|
|
Скачать 1.4 Mb.
|
Задания:
2. Опишите технику постановки определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом дисков. 3. Как провести учет результатов? ^ При поступлении больного ребенка Н., 9 лет, в приемный покой, дежурный врач заподозрил менингит. Задания: 1. Какой материал следует отправить на исследование? 2. Как его получить? Условия доставки. 3. Если при микробиологическом исследовании не выделяется возбудитель, какое допол- нительное исследование следует использовать? ^ В туберкулезный диспансер поступил пациент К., 55 лет, астенического телосложения, с явлениями иммунодефицита, кашлем и обильным отделением вязкой мокроты. Ему поставлен диагноз: кавернозный туберкулез легких; у пациента отобрана мокрота для исследования. Задания: 1. Каким методом окрашивают мазок мокроты? 2. Каковы морфологические особенности микобактерий туберкулеза? 3. Как ставится метод микрокультур по Прайсу для экспресс-диагностики туберкулеза? ^ В инфекционное отделение поступил ребенок А., 5 лет, в тяжелом состоянии, температура 39° С, выраженная интоксикация, при глотании умеренные боли, на миндалинах имеется грязно-белый налет, подчелюстные лимфатические узлы увеличены, ребенку поставлен предварительный диагноз: дифтерия зева. Задания: 1. Как изготовить тампон для забора материала и простерилизовать его? 2. Как отобрать материал для исследования на дифтерию? 3. На какие питательные среды делается посев материала? ^ Мать ребенка Д., 13 лет, жалуется, что у него частые задержки стула, вздутие живота, периодические боли в животе. В последние 6 месяцев появились аллергические реакции на коже в виде периодически появляющейся и исчезающей сыпи, частые головные боли, недомогания, бледные кожные покровы. Ребенку поставлен предварительный диагноз: дисбактериоз; отобран материал для исследования: испражнения в количестве 2,0. Задания: 1. Как подготовить испражнения к исследованию? 2. Перечислите среды для первичного посева. 3. На какие питательные среды необходимо сделать посев? ^ В больницу поступил пациент Г., 32 лет, с симптомами: судороги жевательных мышц, спазмы лицевой и затылочной мускулатуры. В анамнезе глубокие раны, загрязненные землей. Задания: 1. Какова морфология возбудителя столбняка? 2. Перечислите методы культивирования анаэробов. ^ ЭТАЛОНЫ ОТВЕТОВ ПРОФЕССИОНАЛЬНЫХ ЗАДАЧ ПО МИКРОБИОЛОГИИ ^ МЕТОДАМИ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ ЗАДАЧА № 1.
Морфологические: грамотрицательные подвижные палочки без спор, капсул. Культуральные: вуалеобразный рост. Биохимические: расщепление глюкозы до кислоты и газа, мочевины, фенилаланина, образование индола, сероводорода, отсутствие ферментации лактозы, маннита. Антигенные: постановка ориентировочные реакции агглютинации с поливалентными О-сыворотками, типовыми О- сыворотками, Н-сыворотками.
^
Делают посев культуры на биохимический ряд: лактоза, маннит, мальтоза, сахароза, мочевина, цитрат Симмонса, индол, сероводород, определяют подвижность. ^
С ПУС пересеять на биохимический ряд: глюкоза, сахароза, мальтоза, маннит, лактоза, индол, сероводород, мочевину, определение подвижности в 0,2% ПА. Для определения антигенной структуры проводят реакцию агглютинации на стекле с поливлептной О-сывороткой, групповыми О-сыворотками, Н-сыворотками первой, второй фазы. ^
3. Кровь в период лихорадки. Испражнения, моча, с конца второй недели заболевания. Дуоденальное содержимое в период реконвалесценции. ^
химическим способом - смесью Никифорова 15 минут. Б) Поставить реакцию агглютинации с О-сывороткой, с сыворотками Огава, Инаба. В) Из колоний материал пересевают на полиуглеводную среду лактозо - сахарозная среда. Г) Идентификация чистой культуры по биохимическим тестам. 3. Методы экспресс-диагностики: А) Реакция иммобилизации с О-сывороткой. Б) РИФ с люминесцентными холерными сыворотками. ^
С полиуглеводных сред сделать посев на биохимический ряд и на 0,2% полужидкий агар при 20 0С и 37 0С для определения подвижности.
^
3. Определение вида возбудителя, вызвавшего ПТИ. В каком количестве содержится в 1 грамме (миллилитре) исследуемого материала. ^
3. Изучение культуральных свойств на КТА, изучение морфологических свойств в мазках, окрашенных метиленовым синим. Определение токсигенности, проба Пизу, определение расщепления мочевины, крахмала, глюкозы, сахарозы. ^
4. Коринебакгерии дифтерии располагаются под острым или тупым углом, в виде растопыренных пальцев. На концах палочек имеются утолщения. Дифтероиды располагаются в виде частокола, зерна волютина отсутствуют или располагаются на одном конце. ^
4. По совокупности морфологических, культуральных, биохимических, антигенных свойств. ^
4. Но совокупности морфологических, культуральных, биохимических, антигенных свойств. ^ Ответ дан согласно приказу № 375 МЗ РФ от 23.12.98. 1. Для выделения и идентификации возбудителя при менингите исследуют: ликвор - 2-2,5 мл до начала антибиотикотераиии; кровь - при подозрении на сепсис; слизь с задней стенки глотки - тампоном на изогнутой проволоке. Доставка материала: При транспортировке материала на короткие расстояния применение транспортных сред не рекомендуется. При транспортировке в течение трех часов и более тампоны перевозят погруженными в транспортную среду. Материал доставляют в лабораторию, тщательно защищая от охлаждения, в зимнее время применяют грелки 34-40°С и немедленно засевают и помещают в термостат. 2. Условия культивирования менингококков. Менингококки требовательны к условиям культивирования. При росте требуют повышенной влажности 5-10%, повышенного содержания СО2, в воздухе, чувствительны к малейшим отклонениям температуры. Питательные среды должны содержать нативный белок - кровь, сыворотку. Питательные среды должны быть проверены на пригодность для культивирования менингококка с эталонным штаммом менингококка. 3. Основные диагностические тесты па менингококк. Идентификация N. meningitidis - по комплексу морфологических, культуральных и биохимических признаков. Морфологические признаки: грамотрицательные диплококки. Культуральные свойства: нежные, прозрачные колонии, голубоватые, «маслянистые», растут на средах с линкомицином и ристомицином. Биохимические признаки:
^
двууглекислого натрия до рН 7,0-7,2,
последовательные разведения от 1:10 до 1:1000000. Возможно, интоксикацию вызвал стафилококк.
- 6,5% солевой бульон; - МПА - для определения общего микробного числа. Эндо, Левина, Плоскирева для выделения микроорганизмов кишечной группы; - ЖСА - для выделения стафилококков. 3. Рост стафилококка: А) на солевом бульоне - помутнение Б) на ЖСА колонии золотистого цвета, гладкие, выпуклые, с «радужным венчиком». ^
Для сбора кала используют чисто вымытые флаконы, не содержащие следов химических реактивов, дезинфицирующих средств, антибиотиков. Посуду закрывают пробкой. Флакон с палочкой для сбора заворачивают в бумагу и стерилизуют в автоклаве при температуре 120"С в течение 30 минут или сухожаровом шкафу при температуре 1 80° С 45-60 минут. Кал собирают; после естественной дефекации больного в стерильное судно или со стерильной бумаги, помещенной в чистое судно, из разных мест в количестве не менее 2-5г. Материал доставляют в лабораторию не позднее двух часов с момента взятия (лучше в охлажденном виде). 2. Подготовка материала для исследования: 1г кала эмульгируют в 9 мл физиологического раствора. Полученное разведение 1:10 является базовым, и из него готовят ряд последовательных разведений: 10-2, 10-3,10-4,10-5, 10-6, 10-7, 10-8, 10-9, 10-10, 10-11. Полученные разведения засевают на питательные среды. 3. Для первичного посева на дисбактериоз необходимы среды: - Эндо, Левина, Плоскирева - на кишечную группу; - желточно - солевой агар -- на стафилококк: - кровяной агар - на определение гемолитической активности кишечной полочки и кокков; - Сабуро - на грибы рода Candida; - Блаурока на бифидобакгерии; - скошенный мясо-пептонный агар на протей (посев по Шукевичу); - молоко на лактобактерии. ^
2. Методы диагностики гонореи: - микроскопический - основной при острых формах гонореи; - микробиологический; - серологический.
