Методическое издание «Рабочая тетрадь 1 по цитологии и эмбриологии животных» для студентов факультета ветеринарной медицины по курсу «Цитология, Гистология и Эмбриология». Улан-Удэ: Изд-во бгсха, 2011. Ц 946 icon

Методическое издание «Рабочая тетрадь 1 по цитологии и эмбриологии животных» для студентов факультета ветеринарной медицины по курсу «Цитология, Гистология и Эмбриология». Улан-Удэ: Изд-во бгсха, 2011. Ц 946





Скачать 410.54 Kb.
Название Методическое издание «Рабочая тетрадь 1 по цитологии и эмбриологии животных» для студентов факультета ветеринарной медицины по курсу «Цитология, Гистология и Эмбриология». Улан-Удэ: Изд-во бгсха, 2011. Ц 946
Дата 30.06.2013
Размер 410.54 Kb.
Тип Методическое пособие
МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РФ

ДЕПАРТАМЕНТ НАУЧНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКОЙ ПОЛИТИКИ И ОБРАЗОВАНИЯ

ФГБОУ ВПО «БУРЯТСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ИМЕНИ В.Р.ФИЛИППОВА»

КАФЕДРА АНАТОМИИ, ГИСТОЛОГИИ И ПАТОМОРФОЛОГИИ


Цыбикова Р.Н., Цыдыпов Р. Ц., Малакшинова Л. М.,


РАБОЧАЯ ТЕТРАДЬ 1

«ЦИТОЛОГИЯ И ЭМБРИОЛОГИЯ С ОСНОВАМИ ГИСТОТЕХНИКИ»


ФИО___________________________________________


Группа___________________________________


Улан- Удэ
2011

УДК 619:578(07)

Ц 946

Печатается по решению методического Совета
ФГОУ ВПО « Бурятская государственная сельскохозяйственная академия
им. В. Р. Филиппова»


Рецензент:

Доктор сельскохозяйственных наук, профессор Лумбунов С.Г.


^ Цыбикова Р.Н., Цыдыпов Р. Ц. , Малакшинова Л. М.

Методическое издание «Рабочая тетрадь 1 по цитологии и эмбриологии животных» для студентов факультета ветеринарной медицины по курсу « Цитология, Гистология и Эмбриология». Улан-Удэ: Изд-во БГСХА, 2011.

Ц 946 Методическое пособие подготовлено в соответствии с действующей программой курса «Гистология, цитология и эмбриология домашних животных» для студентов факультета ветеринарной медицины со специальностями 11201.65 – «Ветеринария» и 110501.65 «Ветеринарно-санитарная экспертиза». Ориентирует студентов на самостоятельную, аудиторную и внеаудиторную работу. В работе содержатся оригинальные фоторисунки, созданные на основе гистологических препаратов научно-исследовательской работы авторов и фондов кафедры. Обобщающие таблицы нацелены на схематичное запоминание пройденного материала. Имеется интерактивный подход к разбору материала в виде ситуационных задач, которые активизируют познавательную деятельность и логическое мышление студентов, прививают им навыки практической деятельности через постановку предварительного диагноза. Рабочая тетрадь написана по единой схеме с выделением целей занятий, их мотивационной характеристики и перечня объектов изучения и является дополнением к руководству к практическим занятиям по цитологии, гистологии и эмбриологии, ранее изданной кафедрой


УДК 619:578(07)






© Цыбикова Р.Н.
Цыдыпов Р. Ц., Малакшинова Л. М.,

©Бурятская государственная сельскохозяйственная

академия им. Ф.Р. Филиппова, 2011

^ РАЗДЕЛ ОСНОВЫ ГИСТОТЕХНИКИ

ЛПЗ № 1: Устройство и показатели микроскопа


Цель занятия:

  • Изучить устройство светооптического микроскопа

  • Усвоить основные показатели микроскопа

  • Усвоить правила работы с микроскопом


Микроскоп – это оптический прибор, дающий увеличенное изображение объекта двумя самостоятельными оптическими системами – объективом и окуляром. Микроскоп состоит из оптической, механической частей и осветительной системы. К первой относятся объективы и окуляры. Механические части состоят из ножки (башмак), тубуса, предметного столика, штатива, включающего макро- и микровинты. К осветительной системе относятся зеркало и конденсор с диафрагмой.

Обычные биологические микроскопы (МБИ-I, МБР-I, БИОЛАМ и другие) в наборе имеют три объектива и столько же окуляров, в то время как у исследовательских число их намного больше. Увеличение объективов бывает 8, 40 и 90-кратным, а окуляров, соответственно 7, 10 15-кратным. Объективы являются важнейшими частями микроскопа, дающими увеличенное обратное действительное изображение. Объективы состоят из линз – шлифованных стекол. Они в некоторой степени дают искажения изображения, которые называются абберациями. Абберации выражаются в появлении нечеткости и цветности изображения. Различают три возможных вида абберации: хроматические, сферическией и по кривизне поля зрения.

Сущность хроматической абберации заключается в частичном разложении лучей белого света на составные части при прохождении через линзу объектива. Получается частично цветное изображение объекта. При сферической абберации лучи света, падающие на различные поверхности линзы объектива, преломляются неодинаково и поэтому получается нечеткое изображение изучаемого объекта. Абберации по кривизне поля зрения возникают из-за искривления поверхности изучаемого объекта и в результате центр и края поля зрения одновременно не имеют резкости.

Абберации в значительной степени устраняются объективами из нескольких линз, поэтому объективы (особенно большого увеличения) являются многолинзовыми системами.

Объективы современных микроскопов по качеству изображения, т.е. по степени устранения аббераций, подразделяются на несколько типов. Объективы ахроматы имеют простое устройство, частично лишены хроматической абберации по двум цветовым волнам и имеют остаточную окраску изображения. Они характеризуются вполне удовлетворительным качеством изображения и поэтому, используется для проведения повседневных работ. Объективы полуапохроматы или флюориты имеют меньше абберации, чем ахроматы. Самыми сложными и лучшими считаются объективы апохроматы, лишенные по существу хроматической абберации. Объективы полуапохроматы и апохроматы используются при проведении научно-исследовательских работ.

Вышеописанные объективы имеют существенный недостаток, который заключается в искажении по кривизне изображения, т.е. примерно от одной трети до половины радиуса поля зрения изображение становится размытым. Для устранения этого используются планахроматические и планапохроматические объективы. Они дают плоское изображение поля зрения. Поэтому изображение получается одинаковым на всем поле зрения. Такие объективы незаменимы для микрофотографирования изучаемых объектов.

