Грамположительные кокки
|
|
Скачать 1.2 Mb.
|
|
^
Основным источником стафилококковой инфекции в лечебно-профилактическом учреждении является человек (больной или здоровый бактерионоситель) из числа:
При проведении плановых бактериологических обследований обязательным является исследование слизи из передних отделов носа. Исследование слизи зева может проводиться выборочно. Забор материала проводит старшая медсестра ЛПУ. ^ Стрептококки представлены 29 видами, которые являются представителями нормальной микрофлоры тела человека и животных, а также вызывают заболевания в различных клинических проявлениях. В зависимости от локализации патологического процесса материалом для исследования служат раневое отделяемое, мокрота, кровь, ликвор, слизь из зева, кусочки пораженных тканей и т.д. Для забора материала используют стерильные пробирки. Одноразовые шприцы, стерильные ватные тампоны. При тонзиллитах и фарингитах пробы для исследования забирают со слизистой оболочки задней стенки глотки и зева сухим ватным тампоном, фиксируя язык шпателем. После взятия образцов тампоны помещают в пробирки с транспортной питательной средой, основой для которой служит среда для контроля стерильности (СКС). Кровь для бактериологического исследования забирают из локтевой вены в объеме 5-10 мл стерильным шприцем и засевают во флаконы с сахарным бульоном непосредственно « у постели больного» (соотношение крови и питательной среды должно быть не менее 1: 10 - 1: 20). Оптимальные сроки доставки патологического материала в бактериологическую лабораторию не должны превышать двух часов. ^ Мазки для первичной бактериоскопии окрашивают по Граму. При положительном результате обнаруживаются грамположительные клетки сферической или слегка вытянутой формы диаметром менее 2 мкм , располагающиеся парами и цепочками различной длины. По мере старения культуры количество клеток, окрашивающихся грамотрицацельно , возрастает. ^ Исследуемый материал засевают на селективные и неселективные питательные среды . Для выделения стрептококков групп А и В из смеси культур используют КМПА с неомицином, для выделения S. agalactiae - селективный бульон с налидиксовой кислотой и гентамицином, для выделения S.bovis - желчно-эскулиновый агар. Исследуемый материал обязательно засевается на 5 % кровяной агар, для приготовления которого используется кровь барана. Эта среда ингибирует рост Haemophilus haemolyticus, обладающего сходными с пиогенным стрептококком культуральными свойствами и являющегося постоянным обитателем "слизистой оболочки верхних дыхательных путей. В качестве среды обогащения используют бульон для стрептококков и среду для контроля стерильности (СКС). Культивирование стрептококков в условиях повышенной концентрации двуокиси углерода дает более пышный рост. Чашки с посевами помещают в эксикатор с плотно притертой крышкой или в анаэростат, на дно которых ставят зажженную свечу. Инкубирую посевы при температуре 37°С в течение 18-24 часов, изучают характер колоний и наличие вокруг них зон гемолиза. По характеру гемолиза на КМПА стрептококки делят на три группы: 1) негемолитические; 2) α-гемолитические, или зеленящие, образующие зеленоватую зону частичного гемолиза за счет образования метгемоглобина; 3). β-гемолитические, образующие вокруг колоний прозрачную зону полного гемолиза. Представители первой группы обладают слабой вирулентностью и в большинстве случаев не имеют практического значения. Зеленящие стрептококки вегетируют на слизистой оболочке полости рта (S.salivarius, S.mutans, S.oralis), являются возбудителями крупозной пневмонии (Streptococcus pneumoniae). Бета-гемолитические стрептококки чаще всего являются источником заболеваний. Они вызывают скарлатину, рожистое воспаление, ангину, эндокардит, менингит, гнойно-воспалительные заболевания кожи, подкожной клетчатки, сепсис и постстрептококковые заболевания (ревматизм, гломеролонефрит). Из подозрительных в отношении стрептококков колоний готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. Для первых генераций стрептококков часто характерен полиморфизм: наряду с типичными шаровидными клетками встречаются вытянутые в длину кокки разной величины, распологающиеся