грамотрицательные диплококки бобовидной формы, полиморфны, встречаются крупные и мелкие формы, неподвижны, спор не имеют. В патологическом материале располагаются внутриклеточно в лейкоцитах или внеклеточно в виде скоплений. Культуральные свойства: на средах с добавлением нативного белка при температуре 37°С, рН 7,2-7,4 (среды должны быть свежеприготовленными и влажными) гонококки образуют мелкие колонии, прозрачные, блестящие с ровным краем, напоминающие капельки росы. На кровяном агаре гемолиза не дают. ^
3. РТГА - это серологическая реакция, в которой специфические противовирусные антитела, взаимодействуя с вирусом (антигеном), нейтрализуют его и мешают способности агглютинировать эритроциты, то есть тормозят реакцию гемагглютинации. Высокая специфичность реакции торможения гемагглютинации позволяет с ее помощью определить вид и даже тип вирусов, обнаруженных при постановке реакции гемагглютинации. ^ 1. Подобное заболевание могут вызвать возбудители сибирской язвы Bacillus anthracis. 2. Работа с возбудителем сибирской язвы проводится в строго режимных условиях. Для исследования берут содержимое карбункула. Из полученного материала делают мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют, Наличие крупных, грамположительных палочек, располагающихся единично, попарно или в виде коротких цепочек, заключенных в капсулу, дает право дать предварительный ответ - микроскопическим метод. Для выделения чистой культуры возбудителя и для его идентификации применяют бактериологический метод исследования - делают посев на питательные среды. 3. Для выявления источника инфекции ставят реакцию Асколи для обнаружения специфического антигена бацилл сибирской язвы в шкурах животных, так как больной по профессии скорняк и заражение предположительно произошло при контакте с животным сырьем от больного животного. ^
Культуральные свойства - факультативные анаэробы, требовательны к питательным средам, растут на средах с нативным белком. На средах с сывороткой растут мелкие, нежные, прозрачные колонии. На кровяном агаре - колонии зеленовато-серого цвета, окруженные зеленой зоной.
Пневмококк расщепляет инулин, лизируется в 40% желчи и не растет на средах с оптохином.
^ 1. 1. Бактериологическая диагностика бруцеллеза. 2. Серологическая диагностика бруцеллеза. 3. Аллергическая диагностика бруцеллеза.
чистой культуры возбудителя и провести идентификацию выделенной культуры для определения вида бруцелл. 2. Для серологической диагностики заболевания поставить серологические реакции: Райта, Хеддельсона, РНГА, PCК для определения у заболевшего противобруцел- лезных антител. 3. Поставить аллергическую пробу Бюрне.
^
2. Для диагностики заболевания должны быть проведены следующие исследования: А) Серологическая диагностика: реакция агглютинации, реакция непрямой гемагглюти- нации, кровянопанельная реакция. Б) Аллергическая проба с тулярином. В) Биологическая проба на морских свинках или белых мышах (проводится в лаборато- рии особо опасных инфекций). 3. Туляремия является типичной зоонозной инфекцией. Человек, хотя и поражается этим заболеванием, но сам никогда не является источником инфекции. ^
Три типа колоний на КТА: - биовар gravius - колонии в виде розетки, крупные с радиальной исчерченностью, серо-черного цвета; - биовар mitis образует колонии мелкие, черные с ровными краями; - биовар intermedius - мелкие, черные, плоские колонии.
^
А) Метод серийных разведений, когда определяется минимальная ингибирующая концентрация антибиотика. Б) Метод дисков, когда определяется максимальная зона задержки роста выделенной культуры.
^
готовится препарат «раздавленная капля», микроскопируют в темном поле зрения (объектив х40, окуляр х10). Б) Из тканевой жидкости готовится мазок, окрашивается по Романовскому - Гимзе. При микроскопии видны спирохеты бледно-розового цвета.