Кроме того, объективы подразделяются на сухие и иммерсионные. В сухих – между объективом и изучаемым объектом находится воздушная среда. К ним относятся, в основном, объективы малого и среднего увеличения (8× и 40×).

В объективах большого увеличения – 60× (имеется в научно-исследовательских микроскопах) и 90× пространство между фронтальной линзой объектива и препаратом заполняется иммерсионной средой – водой, водным раствором глицерина или кедровым маслом. Иммерсионные системы обладают большей преломляющей способностью лучей свет, чем воздушная среда и поэтому в объектив попадает больше лучей света.

Для научно-исследовательской работы часто используются объективы специального назначения: фазово-контрастные, эпиобъективы и другие.

Второй оптической системой микроскопа являются окуляры, которые увеличивают изображение, проецированные объективом. Наиболее простым и широко используемыми являются окуляры Гюйгенса. Они применяются с ахроматическими объективами.

Для работы с планахроматическими и апохроматическими объективами больших увеличений применяются компенсационные окуляры. Они более сложно устроенные и в значительной степени исправляют абберации и, тем самым, улучшают качество изображения. Кроме того, для специальных целей применяются фотоокуляры и гомали. Фотоокуляры служат для проецирования изображения на фоточувствительные материалы или же на экран.

Известно, что ахроматические и апохроматические объективы имеют значительную кривизну изображения. Гомали устраняют этот недостаток и поэтому могут быть использованы для фотографирования объекта. В то же время они до одной трети уменьшают поле зрения.

На объективах и окулярах имеются гравировки. С одной стороны обоймы объектива фигуры или написано «ЛОМО» (Ленинградское оптико-механическое объединение), здесь же указывается номер объектива. На противоположной стороне обоймы объектива указывается его увеличение, численная апертура, а иногда и максимально допустимая толщина покровного стекла (0,17мм). В объективах большого увеличения (90×) гравировано «МИ» (масляная иммерсия).

Кроме того, в объективах планахроматах, полуапохроматах и апохроматах гравированы слова «планахромат», «полуапохромат», и «апохромат». В окулярах обычно имеется гравировка увеличения, а в компенсационных буква «К».

На занятиях по самостоятельной работе студенты берут закрепленные за ними на ЛПЗ микроскопы. Каждый студент должен определить общее увеличение микроскопа и разрешающую способность его объективов. Для их определения необходимо знать численную апертуру объектива. Численная апертура – это произведение показателя преломления среды на половину апертурного угла и определяется по формуле:

А = n*sin

Где n – показатель преломления среды, находящегося между препаратом и фронтальной линзой объектива; u – половина апертурного угла. Он образуется коническим пучком света, попадающим в объектив из точки препаратов.

Показатель преломления сред различный:

^ N nвоздуха = 1,0; nводы =1,33 и nмасла = 1,51


Таким образом, используя иммерсионные среды, можно увеличить апертуру объектива. В современных микроскопах апертура определена и выгравирована на объективах. У объективов с увеличением 8х численная апертура равна 0,20 и соответственно 40х=0,65; 90х=1,25.

Человеческий глаз при нормальной остроте зрения на расстоянии наилучшего видения (250мм) способен различить две линии или точки, отстоящие друг от друга на расстоянии не меньше, чем на 0,08мм. Эта величина называется разрешающей способностью глаза.

^ Под разрешающей способностью микроскопа понимается то наименьшее расстояние между двумя деталями изучаемого объекта, когда они видны раздельно. Чем меньше это расстояние, тем выше разрешающая способность микроскопа.

Если изучаемый объект будет равным или большим разрешающей способности, то он будет виден в действительной форме, т.е. таким каким он является. Если же изучаемый объект будет меньше разрешающей способности, но не меньше ее половины, то он будет округлым независимо от его истинной формы, равным величине разрешающей способности. Если объект меньше половины разрешающей способности он не будет виден.

Разрешающая способность светооптического микроскопа определяется по формуле:

e = λ / -А,

где е – разрешающая способность объектива;

λ – длина световой волны;

А – численная апертура.


Длина волны белого света λ = 0,55мкм, красного цвета = 0мкм, фиолетового = 0,4мкм. Из формулы видно, что можно увеличить разрешающую способность объектива, используя лучи коротковолновой части спектра.

При работе со светооптическим микроскопом нужно учитывать полезное увеличение, которое не должно превышать тысячекратной численной апертуры (1000 А). Можно добиться увеличения, превышающего 1000 А, используя сильные окуляры. Однако при этом заметно ухудшается освещенность и качество изображения. В то же время иногда используется увеличение микроскопа превышающее 1000А при микрофотографии, микропроекции и в целях измерения.

Задачей самостоятельной работы заключается в подробном изучении устройства и показателей микроскопа. Нужно уяснить, что означает гравировка на объективах и окулярах микроскопа. Используя настоящее пособие, в тетрадях для самостоятельной работы сделать краткие конспекты, определить общее увеличение микроскопа при разных объективах и окулярах по формуле:

βм = βоб * βок

где βм – общее увеличение микроскопа;

βоб – увеличение объектива;

βок – увеличение окуляра.


Задание:

  • Определить разрешающую способность разных объективов микроскопа и записать полученные расчеты

  • Заполнить таблицу №1 «Устройство светового микроскопа».


Определить разрешающую способность микроскопа


  1. При использовании дневного света и объективов с увеличением 8х, 20х, 90х;




  1. При использовании красного света и объективов с увеличением 9х, 20х, 90х;




  1. При использовании фиолетового света и объективов с увеличением 10х, 60х, 90х.





Рис. 1 Строение микроскопа


1 - 11-

2 - 12 -

3 - 13 -

4 - 14 -

5 - 15 -

6 - 16 -

7 - 17 -

8 - 18 -

9 - 19 -

10 -


Таблица 1 ^ Устройство светового микроскопа


Название систем микроскопа

Составные системы

Функция системы

Примечания

Механическая












Оптическая












Осветительная














Литература

  1. Кацнельсон З.С., Рихтер И.Д. – Практикум по цитологии, гистологии и эмбриологии. Л.: Колос. 1976

  2. Сиразиев Р.З., Игумнов Г.А., Цыдыпов Р.Ц. и др. Руководство к практическим занятиям по цитологии, гистологии и эмбриологии. – Улан-Удэ: Изд-во Бурятской ГСХА , 2006. – 152 с.



ЛПЗ № 2: Гистологическая техника


Цель занятия:

  • Изучить методы взятия материала и приготовления гистологических препаратов

  • Усвоить приемы и методы гистологической техники


Приемы и методы приготовления гистологических препаратов называются гистологической техникой. Она состоит из нескольких последовательных приемов:

  1. взятие материала;

  2. его фиксация;

  3. отмывания от фиксатора;

  4. замораживания или заключения в уплотняющие среды;

  5. приготовления срезов;

  6. их окрашивания;

  7. и их заключения.