парами, короткими цепочками и скоплениями неправильной формы. На жидких питательных средах рост различных стрептококков имеет свои особенности. Для пиогенного стрептококка характерен придонно-пристеночный рост с образованием мелкозернистого осадка и сохранением полной прозрачности среды. Пневмококки дают придонный рост в виде пушистого рыхлого осадка с сохранением полной прозрачности или равномерным более или менее интенсивным помутнением бульона. S.pyogenes, S.bovis, S.agalactiae могут вызывать интенсивное помутнение бульона с образованием небольшого гомогенного осадка. В мазках приготовленных с жидкой среды стрептококки располагаются обычно в виде длинных цепочек (7-8 и более кокков). Для получения чистой культуры выросшие изолированные колонии пересевают на КМПА. колоний. Из флаконов с посевами крови делают высев на КМПА на вторые, четвертые девятые сутки для получения изолированных колоний. Заключительным этапом бактериологического исследования является идентификация выделенной культуры по биохимическим, антигенным свойствам, чувствительности к антимикробным средствам. Проба на каталазу. В каплю 3% раствора перекиси водорода на предметном стекле вносят с помощью стеклянной палочки изучаемую культуру. Положительный результат оценивается по выделению пузырьков газа. Стрептококки каталазной активностью не обладают. Проба с бацитрацином и сульфаниламидами. Диски с названными препаратами, помещают на чашки с засеянной сплошным газоном культурой, инкубируют 18-24 часа в аэробных условиях. Большинство штаммов S.pyogenes (99%) чувствительны к бацитрацину, стрептококки групп С и G чувствительны к смеси сульфаметоксазола и триметоприма. Гидролиз гиппурата натрия. В 0,4 мл 1% водного раствора гиппурата натрия вносят петлю чистой культуры, материал инкубируют в термостате при температуре 37°С в течение 2 часов. Затем добавляют 0,2 мл 3,5% раствора нингидрина в смеси бутанола и ацетона (1:1). Через 10 минут после повторной инкубации появляется пурпурное окрашивание. Этот тест основан на способности стрептококков группы В вызывать гидролиз гиппурата натрия. Желчно - эскулиновый тест необходим для идентификации стрептококков группы Д (S.bovis), которые растут на желчно-эскулиновом агаре с образованием комплекса темно-коричневого или черного цвета. Исследуемую культуру засевают на агар, содержащий 40% желчи, 0,1%эскулина и 0,05% цитрата железа. Результат учитывается через 24-48 часов инкубации при температуре 37°С. Рост в бульоне с 6,5% раствором NaCl. Стрептококки группы В, в отличие от других стрептококков, устойчивы к высокой концентрации NaCl. Результат учитывается через 24-48 часов инкубации при температуре 37°С. Тест лизиса желчью. 10% раствор желчи лизирует молодую культуру пневмококка. При лизисе в опытной пробирке отмечается просветление. (В контрольной пробирке с сывороточным бульоном пневмококк дает придонный рост в виде пушистого рыхлого осадка) Оптохиновый тест. От зеленящих стрептококков пневмококки отличаются высокой чувствительностью к оптохину. Рост пневмококка ингибируется оптохином в концентрации не более 5 мкг/мл. Зона ингибирования роста пневмококка вокруг диска с оптохином значительно превышает зону задержки роста прочих стрептококков. Антигенная дифференциация стрептококков. В настоящее время по антигенному составу полисахарида клеточной стенки (субстанция С) стрептококки разделяют на 20 серологических групп, обозначаемых заглавными буквами латинского алфавита от А до V. Выпускаемые в настоящее время диагностикумы обеспечивают идентификацию стрептококков групп А, В, С, F, G по реакции преципитации. Внутри серогрупп стрептококки разделяют на серовары по специфичности белковых антигенов М, Р и Т, которые выявляются в реакции агглютинации. Серовары обозначаются цифрами. Большинство возбудителей различных стрептококковых инфекций относится к серогруппе А. Антигенную структуру пневмококков изучают в реакции агглютинации на стекле или в реакции Нейффельда с использованием набора сывороток к капсульным полисахаридам. Иммунологическая диагностика стрептококковых заболеваний нашла признание при подтверждении диагноза ревматизма и направлена на определение титра антител к стрептолизину, гиалуронидазе, стрептокиназе в парных сыворотках по реакции нейтрализации ферментов. ^ Для обнаружения пиогенного стрептококка в клиническом материале используется реакция коагглютинации и метод флюоресцирующих антител (МФА). ^ В связи с тем, что исходный материал (мокрота) может быть загрязнен сопутствующей микрофлорой, выделить чистую культуру пневмококков очень трудно с использованием питательных сред. В таком случае приходится прибегать к предварительному заражению белой мыши, в организме которой пневмококк размножается быстрее, чем другие микробы. Мышь заражают внутрибрюшинно 0,5 мл взвеси первичного материала. Через 6-8 часов можно взять из брюшной полости выпот и выделить чистую культуру, посеяв 1-2 капли на чашку. Можно забрать материал от погибшего животного, гибель наступает через 18-24 часов при наличии в исследуемом материале пневмококков. ^ Род Enterococcus состоит из 13 видов бактерий, способных вызывать гнойно-воспалительные заболевания органов пищеварения, перитонит, урологические и раневые инфекции, эндокардит, остеомиелит, отит, менингит и сепсис. Чаще всего заболевание вызывают E.faecalis u E.faecium и E.durans. Энтерококки представляют собой слегка удлиненные грамположительные кокки диаметром 0,5-1 мкм, которые чаще всего располагаются в парах и коротких цепочках, спор не образуют, некоторые виды ограничено подвижны, капсул не имеют. Соответственно локализации патологического процесса проводится забор материала в стерильные флаконы, пробирки, шприцы. Тампоны с материалом, кровь помещают в питательную среду на основе СКС. ^ Мазки окрашивают по Граму. Бактериологическое исследование Выделение возбудителя обычно не представляет трудностей, т.к. энтерококки хорошо растут на простых питательных средах. Селективными являются среды, содержащие кровяной агар с добавлением азида натрия, канамицина, полимиксина, налидиксовой кислоты. Инкубацию посевов осуществляют при температуре 37°С в течение 24-48 часов. На жидких средах энтерококки дают интенсивный рост, вызывая диффузное помутнение. На пластинчатых средах стрептококки растут в виде сероватых колоний диаметром 0.4-1 мм, на кровяном агаре образуют колонии с альфа - или гамма- гемолизом, E.mundtii и E.casseliflavus образуют желтый пигмент. При наличии характерных колоний, часть колонии засевают в сахарный бульон и на сектор кровяного агара в чашке Петри для накопления чистой культуры. Чистая культура определяется на принадлежность ее к роду Enterococcus. Культура вносится в молоко с 0,1% метиленового синего и на чашку с желточно-щелочным агаром (ЖЩА). Энтерококки редуцируют метиленовый синий, что приводит к изменению цвета среды с голубого на кремовый уже через'6-16 часов при температуре 37°С. На ЖЩА растут только энтерококки, колонии могут появиться лишь на 3 сутки. Для дифференцировки энтерококков от стафилококков ставят пробу на каталазу (энтерококки каталазоотрицательные). Для дифференциации от гноеродных кокков культуру засевают на в МПБ, содержащий 10% желчи крупного рогатого скота, через 1 час инкубирования при 37°С гноеродные кокки лизируются, энтерококки не лизируются. ^
^ В медицинской практике обычно выделяют бактерии родов Peptostreptococcus (P.magnus, P.asaccharolyticus, P.prevotu, P.anaerobhis, P.micros) и Peptococcus (с монотипным видом P.niger). Прочие грамположительные кокки родов Ruminococcus, Coprococcus, Gemella, Sarcina большого медицинского значения не имеют. Род Peptococcus образуют неподвижные сферические клетки размером 0,3-1,2 мкм; в мазках располагаются парам, тетрадами, беспорядочными скоплениями или короткими цепочками. Хемоорганотрофы, нуждаются в обогащенных питательных средах. Род Peptostreptococcus образуют неподвижные кокки и коккобациллы размером 0,5-1,2 мкм; морфология и физиология сходны с таковыми у представителей рода Peptococcus. Анаэробные кокки входят в состав микробных сообществ полости рта, верхних дыхательных путей, толстой кишки и влагалища. В практической бактериологии они составляют вторую (после бактероидов) по частоте выделяемости группу анаэробов. Инфекции, вызываемые анаэробными кокками, носят эндогенный характер. ^ включает