Н. Г. Базарнова Редакционный совет

Скачать 3.83 Mb. Название Н. Г. Базарнова Редакционный совет страница 6/54 Дата 24.02.2013 Размер 3.83 Mb. Тип Документы

Содержание II.3. Роль подвижной фазы в СЭХ водорастворимых полисахаридов III. Влияние концентрации полимера на процесс элюирования

^ II.3. Роль подвижной фазы в СЭХ водорастворимых полисахаридов В качестве подвижной фазы при СЭХ водорастворимых полисахаридов используются вода в случаях минимальных взаимодействий элюируемых веществ с пористыми частицами неподвижной фазы или друг с другом и растворы электролитов. Вода применяется в основном при СЭХ нейтральных полисахаридов совместно, например, полужесткого геля сефадекс С-15 [34] и полиакриламидных гелей [35]. При СЭХ полисахаридов, содержащих кислые или основные функциональные группы, в случае использования воды имеют место электростатические взаимодействия растворенного вещества с неподвижной фазой. Для подавления такого взаимодействия иногда прибегают к повышению температуры колонки [35]. Однако это не всегда дает ожидаемый эффект. Последний достигается, если в качестве элюента применяют растворы электролитов, оптимальную концентрацию которых необходимо определять для каждого конкретного случая [9]. Некоторые полисахариды, например, арабиногалактан, наряду с полиэлектролитными эффектами способны образовывать в воде ассоциаты [36]. Для подавления полиэлектролитных эффектов и разрушения ассоциатов арабиногалактана авторы [32] применили элюент, содержащий фосфорную кислоту и бромистый литий. На TSK PW колонках в зависимости от разделяемых полисахаридов были использованы различные элюенты [37]. По причине отрицательной заряженности этих гелей неионные полисахариды, во избежание адсорбционных явлений, фракционированы 0,1 М раствором нитрата натрия. В этих же условиях происходит разделение анионных полисахаридов без взаимодействия с неподвижной фазой. При элюировании водой нормальные хроматограммы получены лишь для низкомолекулярного декстрана. При фракционировании катионных полимеров для снижения адсорбционных взаимодействий использован в качестве элюента 0,5 М раствор уксусной кислоты, содержащий 0,3М сульфата натрия. Причем уменьшение концентрации последнего до 0,1 М приводило к невоспроизводимым результатам. Гидрофильные катионные полимеры, гликольхитозан, ДЭАЭ-декстран успешно фракционируются в 0,8 М нитрате натрия. Однако концентрация нитрата натрия ниже 0,4 М недостаточна для предотвращения адсорбции. В таблице 1 приведены отдельные полимеры для СЭХ водорастворимых полисахаридов различной природы (нейтральной, кислой и основной) с условиями проведения хроматографического процесса, включающими используемые колонки, элюенты и тип детектора. ^ III. Влияние концентрации полимера на процесс элюирования При отсутствии межмолекулярных взаимодействий макромолекул полимера объем элюирования VR остается постоянным вплоть до критической концентрации С* полимера (рис. 4). Это справедливо для нейтральных и анионных полисахаридов. Например, для ксантана или сукциногликана критическая концентрация С*<0,1 г/л [45]. Выше критической концентрации объем элюирования увеличивается. Концентрационные эффекты особенно ярко проявляются при исследовании полиэлектролитов в СЭХ. Таблица 1. Условия для стерической эксклюзионной хроматографии для полисахаридов различной природы Полисахариды Неподвижная фаза, колонка, температура Подвижная фаза Детектор Литература Нейтральные Ламинародекстрины Сефадекс G-15 (100  0,5) см Вода Рефрактометр 34 Галактоманнан, галактан Биогель P-100 (48  0,1) см 50 мМ, АсONa, pH 5,2 УФ, 490 нм 38 2 колонки TSK PW (6000+5000) 0,1 М LiNO3 Рефрактометр 39 Галактоолигосахариды Shodex KS-802, (30  0,8) см, 80 °С Вода Рефрактометр 35 Олигосахариды Biogel P-2, P-6, (25х0,46) см 0,1M NaCl УФ,232 нм 40 Декстрины Jordi GBR (25  0,46) см Вода+ДМСО Дифференциальный рефрактометр 22 Гидроксиэтилцеллюлоза TSK PW 6000, 5000, 4000, 3000 (25  0,46) см 0,1 М NaNO3 Дифференциальный рефрактометр + многоугловое лазерное светорассеяние 18 Амилоза, амилопектин Силикагель с диольной фазой (25  0,46) см ДМСО+МеОН (15%) +АсОNH4 Дифференциальный рефрактометр 41 Кислые Пектин TSK PW 6000, 5000, 4000, 3000 (30  0,7) см, 30 °С 0,44 М АсОН +0,06М АсОNa+0,1М Na2SO4+ 1 мл пропионовой кислоты - // - 41 Рамногалактуровая фракция гидролизата пектина TSK HW503 или HW 55S (50  0,25) см 50 мМ AcONH4 буферный раствор, рН 5,2 - // - 42 Альгинат натрия, гиалуронат натрия, карбоксиметилцелюлоза, хондроитин сульфат натрия TSK GM PW (60  0,75) см 0,1 М NaNO3 - // - 37 Основные Хитозан Поливинилбензол, (25  0,46) см 4%-ный водный АсОН - // - 21 Пиперазин производные хитозана TSK GMPWXL 2  (30  0,75 см) 0,3 М АсОH (рН 4,5) + 0,2 М ацетат натрия Детектор по многоугловому рассеянию света, рефрактометр, вискозиметр 43 Гликольхитозан TSK GM PW (60  0,75) см 0,5 M АсОН +0,3 М Na2SO4 или 0,8 М NaNO3 Дифференциальный рефрактометр 37 Хитозан ацетат, кватернизированный амилопектин Пористый силикагель с привитыми аммонийными. группами 0,05 М АсОNH4 - // - 44 Так, макромолекулы полиэлектролита при продвижении вдоль хроматографической колонки испытывают на себе действие двух факторов. В соответствии с молекулярно-ситовым эффектом молекулы с большей ММ занимают положение в передней части хроматографической зоны. При этом начинает действовать эффект, связанный с зависимостью размеров молекул полиэлектролитов от их концентрации в растворе. Более крупные молекулы, попавшие в переднюю часть зоны, где концентрация раствора меньше, чем в центре, дополнительно «разворачиваясь», увеличиваются в размерах и «догоняют» молекулы, движущиеся в центральной части хроматографической зоны. Последняя в результате этого приобретает сильно вытянутый передний фронт и резко обрывающийся задний. На выходе из колонки хроматограмма имеет такой вид, который дает возможность заключить о полиэлектролитной природе элюируемого вещества. В таких случаях необходимо устранить влияние концентрации полимера на форму хроматограмм и объем элюирования разделяемых макромолекул оптимальным подбором ионной силы или рН раствора. Поэтому при интерпретации подобной хроматограммы в процессе определения ММР следует учитывать не только калибровочную зависимость, установленную для данной системы, но и концентрационный эффект, связанный с набуханием полимерного клубка. Рис. 4. Влияние концентрации декстрана на объем элюирования. Декстран T-40, Mw=40 000, растворитель: Н2О-этиленгликоль (1%) [45] При высоких концентрациях полимера (>C*) селективность фракционирования по ММ снижается. Следовательно, для получения оптимальных результатов необходимо вводить в колонку раствор образца полимера с концентрацией ниже критической С* [45].

---

Ваша оценка:

Похожие:

	А. Б. Мулик Редакционный совет Физиология адаптации: Материалы 1-й Всероссийской научно-практической конференции, г. Волгоград,...		Совет
	Севастопольский городской совет		Экономический и Социальный Совет
	Экономический и Социальный Совет		2 Совет, консультация по просьбе пациента 3,00
	Нарвинский сельский совет депутатов		Научный совет по медицинским проблемам питания
	Улан-удэнский городской совет депутатов		Совет судей российской федерации постановление

Разместите кнопку на своём сайте:
Медицина

---