  1. Взятие материала производится острым режущим инструментом от убитого животного или от трупа (не более 1 часа после смерти), иногда биопсией при жизни животных. Величина взятого кусочка не должна превышать 1 см3.

  2. Фиксация. Взятый кусочек помещается в фиксатор. При этом происходит быстрая коагуляция (осаждение, свертывание) белков. Однако, имеются фиксаторы, в которых происходит сильное обезвоживание коллоидов. При фиксации прекращаются процессы разложения, и тем самым, сохраняются в большей или меньшей степени прижизненные структуры материала. Наиболее часто в качестве фиксатора используется формалин, этиловый спирт, ацетон и другие вещества. Часто фиксаторы бывают сложного химического состава.

  3. Промывка - извлечение (удаление) фиксатора. Производится промывание сначала обычной (водопроводной), а затем дистиллированной водой.

Для ускоренного приготовления гистологических препаратов из промывочной воды кусочки переносятся на столик специального микротома, замораживаются жидкой углекислой и готовятся срезы.

  1. ^ Обезвоживание и заключение в плотные среды. Для заключения в целлоидин или парафин материал проводят обезвоживание материала в спиртах возрастающей концентрации.

После проводки через спирты производится заливка материала.

  1. ^ Заключение материала в целлоидин. Целлоидин представляет собой очищенный сор коллодионной нитраклетчатки. Из-за дефицитности целлоидина, его можно заменить кино- и рентгенопленками, имеющими нитроцеллоидную основу. С кино и рентгенопленок удаляют эмульсию, помещая в горячую воду или 20% раствора едкого натрия или калия. Затем их сушат и нарезают на мелкие кусочки и растворяют в равных частях спирт – эфира. Готовят 2, 4-5 и 10% растворы.

^ Для заливки в целлоидин материал из последнего спирта переносят в равные части спирта – эфира (6-24час.), затем делается последовательная проводка через растворы (2- , 4-5, 10%) целлоидина. В последнем густом растворе целлоидина оставляют на открытом воздухе на 2-3 дня. Спирт – эфир испаряется и целлоидин загустевает. Затем вырезаются заключенные кусочки материала и приклеиваются к деревянным блокам. Хорошо сохраняются блоки в 70º спирте.

^ Для заключения материала в парафин кусочки ткани проводятся через спирты возрастающей концентрации, включая абсолютный. В дальнейшем материал помещается в раствор из равных частей спирт- хлороформа (вместо хлороформа можно использовать ксилол и толуол). Из этого раствора кусочек перекладывается в чистый хлороформ (2 порции) с последующим переносом в хлороформ – парафин (насыщенный раствор парафина в хлороформе) при температуре 35-40ºС. В последующем материал помещается в 3 порциях расплавленного парафина при температуре 54-56ºС. Из бумаги изготовляются формочки, куда переносится материал и сверху заливается расплавленным парафином. Для быстрого застывания парафина формочки опускаются в чашки с холодной водой.

  1. ^ Приготовление срезов из целлоидиновых и парафиновых блоков. Готовятся срезы с помощью особых приборов – микротомов.

Наиболее распространенными являются санные микротомы. Они состоят из станины (корпуса), микрометрического винта, объектодержателя, ножевых салазок с зажимом ножа. Для резки блоков используются микротомные ножи. По форме клина лезвия ножей различаются на прямые (обе стороны лезвия ножа плоские), плосковогнутые (одна сторона лезвия плоская, другая вогнутая) и двояковогнутые. Прямые ножи используются для срезки замороженных материалов и парафиновых блоков. Другие ножи чаще всего применяются для срезки целлоидиновых блоков.

При установке ножа нужно соблюдать угол резания, образуемый при пересечении верхней плоскости объекта с нижней стороной лезвия ножа. Считается наиболее лучшим угол резания около 15 градусов.

При гистохимических исследованиях иногда производится приготовление срезов из нефиксированной ткани. Для этой цели наиболее приемлемым является криостат. Он представляет холодильную установку с помещенным в ней микротомом. После включения прибора через 1-1,5 часа устанавливается автоматически поддерживаемая температура до 30ºС. При низкой температуре под контролем через иллюминатор готовятся замороженные срезы.

  1. ^ Окрашивание срезов. Перед окрашиванием срезы подвергаются предварительной обработке в зависимости от фиксации и заключения материала.

Парафиновые срезы не имеют достаточной прозрачности и затрудняется процесс окрашивания. Поэтому их подвергают депарафинированию с помощью ксилола или других растворителей парафина. Затем срезы выдерживают в спиртах нисходящей концентрации о последующим помещением в воду.

Целлоидиновые срезы, полученные из блоков, хранящихся в 70º спирте, помещают сначала в 50º спирт, а затем в воду.

Срезы из криостата сразу помещают на предметные стекла. Замороженные срезы, приготовленные на микротоме или замораживающем столике, сразу опускают в воду.

Окрашиванию подвергаются наклеенные на предметные стекла и не наклеенные срезы. В первом случае для крашения используются биологические стаканчики, высокие бюксы и кюветы. Не наклеенные срезы помещаются в низкие бюксы, часовые стекла. При этом перенос срезов производится с помощью стеклянных крючков.

При переносе срезов из одного раствора в другой нужно избегать загрязнения последующих реактивов. При переносе предметных стекол с наклеенными срезами надо давать возможность стекать жидкости, но не допуская их подсыхания. При окрашивании срезов необходимо чаще менять растворы, не допуская их загрязнения.

В гистологии применяется много различных красок. Они по химическому составу делятся на основные, кислые, нейтральные и индиферентные. Основные краски являются красящими основаниями и их солями. Гистологические структуры, окрашивающиеся основными красками называются базофильными. Кислые краски – это красящие кислоты и их соли. Гистологические структуры, окрашивающиеся кислыми красками называются оксофильными или ацидофильными.

Нейтральные краски – это солеобразные соединения, у которых анионы и катионы являются красящими радикалами. В нейтральных красках базофильные структуры окрашиваются основными компонентами красителя, а кислые – соответственно кислыми радикалами краски.

Индиферентные краски – это не красители, а окрашенные вещества. В гистологии они используются для окрашивания жировой ткани. Индиферентные краски (суданы разных марок) хорошо растворяются в жировой ткани и тем самым окрашивают ее.