бактериоскопический и бактериологический методы; для обнаружения анаэробов применяют газовожидкостную хроматографию, ИФА, ИФМ. ^ Обоснование темы. Грамотрицательные кокки - микроорганизмы, вызывающие проблемные заболевания. Менингококк по-прежнему вызывает тяжелые заболевания у человека не зависимо от возраста. Гонококковая инфекция имеет тенденцию к росту в последние 20 лет. ^ Ознакомить студентов с характеристикой менингококков, гонококков, их ролью в развитии заболеваний, основами микробиологической диагностики. ^ -основные факторы неспецифической резистентности и иммунной защиты -правила забора материала для исследований -схему выделения и идентификации чистой культуры ^ - приготовить мазки из представленного материала, окрасить по Граму - нанести материал на соответствующие питательные среды - выявить биохимические свойства микроорганизмов. ^ Менингококки 1. Таксономия 2. Экология и распространенность 3. Морфология и физиология 4. Антигены 5. Патогенность менингококков и патогенез менингита 6. Иммунитет 7. Лабораторная диагностика 8. Профилактика и лечение Гонококки 1. Таксономия 2. Экология и распространенность 3. Морфология и физиология 4. Патогенность гонококков и патогенез гонореи 5. Иммунитет 6. Лабораторная диагностика острой и хронической гонореи 7. Профилактика и лечение 8. Внебрачные связи и алкоголизм как факторы, способствующие заболеванию Дополнительные вопросы для педиатрического факультета 1. Роль гонококков в развитии бленнореи 2. Профилактика бленнореи Вопросы для самоконтроля 1. Что считают главным фактором вирулентности менингококка? 2. Что является причиной пятнистой сыпи петехиальных геморрагии, сопутствующих генерализованным формам менингококковых заболеваний? 3. Особенности диагностики менингококкового назофарингита. 4. Какие штаммы менингококков чаще вызывают менингококковый менингит у детей младше 5 лет? 5. Какие грамотрицательные кокки вызывают уретриты, клинически не отличимые от гонореи? 6. С какой целью используется гоновакцина? 7. Основные особенности диагностики острой и хронической гонореи. ^ 1. Изучить морфологию менингококков в готовых мазках, приготовленных из спинномозговой жидкости больного менингитом 2. Изучить РНГА, РСК в демонстрационном наборе с целью выявления титра противоменингококковых антител и сделать заключение 3. Изучить морфологию гонококков в готовых мазках, приготовленных из гнойного отделяемого уретры больного острой гонореей 4. Изучить РНГА, РСК (реакция Борде-Жангу) с сывороткой крови больного для выявления специфических антител. 5. Составить алгоритмы микробиологической диагностики менингококковой и гонококковой инфекций. 6. Решить предложенные ситуационные задачи. ^ Менингококки вызывают заболевание у человека в форме менингита, менингококкцемии и назофарингита. Клетки менингококка имеют слегка овоидную форму и напоминают кофейные зерна размером 0,6-1 мкм, располагающиеся попарно, имеют капсулу. Капсула утрачивается при пересеве на среды. Окрашиваются по Граму отрицательно. Материалом для исследований может служить СМЖ (спинномозговая жидкость), кровь, носоглоточная слизь, соскоб из геморрагических элементов сыпи, секционный материал. Как при взятии материала, так и при проведении исследований необходимо учитывать слабую жизнеспособность менингококков во внешней среде. Материал исследуют немедленно или не позднее 2-3 часов после взятия, выдерживая его при температуре 37°С. Носоглоточная слизь забирается специальным тампоном изогнутым на 2/3 длины под углом 45° из верхних отделов носоглотки не касаясь языка, зубов, слизистой оболочки щек. Материал следует брать натощак или через 3-4 часа после еды и до начала антибиотикотерапии. Ликвор берут путем пункции спинномозгового канала в количестве 2-5 мл и делят на 2 части: одну центрифугируют и исследуют осадок, к другой добавляют полужидкую питательную среду и выдерживают при 37°С для накопления бактерий. ^ Мазки из осадка ликвора окрашивают по Граму или метиленовой синькой в течение 5 минут и микроскопируют. (Кровь и носоглоточная слизь бактериоскопическому исследованию не подлежит). При наличии гноя в большинстве случаев обнаруживаются типичные грамотрицательные