трепонема имеет вид черной спирали на светлом фоне. Г) Реакция ммунофлюоресценции: приготовленный мазок обрабатывается флюоресци- рующими диагностическими сыворотками. При люминесцентной микроскопии видны извитые трепонемы Д) Метод фазово-контрастной микроскопии. 3. Treponema pallidum имеет спиралевидную форму с одинаковыми по высоте завитками, до 12-14 штук. Движения разнообразные: сгибагельные, поступательные, маятникообразные, винтообразные. ^
Вид, серовар, подсеровар выделенной культуры устанавливют при помощи адсорбированных сывороток. Анализ антигенной структуры начинают с реакции агглютинации на стекле со смесью № 1. В эту смесь входят сыворотки с антителами к шигеллам Зонне, Ньюкасл и поливалентная сыворотка к шигеллам Флекснера. При положительной реакции агглютинации со смесью выделенную культуру агглютинируют отдельно с каждой сывороткой, входящей в смесь. ^ Работа с возбудителем сибирской язвы проводится в строго режимных условиях.
3. Учет результатов: А) Контроли: К1 (преципитирующая сибиреязвенная сыворотка и стандартный антиген) - кольцо; К2; К3; К4- признаков преципитации нет. Б) Опыт: при положительном результате - кольцо на границе двух жидкостей, при отрицательном - кольца нет. ^
3. Цель посева на питательные среды: A) МПА - для определения ОМЧ. Б) Кода, Кесслера - для определения БГКП. B) Для определения сальмонелл посев делают в забуференную пептонную воду(25 грамм в 225 мл среды), потом в магниевую среду. Г) Для определения протея посев делают на свежеприготовленный скошенный МПА в конденсат по Шукевичу. Д) Для выделения клостридий на среду Вильсон - Блера. Е) Для обнаружения стафилококков посев делают на ЖСА и в 7.5% солевой бульон. ^
3. А) Реакция плазмокоагуляции. Цитратную плазму, полученную из крови кролика, разводят изотоническим раствором в соотношении 1:5 и наливают в четыре преципитационные пробирки по -0,5 мл. В первую пробирку вносят петлей исследуемую культуру; во вторую - плазмокоагулирующий стафилококк; в третью - неплазмокоагулирующий стафилококк; четвертая пробирка контроль плазмы; ставят в термостат при 37 °С. Учет через 2-3 часа, окончательный через 24 часа. При наличии фермента плазмокоагулазы плазма в опытной пробирке свертывается, при отсутствии плазмокоагулазы - консистенция жидкости в пробирке не меняется. Контроль с плазмокоагулирующим стафилококком положительный, плазма свертывается. Контроль с неплазмокоагулрирующим стафилококком – отрицательный, плазма не свертывается. Контроль плазмы – отрицательный, плазма не свертывается. Б) Лецитиназная активность определяется на ЖСА и проявляется - появлением радужного венчика вокруг колоний. В) Проба на расщепление маннита. Культуру засевают бляшками на среду с маннитом, инкубируют 18-24 часа при 37 ° С. При положительном результате - цвет среды меняется. ^
2. Идентификация до вида проводится по следующей схеме: A) посев на ПУС (Ресселя, Клиглера, Олькеницкого); Б) учет роста на ПУС, приготовление мазка, окраска его по Граму, микроскопирование; В) высев культуры на скошенный агар, накопление культуры, подбор биохимического ряда и высев на него; при необходимости проба с бактериофагом; Г) учет биохимического ряда, пробы с фагом, серологическая идентификация. 3. Среды: Эндо, Плоскирева, ВСА, Левина. ^
3. Пути передачи вирусных гепатитов B,C,D парентеральный, вертикальный, половой. Гепатитов А, Е - пищевой, водный, контактно-бытовой. ^
3. Для серологической диагностики сыпного тифа ставят: A) Реакцию связывания комплемента (РСК), полученную сыворотку больного испыты- тывают параллельно двумя антигенами: из риккетсий Провацека и риккетсий Музера- для дифференциации эпидемического сыпного тифа от эндемического. Б) Для дифференциации сыпного тифа от болезни Брилла ставят реакцию агглюти- нации с антигеном из риккетсий Провацека и культуры 0Х19. B) Реакцию непрямой гемагглютинации ставят для дифференциации межгрупповых риккетсиозов. Для дифференциальной диагностики эпидемического и эндемичес- кого сыпного тифа заражают морских свинок (самцов). Возбудители эпидеми- ческого сыпного тифа вызывают у них лихорадку. При введении возбудителей эндемического сыпного тифа у морских свинок развивается периорхит. ^
2. Основные методы исследования при ботулизме: 1. Биологический метод: постановка реакции нейтрализации ботулинистического ток- сина на мышах. 2. Бактериологический метод. Выделение чистой культуры возбудителя на среде Китта-Тароцци и идентификация по морфологическим, ферментативным свойствам, по реакции нейтрализации токсина. 3. В качестве профилактики и лечения вводят противоботулинистическую поливалентную антитоксическую сыворотку типов А, В, С. После установления типа токсина вводят противоботулинистическую сыворотку того типа, который соответствует выделенному штамму. ^
3. Реакцию Вассермана ставят по принципу реакции связывания комплемента. Отличается она тем, что при реакции Вассермана может быть использован неспецифический антиген. Например, липоидный экстракт из бычьего сердца, кардиоантиген. Реакция с неспецифическим антигеном объясняется тем, что в сыворотке крови больного повышается содержание глобулинов и изменяется степень их дисперсности. Глобулины, вступая в соединение с липидными экстрактами, образуют комплекс, который связывает комплемент и поэтому гемолиз в гемолитической системе не наступает. Отсутствие гемолиза - положительная реакция - серологически подтверждает диагноз: «Сифилис». ^
2. Для подтверждения диагноза следует провести микробиологическое исследование. A) Микроскопический метод. Из полученного материала готовят мазки, окрашивают по Граму, метиленовым синим для выявления биполярности. Наличие в мазках грамотрицательных палочек овоидной формы, а при окраске метиленовым синим - наличие биполярности дает право поставить предварительный диагноз. Б) Бактериологический метод. Делают посев исследуемою материала на питательные среды для выделения и идентификации возбудителя заболевания. B) Биологическая проба. Биологическую пробу ставят на морских свинках и белых мышах. 3. Исследования на чуму проводят в лаборатории особо опасных инфекций. ^
2. Для подтверждения диагноза следует применить следующие методы: A) Бактериологический метод. Делают посев исследуемого материала на среду Левенштейна - Йенсена для выделения возбудителя. Б) Биологический метод. Морских свинок заражают для выделения чистых культур микобактерий туберкулеза и изучения патогенеза заболевания. B) Аллергический метод. Внутрикожно вводят в предплечье 0,1 мл альттуберкулина. В положительных случаях на месте введения туберкулина появляется инфильтрат с венчиком гиперемии диаметром 10 мм. 3. Специфическая профилактика – живая вакцина БЦЖ. ^
В ответе указывают, какой чувствительностью обладает исследуемый микроорганизм к различным антибиотикам - чувствительные, устойчивые, умеренно устойчивые. ^
Делают посев сразу на 10% сывороточный агар с линкомицином или ристомицином, 5% кровяной агар или доставляют при температуре не ниже 2 0С, предохраняя от высыхания в течение 2-3 часов. Ликвор, соблюдая правила асептики, стерильной иглой из спинно – мозгового канала в центрифужную пробирку. Кровь засевают у постели больного в жидкую жидкую среду с 0,1% глюкозой в соотношении 1:10 до начала лечения.
^
^
3. Посев материала осуществляется на кровяно-теллуритовый агар (КТА). Посев делается следующим образом: чашку со средой делят на две половины, подписывают «зев» - на одной, «нос» - на другой половине, ставят - №, дату исследования. Посев производят в чашку параллельными штрихами. Основной тест при идентификации коринебактерий - проба на токсигенность. ^
Далее получают разведения: 10-3, 10 -5, 10-7, 10-9, 10-11.
^
1. В глубине высокого столбика агара. 2. Перед посевом из среды удаляют кислород путем кипячения в водяной бане и быстрого охлаждения до температуры 40-50 0С. 3. Использование редуцирующих веществ: глюкозы, кусочков мяса. . 4. Жидкие среды залипают слоем вазелинового масла. 5. Посевы на чашках ставят в анаэростат. 6. Биологический метод: совместное культивирование анаэробов и аэробов в одной чашке.
|