Также красители делятся на субстактивные и аджективые. Первые окрашивают срезы без какой-либо дополнительной обработки, а вторые для окрашивания нуждаются в дополнительной обработке – протравливании. Протравами служат окислы двух – и трехвалентных металлов (железа, алюминия, хрома и других). При окрашивании протравы с красителями образуют хелатный комплекс (лак), который заметно отличается от взятого красителя. Протрава в отдельных случаях может превратить вещество в краситель. Так, например, гематоксилин в чистом виде почти не обладает красящими свойствами, так как его лаки становятся сильными красителями.

В гистологии применяются прогрессивные и регрессивные метод окрашивания. При прогрессивном методе срезы окрашивают до желательной интенсивности, когда все необходимые детали среза четко выявляются. При работе регрессивным методом срезы специально перекрашиваются, а затем избыток красителя извлекается соответствующими реактивами.

Самым распространенным классическим гистологическим методом является окрашивание гематоксилин – эозином.

Гематоксилин – экстракт камышового дерева. Имеется много рецептов приготовления гематоксилина. В нашей лаборатории часто применяются гематоксилины Каррачи, Гейденгайна и Вейгерта. Гематоксилин Каррачи имеет следующий химический состав:

  1. Вода дистиллированная – 400,0 мл

  2. Квасцы алюмо – калиевые – 25,0 г.

  3. Гематоксилин – кристаллический – 0,5 г.

  4. Глицерин – 100,0 мл.

  5. Йодноватокислый калий (КО3) – 0,03 г.

Для приготовления железного гематоксилина Гейденгайна сначала готовят два раствора.

  1. 10% раствор железоаммиачных квасцов (кристаллы их должны быть только светло – фиолетового цвета).

  2. Растворяют 1,0 г гематоксилина в 10мл 96º спирта и затем добавляют 90мл дистиллированной воды.

  3. Отмечают уровень второго раствора и его оставляют для созревания на 4-5 недель. При этом раствор должен быть свободный доступ воздуха. Для чего среду с раствором прикрывают марлей сложенный в несколько слоев. По мере испарения воды из раствора доливают воду до исходного уровня. По мере созревания раствор красителя становится от светло-коричневого до темно-коричневого. Перед окраской раствор краски разбавляют равным количеством дистиллированной воды.



^ Железный гематоксилин Вейгерта.

Готовят два раствора:

  1. 1,0г гематоксилина растворяют в 100мл 96º спирта. Раствор созревает на свету около месяца.

  2. Официальный раствор полуторахлористого железа 4,0мл, соляная кислота (удельный вес 1,15-1,17) 1,0мл, вода дистиллированная 95,0мл. Официальный раствор полуторахлористого железа представляет собой 50% водный раствор хлористого железа (FeCI3 ˟ 6H2O – желто-бурая масса).

Перед работой обо раствора смешивают в равных частях.

^ Окрашивание срезов гематоксилин – эозином. Замороженные срезы, за исключением случаев окраски на липиды, помещают для обезжиривания в 70º и 96º спиртах. Парафиновые срезы для удаления его проводят через 2 порции ксилола по 1-2 минуты, затем через спирты убывающей концентрации и переносят в воду.


Схема окрашивания гематоксилин – эозином

прогрессивным методом.

  1. Срезы помещают в раствор гематоксилина (Карраччи и другие) на 3-5 минут.

  2. Срезы переносят в обычную воду до приготовления синеватого цвета. При этом ядра клеток, окрашенные в красновато-фиолетовый цвет в щелочной среде воды, приобретают сине-фиолетовый цвет. Синие ядра клеток становятся более контрастными. Затем срезы переносят в дистиллированную воду на 3-5 минут.

  3. Срезы помещают в 1% раствор эозина на 1-3 минуты.

  4. Отмывают краситель 1-2 и более минут дистиллированной водой.


Схема окрашивания гематоксилин – эозином

регрессивным методом.

В этом методе используются легко перекрашивающие растворы гематоксилина Бемера, Делафильда, Эрлиха (рецепты их приготовления имеются в пособиях по гистологической технике).


Схема окрашивания

  1. Окраска срезов в растворе гематоксилина 2-5 минут.

  2. Промывка в дистиллированной воде 1-6 секунд.

  3. Срезы переносят в 0,5-1% раствор соляной кислоты на 70º спирте 3-30 секунд.

Срезы при дифференцировке начинают краснеть. При передержке в солянокислом спирте может произойти полное исчезновение краски. Затем красят эозином.


Метод окрашивания под ван Гизон


Этот метод окрашивания дает цветное окрашивание разных гистоструктур. Перед окраской растворы Вайгерта1 и 2 смешивают поровну. Получается густая темно-фиолетовая жидкость. Нужно иметь в виду, что в готовом виде краска быстро портится из-за наличия сильных окислителей.

Вторую краску –пикрофуксин готовят из насыщенного водного раствора пикриновой кислоты и 1% водного раствора кислого фуксина.

Берут 100,0 мл пикриновой кислоты и смешивают с 10 мл фуксина. Образуется стойкая смесь гранатового цвета, сохраняющаяся месяцами.


Схема окрашивания по ван Гизон.

  1. Срезы окрашиваются в гематоксилине Вейгерта в течение 3-5 минут.

  2. Срезы быстро ополаскивают в 2 порциях обычной воды.

  3. окрашивают пикрофуксином 1-3 минуты.

  4. Срезы быстро ополаскивают в обычной воды.



После окраски гематоксилин – эозином, по ван Гизон и другими методами готовятся гистологические препараты. Существуют разные методы приготовления препаратов. Чаще всего пользуются заключением в бальзам. Для чего срезы проводят через спирты возрастающей консистенции, а затем через просветляющие среды. К ним относятся ксилол, толуол, эфирные масла, креозот, скипидар, карбоксилол. В большинстве случаев пользуются ксилолами или толуолом. В них срезы помещаются на непродолжительное время. Заключают срезы после ксилола или толуола в канадский или пихтовый бальзам.



  1. Меркулов Г.А. – Курс патологической техники. М.: Медицина, 1969



Раздел ЦИТОЛОГИЯ

ЛПЗ № 3: Морфология клеток

Цель занятия:

  • Ознакомиться со структурой клетки

  • Научиться различать структуры с помощью светового микроскопа.

Задания:

  • Изучить препарат «Растительные клетки кожицы лука» рассмотреть их и зарисовать при большом увеличении;

  • Изучить препарат «Нейроны спинномозгового узла», рассмотреть нейроциты и зарисовать их при большом увеличении;

  • Изучить препарат «Аппарат Гольджи» под большим увеличением микроскопа, найти и обозначить локализацию пластинчатого комплекса;

  • Изучить электронограммы и обозначить структуры.





Рис. 1 Растительные клетки кожицы лука. Ув.40:





Рис. 3 Аппарат Гольджи Ув. 40:




^ Рис.4 Фибробласт выйной связки Электронограмма.18000(по Россу):

1 -

2 –

3 –

4 –

5 –

6 –

7 - коллагеновые фибриллы; 8 - эластиновые фибриллы





Рис. 5 Плазматическая клетка селезенки крысы. Электронограмма 30000 (по Ю.И.Афанасьеву, кафедра гистологии I ММИ):


1 –

2 –

3 –





Рис. 6 Десмосомы:часть клеток шиповатого слоя кожи живота человека. Электронограмма. 40 000 (по И.Н.Михайлову и Л.Н.Михайловой):

1 -

2 -

3 –

4 –

5 –

6 –





Рис. 7 Макрофаг. Электронограмма макрофага

из лимфатического узла. 13 000 (по И.Б.Токину):

1 –

2 -

3 –

4 –

5 –

6 -





Рис. 8 Плазматическая клетка селезенки крысы. Электронограмма 30000

(по Ю.И.Афанасьеву, кафедра гистологии I ММИ):


1 –

2 –

3 –

4 –





Рис.9 Десмосомы:часть клеток шиповатого слоя кожи живота человека. Электронограмма. 40 000 (по И.Н.Михайлову и Л.Н.Михайловой):


1 –

2 –

3 –

4 –

5 -





Рис. 10 Соединения эпителиоцитов по типу "замка"

Электронограмма клеток мерцательного эпителия бронха. 21 500

(по Ю.Н.Королеву; кафедра гистологии I ММИ):

1 –

2 –

3 –

4 –





Рис. 11 Различные контакты эпителиоцитов (апикальная часть клеток желчного пузыря) Эпителий слизистой оболочки желчного пузыря собаки. Электронограмма 16 000(по Джонсону с соавторами):


1 –

2 –

3 –

4 –

5 –

6 –





Рис. 12 Микроворсинки (щеточная каемка) Апикальная часть клетки проксимального отдела нефрона. Электронограмма. 124 000 (по В.В.Королеву, кафедра гистологии I ММИ):

1 –

2 -


^ ЛПЗ № 4: НЕПОСТОЯННЫЕ КЛЕТОЧНЫЕ ВКЛЮЧЕНИЯ

Цель занятия:

  • Ознакомиться с клеточными включениями и методами их окраски

  • Научиться определять эти структуры под микроскопом

  • Уметь дать определение этим включениям


Жиры обычно окрашивают жирорастворимыми красителями. К ним относятся суданы.

Гликоген – это сильно разветвленный сложный полисахарид синтезируемый из глюкозы. Он накапливается в гепатоцитах печени., волокнах поперечнополосатой мускулатуры, хряще и других. Гликоген под воздействием ферментов расщепляется на моносахариды. Гликоген хорошо растворяется в воде и поэтому фиксируют его в специальных фиксаторах. Лучшим оказался фиксатор, предложенный А.Л. Шабадашем (спирт, азотнокислая медь, азотнокислый кальций, формалин).

Для гистохимического выявления гликогена применяется реакция Шиффа с фуксинсернистой кислотой после окисления периодатами натрия или калия. Метод основан на окислительном расщеплении 1,2 – гликоля гликогена на альдегиды. Контролем реакции является предварительная обработка материала в амилазе слюны.

Для определения нуклеиновых кислот в качестве фиксатора обычно используется жидкость (смесь) Карнуа. Окрашивание срезов производится методами Браше и Эйнарсона. При использовании метода Браше срезы обрабатываются двумя основными красителями метиловым зеленым и пиронином. При этом метиловый зеленый окрашивает ДНК, локализованные в хроматиде ядра, а пиронин соединяется с РНК, находящейся как в ядре, так и в цитоплазме. Таким образом, одновременно окрашиваются обе нуклеиновые кислоты.

При использовании метода Эйнарсона (1951) красителем является галлоцианин, который взаимодействуя с хромовокалиевыми квасцами, образует краплак-катион. При низших значениях среды (рН=0,8-1,75) краситель связывается с нуклеиновыми кислотами. Эта реакция считается высокоспецифичной и поэтому применяется для количественного анализа нуклеиновых кислот. Основным недостатком метода является невозможность визуальной дифференцировки ДНК и РНК.

Для выявления белков, содержащих три важнейших аминокислоты – тирозин, триптофан, гистидин применяется метод тетразониевого азосочетания по Даниели (1947). Он основан на двух реакциях, следующих одна за другой. Первая реакция азосочетания происходит между тетразосоединением и аминокислотами. Затем свободная диазогруппа реагирует амино- и оксигруппами. В результате получается окраска серо-голубого цвета разной интенсивности.

В гистохимии белков можно применять метод сулема – бромфеноловый синий. Он был предложен Деррамом (1950) для определения белка при хромотографии на бумаге. В настоящее время его модификация используется для гистохимического выявления общего белка. Установлено, что на препаратах количество связанного красителя пропорционально количеству белка в соответствии с законом Ламберта – Бера.

Задание:

  • Рассмотреть препарат «Включения гликогена в печени» и обозначить включения гликогена в гепатоцитах;

  • Рассмотреть препарат «Нуклеиновые кислоты в нейронах спинального ганглия», найти включения ДНК и РНК в ядрах и ядрышках нейронов;

  • Рассмотреть препарат «Включения липидов в клетках коры надпочечников» в виде мелких капелек;

  • Ознакомиться с электронограммами включений.






Рис. 13 Включения гликогена в печени крысы

до и после кормления животного:




Рис. 14 Нуклеиновые кислоты в нейронах спинального ганглия. Ув. 40х:




Рис. 15 Включения липидов в клетках коры надпочечников Ув. 40х:





Рис. 16 Адипоцит бурой жировой ткани
Клетка бурой жировой ткани новорожденного крысенка

(по Ю.И.Афанасьеву и Е.Д. Колодезниковой, кафедра гистологии I ММИ):


1 – ;

2 – ;

3 – .


^ ЛПЗ №5: ДЕЛЕНИЕ КЛЕТОК


Цель занятия:

  • Усвоить способы деления клетки

  • Изучить структуры ответственные за деление клетки

  • Выяснить биологическое значение различных способов деления клетки.

Задания:

  • Изучить препарат «Растительные клетки кожицы лука» рассмотреть их и зарисовать при большом увеличении;

  • Изучить препарат «Нейроны спинномозгового узла», рассмотреть нейроциты и зарисовать их при большом увеличении;

  • Изучить препарат «Центросомы в делящихся яйцах лошадиной аскариды» при большом увеличении, сделать обозначения.

  • Изучить препарат «Амитоз в эпителии мочевого пузыря»





Рис. 17 Растительные клетки кожицы лука. Ув 40х:


1-

2-

3-




Рис. 18 Нейроны спинномозгового узла. Ув. 40:




Рис. 19 Центросомы в делящихся яйцах лошадиной аскариды Ув. 40х:




Рис. 20 Амитоз в эпителии мочевого пузыря в 40х:


^ РАЗДЕЛ «ЭМБРИОЛОГИЯ»


ЛПЗ № 6: ПОЛОВЫЕ КЛЕТКИ

Цель занятия:

  • Усвоить отличительные особенности половых клеток от соматических клеток

  • Изучить процессы сперматогенеза и оогенеза

  • Выяснить биологическое значение мейоза.


Задания:

  • На препарате «Сперматозоиды петуха» при малом увеличении найти скопление спермиев, затем рассмотреть их при большом увеличении;

  • Изучить препарат «Семенник барана» при большом увеличении и отметить на рисунке его структуры;

  • Просмотреть препарат «Яичник млекопитающих» и выбрать фолликулы, в которых видна яйцеклетка с ядром и другие структуры, последовательно отражающие этапы роста ооцита и перестройку окружающих его оболочек;

  • Заполнить таблицу «Отличия процесса спермиогенеза от процессов оогенеза» рисовать схему яичника и семенников, в которых отражены все стадии развития фолликулов и спермиев;

  • Дополните рисунки 9,13.






Рис. 21 Сперматозоид млекопитающих (по С.Л. Кузнецову):



Рис. 22 Строение сперматозоида:

1-

2-

3-

4-

5-

6-

7-

8-

9-

9-

10-

11-

12-







Рис.23 Семенники хряка Ув. 10х:





Рис. 24 Семенники хряка. Ув. 40х:





Рис. 25 Строение яичника крольчихи. Ув. 40х:





Рис. 26 Строение яйцеклетки:


Таблица 2. Отличие процессов спермиогенеза от оогенеза





Спермиогенез

Оогенез

Начало

генеза









Периоды

Развития









Количество развивающихся клеток из одного (й) клетки









Размеры










^ ЛПЗ № 7: РАЗВИТИЕ ЛАНЦЕТНИКА И АМФИБИЙ


Цель занятия:

  • Изучить периоды эмбриогенеза и ознакомиться с основными эмбриологическими терминами на примере ланцетника

  • Сравнить развитие ланцетника и амфибии

  • Распознавать зародыши на ранних стадиях эмбриогенеза – оплодотворения, дробления, гаструлы.

Задания: По муляжам, плакатам и демонстрационными препаратам разобрать следующие вопросы:

  • Заполнить таблицы «Классификация типов яйцеклеток»;

  • Заполнить таблицу «Классификация типов дробления»;

  • Заполнить таблицу типы и строение бластул, гаструла; типы гаструляции;

  • Зарисовать этапы эмбрионального развития ланцетника;

  • Решить ситуационные задачи.


Таблица 3. Классификация яйцеклеток

Название

Описание

Принадлежность

по количеству желтковых включений

Алецитальные







Олиголецитальные








Полилецитальные







по распределению желтковых включений в цитоплазме яйцеклетки

Изолецитальные








Центролецитальные








Мезолецитальные








Телолецитальные








Таблица 4. Классификация типов дробления



Название

Описание

Принадлежность

^ По полноте деления зиготы

Полное








Неполное







^ По размерам образующихся бластомеров

Равномерное







Неравномерное







^ Временным интервалам между делениями

Синхронное








Асинхронное









Таблица 5 Способы образования гаструл

Название

Описание

Принадлежность

Инвагинации

(впячивание)








Эпиболия

(обрастание)








^ Иммиграция (выселение)








Деляминация

(расслоение)











  1. Проникновение одного сперматозоида в яйцеклетку млекопитающих предотвращает возможность проникновения остальных сперматозоидов. Назовите вид оплодотворения и что препятствует проникновению в одну яйцеклетку более одного сперматозоида?

Ответ:



  1. Яйцеклетка содержит мало желтка и распределен он равномерно. Определите тип яйцеклетки, характер дробления, вид бластулы будущего зародыша. Каким представителям животного мира свойственны такие яйцеклетки?

Ответ:



  1. Даны два зародыша одного вида животных. Один на стадии двух бластомеров, другой на стадии морулы. Какой зародыш больше по массе?

Ответ:



  1. В результате дробления у одного зародыша образуется микро- и макробластомеры. Для каких яйцеклеток характерно наличие таких бластомеров?

Ответ:



  1. У зародыша дробление отмечено только на анимальном полюсе. Как называется такой вид дробления и тип яйцеклетки?

Ответ:



  1. Желтка в яйцеклетке много, концентрируется на вегетативном полюсе. Как называется такая яйцеклетка и для какого класса животного мира она характерна?

Ответ:



  1. В условном эксперименте микроманипулятором разрушили дерматом. Нарушение развития, какой ткани вызовет это воздействие?

Ответ:





Рис. 27 Поздняя бластула лягушки. Ув. 40х:





Рис. 28 Гаструла лягушки Ув.40х:





Рис. 29 Нейрула лягушки Ув. 10Х:


^ ЛПЗ № 8: ЭМБРИОНАЛЬНОЕ РАЗВИТИЕ ПТИЦ


Цель занятия:

  • Усвоить особенности строения яйцеклетки птиц;

  • Усвоить этапы эмбриогенеза птиц на примере развития куриного зародыша;

  • Отметить общие и отличительные черты эмбриогенеза птиц и других животных.


Задания:

  • Разобрать муляж и музейный препарат этапов эмбриогенеза птиц;

  • Зарисовать этапы в рабочую тетрадь и обозначить все структуры, заполнить таблицу;

  • Изучить под малым и большим увеличением микроскопа препараты, отражающие разные стадии развития куриного зародыша;

  • Решите ситуационные задачи.




Рис. 30 Схема развития яйца птицы



Рис. 31 Яйцо курицы, вскрытое в начале инкубации

1-

2-

3-


Рис.32 Инкубированное яйцо курицы

1-

2-

3-

4-

5-

6-

7-

8-

9-







Рис. Формирование зародышевых листков курицы

.

Ситуационные задачи


1. В результате дробления зародыша возникла целобластула. Определите тип яйцеклетки и характер дробления.



  1. Желтка в яйцеклетке много, концентрируется на вегетативном полюсе. Как называется такая яйцеклетка и для какого класса животного мира она характерна?




  1. В эксперименте у зародыша цыпленка нарушен процесс срастания амниотических складок. Образование, каких провизорных органов будет нарушено?




  1. При развитии цыпленка образуется амниотическая складка. Какими зародышевыми листками она представлена, и какие оболочки она образует?




  1. В эксперименте у зародыша птицы на стадии гаструлы блокирован процесс перемещения клеток через первичную полоску. Развитие, какого зародышевого листка будет нарушено?




  1. Дробление зиготы дискоидальное. Определите тип яйцеклетки и для каких классов животных характерно такое дробление?





Рис. 34 Сомиты и нервная трубка курицы Ув.10х:




Рис. 35 Сомиты и нервная трубка курицы Ув.40х:


^ ЛПЗ № 9: ЭМБРИОНАЛЬНОЕ РАЗВИТИЕ МЛЕКОПИТАЮЩИХ


Цель занятия:

  • Усвоить этапы эмбриогенеза млекопитающих;

  • Выявить связь эмбриогенеза с морфологией яйцеклетки, характером строения плаценты у различных видов животных.


Задания:

  • Разобрать этапы эмбриогенеза различных видов млекопитающих по таблицам, стендам, иллюстрациям и музейным препаратам;

  • Сравнить эмбриогенез млекопитающих и птиц, заполнить таблицу сходства и отличия провизорных органов;

  • Разобрать строение различных типов плацент, заполнить таблицу;

  • Решите ситуационные задачи.

.


Таблица 6. Провизорные органы птиц и млекопитающих


Провизорные органы

Птицы

Млекопитающие

Функции

Амнион












Желточный мешок












Аллантоис












Серозная оболочка












Хорион












Плацента














Таблица 7. Типы плацент


Название


Особенности

Принадлежность







































Таким образом, у млекопитающих имеются:

^ 4 зародышевых листка

4 осевых органа

4 провизорных органа





































  1. В условном эксперименте блокировано перемещение клеточного материала через первичную полоску и головной узелок. Какое нарушение в развитии зародыша вызовет это воздействие?




  1. У зародышей развиты все провизорные органы, желточный мешок, амнион, серозная оболочка и аллантоис. К какому классу животных следует отнести эти зародыши?




  1. В результате 2-го дробления у приматов образуется три различных по величине бластомера. Определите тип дробления зиготы.




  1. Зародыш состоит из 8 бластомеров. Определите приблизительный срок беременности и место нахождения зародыша.




  1. В зародыше млекопитающего образуется полость и происходит дифференцировка бластомеров. На какой стадии развития находится зародыш? Где это происходит? Какие образования являются результатом дифференцировки?




  1. Для развития крупного рогатого скота характерно развитие эмбриобласта, который на второй неделе развития дифференцируется на два слоя. Как называются эти слои, и какими гистологическими они образованы?




  1. Зарегистрировано начало прикрепления зародыша крупного рогатого скота. На какой стадии находится зародыш? Каков возраст зародыша?




  1. У зародыша млекопитающих началась закладка осевых органов. Каков возраст зародыша?



ПРИЛОЖЕНИЯ

^ К РАБОЧЕЙ ТЕТРАДИ


Краткий эмбриологический словарь

Аллантоис - внезародышевый орган, принимающий участие в газообмене и экскреции у рептилий и птиц. У зародыша человека имеют значение сосуды аллантоиса.

Амнион (амниотическая оболочка) - внезародышевый орган, создающий жидкостную среду для развития плода. Состоит из однослойного эпителия и соединительной ткани, связывающей амнион с хорионом.

Бластомер - клетка зародыша, образующаяся в результате дробления оплодотворенной яйцеклетки - зиготы.

Бластоциста - ранняя стадия развития зародыша человека, на которой зародыш имеет форму пузырька. Наружную стенку пузырька образуют клетки трофобласта, полость пузырька заполнена жидкостью, а к внутренней стороне трофобласта в виде зародышевого узелка прикрепляется эмбриобласт.

Бластула - стадия развития зародыша, которой заканчивается процесс дробления бластомеров, зародыш имеет форму диска или полого шара, в котором различают бластодерму и бластоцель, заполненную жидкостью.

^ Висцеральный листок мезодермы (висцеральная спланхномезодерма) - внутренний, обращенный к энтодерме, листок спланхнотома.

Внутренняя клеточная масса (эмбриобласт) - темные, расположенные на внутренней стороне стенки бластоцисты бластомеры, дающие начало телу зародыша и всем внезародышевым органам, кроме трофобласта.

Гаструляция - сложный процесс размножения, перемещения и дифференцировки клеточного материала зародыша, приводящий к образованию зародышевых листков - эктодермы, энтодермы и мезодермы и началу формирования осевых зачатков органов.

Деламинация - способ гаструляции путем расщепления единого пласта бластодермы на два слоя клеток - наружный - эктодерму и внутренний - энтодерму.

Дерматом - дорсо-латеральный участок сомита, являющийся зачатком соединительнотканной основы кожи.

Дискобластула - бластула, образующаяся в результате неполного неравномерного дробления и дискоидального дробления.

Дробление - ряд последовательных митотических делений бластомеров без роста дочерних клеток.

^ Желточный мешок - внезародышевый орган, появляющийся в эволюции впервые у рыб; стенка желточного мешка у зародыша человека является местом образования первичных клеток крови, кровеносных сосудов, а также местом первичной локализации гонобластов.

^ Зигота - одноклеточный организм, имеющий диплоидный набор хромосом.

Иммиграция
- способ гаструляции путем выселения клеток зародыша при образовании зародышевых листков и мезенхимы.

Имплантация - внедрение зародыша в слизистую оболочку матки.

Инвагинация - способ гаструляции путем вдавления бластодермы в основном в области дна бластулы.

Мезодерма - средний зародышевый листок, образующийся путем выселения и дифференцировки клеток эктодермы (у хордовых) и первичной полоски (у млекопитающих и человека), располагающихся в виде слоя клеток между экто- и энтодермой.

^ Миотом - дорсомедиальная часть сомита, дающая начало стволовым миогенным клеткам, из которых развивается скелетная мышечная ткань.

Морула
- многоклеточный зародыш, представленный плотным скоплением бластомеров, находящихся на стадии дробления.

^ Нервная трубка - эмбриональный зачаток тканей всей нервной системы.

Нефротом - сегментированная часть мезодермы, расположенная между сомитами и спланхнотомом, из которой развивается мочеполовая система.

Овогония - исходная клетка для развития яйцеклетки, размножающаяся в эмбриональном яичнике и дающая начало овоциту I-го порядка в яичнике новорожденной девочки.

Овуляция - разрыв зрелого фолликула и выброс овоцита в брюшную полость.

^ Париетальный листок мезодермы (париетальная соматомезодерма) - поверхностный, обращенный к эктодерме, листок спланхнотома.

Первичная полоска - утолщенный участок центральной зоны эктодермы зародышевого щитка в каудальной области, из которого мигрируют клетки, образующие мезодерму.

Плацента - внезародышевый орган млекопитающих и человека, состоящий из плодной части - разрастающихся хориальных ворсинок (хориона ворсинчатого) и материнской части - видоизмененной слизистой оболочки матки, превращающейся в децидуальную оболочку.

^ Прехордальная пластинка - участок эктодермы, перемещающийся через дорсальную губу бластопора впереди хордальной пластинки и входящий в состав переднего отдела первичной кишки.

^ Серозная оболочка - провизорный орган, образуется при смыкании амниотических складок у зародышей рептилий и птиц.

Синцитиотрофобласт - поверхностный многоядерный слой трофобласта, покрывающий ворсинки хориона, образуется путем слияния клеток трофобластического эпителия.

Склеротом - вентромедиальный участок сомита, дающий начало мезенхиме.

^ Сомиты - участки (сегменты) дорсального отдела мезодермы, появляющиеся в процессе дифференцировки мезодермального пласта.

Спланхнотом
- вентролатеральная часть мезодермы, не подвергающаяся сегментации, но расщепляющаяся на париетальный и висцеральный листки, между которыми формируется вторичная полость тела - целом.

Трофобласт - внезародышевый орган млекопитающих и человека, развивающийся из светлых бластомеров, обеспечивает имплантацию зародыша и его питание, формирует наружный покров хориальных ворсинок.

Хорда - спинная струна, развивающаяся у хордовых животных из энтодермы и функционирующая у взрослого животного; у зародыша человека хорда развивается из эктодермы и редуцируется в процессе развития костного скелета.

^ Хорион ворсинчатый - поверхность хориона, обращенная к основной отпадающей оболочке матки и несущая разветвленные вторичные и третичные ворсинки, участвующие в формировании плаценты.

^ Хорион гладкий - большая часть поверхности хориона, обращенная к пристеночной и сумочной отпадающим оболочкам матки, не имеющая ворсин.

Целом - вторичная полость тела зародыша, выстланная мезотелием.

Цитотрофобласт - клеточный, более глубокий слой эпителия, входящий в состав трофобласта хориальных ворсинок.

Эктодерма - наружный зародышевый листок 3-слойного зародыша.

Энтодерма - внутренний зародышевый листок 3-слойного зародыша.

Эпиболия - нарастание материала анимальной части бластулы на вегетативную с одновременным погружением последней внутрь гаструлы.

Яйцеклетка - женская половая клетка, образующаяся в результате овогенеза, содержащая ядро с гаплоидным набором хромосом; у большинства видов животных в цитоплазме содержит желточные включения.


Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:

Похожие:

Методическое издание «Рабочая тетрадь 1 по цитологии и эмбриологии животных» для студентов факультета ветеринарной медицины по курсу «Цитология, Гистология и Эмбриология». Улан-Удэ: Изд-во бгсха, 2011. Ц 946 icon Рабочая тетрадь 3 по анатомии домашних животных студента факультета ветеринарной медицины группы

Методическое издание «Рабочая тетрадь 1 по цитологии и эмбриологии животных» для студентов факультета ветеринарной медицины по курсу «Цитология, Гистология и Эмбриология». Улан-Удэ: Изд-во бгсха, 2011. Ц 946 icon Рабочая программа дисциплины гистология, эмбриология, цитология для специальности
Рабочая программа обсуждена на заседании кафедры гистологии, эмбриологии, цитологии
Методическое издание «Рабочая тетрадь 1 по цитологии и эмбриологии животных» для студентов факультета ветеринарной медицины по курсу «Цитология, Гистология и Эмбриология». Улан-Удэ: Изд-во бгсха, 2011. Ц 946 icon Методические указания и контрольные задания по гистологии для студентов заочного обучения факультета

Методическое издание «Рабочая тетрадь 1 по цитологии и эмбриологии животных» для студентов факультета ветеринарной медицины по курсу «Цитология, Гистология и Эмбриология». Улан-Удэ: Изд-во бгсха, 2011. Ц 946 icon Рабочая программа дисциплины Морфология: анатомия человека, гистология, цитология Для специальности
Рабочая программа обсуждена на заседании кафедры гистологии, эмбриологии, цитологии
Методическое издание «Рабочая тетрадь 1 по цитологии и эмбриологии животных» для студентов факультета ветеринарной медицины по курсу «Цитология, Гистология и Эмбриология». Улан-Удэ: Изд-во бгсха, 2011. Ц 946 icon Рабочая учебная программа дисциплины «Гистология, эмбриология, цитология, гистология полости рта»

Методическое издание «Рабочая тетрадь 1 по цитологии и эмбриологии животных» для студентов факультета ветеринарной медицины по курсу «Цитология, Гистология и Эмбриология». Улан-Удэ: Изд-во бгсха, 2011. Ц 946 icon Методические указания по выполнению самостоятельных работ по курсу патологической анатомии домашних

Методическое издание «Рабочая тетрадь 1 по цитологии и эмбриологии животных» для студентов факультета ветеринарной медицины по курсу «Цитология, Гистология и Эмбриология». Улан-Удэ: Изд-во бгсха, 2011. Ц 946 icon Рабочая программа дисциплины гистология, эмбриология, цитология для специальности

Методическое издание «Рабочая тетрадь 1 по цитологии и эмбриологии животных» для студентов факультета ветеринарной медицины по курсу «Цитология, Гистология и Эмбриология». Улан-Удэ: Изд-во бгсха, 2011. Ц 946 icon Рабочая программа дисциплины гистология, эмбриология, цитология для специальности

Методическое издание «Рабочая тетрадь 1 по цитологии и эмбриологии животных» для студентов факультета ветеринарной медицины по курсу «Цитология, Гистология и Эмбриология». Улан-Удэ: Изд-во бгсха, 2011. Ц 946 icon Рабочая программа учебной дисциплины «гистология, эмбриология, цитология» Специальность

Методическое издание «Рабочая тетрадь 1 по цитологии и эмбриологии животных» для студентов факультета ветеринарной медицины по курсу «Цитология, Гистология и Эмбриология». Улан-Удэ: Изд-во бгсха, 2011. Ц 946 icon Рабочая программа учебной дисциплины «гистология, эмбриология, цитология» Специальность

Разместите кнопку на своём сайте:
Медицина


База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
Документы