диплококки, имеющие характерное расположение - внутри лейкоцитов, либо свободно, что позволяет сделать окончательное заключение о менингококковой инфекции. Аналогичным образом изучают мазки-отпечатки из оболочек мозга при исследовании секционного материала. Обязательному бактериоскопическому исследованию подвергают материал из колоний менингококков на плотных питательных средах. В случае трудности дифференцировки с грамположительными кокками фиксированные мазки окрашивают по Граму в модификации Калины. Методика окраски: на обезжиренное стекло наносят каплю воды, в которой эмульгируется изучаемая культура. К капле микробной взвеси добавляют каплю 0,5% спиртового раствора бриллиантовой зелени, распределяют в виде мазка, высушивают на воздухе и фиксируют в пламени. На препарат наносят основной реактив на 1,5-2 минуты (0,5% спиртовый раствор йодистого калибя-96 мл и 5% спиртовый раствор йода-2 мл), затем краску смывают водой. Препарат промывают 30% спиртом до отхождения облачков краски, промывают водой и докрашивают раствором фуксина в течение 2 минут (основной фуксин Циля-1 мл и дистиллированной воды 9 мл). При микроскопии грамотрицательные микроорганизмы окрашиваются в розовый цвет, грамположительные - в зелено-черный. ^ . Исследуемый материал засевают на чашки с питательным агаром, содержащим кровь, сыворотку или асцитическую жидкость, для выделения чистой культуры с целью подавления роста грамположительных кокков в среды добавляют ристомицин. Для посева используют свежеприготовленные среды, подогретые в термостате до температуры 37°С. Образование колоний менингококков на этих средах наблюдается через 24-48 часов после инкубации посевов при 37°С. В отличие от колоний других кокков колонии менингококков прозрачны, имеют голубоватый оттенок, ровные края и величину с булавочную головку. Такие колонии пересевают в 2 пробирки со скошенным сывороточным агаром для накопления чистой культуры и в пробирку со скошенным простым МПА, что необходимо для дифференцировки нейссерий. Одну пробирку с сывороточным агаром и пробирку с простым МПА инкубируют при температуре 37°С, а вторую пробирку с сывороточным агаром при 22°С. Эти посевы помогают отличить менингококк от Neisseria catarrhalis, которая хорошо растет на простых средах при температуре 22°С и 37°С. Для чтобы установить принадлежность культуры к роду нейссерий необходимо провести пробу на оксидазу. Проба на оксидазу. Изучаемую культуру наносят петлей на поверхность фильтровальной бумаги, пропитанной 1% раствором тетраметилпарафенилендиамина След штриха сразу краснеет, если микроб принадлежит к роду нейссерий.) Грамотрицательные диплококки, дающие положительную реакцию на оксидазу, засевают на среды "пестрого" ряда с добавлением сыворотки. Менингококк ферментирует лактозу и мальтозу до кислоты. ^ Серотипирование менингококка проводят для эпидемиологического контроля. Культуры, признанные менингококковыми, типируют с помощью стандартных агглютинирующих сывороток в реакции агглютинации на стекле. Для иммунологической диагностики менингококковой инфекции могут быть использованы РНГА, РИФ, РСК. РНГА - с 5-6 дня болезни титры антител достигают 1:200 и выше. В качестве антигена в этой реакции используют взвесь эритроцитов, сенсибилизированных специфическим полисахаридом менингококка. РИФ - Приготовленные из свежих культур менингококков различных серогрупп препараты обрабатывают специфическими сыворотками, а затем флюоресцирующей сывороткой против глобулинов человека, изучают в люминесцентном микроскопе. РСК - используется для выявления противоменингококковых антител в сыворотке больного, а также для обнаружения менингококкового антигена в материале от больного. Реакцию можно ставить в качественном и количественном вариантах, классическим методом и методом связывания на холоду. |
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Похожие:
 |
●Условно-патогенные кокки, способные вызывать заболевания различной локализации: Стафилококки Стрептококки |
База данных защищена авторским правом ©MedZnate 2000-2016
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
allo, dekanat, ansya, kenam
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям