим подсчетом структурно-функциональных элементов в яичнике: фолликулы с одним слоем гранулезных клеток; фолликулы с двумя и более слоями гранулезных клеток; граафовы пузырьки и атретические тела. Указанные элементы подсчитывали по всей поверхности среза. ^ 2.1. Результаты исследования эмбриотоксического действия киллевира при ректальном введении На протяжении всего периода беременности при ректальном введении киллевира и суппозиторной основы с ДМСО не было отмечено различий в динамике массы тела животных во всех экспериментальных группах при сравнении с контрольной (табл.1). Таблица 1 Динамика изменения массы тела беременных самок на протяжении всего срока ректального введения киллёвира
Оценка состояния генеративной функции крыс под воздействием киллевира выявила достоверное увеличение количества мест имплантации и живых плодов в группе животных, получавших препарат в дозе 85,8 мг/кг массы тела (табл. 2). Изменение данных показателей не носит дозозависимого характера. Анализ остальных показателей не выявил различий между подопытными и контрольными животными. Таблица 2 Результаты количественной оценки эмбриотоксического действия киллевира на белых крыс при ректальном введении
Внешний осмотр плодов во время вскрытия самок подопытных групп выявил один случай патологии плода в группе получавшей суппозиторную основу с ДМСО в дозе 286,0 мг/кг. Отме чгно общее недоразвитие плода, а также аплазия левой передней конечности и синдактилия на обеих задних конечностях. Во всех остальных группах патологии плодов не обнаружено. Анализ состояния внутренних органов плодов методом серийных срезов показал достоверно; увеличение количества плодов с полнокровием сосудов печени, в тех группах, где крысы получали ректально киллевир в дозах 85,8 мг/кг и 286,0 мг/кг (таблица 3). В целом в этих группах наблюдался повышенный уровень возникновения кровоизлияний. По остальным аномалиям существенных различий с контролем не отмечено. Таблица 3 Результаты >[соледования токсического действия киллевира на состояние внутренних органов плодов при ректальном введении
При изучении развития костной системы в группе эмбрионов, матери которых получали ректально киллевир в дозе 286,0 мг/кг, выявлена достоверная задержка в оссификац™ костей грудины (табл.4). При этом наиболее высокий показатель задержки оссификации отдельных костей отмечен при воздействии суппозиторной основы с ДМСО. Таблица 4 Результаты исследования токсического действия киллевира на развитие костной системы плодов при ректальном введении
^ Наблюдение за экспериментальными животными при внутривенном введении киллевира не выявило каких-либо изменений их физического состояния. Динамика изменения массы тела крыс подопытных и контрольной групп, была положительной и не имела достоверных отличий, за исключением группы, получавшей водный раствор ДМСО в максимально,! дозе в 16 и 18 день беременности. Масса животных в данной группе была достоверно выше контроля (табл. 5), что, как было установлено при вскрытии животных, объяснялось большим количеством плодов в среднем у каждой самки. 12 Таблица 5 Динамика изменения массы тела крыс при внутривенном введении киллевира
Результаты вскрытия самок контрольной и подопытных групп показали, что такие параметры оценки эмбриотоксического действия, как количество желтых тел в яичниках и число мест имплантации, а, следовательно, и предимплантационная смертность зародышей, статистически не отличалась (таблица 6). За исключением группы получавшей внутривенно водный расгвор ДМСО в 16 и 18 дни беременности в дозе 5,0 мл/кг. У животных в данной группе отмечено достоверно повышенное количество мест имплантации и живых плодов, и достоверно снижена предимплантационная смертность. Для всех остальных экспериментальных групп статистически значимых различий не было. Внеш 1й осмотр плодов во время вскрытия самок выявил один случай патологии эмбриона в группе, получавшей внутривенно водный раствор ДМСО в дозе 5,0 мл/кг в 1 и 3 дни, и один случай патологии эмбриона, вызвавшей внутриутробную гибель, в группе, получавшей внутривенно водный раствор ДМСО в дозе 5,0 мл/кг в 16 и 18 дни беременное iii. В первом случае отмечено общее недоразвитие, грыжа головного мозга, а также гипса и ия верхней челюсти с расщеплением верхней губы и твердого нёба, во втором — было отмечено отсутствие кистей и стоп, а также лизис мягких тканей в результате внутриутробной смерти. В группах животных, получавших киллевир, случаев грубой патологии (внешних аномалий развития) не отмечено. Во всех энспериментальных группах, независимо от дозы и срока введения киллевира или растьора ДМСО, было отмечено достоверное снижение массы тела и краниокаудальього размера эмбрионов за исключением групп, которым киллевир и водный раствор ДМСО вводили в 16 и 18 дни беременности (таблица 6). Это свидетельствует об эмбрио- и фетотоксическом воздействии, а именно о влиянии в период органогенеза. Имеются все основания, чтобы предполагать, что данный эффект вызван ДМСО. Однако, учитывая, что ДМСО "является неотъемлемой частью (растворителем субстанции) инъекционной формы препарата киллевир, применение препарата всегда будет связано с риском дня плода. Таблица 6
 Продолжение таблицы 6
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
1 2
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям